阅读说明：本技术 抑制生物膜形成的脂质体 (Liposomes for inhibiting biofilm formation ) 是由 S·阿泽雷多·达·西尔维拉·拉雅尤尼亚斯 F·拉雅尤尼亚斯 于 2018-03-01 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种组合物,其包含以下并优选由以下组成：(i)单一的空脂质体,其中所述单一的空脂质体选自(a)包含胆固醇的空脂质体,其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；其中优选地,所述空脂质体包含胆固醇和鞘磷脂,并且进一步优选地由胆固醇和鞘磷脂组成；或(b)由鞘磷脂组成的空脂质体；或(ii)空脂质体的混合物；其中所述空脂质体的混合物包含选自以下的至少一种空脂质体且优选由选自以下的至少一种空脂质体组成：(a)包含胆固醇的空脂质体,其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量),其中优选地,所述空脂质体包含胆固醇和鞘磷脂,并且进一步优选地由胆固醇和鞘磷脂组成；(b)由鞘磷脂组成的空脂质体；以及(c)空脂质体,其包含磷脂酰胆碱和鞘磷脂,优选地由磷脂酰胆碱和鞘磷脂组成；以及彼此独立地选自包含脂质或磷脂并优选由脂质或磷脂组成的空脂质体的至少一种空脂质体,所述脂质或磷脂选自胆固醇、鞘磷脂、神经酰胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、二酰基甘油和含有一个或两个或多个长于4个碳原子并最多达28个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸；该组合物用于预防或减少生物膜形成或消除或减少已有生物膜的方法。(The present invention relates to a composition comprising and preferably consisting of: (i) a single empty liposome, wherein the single empty liposome is selected from the group consisting of (a) empty liposomes comprising cholesterol, wherein the amount of cholesterol is at least 30% (weight/weight); wherein preferably the empty liposomes comprise cholesterol and sphingomyelin, and further preferably consist of cholesterol and sphingomyelin; or (b) empty liposomes composed of sphingomyelin; or (ii) a mixture of empty liposomes; wherein the mixture of empty liposomes comprises and preferably consists of at least one empty liposome selected from the group consisting of: (a) empty liposomes comprising cholesterol, wherein the amount of cholesterol is at least 30% (weight/weight), wherein preferably the empty liposomes comprise cholesterol and sphingomyelin, and further preferably consist of cholesterol and sphingomyelin; (b) empty liposomes composed of sphingomyelin; and (c) empty liposomes comprising, preferably consisting of, phosphatidylcholine and sphingomyelin; and at least one empty liposome selected independently of each other from empty liposomes comprising and preferably consisting of lipids or phospholipids selected from the group consisting of cholesterol, sphingomyelin, ceramide, phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, diacylglycerol and saturated or unsaturated fatty acids containing one or two or more longer than 4 carbon atoms and up to 28 carbon atoms; the composition is used in a method for preventing or reducing biofilm formation or eliminating or reducing existing biofilms.)

抑制生物膜形成的脂质体

技术领域

本发明涉及具有确定的脂质组成的空脂质体或空脂质体的混合物，用于预防或减少生物膜的形成或用于消除或减少已有的生物膜。本发明还涉及通过单独使用本发明的空脂质体或空脂质体的混合物或者与标准抗微生物治疗组合使用来治疗或预防这种生物膜的形成。

背景技术

参考文献：Davies,Nat.Rev.Drug Discov.(2003)2:114-122；Bjarnsholt等,Nat.Rev.Drug Discov.(2013)12:791-808；Wu等,International Journal of OralScience 7(2015)；Rasamiravaka等,BioMed Research International Volume(2015)；Bhattacharya等,Expert Rev Anti Infect Ther.(2015)13(12)；Peneysan等,Molecules(2015)20；Rabin等,Future Med.Chem.(2015)7(4)。

微生物可以以浮游生物(特别是自由漂浮的细菌或真菌)或生物膜(特别是生物膜细菌或真菌)的形式出现。通常，这些生物膜由紧密包装和高度组织的微生物群落组成，这些微生物群落包裹在由蛋白质、细胞外DNA、淀粉样蛋白纤维和多糖组成的分泌聚合物基质中，这些基质形成高度水合的极性混合物，有助于生物膜的整体结构支架和结构。

与浮游微生物相比，在充分营养的条件下，几乎所有生态系统中的生物膜微生物都占主导地位。因此，生物膜可以在各种宿主环境中建立，因为它们可以粘附到非生物表面，例如，粘附到诸如导管、人工血管、人工心脏瓣膜、心脏起搏器、脑脊液分流器、导尿管、腹膜透析导管、关节假体和骨科固定设备、子宫内设备、胆道支架、***植入物、隐形眼镜、假牙的植入物表面，粘附到在牙齿区域的龋齿和牙周炎，以及粘附到诸如肺、皮肤、骨骼、牙齿等生物表面，导致例如囊性纤维化患者的慢性气道感染、慢性阻塞性肺疾病、天然瓣膜心内膜炎、慢性中耳炎、慢性鼻窦炎或慢性伤口感染。由于细菌和真菌都粘附在牙齿上并被嵌入唾液聚合物和微生物细胞外产物中，因此生物膜还形成了牙菌斑，从而有助于牙齿疾病的发展。由于生物膜在食品工厂的食品设备表面和工业过程中形成的能力，因此生物膜在食品工业中也是一个问题。

如果生物膜微生物只是粘附在表面上的浮游生物，这种披露也就不重要了，但是生物膜微生物与浮游生物有很大的不同。生物膜聚合物基质可形成抵抗宿主免疫防御的屏障，并分别保护深层细菌和真菌免受抗细菌剂和抗真菌剂的侵害。此外，生物膜可作为传染性小生境(niche)，有助于慢性感染及复发。与生物膜相关的感染是慢性的、持续的并且难以治愈。即使在诸如心脏瓣膜之类的植入物上形成生物膜的情况下，脱落的生物膜细胞也会随血流迁移并引起其他器官的感染。

生物膜参与多种感染，革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌以及支原体、螺旋体和真菌都可以形成。它们还参与由ESKAPE病原体引起的感染。与生物膜相关的疾病数量被认为是非常多的，结肠炎、***炎、尿道炎、结膜炎和中耳炎只是常见例子的一小部分。如所指出的，生物膜也作为重要的医疗器械的移生菌，包含尿管、静脉和动脉导管、分流器等。由于生物膜中存在的细菌和真菌具有耐抗微生物剂和免疫防御机制，因此生物膜相关的感染往往是慢性的，例如囊性纤维化(CF)患者的支气管肺炎铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)感染。

实际上，生物膜细菌对抗生素的抵抗力是浮游细菌的1000倍。传统上，已经开发出抗生素以靶向涉及自由漂浮细菌(即浮游生物的细菌)的生长和存活的细胞机制。但是，生物膜细菌与浮游细菌完全不同。值得注意的是，生物膜细菌表达的细胞外蛋白、毒力因子和表面活性剂与自由漂浮细菌表达的蛋白不同。而且，保护性生物膜基质能够逃避宿主免疫应答、促进持久性和细菌的传播。此外，抗菌剂耐性是生物膜的固有特性。因此，尽管宿主的免疫防御能力完好并且频繁进行抗生素治疗，细菌仍会持续存在。此外，仅使用浮游细菌靶向感染的抗生素治疗通常对生物膜表型无效。由于高剂量抗生素的毒性和副作用以及肾和肝功能的局限性，常规抗生素给药难以达到用于根除生物膜的有效抗生素剂量。此外，将生物膜中的细菌暴露于抗生素会进一步增加与抗生素抗性发展相关的选择压力。类似地，与生物膜相关的真菌感染通常由于对抗菌剂的抗性而对常规疗法是难治的，这部分归因于表面诱导的药物外排泵的上调。

当前的方法可能包括物理去除感染源(通过导管或外科手术去除整形外科硬件、不可吸收的缝合线、坏死组织)或用抗菌素治疗。然而，尽管抗生素和抗真菌剂直接靶向形成生物膜的生物，但它们在治疗与生物膜相关的疾病方面很难成功。实际上，当前的方法在消除感染上并不总是成功的，涉及生物膜驻留细菌或真菌的感染常常被证明是无法治愈的，并最终发展为慢性状态。尽管事实上形成生物膜的能力是细菌的普遍属性，并且许多医学上重要的真菌会产生生物膜，但生物膜形成的确切机制仍未得到很好的理解，这导致与生物膜相关的感染特别难以治疗和根除。正在开发的非杀菌性抗生物膜药物的主要目标是(i)避免微生物附着在表面上，(ii)影响生物膜的成熟和/或诱导其分散和降解——例如，通过靶向在生物膜形成的调节中具有重要作用的细菌系统和信使，尤其是细菌群体感应(QS)、核苷酸、特别是c-di-GMP或小非编码RNA(sRNA)——或(iii)避免微生物附着在表面上，例如通过破坏生物膜形成中涉及的淀粉样蛋白结构。生物膜相关病症的治疗已被证实是相当大的未满足的临床需求。

定制的空脂质体(例如由胆固醇(CHOL)和/或鞘磷脂(SM)组成的空脂质体)及其在细菌感染治疗中的用途已被描述用作细菌毒素的诱捕剂(WO 2013/186286；Henry BD等,Nat Biotechnol 2015；33(1):81-88；Azeredo da Silveira,S和Perez,A,ExpertRev.Anti Infect.Ther.2015；13(5):531-533)。

因此，本发明的一个目的是提供具有抗生物膜活性的组合物和用于治疗与生物膜相关的病症和疾病的组合物。

发明内容

我们惊奇地发现，根据本发明的具有确定的脂质组成的空脂质体和具有确定的脂质组成的空脂质体的混合物能够预防或减少生物膜的形成并消除或减少已有的生物膜。特别地，令人惊奇地发现，本发明的空脂质体及其混合物被证明减少了铜绿假单胞菌的生物膜形成。因此，根据本发明的具有确定脂质组成的空脂质体和空脂质体的混合物能够预防或减少生物膜的形成或消除或减少已有的生物膜，因此能够预防和治疗例如急性和慢性的细菌感染或囊性纤维化等病症和疾病。

而且，通过本发明的单一的空脂质体或空脂质体的混合物破坏或削弱生物膜或避免或减少生物膜的形成将导致同时或随后施用的抗微生物剂、特别是杀生物剂(抗菌剂)、尤其是抗生素或抗真菌剂的功效提高。这是高度协同的效果，因为被释放的浮游细菌或真菌对抗菌剂和抗生素的敏感度更高(高达1000倍)。通过同时或随后的抗生素或抗真菌治疗，可以消除浮游生物，并避免感染扩散到身体的其他部位。此外，被释放的生物体更容易受到宿主免疫防御机制的影响，因此可以通过宿主自身的免疫系统更有效地清除。

此外，据信本发明的组合物和本发明的空脂质体的非毒性代表了本发明的另一个有益和有利的特征。

因此，在第一方面，本发明提供了一种在预防或减少生物膜形成或消除或减少已有生物膜的方法中使用的组合物，其中所述组合物包含并优选由以下组成：(i)单一的空脂质体，其中所述单一的空脂质体选自：(a)包含胆固醇的空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)，其中优选地，所述空脂质体包含胆固醇和鞘磷脂，并进一步优选由鞘磷脂和鞘磷脂组成；(b)由鞘磷脂组成的空脂质体；或(ii)空脂质体的混合物；其中所述空脂质体的混合物包含选自以下的至少一种空脂质体，优选由以下的至少一种空脂质体组成：(a)包含胆固醇的空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)，其中优选地，所述空脂质体包含胆固醇和鞘磷脂，并且进一步优选由胆固醇和鞘磷脂组成；(b)由鞘磷脂组成的空脂质体；(c)空脂质体，其包含磷脂酰胆碱和鞘磷脂，并优选由磷脂酰胆碱和鞘磷脂组成；以及至少一种空脂质体，其彼此独立地选自包含并优选由脂质或磷脂组成的空脂质体，所述脂质或磷脂选自胆固醇、鞘磷脂、神经酰胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、二酰基甘油和含有一个或两个或更多个长于4个碳原子并最多达28个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸。

在另一方面，本发明提供了一种由鞘磷脂和胆固醇组成的空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)，在用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法中使用，优选在哺乳动物中，进一步优选在人类中。

在另一方面，本发明提供了由鞘磷脂组成的空脂质体，其在用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法中使用，优选在哺乳动物中，进一步优选在人中。

在另一方面，本发明提供了一种空脂质体的混合物，其包含：(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；和(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体；其在用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法中使用，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。

在另一方面，本发明提供了一种用于减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法，该方法包括向需要治疗的哺乳动物、优选人施用治疗有效量的本发明的组合物、本发明的单一的空脂质体或本发明的空脂质体的混合物。在另一方面，本发明提供了一种在处于危险中的受试者中预防生物膜形成的方法，该方法包括将有效量的本发明的组合物、本发明的单一的空脂质体或本发明的空脂质体的混合物施用于处于危险中的哺乳动物，优选人。在另一方面，本发明提供了一种用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法，该方法包括向需要治疗的哺乳动物，优选人，施用治疗有效量的本发明的组合物、本发明的单一的空脂质体或本发明的空脂质体混合物而无需共同施用标准的抗微生物剂。此外，本发明涉及预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜，包括在对感染进行标准抗菌治疗之前、之后、一起或并行地向需要治疗的哺乳动物，优选人，施用治疗有效量的本发明的组合物、本发明的单一的空脂质体或本发明的混合物。

随着该描述的继续，本发明的其他方面和实施例将变得显而易见。

附图说明

图1：使用1×10⁷个细胞/孔的细菌密度，本发明的空脂质体混合物对铜绿假单胞菌多药耐药菌株6077生物膜的抑制。该图显示了与不存在空脂质体的情况下形成的生物膜相比的生物膜抑制的百分比。

具体实施方式

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解含义的相同的含义。

本文所用的术语“约”应具有+/-10％的含义。例如，大约50％表示45％至55％。优选地，本文所用的术语“约”应具有+/-5％的含义。例如，约50％表示47.5％至52.5％。当在本文中使用术语“一个”时，除非另有说明，否则它们表示“至少一个”。特别地，术语“一个”或“一种”与所述单一的空脂质体、所述第一空脂质体和所述第二空脂质体结合使用以描述根据本发明的空脂质体和空脂质体的混合物。通常并且优选地是指单一空脂质体和包含所述第一空脂质体和所述第二空脂质体的空脂质体的混合物。

因此，在第一方面，本发明提供了一种在用于预防或减少生物膜形成或消除或减少已有生物膜的方法中使用的组合物，其中所述组合物包含并优选由以下组成：(i)单一的空脂质体，其中所述单一的空脂质体选自：(a)包含胆固醇的空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)，其中优选地，所述空脂质体包含胆固醇和鞘磷脂，并进一步优选由鞘磷脂和鞘磷脂组成；(b)由鞘磷脂组成的空脂质体；或(ii)空脂质体的混合物；其中所述空脂质体的混合物包含选自以下的至少一种空脂质体，优选由以下的至少一种空脂质体组成：(a)包含胆固醇的空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)，其中优选地，所述空脂质体包含胆固醇和鞘磷脂，并且进一步优选由胆固醇和鞘磷脂组成；(b)由鞘磷脂组成的空脂质体；(c)空脂质体，其包含磷脂酰胆碱和鞘磷脂，并优选由磷脂酰胆碱和鞘磷脂组成；以及至少一种空脂质体，其彼此独立地选自包含并优选由脂质或磷脂组成的空脂质体，所述脂质或磷脂选自胆固醇、鞘磷脂、神经酰胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、二酰基甘油和含有一个或两个或更多个长于4个碳原子并最多达28个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸。

如本文所用，术语“空脂质体”是指这样的脂质体，优选人工脂质体，其平均直径为20nm至10μm，优选为20至500nm，并且进一步优选地其平均直径为20nm至400nm，更进一步优选为40nm至400nm或20nm至200nm，并且由一个或多个磷脂双层组成，并且通常且优选为单层囊泡和多层囊泡，更优选为小单层囊泡(SUV)。在一个优选的实施方案中，本文所用的术语“空脂质体”通常并且优选地是指不掺入任何药物的脂质体，通常并且优选地是指不掺入任何药物的脂质体。如本文所用，当涉及本发明的空脂质体时，“被掺入/掺入”通常且优选地是指被包封/包封在脂质体的腔中，在脂质体的潜在双层内或作为脂质体膜层的一部分。在另一个优选的实施方案中，如本文所用，术语“空脂质体”通常且优选地是指根据本发明的由鞘磷脂和胆固醇组成或由鞘磷脂组成的脂质体，并且仅进一步包含水溶性无机化合物和/或水溶性有机分子，其中通常和优选地，所述水溶性无机化合物和/或水溶性有机分子衍生自所述发明的空脂质体的合成，并且其中，通常且优选地，所述水溶性无机化合物是无机盐，其优选选自NaCl、KCl、MgCl₂，其中所述水溶性有机分子是缓冲剂，其中优选所述水溶性有机分子选自葡萄糖和HEPES。通常和优选地，由于在本发明的空脂质体的生产过程中所述水溶性无机化合物和/或水溶性有机分子的存在，它们被掺入本发明的本发明的空脂质体中。在另一个优选的实施方案中，本文所用的术语“空脂质体”通常并且优选地是指根据本发明的由鞘磷脂和胆固醇组成或由鞘磷脂组成的脂质体，其中所述空脂质体不包含抗氧化剂。在另一个优选的实施方案中，本文所用的术语“空脂质体”通常并且优选地是指根据本发明的由鞘磷脂和胆固醇组成或由鞘磷脂组成的脂质体，并且仅进一步包含水溶性无机化合物和/或水溶性有机分子，其中通常和优选地，所述水溶性无机化合物和/或水溶性有机分子衍生自所述发明的空脂质体的合成，并且其中，通常和优选地，所述水溶性无机化合物是优选选择的无机盐选自NaCl、KCl、MgCl₂，其中所述水溶性有机分子是缓冲剂，其中优选所述水溶性有机分子选自葡萄糖和HEPES，并且其中所述空脂质体由鞘磷脂和胆固醇组成或由鞘磷脂组成本发明的化合物不包含抗氧化剂。

如本文所用，术语“生物膜”应指彼此粘附，粘附于表面、包括生物和非生物表面的界面或与组织或粘液相关的界面的细菌和/或真菌细胞群。该定义还包括小型和大型微生物聚集体和絮凝物，以及多孔介质孔隙空间内的附着种群。如本文所用，术语“抗生物膜活性”或仅“抗生物膜”是指预防或减少生物膜形成或消除或减少已有生物膜、至少部分释放微生物、优选细菌、或至少部分溶解生物膜。如本文所用，术语“生物膜细菌”是指存在于生物膜中的非浮游细菌。

本文使用的术语“ESKAPE病原体”应指选自粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肠杆菌属的病原体。

如本文所用以及涉及生物膜或生物膜形成的术语“抑制”、“破坏”、“减少”和“消除”是指完全或部分抑制(优选大于20％，进一步优选大于30％，进一步优选大于50％，进一步优选大于90％，还更优选大于95％或甚至超过99％)生物膜形成，通常并优选就剩余细胞数量和/或发育而言，还包括其范围是与生物膜发育或生物膜形成和/或发育相关的过程的逆转。关于后者，其优选是指以比未处理的生物膜或用已知对生物膜的稳定性没有影响的化合物处理的生物膜更大的速率消除已有的生物膜。此外，抑制可以是永久性的或暂时性的。就暂时性抑制而言，生物膜的形成和/或发展可以被抑制持续足以产生所需效果的时间(例如至少5天，优选至少10天)。优选地，对生物膜的抑制是完全和/或永久性的(优选没有持留菌)(“消除”)。

如本文所用，术语“旨在介入受试者体内的医疗装置”是指本文所定义的手术侵入装置或可植入装置，例如但不限于欧盟委员会DG健康和消费者理事会(EuropeanCommission DG Health and Consumer Directorate)B，B2单元“化妆品和医疗设备”涉及理事会指令93/42/EEC在医疗设备上的应用指南。

如本文所用，术语“治疗”、“处理”或“疗法”是指获得期望的生理作用的手段。就部分或完全治愈疾病或病症和/或归因于该疾病或病症的症状而言，该作用可以是治疗性的。该术语是指抑制疾病或病症，即阻止其发展，或改善疾病或病症，即导致疾病或病症消退。如本文所用以及在根据本发明的离体方法的语境中或在用本发明的组合物处理表面(例如哺乳动物细胞、组织或结构的表面，或植物细胞、组织或结构的表面，或食物设备的表面，或选自医疗设备的表面或打算与水或水溶液接触的表面)的语境中使用术语“治疗”或“处理”，应指代并包括(但不限于)以根据本发明的所述离体方法或将所述本发明的组合物接触，涂覆和施加至所述表面。

如本文所用，术语“预防”是指预防或延迟疾病或病症和/或归因于该疾病或病症的症状的发作。

如本文所用，术语“有效量”是指当施用或应用于受试者或患者或表面时足以产生有益或期望结果的活性成分(通常并且优选地是根据本发明的组合物)的量。在预防或治疗的语境中，术语“医疗器械的表面”通常优选地用于介入患者体内。更具体地，本文所用的术语“治疗有效量”是指当给予受试者或患者时足以产生有益或期望结果的活性成分(例如根据本发明的组合物)的量。治疗有效量可以在一次或多次给药、施用、剂量中应用。本领域普通技术人员可以容易地确定根据本发明的组合物的治疗有效量。在本发明的语境中，“治疗有效量”是在与预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜或与所述生物膜形成或所述已有生物膜相关的病症或疾病的治疗相关的一个或多个参数上产生客观测量的变化的量，其中优选所述病症或疾病是由所述生物膜中存在的细菌引起的，并且其中优选所述病症或疾病选自感染，并且其中进一步优选地，所述感染是气道感染-传播疾病、脑膜炎、***、胃肠道疾病、天然瓣膜心内膜炎、结肠炎、***炎、尿道炎、结膜炎、耳炎、(优选是中耳炎)、囊性纤维化、呼吸机相关性肺炎、菌血症或伤口感染。当然，治疗有效量将取决于特定的受试者和所治疗的病症、受试者的体重和年龄、疾病状况的严重程度、所选的特定组合物、要遵循的给药方案、给药时间、给药方式等，所有这些都可以由本领域普通技术人员容易地确定。

如本文所用，术语“受试者”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”是指需要诊断、预后、预防或治疗的任何受试者，特别是哺乳动物受试者，例如人或驯养的哺乳动物(如狗、猫或马)或食用动物(如牛、绵羊或猪)，优选是人类。

在一个优选的实施方案中，所述至少一种空脂质体彼此独立地选自包含并优选由脂质或磷脂(所述脂质或磷脂选自胆固醇、鞘磷脂、神经酰胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、二酰基甘油和含有一个或两个或更多个长于4个碳原子且最多28个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸的磷脂酸)组成空脂质体，选自(a)包含胆固醇的空脂质体，其中胆固醇的量至少为30％(重量/重量)，其中优选所述空脂质体包含胆固醇和鞘磷，并进一步优选由胆固醇和鞘磷脂组成；(b)由鞘磷脂组成的空脂质体；(c)空脂质体，其包含磷脂酰胆碱和鞘磷脂，并优选由磷脂酰胆碱和鞘磷脂组成。

在一个优选的实施方案中，所述(i)单一的空脂质体选自(a)包含胆固醇和鞘磷脂的空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的空脂质体；并且其中所述空脂质体混合物包含：(a)包含胆固醇和鞘磷脂的第一空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体。

在一个优选的实施方案中，所述(i)单一的空脂质体选自(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的空脂质体；并且其中所述空脂质体混合物包含(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体。

在一个优选的实施方案中，所述组合物包含选自以下的单一的空脂质体，优选由其组成：(a)包含胆固醇和鞘磷脂的空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)。

在一个优选的实施方案中，用于根据本发明的方法的所述组合物包含单一的空脂质体，优选由单一的空脂质体组成，其中所述单一的空脂质体选自(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的空脂质体，其中胆固醇含量至少为30％(重量/重量)；或(b)由鞘磷脂组成的空脂质体。

在另一个优选的实施方案中，用于根据本发明的方法的所述组合物包含单一的空脂质体，优选由单一的空脂质体组成，其中所述单一的空脂质体是由鞘磷脂和胆固醇组成的空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)。优选地，所述空脂质体的胆固醇的量为30％-70％(重量/重量)，进一步优选地，所述空脂质体的胆固醇的量为35％-60％(重量/重量)。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的胆固醇的量为45％-55％(重量/重量)，再进一步优选地，所述空脂质体的胆固醇的量为约50％(重量/重量)。因此，在本发明的非常优选的实施方案中，所述单一的空脂质体包含并优选由50％(重量/重量)的鞘磷脂和50％(重量/重量)的胆固醇组成，在用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法中使用，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。

在另一个优选的实施方案中，用于根据本发明的所述方法的所述组合物包含单一的空脂质体，优选由单一的空脂质体组成，其中所述单一的空脂质体是由鞘磷脂组成的空脂质体。

在一个实施方案中，所述组合物包含空脂质体的混合物，优选由空脂质体的混合物组成，其中所述空脂质体的混合物包含并优选由以下组成：(a)包含胆固醇的第一空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体；(c)包含并优选由磷脂酰胆碱和鞘磷脂组成的第三空脂质体。

在另一个实施方案中，所述使用的组合物包含空脂质体的混合物，优选由空脂质体的混合物组成，其中所述空脂质体的混合物包含并优选由以下组成：(a)包含胆固醇的第一空脂质体，其中胆固醇的量至少为30％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体；(c)包含并优选由磷脂酰胆碱和鞘磷脂组成的空脂质体；并且进一步任选地(d)至少一种空脂质体，其彼此独立地选自包含并优选由脂质或磷脂组成的空脂质体，所述脂质或磷脂选自胆固醇、鞘磷脂、神经酰胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、二酰基甘油和含有一个或两个或更多个长于4个碳原子并最多达28个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸。

在一个实施方案中，所述组合物包含并优选由空脂质体的混合物组成，其中所述空脂质体的混合物包含(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体；(c)包含并优选由磷脂酰胆碱和鞘磷脂组成的第三空脂质体。

在一个实施方案中，所述组合物包含空脂质体的混合物，优选由空脂质体的混合物组成，其中所述空脂质体的混合物包含并优选由以下组成：(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(每重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体；(c)包含并优选由脂质或磷脂组成的第三空脂质体，其中所述脂质或磷脂选自胆固醇、鞘磷脂、神经酰胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、二酰基甘油和含有一个或两个或更多个长于4个碳原子并最多达28个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸。

在一个优选的实施方案中，所述组合物包含空脂质体的混合物，优选由其组成，其中所述空脂质体的混合物包含并优选由以下组成：(a)包含胆固醇和鞘磷脂的第一空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体。

在另一个优选的实施方案中，用于根据本发明的方法的所述组合物包含并优选由空脂质体的混合物组成，其中所述空脂质体的混合物包含(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇含量至少为30％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体。优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为30％-70％(重量/重量)，进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为35％-60％(重量/重量)。在另一个优选的实施方案中，所述第一空脂质体的胆固醇的量为45％-55％(重量/重量)，并且再进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为约50％(重量/重量)。因此，在本发明非常优选的实施方案中，所述第一空脂质体包含，优选由50％(重量/重量)的鞘磷脂和50％(重量/重量)的胆固醇组成，在用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法中使用，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。

在另一个优选的实施方案中，用于根据本发明的方法的所述组合物包含空脂质体的混合物，其中所述空脂质体的混合物由以下组成：(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇的量至少为30％(重量/重量)，优选为30％-70％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体。优选地，所述第一空脂质体的胆固醇含量为35％-60％(重量/重量)，进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇含量为45％-55％(重量/重量)，再次优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为约50％(重量/重量)。因此，在本发明的非常优选的实施方案中，所述空脂质体混合物的所述第一空脂质体由50％(重量/重量)鞘磷脂和50％(重量/重量)胆固醇组成，在用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法中使用，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。

在另一个优选的实施方案中，用于根据本发明的方法的所述组合物由空脂质体的混合物组成，其中所述空脂质体的混合物由以下组成：(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇为至少30％(重量/重量)，优选30％-70％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体。优选地，所述第一空脂质体的胆固醇含量为35％-60％(重量/重量)，进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇含量为45％-55％(重量/重量)，并再次进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的所述量为约50％(重量/重量)。因此，在本发明的非常优选的实施方案中，所述空脂质体混合物的所述第一空脂质体由50％(重量/重量)的鞘磷脂和50％(重量/重量)的胆固醇组成，在用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法中使用，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含至少1％、优选至少5％、进一步优选至少10％、再进一步优选至少20％、再进一步优选至少30％(重量/重量)的所述第一空脂质体并且至多99％、优选至多95％、进一步优选至多90％、再次进一步优选至多80％、再进一步优选至多70％(重量/重量)的第二空脂质体，其中再次优选地，所述空脂质体的混合物包含至少40％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多60％(重量/重量)的所述第二空脂质体。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体混合物包含至少1％、优选至少5％、进一步优选至少10％、再进一步优选至少20％、再进一步优选至少30％(重量/重量)的所述第二空脂质体和至多99％、优选至多95％、进一步优选至多90％、再进一步优选至多80％、再进一步优选至多70％(重量/重量)的所述第一空脂质体，并且其中，进一步优选地，所述空脂质体的混合物包含至少40％(重量/重量)的所述第二空脂质体和至多60％(重量/重量)的所述第一空脂质体。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含1-99％、优选5％-95％、进一步优选10-90％、再进一步优选20-80％、再进一步优选30-70％(重量/重量)的所述第一和所述第二空脂质体，并且其中又优选地，所述空脂质体的混合物还包含40-60％(重量/重量)的所述第一和第二空脂质体。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含至少30％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多70％(重量/重量)的所述第二空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质体的混合物包含至少40％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多60％(重量/重量)的所述第二空脂质体。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体混合物包含至少45％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多55％(重量/重量)的所述第二空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质体混合物包含约50％(重量/重量)的所述第一空脂质体和约50％(重量/重量)的所述第二空脂质体。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含至少30％(重量/重量)的所述第二空脂质体和至多70％(重量/重量)的所述第一空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质体的混合物包含至少40％(重量/重量)的所述第二空脂质体和至多60％(重量/重量)的所述第一空脂质体。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含至少45％(重量/重量)的所述第二空脂质体和至多55％(重量/重量)的所述第一空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质体的混合物包含约50％(重量/重量)的所述第二空脂质体和约50％(重量/重量)的所述第一空脂质体。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含至少20％(重量/重量)的所述第一和所述第二空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质体的混合物包含至少30％(重量/重量)的所述第一和所述第二空脂质体。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含至少40％(重量/重量)的所述第一和所述第二空脂质体。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体混合物包含各自至少20％(重量/重量)的所述第一和所述第二空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质体混合物包含各自至少30％(重量/重量)的所述第一和所述第二脂质体。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含各自至少40％(重量/重量)的所述第一和所述第二空脂质体。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物由所述第一空脂质体和所述第二空脂质体组成。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物由所述第一空脂质体和所述第二空脂质体组成，并且其中所述空脂质体的混合物由至少40％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多60％(重量/重量)的所述第二空脂质体组成，并且优选地，其中所述空脂质体的混合物由约50％(重量/重量)的所述第一空脂质体和约50％(重量/重量)的所述第二空脂质体组成。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物由所述第一空脂质体和所述第二空脂质体组成，并且其中所述空脂质体的混合物由至少40％(重量/重量)的所述第二空脂质体和至多60％(重量/重量)的所述第一空脂质体组成，并且优选地，其中所述空脂质体的混合物优选由约50％(重量/重量)的所述第二空脂质体和约50％(重量/重量)的所述第一空脂质体组成。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物由1-99％、优选5％-95％、进一步优选10-90％、再进一步优选20-80％、再进一步优选30-70％(重量/重量)的所述第一和第二空脂质体组成，并且其中又优选地，所述空脂质体的混合物由40％-60％(重量/重量)的所述第一和第二空脂质体组成。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物由所述第一空脂质体和所述第二空脂质体组成，并且其中所述空脂质体的混合物由至少40％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多60％(重量/重量)的所述第二空脂质体组成，并且其中优选地，所述空脂质体的混合物由约50％(重量/重量)的所述第一空脂质体和约50％(重量/重量)的所述第二空脂质体组成，并且其中所述第一空脂质体的胆固醇含量为45％-55％(重量/重量)，并且其中优选地，所述第一空脂质体的胆固醇含量为约50％(重量/重量)。

在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物由所述第一空脂质体和所述第二空脂质体组成，并且其中所述空脂质体的混合物由至少40％(重量/重量)的所述第二空脂质体和至多60％(重量/重量)的所述第一空脂质体组成，并且其中优选地，所述空脂质体的混合物由约50％(重量/重量)的所述第二空脂质体和约50％的所述第一空脂质体的重量(重量/重量)组成，并且其中所述第一空脂质体的胆固醇的量为45％-55％(重量/重量)，并且其中优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为约50％(重量/重量)。

在另一个优选的实施方案中，用于本发明的空脂质体是脂质体，优选是人工脂质体，其平均直径为20nm至10μm，优选为20至500nm，并且进一步优选地具有20nm至200nm的平均直径。用于本发明的空脂质体是不封装任何药物的脂质体。用于本发明的空脂质体不包含任何药物。用于本发明的空脂质体不掺入其他药物。如本文所用，“掺入”通常且优选地是指封装在脂质体的腔中、在脂质体的潜在双层内或作为脂质体的膜层的一部分。用于本发明的脂质体由一个或多个磷脂双层组成，通常且优选地为单层和多层囊泡。最优选的是小单层囊泡(SUV)。

在另一方面，本发明提供了一种由鞘磷脂和胆固醇组成的空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)，用于预防或减少生物膜形成的方法或用于消除或减少已有生物膜的方法，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。在另一个优选的实施方案中，用于根据本发明的方法的所述空脂质体包含鞘磷脂和胆固醇，优选由其组成，其中胆固醇的量为30％-70％(重量/重量)，进一步优选所述空脂质体的胆固醇为35％-60％(重量/重量)。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的胆固醇的量为45％-55％(重量/重量)，再进一步优选地，所述空脂质体的胆固醇的量为约50％(重量/重量)。因此，在本发明的非常优选的实施方案中，所述空脂质体包含并优选由50％(重量/重量)的鞘磷脂和50％(重量/重量)的胆固醇组成，用于预防或减少生物膜形成的方法或用于消除或减少已有生物膜的方法，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。

在另一方面，本发明提供了由鞘磷脂组成的空脂质体，其用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法，优选在哺乳动物中，进一步优选在人中。

在另一方面，本发明提供了一种空脂质体的混合物，其包含：(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体；用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法中，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为30％-70％(重量/重量)，进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为35％-60％(重量/重量)。在另一个优选的实施方案中，所述第一空脂质体的胆固醇的量为45％-55％(重量/重量)，再进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为约50％(重量/重量)。因此，在本发明的非常优选的实施方案中，所述第一空脂质体包含，优选由50％(重量/重量)的鞘磷脂和50％(重量/重量)的胆固醇组成，用于预防或减少生物膜形成的方法或用于消除或减少已有生物膜的方法，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含至少30％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多70％(重量/重量)的所述第二空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质混合物脂质体包含至少40％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多60％(重量/重量)的所述第二空脂质体。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体混合物包含至少45％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多55％(重量/重量)的所述第二空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质体混合物包含约50％(重量/重量)的所述第一空脂质体和约50％(重量/重量)的所述第二空脂质体。

在另一方面，本发明提供了一种空脂质体的混合物，其包含：(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；和(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体；用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法中，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为30％-70％(重量/重量)，进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为35％-60％(重量/重量)。在另一个优选的实施方案中，所述第一空脂质体的胆固醇的量为45％-55％(重量/重量)，并且再次进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为约50％(重量/重量)。因此，在本发明的非常优选的实施方案中，所述第一空脂质体包含，优选由50％(重量/重量)的鞘磷脂和50％(重量/重量)的胆固醇组成，用于预防或减少生物膜形成的方法或用于消除或减少已有生物膜的方法，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体混合物包含至少30％(重量/重量)的所述第二空脂质体和至多70％(重量/重量)的所述第一空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质混合物脂质体包含至少40％(重量/重量)的所述第二空脂质体和至多60％(重量/重量)的所述第一空脂质体。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含至少45％(重量/重量)的所述第二空脂质体和至多55％(重量/重量)的所述第一空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质体的混合物包含约50％(重量/重量)的所述第二空脂质体和约50％(重量/重量)的所述第一空脂质体。

在另一方面，本发明提供了一种空脂质体的混合物，其包含：(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇的量为至少30％(重量/重量)；和(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体；用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为30％-70％(重量/重量)，进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为35％-60％(重量/重量)。在另一个优选的实施方案中，所述第一空脂质体的胆固醇的量为45％-55％(重量/重量)，再进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为约50％(重量/重量)。因此，在本发明的非常优选的实施方案中，所述第一空脂质体包含，优选由50％(重量/重量)的鞘磷脂和50％(重量/重量)的胆固醇组成，用于预防或减少生物膜形成的方法或用于消除或减少已有生物膜的方法，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含1-99％，优选5％-95％，进一步优选10-90％，再进一步优选20-80％，再进一步优选30-70％(重量/重量)的所述第一和第二空脂质体，其中再优选地，所述空脂质体混合物包含40％-60％(重量/重量)的所述第一和第二空脂质体。

因此，在另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含空脂质体的混合物，优选由其组成，其中所述空脂质体的混合物包含，优选由以下组成：(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇含量至少为30％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体；用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法中，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为30％-70％(重量/重量)，进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为35％-60％(重量/重量)。在另一个优选的实施方案中，所述第一空脂质体的胆固醇的量为45％-55％(重量/重量)，再进一步优选地，所述第一空脂质体的胆固醇的量为约50％(重量/重量)。因此，在本发明的非常优选的实施方案中，所述第一空脂质体包含，优选由50％(重量/重量)的鞘磷脂和50％(重量/重量)的胆固醇组成，用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法中，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。在另一个优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含1-99％，优选5％-95％，进一步优选10-90％，再进一步优选20-80％，再进一步优选30-70％(重量/重量)的所述第一和第二空脂质体，并且其中再次优选地，所述第一和第二空脂质体的重量百分比优选为40％-60％(重量/重量)。

因此，在本发明非常优选的实施方案中，所述空脂质体的混合物包含并优选由以下组成：(i)由约50％(重量/重量)鞘磷脂和约50％(重量/重量)的胆固醇组成的第一空脂质体，和(ii)由(100％)鞘磷脂组成的第二个空脂质体；其中所述空脂质体的混合物包含至少45％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多55％(重量/重量)的所述第二空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质体的混合物包含约50％(重量/重量)的所述第一空脂质体和约50％(重量/重量)的所述第二空脂质体，用于预防或减少生物膜形成的方法或用于消除或减少已有生物膜的方法，优选在哺乳动物中，更优选在人类中。

因此，在另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含空脂质体的混合物，优选由其组成，其中所述空脂质体的混合物包含并优选由以下组成：(i)由约50％(重量/重量)鞘磷脂和约50％(重量/重量)胆固醇组成的第一空脂质体，以及(ii)由(100％)鞘磷脂组成的第二个空脂质体；其中所述空脂质体的混合物包含至少45％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多55％(重量/重量)的所述第二空脂质体，并且其中优选地，所述空脂质体的混合物包含约50％(重量/重量)的所述第一空脂质体和约50％(重量/重量)的所述第二空脂质体，用于预防或减少生物膜形成或消除或减少已有生物膜的方法，优选在哺乳动物中使用。优选在人类中。

在另一个优选的实施方案中，所述第一空脂质体由约50％(重量/重量)的鞘磷脂和约50％(重量/重量)的胆固醇组成，所述第二空脂质体由(100％)鞘磷脂的组成，其平均直径为20至500nm，优选20nm至400nm，再进一步优选40nm至400nm。在另一个优选的实施方案中，由约50％(重量/重量)鞘磷脂和约50％(重量/重量)胆固醇组成的所述第一空脂质体，和由(100％)鞘磷脂的组成的第二空脂质体包含pH 6.6-8.0。在另一个优选的实施方案中，由约50％(重量/重量)鞘磷脂和约50％(重量/重量)胆固醇组成的所述第一空脂质体，和由(100％)鞘磷脂的组成的第二空脂质体，包含多分散指数＜0.45。在另一个优选的实施方案中，由约50％(重量/重量)鞘磷脂和约50％(重量/重量)胆固醇组成的所述第一空脂质体，和由(100％)鞘磷脂的组成的第二空脂质体，包含ζ电位为-25至+2mV。

根据本领域已知的挤出或超声处理或微流化(例如高压均质化)方法制造脂质体。例如，将脂质在有机溶剂如氯仿中混合。蒸发氯仿，并将干燥的脂质膜在水溶液如生理盐水(0.9％NaCl)、Krebs溶液或Tyrode溶液中水合，并进一步超声处理以产生脂质体。如果需要，可以通过将脂质体通过固定孔径的膜过滤器挤出来控制脂质体的大小。通常并优选在即将施用之前，以所需的比例混合具有不同脂质组成的单独生产的脂质体。作为另一个例子，脂质体是使用标准脂质体的水合作用、挤出和渗滤工艺制备的，其中将脂质溶解在溶剂(如乙醇)中同时混合，然后将脂质溶液添加到PBS缓冲溶液中，同时混合不同大小的脂质体以自发地混合形成并充分水合。将所得的囊泡反复挤压通过一系列聚碳酸酯轨迹蚀刻膜，直到获得所需的粒径，这是通过动态光散射法测得的。用PBS对挤出后的加工液进行渗滤，以从加工液中去除溶剂，最后用PBS缓冲液将其浓缩和/或稀释至总脂质的目标浓度。

脂质体的脂质表面(双层)在水基溶剂中自发形成，因此将水以及可能在脂质体生产过程中存在的其他水溶性无机和有机分子捕获在脂质体内。在本研究中使用的空脂质体是在含有水和简单有机或无机分子(例如NaCl、KCl、MgCl₂、葡萄糖、HEPES和/或CaCl₂)的缓冲液中产生的脂质体。

在本发明的非常优选的实施方案中，组合物包含空脂质体的混合物，优选由其组成，所述混合物包含(a)由鞘磷脂和胆固醇组成的第一空脂质体，其中胆固醇的量为约50％(重量/重量)；(b)由鞘磷脂组成的第二空脂质体；用于预防或减少生物膜形成的方法或用于消除或减少已有生物膜的方法，优选在哺乳动物中，进一步优选在人体内，再进一步优选用于预防或减少人的生物膜形成的方法中。优选地，所述空脂质体的混合物包含至少40％(重量/重量)的所述第一空脂质体和至多60％(重量/重量)的所述第二空脂质体。更优选地，所述空脂质体的混合物包含约50％(重量/重量)的所述第一空脂质体和约50％(重量/重量)的所述第二空脂质体。

在另一个优选的实施方案中，所述使用是用于预防或减少生物膜形成的方法，其中优选地，所述使用是用于预防或减少表面上的生物膜形成的方法。优选地，所述表面是哺乳动物、优选人的细胞、组织或结构的表面，并且其中进一步优选地，所述细胞或组织是肺、肌肉、骨骼或皮肤细胞或组织，并且所述结构是牙齿。

在另一个优选的实施方案中，所述使用是用于预防或减少哺乳动物、优选在人类中的生物膜形成的方法，其中进一步优选地，所述使用是用于预防或减少在哺乳动物、优选在人类中的表面上的生物膜形成的方法。

在另一个优选的实施方案中，所述使用是用于消除或减少已有生物膜的方法，其中优选地，所述使用是用于防止或减少表面上的生物膜形成的方法。优选地，所述表面是哺乳动物、优选人的细胞、组织或结构的表面，并且其中进一步优选地，所述细胞或组织是肺、肌肉、骨骼或皮肤细胞或组织，并且所述结构是牙齿。

在另一个优选的实施方案中，所述使用是用于预防或减少表面上的生物膜形成的方法或用于消除或减少表面上的已有生物膜的方法。

在另一个优选的实施方案中，所述使用是用于预防或减少表面上生物膜形成的方法，优选地，所述表面是哺乳动物细胞、组织或结构的表面。

在另一个优选的实施方案中，所述使用是用于预防或减少表面上生物膜形成的方法，优选地，所述表面是植物细胞、组织或结构的表面。在另一个优选的实施方案中，植物可以是但不限于产生胡萝卜、土豆、黄瓜、洋葱、西红柿、生菜、苹果、柑桔或李子的植物。在某些实施方案中，植物细胞来自植物，并且组织或结构选自植物的叶、根、花、果实或其他可食用结构。在另一个优选的实施方案中，所述表面是食用植物的表面。

在另一个优选的实施方案中，所述使用是用于消除或减少表面上已有生物膜的方法。优选地，所述表面是哺乳动物、优选人的细胞、组织或结构的表面，并且其中进一步优选地，所述细胞或组织是肺、肌肉、骨骼或皮肤细胞或组织，并且所述结构是牙齿。

在另一个优选的实施方案中，所述表面是伤口敷料的表面。

在另一个优选的实施方案中，所述表面通常且优选是非生物的、选自医疗装置的表面或旨在与水或水溶液接触的表面。

在另一个优选的实施方案中，所述表面通常且优选是非生物的医疗设备的表面，所述医疗设备通常且优选地旨在介入受试者的体内，其中所述医疗设备选自起搏器、起搏器导线、导管、支架、血管假体、人工心脏瓣膜、心脏起搏器、脑脊液分流器、导尿管、腹膜透析导管、关节假体和骨科固定装置、子宫内装置、胆道支架、***植入物、隐形眼镜、假牙。

在另一个优选的实施方案中，所述表面是旨在与水或水溶液接触的表面，其中所述旨在与水或水溶液接触的表面是船体、管道、过滤器、应变或泵的表面，其中优选地，所述表面是不锈钢或聚丙烯。

在某些优选的实施方案中，旨在介入受试者体内的医疗器械是旨在短期使用(>60分钟，<30天)的外科侵入性器械，例如但不限于夹具、输注套管、皮肤闭合设备、临时填充材料、心脏外科手术中使用的组织稳定剂、心血管导管、心输出量探头、临时起搏器导线、旨在引流心脏(包括心包膜)的胸导管、颈动脉分流器、消融导管、神经系统导管、皮质电极或近距离放射治疗设备。

在某些优选实施例中，旨在介入受试者体内的医疗装置是可植入装置或长期手术侵入性装置(>30天)，例如人工关节置换、韧带、分流器、支架和瓣膜(例如肺动脉瓣)、指甲和板、人工晶状体、内部闭合装置(包括血管闭合装置)、组织增强植入物、周围血管导管、周围血管移植物和支架、***植入物、不可吸收的缝合线、骨水泥和上颌面部植入物、弹性外科手术设备、专门用于眼前节手术、牙桥和牙冠、牙科填充材料和销钉、牙科合金、陶瓷和聚合物、人工心脏瓣膜、动脉瘤夹、人工血管和支架、中央血管导管、脊椎支架、CNS电极、心血管缝合线、永久性和可取回的腔静脉滤器、中隔阻塞装置、主动脉内球囊泵、外部左心室辅助设备。

在食品加工业中，生物膜会在食品加工设备(如巴氏灭菌管和管)中引起慢性细菌污染。

在以海洋为基础的工业中，海洋污染通常被描述为包括多个阶段，细菌粘附的早期步骤开始形成生物膜，然后是第二批的大型藻类的孢子(例如肠浒苔，丝藻属)和原生动物(例如钟形虫属，聚缩虫)的定殖。最后是第三批的定殖物-大型污底生物，包括被膜、软体动物和无柄线虫。因此，生物膜的形成为水下表面的生物污染提供了基础，这些表面例如是船体、船螺旋桨、笼、水下码头结构、海上石油平台上的水下结构、海底矿山、浮标、海底电缆、发电厂的冷却系统、管道和过滤器海水淡化厂等。

在另一个优选的实施方案中，所述使用是用于预防或减少表面上细菌生物膜形成的方法。

生物膜居住细菌可以是任何细菌，即革兰氏阴性或***或支原体和螺旋体。在这些类别中，存在与动物细胞、植物细胞或人造表面相关的细菌。在某些实施方案中，在此讨论的生物膜中产生和/或存在的细菌是革兰氏阴性细菌或***。

在另一个优选的实施方案中，所述使用是用于预防或治疗病症或疾病，并且其中优选地，所述病症或疾病是由所述生物膜中存在的细菌引起的。

在另一个优选的实施方案中，所述使用用于预防，通常且优选地用于病症或疾病，并且其中进一步优选地，所述病症或疾病是由所述生物膜中存在的细菌引起的。在另一个优选的实施方案中，所述使用是用于治疗病症或疾病，并且其中优选地，所述病症或疾病是由所述生物膜中存在的细菌引起的。

在另一个优选的实施方案中，所述使用是用于病症或疾病的预防或治疗，并且其中所述疾病是传染病。在另一个优选的实施方案中，所述使用通常和优选地用于病症或疾病的预防，并且其中所述病症或疾病是传染性疾病。在另一个优选的实施方案中，所述使用用于病症或疾病的治疗，并且其中所述病症或疾病是传染性疾病。

在另一个优选的实施方案中，所述使用用于预防或治疗哺乳动物、优选人的病症或疾病，并且其中优选所述病症或疾病是感染性疾病。在另一个优选的实施方案中，所述使用用于治疗哺乳动物、优选人的病症或疾病，并且其中优选所述病症或疾病是感染性疾病。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病选自感染，并且其中优选地，所述感染是气道感染、性传播疾病、脑膜炎、***、胃肠道疾病、天然瓣膜心内膜炎、结肠炎、***炎、尿道炎、结膜炎、耳炎(优选中耳炎)、囊性纤维化、呼吸机相关性肺炎、菌血症或伤口感染。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是气道感染、性传播疾病、脑膜炎、泌尿道感染、胃肠道疾病、天然瓣膜心内膜炎、结肠炎、***炎、尿道炎、结膜炎、耳炎(优选中耳炎)、囊性纤维化、呼吸机相关性肺炎、菌血症或伤口感染。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是感染。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病选自气道感染、性传播疾病、脑膜炎、***、胃肠道疾病、天然瓣膜心内膜炎、结肠炎、***炎、尿道炎、结膜炎、耳炎(优选中耳炎)、囊性纤维化、呼吸机相关性肺炎、菌血症或伤口感染。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是气道感染。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是性传播疾病。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是脑膜炎。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是泌尿道感染。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是胃肠道疾病。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是天然瓣膜心内膜炎。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是结肠炎。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是***炎。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是尿道炎。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是结膜炎。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是耳炎，优选中耳炎。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是呼吸机相关性肺炎。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是菌血症。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是(慢性)伤口感染，通常并且优选是慢性伤口感染。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是慢性气道感染，优选地，所述慢性气道感染是囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病或慢性鼻窦炎。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是囊性纤维化。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是由细菌、支原体、螺旋体或真菌引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是由细菌引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是由支原体引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是由螺旋体引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是由真菌引起的，其中优选地，所述真菌选自念珠菌、曲霉菌、隐球菌、丝孢菌、球孢菌或肺孢菌。

涉及生物膜的感染和病症包含由***例如肺炎链球菌、芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特菌、葡萄球菌属、乳酸菌(包含植物乳杆菌和乳酸乳球菌)、远缘链球菌、变异链球菌，革兰氏阴性细菌例如大肠杆菌、铜绿假单胞菌、肠杆菌科、沙门氏菌属、胸膜肺炎放线杆菌、变形杆菌、鲍曼不动杆菌、志贺氏菌属、莫拉氏菌、幽门螺杆菌、嗜麦芽单胞菌、贝氏杆菌、乙酸菌、军团菌、蓝细菌、螺旋体门(spirochaetes)、绿色硫细菌及绿色非硫细菌、奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、粘质沙雷氏菌，以及支原体、螺旋体(spiroplasmas)和真菌例如念珠菌、曲霉菌、隐球菌、丝孢菌、球孢菌、肺孢菌所引起的感染。形成生物膜的某些病原体是ESKAPE病原体。涉及生物膜的感染和病症包括例如由革兰氏阴性球菌引起的性传播疾病(例如淋病奈瑟菌)、脑膜炎(例如脑膜炎奈瑟氏球菌)或呼吸道症状(例如卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌)。它们还包含由革兰氏阴性杆菌引起的感染和病症，如主要呼吸系统疾病(例如肺炎克雷伯菌、肺炎军团菌、铜绿假单胞菌)、主要***疾病(例如大肠杆菌、变形杆菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌)或主要胃肠道疾病(例如幽门螺杆菌、肠炎沙门氏菌、伤寒沙门氏菌)。涉及生物膜的感染还包括医院获得性感染(例如鲍曼不动杆菌)引起的医院和重症监护室的菌血症、继发性脑膜炎和呼吸机相关性肺炎。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病，优选所述感染，是由至少一种ESKAPE病原体引起的。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病，优选所述感染，是由粪肠球菌引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病，优选所述感染，是由金黄色葡萄球菌引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病，优选所述感染，是由肺炎克雷伯菌引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病，优选所述感染，是鲍曼不动杆菌引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病，优选所述感染，是由铜绿假单胞菌引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病，优选所述感染，是肠杆菌属引起的。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是由细菌引起的，并且其中所述细菌是革兰氏阴性细菌或***。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是由革兰氏阴性细菌引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病是由***引起的。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病由选自肺炎链球菌、芽孢杆菌属、单核细胞增生李斯特菌、葡萄球菌属、乳酸菌(优选植物乳杆菌和乳酸乳球菌)、远缘链球菌、变形链球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、肠杆菌科、沙门氏菌种(优选肠炎沙门氏菌、肠炎沙门氏菌或伤寒沙门氏菌)、胸膜肺炎放线杆菌、变形杆菌、痢疾志贺氏菌种、莫拉氏菌(优选卡他莫拉菌)、痢疾杆菌(优选幽门螺杆菌)、寡养单胞菌、蛭弧菌、乙酸菌、军团菌(优选嗜肺军团菌)、蓝细菌、螺旋体门(spirochaetes)、绿色硫细菌及绿色非硫细菌、奈瑟菌(优选淋病奈瑟菌或脑膜炎奈瑟菌)、流感嗜血杆菌、粪肠球菌、金黃葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、粘质沙雷氏菌、阴沟肠杆菌和肠杆菌属的革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌引起。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病，优选所述感染，是由流感嗜血杆菌或粘质沙雷氏菌引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病，优选所述感染，是由流感嗜血杆菌引起的。在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病，优选所述感染，是由粘质沙雷氏菌引起的。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病，优选所述感染，是由选自粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肠杆菌属的至少一种ESKAPE病原体引起的，或者是由流感嗜血杆菌或粘质沙雷氏菌引起的。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病由选自肺炎链球菌、芽孢杆菌属、单核细胞增生李斯特菌、葡萄球菌属、乳酸菌(优选植物乳杆菌和乳酸乳球菌)、远缘链球菌、变形链球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、肠杆菌科、肠沙门氏菌、胸膜肺炎放线杆菌、变形杆菌的革兰氏阴性或***引起。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病由选自铜绿假单胞菌、大肠杆菌、肠杆菌科、肠炎沙门氏菌、胸膜肺炎放线杆菌和变形杆菌的革兰氏阴性细菌引起。

在另一个非常优选的实施方案中，所述病症或疾病是由铜绿假单胞菌引起的。在另一个非常优选的实施方案中，所述病症或疾病由革兰氏阴性细菌引起，其中所述革兰氏阴性细菌是铜绿假单胞菌。在另一个非常优选的实施方案中，所述使用是用于预防或减少细菌生物膜形成的方法，所述生物膜通常并且优选在表面上，其中所述细菌是铜绿假单胞菌。

铜绿假单胞菌生物膜可作为疾病复发的储库(reservoirs)，阻碍了其完全治愈。这种机会性病原体的生物膜既涉及慢性感染，例如囊性纤维化患者的肺部感染(80％的CF患者长期被铜绿假单胞菌感染)，也包含威胁生命的顽固性医院获得性感染，包括呼吸机相关性肺炎、烧伤患者的伤口、术后伤口感染以及皮肤和软组织感染。它还涉及医疗仪器、设备和工具的污染(Rabin等,Future Med.Chem.7(4)2015；Tran等,PLOS Pathogens 10(11)2014)。

在另一个优选的实施方案中，所述病症或疾病由选自肺炎链球菌、芽孢杆菌属、单核细胞增生李斯特菌、葡萄球菌属、乳酸菌(优选乳酸杆菌属和乳酸乳球菌)、远缘链球菌和变形链球菌的***引起。

在另一个非常优选的实施方案中，所述病症或疾病是由金黄色葡萄球菌引起的。在另一个非常优选的实施方案中，所述使用是用于预防或减少细菌生物膜形成的方法，所述方法通常并且优选在表面上，其中所述细菌是金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌生物膜是引起多重感染的主要原因，并对常规的抗感染方法，尤其是抗生素疗法成为挑战。金黄色葡萄球菌的许多临床分离株是耐甲氧西林(MRSA)的或多重耐药的。随着生物膜形成的金黄色葡萄球菌对少数MRSA仍然易感的抗生素的耐受性的增强，对抗生素治疗的抗性进一步增强。万古霉素是用于金黄色葡萄球菌生物膜相关感染的最常用药物，但是生物膜对万古霉素的耐受性增加表明使用组合治疗方法是必要的。

金黄色葡萄球菌生物膜通常与植入物相关的感染(假体矫形植入物、心脏瓣膜、起搏器和血管导管)、慢性伤口、骨髓炎、囊性纤维化、肺部感染和心内膜炎有关。例如，囊性纤维化肺部感染与生物膜的存在和慢性、长期细菌持久性增加死亡率有关。对于金黄色葡萄球菌，这些感染通常是由MRSA引起的。金黄色葡萄球菌也是感染心内膜或心脏假体表面，引起感染性心内膜炎的主要原因。金黄色葡萄球菌性心内膜炎随着外科手术程序的使用不断增加，涉及植入人工心血管设备，如人工心脏瓣膜、移植物、血液透析导管和起搏器(Bhattacharya等,Expert Rev Anti Infect Ther.13(12)2015)。

在另外的优选实施方案中，根据本发明的用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法进一步包含向有需要的哺乳动物、优选向有需要的人施用治疗有效量的本发明的组合物、本发明的单一的空脂质体或本发明的混合物。

为了防止或减少生物膜的形成或为了消除或减少已有的生物膜，本发明的单一的空脂质体或本发明的空脂质体混合物可以以静脉内、肌肉内、腹膜内或皮下注射的形式施用。通过本领域已知的标准方法制备注射溶液，例如在无菌生理盐水中作为脂质体的悬浮液。还考虑将本发明的单一的空脂质体或本发明的空脂质体混合物作为气雾剂用于治疗呼吸道感染、或以可用于舌下或颊侧施用、眼内或玻璃体内施用以及局部用药的制剂形式使用(例如滴眼液、牙膏、皮肤或口腔局部用液体悬浮液等)。由脂质体例如本发明的空脂质体制备此类制剂的方法是本领域已知的。基于本发明的单一的空脂质体或本发明的空脂质体混合物的预防措施将有助于预防与生物膜相关的病症或疾病，例如，预防将经历、正经历或曾经历植入手术的患者、或患有慢性感染的患者、或处于其他有利于生物膜相关病症或疾病发展的环境中预防生物膜发展。

在另外的优选实施方案中，根据本发明的用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法进一步包含向有需要的哺乳动物、优选向有需要的人施用治疗有效量的本发明的组合物、本发明的单一空脂质体、本发明的空脂质体混合物，其中本发明的组合物、本发明的单一空脂质体或本发明的空脂质体混合物不与任何其他药物联合施用，因此通常单独施用，其中进一步通常地和优选地，本发明的组合物、本发明的单一空脂质体或本发明的空脂质体混合物在相同时间或前后最多4周的任何时间、优选最多前后2周的任何时间为非共同施用的。

在本发明的另一个优选的实施方案中，所述使用与抗微生物剂组合，其中优选所述抗微生物剂是抗生素、抗真菌剂、抗毒素剂、抗毒力剂、防腐剂或抗微生物剂及其组合，并且其中进一步优选地，所述抗微生物剂是抗生素。

本发明还涉及用于预防或减少生物膜形成或用于消除或减少已有生物膜的方法，优选地涉及用于预防或减少生物膜形成的方法，用于治疗病症或疾病，优选细菌感染，其中所述方法包括：在施用抗微生物剂、优选施用细菌感染的标准抗生素治疗之前、之后、一起或并行地，向有需要的哺乳动物、优选人施用治疗有效量的本发明的单一空脂质体或本发明的空脂质体混合物。

本发明的这一优选方面和实施方案旨在改善治疗效果，促进浮游生物的生长，从而消除生物膜提供的额外的群落水平的抵抗力，促进传统抗生素将病原体靶向细胞的水平，并且还允许减少抗生素剂量。而且，由于已经描述了本发明的单一空脂质体和空脂质体混合物作为毒素中和剂，因此其对毒素的作用将同时消解细菌毒性并允许免疫防御系统发挥针对病原体的适当反应。

在本发明的其他优选实施方案中，该方法还包含在施用抗微生物剂之前、之后、一起或并行地向有需要的哺乳动物、优选在人中施用治疗有效量的本发明的组合物、本发明的单一空脂质体或空脂质体混合物。其中优选地，所述抗微生物剂是抗生素、抗真菌剂、抗毒素剂、抗毒力剂、防腐剂或其组合，并且其中进一步优选地，所述抗微生物剂是抗生素。在另一个优选的实施方案中，该方法进一步包含在施用标准抗生素治疗或标准护理之前、之后、一起或并行地向有需要的哺乳动物、优选人施用治疗有效量的本发明的组合物、本发明的单一空脂质体或空脂质体的混合物。

在本发明的其他优选实施方案中，该方法进一步包括将有效量的本发明的组合物、本发明的单一空脂质体或本发明的空脂质体混合物施用于有需要的动物，优选食用动物，例如牛或绵羊或猪，而不需要与任何其他药物合用，因此通常单独使用，或在抗微生物剂之前、之后、一起或并行地使用，其中优选地，所述抗微生物剂是抗生素、抗真菌剂、抗真菌剂、毒素剂、抗毒剂、防腐剂或其组合，并且其中进一步优选地，所述抗菌剂是抗生素。在另一个优选的实施方案中，该方法进一步包含在标准抗生素治疗或施用之前、之后、一起或并行地，将有效量的本发明的组合物、本发明的单一空脂质体或本发明的空脂质体的混合物施用于有需要的动物，优选食用动物，例如牛或绵羊。

在本发明的其他优选实施方案中，该方法进一步包括将治疗有效量的本发明的组合物、本发明的单一空脂质体或本发明的空脂质体混合物施用于有需要的动物，优选食用动物，例如牛或绵羊或猪，不与任何其他药物合用，因此通常单独使用，或者在施用抗微生物剂之前、之后、一起或并行地使用，其中优选地，所述抗微生物剂是抗生素、抗真菌剂、抗微生物剂、抗毒素剂、抗毒力剂、防腐剂或其组合，并且其中进一步优选地，所述抗微生物剂是抗生素。在另一个优选的实施方案中，该方法还包含在标准抗生素治疗之前、之后、一起或并行地，将治疗有效量的本发明的组合物、本发明的单一空脂质体或本发明的空脂质体混合物施用于有需要的动物，优选为食用动物，例如牛或绵羊。

在本发明的其他优选实施方案中，该方法进一步包含将治疗有效量的本发明的组合物、本发明的单一空脂质体或本发明的空脂质体混合物接触或涂覆在表面上，优选地在植物表面上，或者不与任何其他药物结合使用，因此通常单独使用，或者在使用抗微生物剂之前、之后、一起或并行地使用，其中优选地，所述抗微生物剂是抗生素、抗真菌剂、抗毒素剂、抗毒力剂、防腐剂或其组合，并且其中进一步优选地，所述抗微生物剂是抗生素。

应当理解的是，如果需要的话，如上定义的空脂质体和如上定义的空脂质体的混合物可以一起使用或与其他化合物、前药或药物组合使用。例如，可以添加其他化合物、前药或药物以制备标准药物组合物。还考虑添加药物或药物样化合物，或进一步添加已知的或新型的在脂质体内部掺入药物或药物样化合物的脂质体。

所考虑的药物和前药特别是本领域技术人员已知的标准抗微生物或抗真菌治疗或抗毒素或抗毒力剂。此外，尤其考虑诸如抗生素的药物。此类抗生素是例如碳青霉烯类，例如亚胺培南/西司他丁、美罗培南、厄他培南和多利培南；第一代头孢菌素，例如头孢氨苄和头孢氨苄；第二代头孢菌素，例如头孢呋辛、头孢克洛和头孢普罗尔；第三代头孢菌素，例如头孢他啶、头孢曲松、头孢克肟、头孢地尼、头孢托仑、头孢噻肟、头孢泊肟肟和头孢替丁；***头孢菌素，例如头孢吡肟；第5代头孢菌素，例如头孢洛林磷酰胺和头孢比洛尔；糖肽，例如万古霉素、替考拉宁和特拉万星；大环内酯类，例如克拉霉素、阿奇霉素、地红霉素、红霉素、罗红霉素、曲安霉素、替利霉素、壮观霉素和螺旋霉素；青霉素，例如阿莫西林、氟氯西林、奥沙西林、羧苄青霉素和哌拉西林；青霉素组合，例如阿莫西林/克拉维酸盐、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄青霉素/舒巴坦和替卡西林/克拉维酸盐；喹诺酮类药物，例如环丙沙星(例如Aradigm的环丙沙星脂质体)和莫西沙星；对抗分枝杆菌的药物，例如利福平(rifampicin，在美国称为rifampin)、氯法齐明、氨苯砜、开普霉素、环丝氨酸、乙胺丁醇、乙硫磷、异烟肼、吡嗪酰胺、利福布丁、利福喷丁和链霉素；其他抗生素，如甲硝唑、阿司匹明、氯霉素、磷霉素、夫西地酸、利奈唑胺、莫匹罗星、板硝霉素、奎奴普丁/达福普汀、利福昔明、甲砜霉素、替加环素和咪唑；氨基糖苷类，例如丁胺卡那霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、妥布霉素(例如Axentis的Fluidosomes^TM妥布霉素)和巴龙霉素；磺胺类药物，例如马芬尼、磺胺基咪唑烷、磺胺乙酰胺、磺胺嘧啶、磺胺嘧啶银、磺胺甲恶唑、磺胺甲恶唑、磺胺酰胺、柳氮磺胺吡啶、磺胺异恶唑、甲氧苄啶和甲氧苄氨磺胺甲恶唑(三甲恶唑，TMP-SMX)；四环素类，例如去甲环素、强力霉素、米诺环素、土霉素和四环素；林可酰胺，例如克林霉素和林可霉素；和脂肽，例如达托霉素。

考虑使用的其他药物是例如抗炎药，包含皮质类固醇(糖皮质激素)，例如氢化可的松(Cortisol)、可的松、强的松、***龙、甲基***龙、***、倍他米松、曲安西龙、贝氯米松、醋酸氟可的松、醋酸脱氧皮质酮、布***、***和氟西尼德；非甾体类抗炎药，例如水杨酸盐，例如阿司匹林(乙酰水杨酸)、双氟尼醛和水杨酸盐；丙酸衍生物，例如布洛芬、地昔布洛芬、萘普生、芬诺洛芬、酮洛芬、右旋酮洛芬、氟比洛芬、氧杂布洛辛和洛索洛芬；乙酸衍生物，例如消炎痛、托美汀、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、双氯芬酸和萘丁美酮；烯醇酸(oxicam)衍生物，例如吡罗昔康、美洛昔康、替诺昔康、屈噁昔康、氯诺昔康和异昔康；芬那酸衍生物(芬那酸盐)，例如甲芬那酸、甲氯芬那酸、氟苯那酸和甲苯磺酸。选择性COX-2抑制剂(coxibs)，例如塞莱昔布；以及其他药物，例如利克飞龙(licofelone)。

考虑的其他药物是例如血管加压药和血管收缩药，例如加压素、羟甲唑啉、去氧肾上腺素、丙基己二胺、伪麻黄碱、肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺和抗组胺药。

还考虑了其他类型的药物，例如扑热息痛(止痛药)、制霉菌素、两性霉素B、多烯、唑和***、核苷类似物、棘白菌素、肺炎球菌素(抗真菌感染)、布比卡因(术后疼痛控制)、***(止痛药)、Verteporfm(眼科疾病)，***(更年期障碍)，化合物。

在这种联合治疗中，可以将本发明的空脂质体和脂质体混合物视为佐剂，并将相应的治疗方法视为辅助治疗。

在本发明的另一个优选实施方案中，所述方法是离体方法，其中优选地，所述方法包括使表面、优选医疗设备的表面与任何一种本发明的组合物接触。

在另一方面，本发明提供了一种用于防止或减少表面上生物膜形成，优选细菌生物膜形成或用于消除或减少表面上已有生物膜的方法，该方法包括使所述表面或已有生物膜与本发明组合物中的任何一种接触。

在另一方面，本发明提供了一种用于防止或减少表面上的生物膜形成、优选细菌生物膜形成或用于消除或减少表面上的已有生物膜的方法，其中所述方法包括使用本发明组合物中的任何一种涂覆所述表面或已有的生物膜。

在另一方面，本发明提供了一种用于防止或减少表面上生物膜形成、优选细菌生物膜形成或用于消除或减少表面上已有生物膜的方法，包括用本发明组合物中的任何一种处理所述表面或已有生物膜。

在另一方面，本发明提供了用于预防或减少表面上生物膜形成，优选细菌生物膜形成或用于消除或减少表面上已有生物膜的离体方法，包括使用本发明组合物中的任何一种接触所述表面或已有生物膜。因此，所述发明方法不是通过疗法治疗人体或动物体的方法。

在另一方面，本发明提供了用于预防或减少表面上的生物膜形成、优选细菌生物膜的形成或用于消除或减少表面上已有的生物膜的方法，其中所述方法包括使用本发明组合物中的任何一种涂覆所述表面或已有生物膜。

在另一方面，本发明提供了用于预防或减少表面上生物膜形成、优选细菌生物膜形成或用于消除或减少表面上已有生物膜的离体方法，包括使用本发明组合物中的任何一种处理所述表面或已有生物膜。因此，所述发明方法不是通过疗法治疗人体或动物体的方法。

用生物或药物活性化合物或组合物涂覆表面的方法是本领域众所周知的。例如，上述非生物表面，即医疗器械的表面可通过将本发明的组合物掺混到成膜组分中而被涂覆，并且被制成可用于抑制生物膜在医疗设备的表面上形成的抗生物膜涂层。成膜组分可包含一种或多种树脂，例如但不限于一种或多种可水解、可溶或不可溶的树脂。例如，该树脂可以是甘醇树脂、丙烯酸树脂、氯化橡胶树脂、环氧树脂、硅树脂、聚酯树脂、聚氨酯树脂、含氟聚合物树脂和本领域技术人员已知的其他树脂中的一种或多种。

实施例

脂质体：

来自蛋黄的鞘磷脂(SM；CAS号：85187-10-6)，购自Sigma(S0756)，Avanti PolarLipids(860061)或Lipoid GmbH。

来自羊脂的胆固醇(CHOL；CAS No.57-88-5)，购自Sigma(C-8667)，Avanti PolarLipids(70000)或Dishman Netherlands BV。

根据本发明，包括鞘磷脂(SM)和胆固醇(CHOL)或由其组成的本发明的空脂质体或本发明的空脂质体混合物可以从如上所述的天然来源获得，或者可以通过化学合成的方式获得。

脂质体制备

使用超声或微流化(例如高压均质或根据水合、挤压和渗滤工艺规程)制备单层鞘氨醇：胆固醇(35:65摩尔比)和仅鞘磷脂(100％)的脂质体。

声波处理：

将脂质分别以1mg/ml的浓度溶于氯仿中，并保存在-20℃下。为了制备脂质体，将各个脂质的氯仿溶液按需要以一定比例混合，以常规地产生50-500μl的最终溶液。在60℃下将氯仿完全蒸发20-50分钟。将含有2.5mM CaCl₂的50μl或100μl Tyrode缓冲液(140mMNaCl、5mM KCl、1mM MgCl₂、10mM葡萄糖、10mM HEPES；pH＝7.4)添加到装有干燥脂质膜并剧烈涡旋的试管中。将脂质悬浮液在Eppendorf热混合器中在剧烈振荡下于45℃孵育20-30分钟。为了生产脂质体，将最终的脂质悬浮液在Bandelin Sonopuls超声仪中于6℃以70％的功率超声处理3x5秒。在将脂质体制剂用于实验之前，将其在6℃下放置至少1小时。

水合，挤压和渗滤工艺流程：

在另一种方法中，每种脂质体制剂均通过乙醇水合和挤出方法制备。将脂质分别溶解在乙醇和叔丁醇中，同时在高温下(约55℃)混合。然后将脂质溶液添加到PBS缓冲溶液(氯化钠、磷酸二氢钠、二水合物和磷酸二钠，将二水合物溶解在注射用水中，同时混合，用盐酸(HCl)或氢氧化钠将pH调节至7.0-7.4(NaOH)，并通过0.2μm过滤器过滤)，同时在高温(约65℃)下混合约30分钟。然后，在高压和高温(约65℃)下，通过一系列聚碳酸酯轨迹蚀刻膜将随后的工艺流体反复挤出，直至达到所需的粒径，该粒径通过动态光散射法测得(挤出机实例：挤出机)。然后使用截留分子量为100,000的中空纤维滤芯将随后的工艺流体浓缩大约2倍，然后针对PBS缓冲溶液的大约10体积交换进行渗滤，以除去乙醇和叔丁醇。在渗滤结束时，将过程流体浓缩约30％，以使其随后稀释至目标脂质浓度。在稀释之前，将过程流体通过0.2μm灭菌级过滤器过滤，以除去可能在无菌过滤过程中堵塞过滤器的任何较大脂质体。然后用PBS缓冲溶液将过程流体稀释至总脂质为40mg/mL的目标。最终制剂通过串联的两个0.2μm灭菌级过滤器无菌过滤，并无菌填充到玻璃管瓶中。

脂质体中单一的脂质的浓度始终以重量/重量比给出。在含有鞘磷脂和胆固醇的脂质体中，1：1(重量/重量)的比例对应于50％(重量/重量)或35:65的摩尔比。具体参见表1中的描述。

表1：脂质体的规格

实施例1

对铜绿假单胞菌多重耐药菌株6077生物膜的抑制作用

如结晶紫(Crystal violet)方法所揭示的，优选的本发明的空脂质体混合物被证明可减少铜绿假单胞菌菌株6077的生物膜的形成。所述优选的本发明的空脂质体混合物由所述第一空脂质体和所述第二脂质体为1：1(重量/重量-w/w)混合物组成，其中所述第一空脂质体包含重量比为1：1(1：1w/w；摩尔比为35:65)的鞘磷脂(SM)和胆固醇(CHOL)，并且所述第二空脂质体仅由SM组成。

方法

简言之，铜绿假单胞菌菌株6077在胰蛋白酶大豆肉汤(TSB)中生长，并在含有2％葡萄糖的LB肉汤中稀释至每毫升1×10⁷或1×10⁶个菌落形成单位(CFU)的浓度。将一百微升(100μl)的稀释接种物添加到96孔平底微量滴定板的孔中。以100μL的体积加入浓度增加的优选本发明的空脂质体的混合物，以评价对生物膜形成的抑制。每个条件一式三份。浓度范围从75μg/mL到2883μg/mL。环丙沙星、庆大霉素和妥布霉素用作对照。将板在37℃下孵育过夜。然后从孔中除去细菌，并洗涤生物膜单层。通过将平板在60℃孵育1小时来固定生物膜。孵育后，将生物膜用0.4％的结晶紫溶液染色5分钟，然后用70％的乙醇洗脱。用分光光度法在600nm下测量洗脱材料的光密度。阳性对照包括在不存在脂质体或对照药物的情况下形成生物膜。阴性对照包括未添加细菌接种物的孔的光密度(即背景噪声)。

结果

以1×10⁷个细胞/孔的细菌密度(高细菌密度设置)，优选的本发明的空脂质体混合物(即，在不存在任何抗生素的情况下)单独以75μg/mL的浓度抑制了生物膜的形成，最大抑制为72％(图1)。还测试了1×10⁶个细胞/孔的较低细菌密度，以便避免可能导致OD不一致的可能的“过度生长”。在这种较低的细菌密度下，优选的本发明的空脂质体混合物对生物膜形成的总体抑制水平较低(对生物膜形成的抑制率为46％)，但仍存在于剂量响应曲线的中间浓度(300至800μg/mL)中。使用较低的细菌密度，当在细菌接种后8小时施加优选的本发明的空脂质体混合物时，也观察到一些生物膜破坏活性。