阅读说明：本技术 Germacradienol及其衍生物用于制备治疗神经母细胞瘤的药物的用途 (Application of Germacradienol and derivatives thereof in preparing medicine for treating neuroblastoma ) 是由 梁淑红 赵杰 李砺锋 沈志博 薛文华 于 2019-10-12 设计创作，主要内容包括：本发明公开了Germacradienol及其衍生物用于制备治疗神经母细胞瘤的药物的用途。本发明的试验结果表明,化合物Germacradienol及其衍生物9β-hydroxyl germacradienol和2-oxygermacradienol对神经母细胞瘤具有显著增殖抑制作用,IC50值均达到nM级别,且9β-hydroxyl germacradienol的增殖抑制活性最强,为Germacradienol的50倍以上,另外2-oxygermacradienol的增殖抑制活性也达到Germacradienol的20倍以上,三者均具有开发成治疗神经母细胞瘤的药物的前景。(The invention discloses application of Germacradienol and derivatives thereof in preparing a medicine for treating neuroblastoma. The test result of the invention shows that the compounds Germacrodienol and the derivatives 9 beta-hydroxy germacrantinol and 2-oxygermacrantinol have obvious proliferation inhibition effect on neuroblastoma, the IC50 value reaches nM level, the proliferation inhibition activity of the 9 beta-hydroxy germacrantinol is strongest and is more than 50 times of Germacrodienol, in addition, the proliferation inhibition activity of the 2-oxygermacrantinol also reaches more than 20 times of Germacrodienol, and the three have the prospect of developing the medicine for treating neuroblastoma.)

Germacradienol及其衍生物用于制备治疗神经母细胞瘤的药 物的用途

技术领域

本发明属于医药领域，涉及抗肿瘤药物的开发，具体涉及Germacradienol及其衍生物用于制备治疗神经母细胞瘤的药物的用途。

背景技术

神经母细胞瘤是小儿死亡率最高的实体肿瘤，恶性度高预后差，有较强的异质性，放化疗效果差异较大，其中一些患者对放化疗不敏感，病情恶化迅速。化疗药物的应用是延长患者生存时间必不可少的手段，开发新的疗效好、不良反应少的药物是患者生命延续的希望(榄香烯对神经母细胞瘤增殖的抑制作用，中国医科大学学报第46卷第12期，2017)。

周景儒等发现，从天然姜科植物温郁金中提取获得的榄香烯对神经母细胞瘤的增殖有抑制作用，并呈时间和浓度依赖性，具有开发成抗神经母细胞瘤药物的前景(榄香烯对神经母细胞瘤增殖的抑制作用，中国医科大学学报第46卷第12期，2017)。

张海利等发现，白藜芦醇能够抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖从而起到抗癌的作用，并且呈现出浓度与时间的双依赖性。在一定浓度范围内，随着白藜芦醇作用时间的增加，其抑制人神经母细胞瘤细胞增殖的作用越明显，并且在一定时间范围内增加白藜芦醇的浓度，其抑制细胞增殖的作用也呈现上升趋势(白藜芦醇对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞增殖的影响研究，滨州医学院学报2017年6月第40卷第3期)。

夏宝佳等发现，人参皂苷Rh2在体外对神经母细胞瘤的抑制作用，通过上调促凋亡蛋白Bax及下调抗凋亡蛋白Bcl-2、基质金属蛋白酶MMP-2来实现抑制其迁移侵袭的过程(人参皂苷Rh2对神经母细胞瘤SH-SY5Y的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响，现代肿瘤医学2019)。

Germacradienol也是一种天然产物，9β-hydroxyl germacradienol和2-oxygermacradienol为其两种衍生物，其化学结构如下。

现有技术对Germacradienol及其衍生物的活性报道较少，无抗神经母细胞瘤活性的报道。

发明内容

本发明旨在提供Germacradienol及其衍生物用于制备治疗神经母细胞瘤的药物的用途。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

如下化学结构的化合物用于制备治疗神经母细胞瘤的药物的用途：

其中，R₁为-H或-OH，R₂为-H或＝O。

进一步地，所述化合物为如下化合物中的一种：

一种治疗神经母细胞瘤的药物，活性成分为如下化学结构的化合物：

其中，R₁为-H或-OH，R₂为-H或＝O。

进一步地，所述化合物为如下化合物中的一种：

进一步地，还含有药学上可以接受的辅料，制成药学上可以接受的剂型。

更进一步地，所述辅料包括液体、固体或半固体辅料。

更进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊、注射剂。

有益效果：

本发明的试验结果表明，化合物Germacradienol及其衍生物9β-hydroxylgermacradienol和2-oxygermacradienol对神经母细胞瘤具有显著增殖抑制作用，IC50值均达到nM级别，且9β-hydroxyl germacradienol的增殖抑制活性最强，为Germacradienol的50倍以上，另外2-oxygermacradienol的增殖抑制活性也达到Germacradienol的20倍以上，三者均具有开发成治疗神经母细胞瘤的药物的前景。

具体实施方式

下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

实施例1：对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的抑制作用

一、试验材料

神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为ATCC公司产品；

RPMI-1640培养基为Hyclone公司产品；

胎牛血清为Gibco公司产品；

MTT为美国Sigma公司产品。

二、试验方法

1、细胞培养

将神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y复苏后用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基培养，置于37℃、5％CO₂的培养箱中培养、传代，取对数生长期细胞用于后续试验。

2、MTT试验

采用MTT法测试Germacradienol、9β-hydroxyl germacradienol和2-oxygermacradienol对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖的抑制活性，具体方法如下：

收集处于对数生长期的细胞，将细胞重悬成浓度为1×10⁴个/mL的细胞悬液，按照每孔100μL细胞悬液将细胞接种到96孔板中，并置于37℃、5％CO₂细胞孵箱中孵育24h。将不同浓度的化合物按每孔100μL药液加入96孔板中，每个浓度设置3个复孔，以含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基处理细胞作为空白对照。药物处理细胞48h后，每孔加入20μL5mg/mL的MTT溶液，继续孵育4h后终止培养，吸弃上清液，每孔各加入150μL二甲基亚砜，振荡器上振荡10min充分溶解结晶，在波长570nm处测定每孔吸光值并计算半效抑制浓度(IC50)。根据三次测定的平均值并采用graphpadprism 7.0软件计算IC50值。

三、试验结果

Germacradienol、9β-hydroxyl germacradienol和2-oxygermacradienol对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖的半效抑制浓度IC50值如表1所示。

表1对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖的半效抑制浓度IC50值

	IC50值(nM)
		Germacradienol	58.25±0.13
9β-hydroxyl germacradienol	1.18±0.07
		2-oxygermacradienol	2.32±0.09

实施例2：对神经母细胞瘤细胞SK-N-SH的抑制作用

一、试验材料

神经母细胞瘤细胞SK-N-SH为ATCC公司产品；

RPMI-1640培养基为Hyclone公司产品；

胎牛血清为Gibco公司产品；

MTT为美国Sigma公司产品。

二、试验方法

1、细胞培养

将神经母细胞瘤细胞SK-N-SH复苏后用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基培养，置于37℃、5％CO₂的培养箱中培养、传代，取对数生长期细胞用于后续试验。

2、MTT试验

采用MTT法测试Germacradienol、9β-hydroxyl germacradienol和2-oxygermacradienol对神经母细胞瘤细胞SK-N-SH增殖的抑制活性，具体方法如下：

收集处于对数生长期的细胞，将细胞重悬成浓度为1×10⁴个/mL的细胞悬液，按照每孔100μL细胞悬液将细胞接种到96孔板中，并置于37℃、5％CO₂细胞孵箱中孵育24h。将不同浓度的化合物按每孔100μL药液加入96孔板中，每个浓度设置3个复孔，以含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基处理细胞作为空白对照。药物处理细胞48h后，每孔加入20μL5mg/mL的MTT溶液，继续孵育4h后终止培养，吸弃上清液，每孔各加入150μL二甲基亚砜，振荡器上振荡10min充分溶解结晶，在波长570nm处测定每孔吸光值并计算半效抑制浓度(IC50)。根据三次测定的平均值并采用graphpadprism 7.0软件计算IC50值。

三、试验结果

Germacradienol、9β-hydroxyl germacradienol和2-oxygermacradienol对神经母细胞瘤细胞SK-N-SH增殖的半效抑制浓度IC50值如表2所示。

表2对神经母细胞瘤细胞SK-N-SH增殖的半效抑制浓度IC50值

	IC50值(nM)
		Germacradienol	62.77±0.15
9β-hydroxyl germacradienol	1.24±0.11
		2-oxygermacradienol	2.29±0.12

实施例3：对神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2的抑制作用

一、试验材料

神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2为ATCC公司产品；

RPMI-1640培养基为Hyclone公司产品；

胎牛血清为Gibco公司产品；

MTT为美国Sigma公司产品。

二、试验方法

1、细胞培养

将神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2复苏后用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基培养，置于37℃、5％CO₂的培养箱中培养、传代，取对数生长期细胞用于后续试验。

2、MTT试验

采用MTT法测试Germacradienol、9β-hydroxyl germacradienol和2-oxygermacradienol对神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2增殖的抑制活性，具体方法如下：

收集处于对数生长期的细胞，将细胞重悬成浓度为1×10⁴个/mL的细胞悬液，按照每孔100μL细胞悬液将细胞接种到96孔板中，并置于37℃、5％CO₂细胞孵箱中孵育24h。将不同浓度的化合物按每孔100μL药液加入96孔板中，每个浓度设置3个复孔，以含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基处理细胞作为空白对照。药物处理细胞48h后，每孔加入20μL5mg/mL的MTT溶液，继续孵育4h后终止培养，吸弃上清液，每孔各加入150μL二甲基亚砜，振荡器上振荡10min充分溶解结晶，在波长570nm处测定每孔吸光值并计算半效抑制浓度(IC50)。根据三次测定的平均值并采用graphpadprism 7.0软件计算IC50值。

三、试验结果

Germacradienol、9β-hydroxyl germacradienol和2-oxygermacradienol对神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2增殖的半效抑制浓度IC50值如表3所示。

表3对神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2增殖的半效抑制浓度IC50值

	IC50值(nM)
		Germacradienol	46.13±0.17
9β-hydroxy lgermacradienol	0.82±0.10
		2-oxygermacradienol	1.95±0.12

实施例1～3试验结果表明，化合物Germacradienol及其衍生物9β-hydroxylgermacradienol和2-oxygermacradienol对神经母细胞瘤具有显著增殖抑制作用，IC50值均达到nM级别，且9β-hydroxyl germacradienol的增殖抑制活性最强，为Germacradienol的50倍以上，另外2-oxygermacradienol的增殖抑制活性也达到Germacradienol的20倍以上，三者均具有开发成治疗神经母细胞瘤的药物的前景。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。