阅读说明：本技术 多廿烷醇在制备胆固醇吸收抑制剂和/或保护肝脏的制剂中的应用 (Application of policosanol in preparation of cholesterol absorption inhibitor and/or liver protection preparation ) 是由 黎鹏 项辉 孟飞 黄俊生 黄冬婷 汤静洁 于 2020-06-01 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种多廿烷醇在制备胆固醇吸收抑制剂和/或保护肝脏的制剂中的应用。本发明提出的多廿烷醇可以抑制胆固醇肠道吸收、促进胆固醇的排泄；同时多廿烷醇可以减少甘油三酯(TG)在肝脏内的堆积,改善肝脏病变情况,治疗酒精肝/脂肪肝,以及保护肝脏。(The invention discloses application of policosanol in preparation of a cholesterol absorption inhibitor and/or a preparation for protecting liver. The policosanol provided by the invention can inhibit intestinal absorption of cholesterol and promote excretion of cholesterol; meanwhile, the policosanol can reduce the accumulation of Triglyceride (TG) in the liver, improve the pathological change condition of the liver, treat alcoholic liver/fatty liver and protect the liver.)

多廿烷醇在制备胆固醇吸收抑制剂和/或保护肝脏的制剂中 的应用

技术领域：

本发明属于食品与医学技术领域，具体涉及一种多廿烷醇在制备胆固醇吸收抑制剂和/或保护肝脏的制剂中的应用。

背景技术：

多廿烷醇是多种长链脂肪伯醇组成的混合物，以二十八烷醇为主。多廿烷醇主要从甘蔗蜡、蜂蜡、米糠中提取获得，具有抗炎、抗氧化、改善高血糖高血压和预防心脑血管疾病的作用。

血脂异常是目前非常常见的慢性疾病，血脂异常具体是指血脂水平异常，包括胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平异常。经研究证实，血脂异常与高血压、糖尿病和心血管疾病的发病有关，这严重威胁了人类健康。临床上应用的降血脂药主要为他汀类药物，许多患者在接受了较大剂量他汀治疗后，其机体内胆固醇水平却未能得到有效控制，因此，现在胆固醇吸收抑制剂在治疗高胆固醇血症中发挥的作用正日益受到关注。肝脏疾病一直是临床上常见的严重危害人类健康的疾病之一，近年来我国脂肪性肝病或是酒精性肝损伤发病率日益增加。因此，对肝脏疾病的预防及治疗变得尤为重要。

发明内容

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本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种多廿烷醇在制备胆固醇吸收抑制剂和/或保护肝脏的制剂中的应用，本发明通过多廿烷醇可以抑制胆固醇肠道吸收、促进胆固醇的排泄；同时多廿烷醇可以减少甘油三酯(TG)在肝脏内的堆积，改善肝脏病变情况，对肝脏具有保护作用。

本发明的第一个目的是提供多廿烷醇在制备胆固醇吸收抑制剂和/或保护肝脏的制剂中的应用。多廿烷醇来自于甘蔗蜡、蜂蜡、米糠等植物提取物或合成产品。

优选地，所述的胆固醇吸收抑制剂为通过抑制肠道对胆固醇的吸收、促进机体对胆固醇的排泄的制剂；所述的保护肝脏的制剂为通过减少甘油三酯在肝脏内的堆积的保护肝脏的制剂。本发明提出的多廿烷醇可以预防和/或治疗高脂饮食和/或酒精影响下的胆固醇水平失调或肝脏损伤。酒精与高脂饮食，均可促进动物对胆固醇的吸收，而多廿烷醇能显著地增加动物胆固醇的排泄量或抑制肠道对胆固醇的吸收。

本发明提出的胆固醇吸收抑制剂可用于调节人类和其他哺乳类动物的胆固醇水平，其它哺乳动物包括鼠、兔、猪、牛、羊、犬等，含有多廿烷醇的功能性制剂还可用于保护肝脏，尤其适用于通过消化系统摄入大量高脂食物和/或酒精导致的哺乳类动物产生的胆固醇水平失调、脂肪性肝病、酒精性肝损伤等。

优选地，所述的胆固醇吸收抑制剂和/或保护肝脏的制剂的剂型为液体制剂、固体制剂或半固体制剂。

进一步优选，所述的液体制剂为注射剂、溶液剂、混悬剂、乳剂或气雾剂，所述的半固体制剂为膏剂，所述的固体制剂为片剂、胶囊、丸剂、粉针剂、缓释制剂或微粒给药系统。

优选地，所述的胆固醇吸收抑制剂和/或保护肝脏的制剂为食品、保健品、药品、添加剂或饲料。

本发明的第二个目的是提供一种胆固醇吸收抑制剂，包括有效量的作为活性成分的多廿烷醇或其可药用盐，和药学上可接受的载体。

本发明的第三个目的是提供一种保护肝脏的制剂，包括有效量的作为活性成分的多廿烷醇或其可药用盐，和药学上可接受的载体。

本发明的有益效果是：

1、高脂饮食/酒精可以促进动物机体对胆固醇的吸收，本发明提出的多廿烷醇对二者带来的影响产生一定的作用，具体表现为抑制肠道对胆固醇的吸收，增加机体胆固醇的排泄。

2、本发明提出的多廿烷醇减少甘油三酯(TG)在肝脏内的堆积，改善肝脏病变情况，具有保护肝脏的作用。

3、本发明通过多廿烷醇抑制胆固醇肠道吸收、促进胆固醇的排泄，同时多廿烷醇可以减少甘油三酯(TG)在肝脏内的堆积，改善肝脏病变情况，对肝脏具有保护作用。

附图说明：

图1是实施例3中大鼠肝脏HE染色图(目镜×10，物镜×20)；

图2是实施例3中大鼠肝脏油红O染色图(目镜×10，物镜×20)。

具体实施方式

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以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

除特别说明，本发明中的实验材料和试剂均为本技术领域常规市购产品。

本发明涉及粪便中胆固醇的测定采用高效液相色谱法，条件为色谱柱为ODS-C18(250×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇：异丙醇(80:20，V/V)，检测波长为210nm，流速为1.0mL/min，柱温为35℃，进样量为10μL。

本发明涉及血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的测定采用全自动血脂测试仪进行测定。

实施例1：

1.1材料

高脂饲料，以质量分数计，包括蔗糖20％、猪油15％、胆固醇1.2％、胆酸钠0.2％、酪蛋白10％、磷酸氢钙0.6％、石粉0.4％、预混料0.4％、基础饲料52.2％。

多廿烷醇溶液的配制为：在装有多廿烷醇的容器中，先按照配制体积的10％加入无水乙醇，沸水浴加热1min使多廿烷醇充分溶解，后加入吐温80一滴，充分摇匀，加水至总体积，漩涡震荡15min，再超声30min，即得多廿烷醇溶液。吐温80的加入量为每1.0mg多廿烷醇加入1滴吐温80，多廿烷醇溶液的质量浓度为0.5～5.0mg/mL。

同时配制不加多廿烷醇的上述溶液作为溶媒剂(加入配制体积的10％的无水乙醇)。

1.2造模、分组及指标检测

采用雄性KM小鼠36只，5-6周龄，标记，所有小鼠自由饮水和进食，保持实验室环境卫生、通风良好，温度为18-22℃，相对湿度为50％-60％，12小时光照和黑夜的循环。适应性喂养一周后，将所有小鼠随机分为6组，每组6只，正常对照组、模型对照组、溶媒组、多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组，其中正常对照组喂食常规饲料7天，其他组连续喂食高脂饲料7天。第8天，正常对照组和模型对照组用生理盐水灌胃，溶媒组用溶媒剂灌胃，多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组的给药剂量分别为10mg/kg、20mg/kg和100mg/kg，6组小鼠的灌胃体积均为20mL/kg。分别于6h、12h、18h和24h收集每组小鼠粪便测定胆固醇含量，收集粪便过程中所有小鼠均予以常规的自由饮水和进食。实验结束后，均按50mg/kg剂量腹腔注射2％戊巴比妥钠麻醉小鼠，下腔静脉取血，所有血液于常温放置20min，然后3000r/min离心15min，得新鲜无溶血血清，并将血清存放于4℃冰箱中，用于测定TC和TG。

2.实验结果

多廿烷醇对喂食高脂饲料7天小鼠粪便胆固醇及血脂的影响如表1所示。模型对照组与正常对照组比较，粪便胆固醇浓度成10倍以上增加，血脂TC、TG均有显著增加(均为P<0.05)。溶媒剂组小鼠在灌胃的12h内，粪便中胆固醇浓度明显减少，酒精促进胆固醇吸收，使粪便中胆固醇浓度明显减少。多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组小鼠均在12h内胆固醇的排出量增加，粪便胆固醇浓度升高；与溶媒组比较，血液中TC含量未见有明显影响，但多廿烷醇中剂量组和多廿烷醇高剂量组小鼠血液中TG含量降低(均为P<0.05)，表明多廿烷醇具有一定的降脂作用。

表1多廿烷醇对喂食高脂饲料7天小鼠粪便胆固醇及血脂的影响

注：P-10、P-20和P-100分别表示实验中多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组。粪便为一组动物收集的全部粪便，只有一个测定值。血脂指标表示为平均值±标准偏差，n＝6。与正常对照组比较，**表示P<0.05；与溶媒组比较，##表示P<0.05。

实施例2：

1.实验方法

1.1材料

高脂饲料包括蔗糖20％、猪油15％、胆固醇1.2％、胆酸钠0.2％、酪蛋白10％、磷酸氢钙0.6％、石粉0.4％、预混料0.4％、基础饲料52.2％。

多廿烷醇溶液的配制为：在装有多廿烷醇的容器中，先按照配制体积的10％加入无水乙醇，沸水浴加热1min使多廿烷醇充分溶解，后加入吐温80一滴，充分摇匀，加水至总体积，漩涡震荡15min，再超声30min，即得多廿烷醇溶液。吐温80的加入量为每1.0mg多廿烷醇加入1滴吐温80，多廿烷醇溶液的质量浓度为1.0～5.0mg/mL。

同时配制不加多廿烷醇的上述溶液作为溶媒剂(加入配制体积10％的无水乙醇)。

1.2造模、分组及指标检测

取雄性SD大鼠30只，180～220g，标记，所有大鼠自由饮水和进食，保持实验室环境卫生、通风良好，温度为18-22℃，相对湿度为50％-60％，12小时光照和黑夜的循环。适应性喂养一周后，随机分为6组，每组5只，包括正常对照组、模型对照组、溶媒组和多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组。除正常对照组用基础饲料喂养外，其余五组均用高脂饲料喂养。在饮食的同时每天定时进行灌胃给药并持续30天。正常对照组和模型对照组用生理盐水灌胃，溶媒组用溶媒剂灌胃，多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组三个剂量组的给药剂量分别为10mg/kg、20mg/kg和50mg/kg，灌胃体积均为10mL/kg。每天称重，记录体重变化。给药期间，每7d收集一次每组大鼠一昼夜(24h)的粪便测定胆固醇含量，共收集4周。

2.实验结果

高脂饲料喂养，使动物粪便中胆固醇含量大幅增加，而且随着高脂饲料喂养时间延长，大鼠粪便胆固醇含量也呈增加的趋势，如表2所示模型对照组第4周比第1周粪便胆固醇含量明显增多。溶媒组(10％乙醇)大鼠整体上每周24小时粪便胆固醇浓度都比模型对照组高，表明酒精(10mL/kg灌胃量)对动物机体胆固醇的代谢影响很大，促进机体胆固醇的吸收。多廿烷醇三个剂量组大鼠粪便胆固醇含量与溶媒组和模型对照组之间(如第2周和第4周测定结果)，表明多廿烷醇对高脂饲料喂养动物的脂肪代谢具有一定调节作用，另外多廿烷醇可以调节酒精影响下的胆固醇水平。

表2多廿烷醇连续给药对喂食高脂饲料30天大鼠粪便胆固醇含量的影响

注：P-10、P-20和P-50分别表示大鼠实验多廿烷醇低、中、高剂量组。粪便为一组动物收集的全部粪便，本次实验制备三个平行样品，表示为平均值±标准误差，n＝3。

实施例3：

1.实验方法

1.1材料

高脂饲料包括蔗糖20％、猪油15％、胆固醇1.2％、胆酸钠0.2％、酪蛋白10％、磷酸氢钙0.6％、石粉0.4％、预混料0.4％、基础饲料52.2％。

多廿烷醇溶液的配制为：在装有多廿烷醇的容器中，先按照配制体积的10％加入无水乙醇，沸水浴加热1min使多廿烷醇充分溶解，后加入吐温80一滴，充分摇匀，加水至总体积，漩涡震荡15min，再超声30min，即得多廿烷醇溶液。吐温80的加入量为每1.0mg多廿烷醇加入1滴吐温80，多廿烷醇溶液的质量浓度为1.0～5.0mg/mL。

同时配制不加多廿烷醇的上述溶液作为溶媒剂(加入配制体积10％的无水乙醇)。

1.2造模、分组及指标检测

取雄性SD大鼠70只，120～150g，标记，所有大鼠自由饮水和进食，保持实验室环境卫生、通风良好，温度为18-22℃，相对湿度为50％-60％，12小时光照和黑夜的循环。适应性喂养一周后，随机分成7组，每组10只，包括正常对照组(正常组)、模型对照组(模型组)、溶媒组和多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组，余下一组为辛伐他汀组。正常对照组使用基础饲料喂养，其余组用高脂饲料喂养，此实验在开始饮食的同时每天定时即进行灌胃给药并持续16周。正常对照组和模型对照组用生理盐水灌胃，溶媒组用溶媒剂灌胃，多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组给药剂量分别为10mg/kg、20mg/kg和50mg/kg，辛伐他汀组给药剂量为20mg/kg，灌胃体积均为10mL/kg。每天称重，记录体重变化。从第12周开始，每7d收集一次大鼠一昼夜(24h)粪便，共收集5次。实验进行到第120d时，取出大鼠，按50mg/kg的剂量腹腔注射2％戊巴比妥钠麻醉大鼠，沿腹中线打开腹腔，取2cm²左右大小的肝脏小片，用4％多聚甲醛固定，之后进行HE和油红O染色。另取50mg左右肝脏，生理盐水洗净，置于-80℃冰箱待用。对肝脏进行处理后对TC和TG进行测定。

1.3实验结果

如表3所示，与溶媒组相比，多廿烷醇低剂量组和多廿烷醇中剂量组的TC水平均降低，辛伐他汀组的TG水平降低约38％。多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组的TG水平分别降低约43％、36％和31％(P<0.01)，与给药剂量成反比，说明给予大鼠长时间的多廿烷醇可以减少TG在肝脏内的堆积。

表3大鼠肝脏TC、TG水平

注：浓度单位为mmol/L，数值均以平均值±标准误差来表示(n＝10)。##，P<0.01，与正常组相比；*，P<0.05，**，P<0.01，与溶媒组相比。

与此同时，肝脏HE染色(图1)和油红O染色(图2)的结果也清楚地显示出各组大鼠肝脏细胞内脂滴的堆积情况。图1中箭头位置表示空泡，正常对照组几乎没有空泡，不存在脂肪变性的情况；模型对照组较多空泡已经完全融合，形成了大泡性和中泡性脂肪变性混合存在的肝脏脂肪变性；溶媒组空泡正在融合，依稀可见部分已经融合完成的大泡性脂肪；多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组中，虽然存在广泛的微泡样脂肪变性，却未见明显的大泡性脂肪变性。图2中箭头位置表示脂滴，正常对照组只有极少的脂肪滴分布，其他各组中，相对来说溶媒组脂肪滴分布最多，其次是模型对照组和辛伐他汀组，多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组中脂肪滴分布最少。

另外本发明对肝脏HE切片的空泡面积和油红O切片的阳性面积占比进行计算(如表4)。由于肝脏组织的细胞间有一定间隙，导致空泡面积占比要大于阳性面积占比，相比之下，阳性面积占比能更为准确的反映脂肪肝的严重程度。与溶媒组相比，辛伐他汀组、多廿烷醇低剂量组、多廿烷醇中剂量组、多廿烷醇高剂量组的阳性面积占比分别下降约12％、40％、25％和27％(P<0.05)，可见，多廿烷醇对肝脏具有保护作用。

表4大鼠肝脏切片特定面积占比(％)

注：面积占比是先通过五点取样法对每张切片进行五个区域的选取，利用imagej单独计算各个区域的空泡面积和阳性面积(脂肪滴)占比，然后取平均值作为此切片的面积占比。数值均以平均值±标准误差表示(n＝3)。##，P<0.01，与正常组相比；*，P<0.05，与溶媒组相比。

以上对本发明提供的多廿烷醇在制备胆固醇吸收抑制剂和/或保护肝脏的制剂中的应用进行了详细的介绍，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的技术方案及其核心思想，应当指出，对于本技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。