阅读说明：本技术 熨斗在定量盘封口中的应用 (Application of iron in quantitative disc sealing ) 是由 谌志强 王景峰 邱志刚 薛斌 李辰宇 王尚 赵辰 张曦 杨晓波 于 2020-04-23 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种熨斗在定量盘封口中的应用,利用温度在140～180℃的熨斗对装有100mL待测水样的定量盘进行封口,可实现对水质微生物指标的检测。本发明突破现有酶底物法中传统封口机的不足,实现了封口机的小型化和便携化,确保酶底物法能在野外、条件较差的实验室等环境下进行水质微生物指标的检测,有效提升了检测人员的水质微生物指标检测工作效率。(The invention provides an application of an iron in sealing a quantitative plate, which is characterized in that the iron with the temperature of 140-180 ℃ is used for sealing the quantitative plate filled with 100mL of water sample to be detected, so that the detection of water quality microorganism indexes can be realized. The invention breaks through the defects of the traditional sealing machine in the existing enzyme substrate method, realizes the miniaturization and the portability of the sealing machine, ensures that the enzyme substrate method can detect the water quality microorganism indexes in the environments such as the field, laboratories with poor conditions and the like, and effectively improves the water quality microorganism index detection work efficiency of detection personnel.)

熨斗在定量盘封口中的应用

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，具体涉及熨斗在定量盘封口中的应用。

背景技术

随着人们生活水平的提高，国家对人们的饮用水的安全性问题日益重视，而水中微生物的污染是导致人身健康与否的关键因素，特别是在农村或偏远地区，饮用水的微生物污染问题尤为严重。为了保障人们的饮用水卫生安全，我国对饮用水进行微生物检测，检测的微生物指标主要有总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌，检测方法主要包括多管发酵法、滤膜法和酶底物法，酶底物法以其操作简便、准确、易学易用和结果易于判读的优点得到众多检测部门的青睐。

目前通用的酶底物法检测装置由程控定量封口机、51孔或97孔定量检测盘、定量瓶和酶底物检测试剂四部分组成，程控定量封口机是酶底物法检测水中微生物的必备设备之一，但传统的程控定量封口机体积大(约为33×35.5×40.6cm)、质量重(约为11kg)、价格昂贵，这极大的限制了酶底物法在条件较差的农村或野外等环境的应用，使得在水质微生物学指标检测的工作效率较低。因此，迫切需要寻找或研发出能够替代传统封口机且价格低廉的设备，确保酶底物法能够在农村、野外或条件较差的实验室等环境中进行水质微生物学指标的检测。

发明内容

鉴于现有水质微生物学指标检测方法中酶底物法配套使用的封口机存在的缺陷或不足，提供一种熨斗在定量盘封口中的应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种熨斗在定量盘封口中的应用。

优选的，所述定量盘包括酶底物法检测过程中使用的51孔或97孔定量检测盘。

上述应用，优选的包括如下步骤：

1)将熨斗预热至封口温度140～180℃；

2)在所述熨斗预热期间，将待测水样加入定量盘中，然后把定量盘平放于配套的垫板上；

3)待熨斗加热至封口温度后，将熨斗从定量盘底部向定量盘的开口端移动进行封口；

4)重复步骤3)的操作，至定量盘开口端无水样流出且孔与孔之间无液体流动，完成封口。

优选地，上述封口温度为150℃。

优选地，熨斗预热的时间为2～3min，更优选地熨斗预热的时间为2.5min。

优选地，上述封口时间为30s～60s。

优选地，重复次数为3～5次。

优选地，步骤3)所述封口过程中，在定量盘的同一位置，熨斗的停留时间≤10s。

与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下的有益效果：

(1)采用熨斗对加入待测水样的定量盘密封后，通过对大肠菌群、总大肠菌群、大肠埃希氏菌以及耐热大肠菌群的检测结果表明，与传统封口机相比，本发明以熨斗作为封口机同样可以保证检测水质微生物指标的准确性。

(2)本发明提供的熨斗在定量盘封口中应用，与传统封口机相比，熨斗具有体积小、重量轻，携行方便和价格低廉的优点，保证了水质微生物检测能够在农村、野外或条件较差的实验室等环境下的顺利进行，有效提升了检测人员的水质微生物指标检测工作效率。

(3)本发明提供的熨斗在定量盘封口中应用，采用熨斗封口定量盘时，无漏液、破孔的情况，且加热时间短。

具体实施方式

本发明提供了一种熨斗在定量盘封口中的应用，本发明对于所述熨斗没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的熨斗即可，为了方便携带、易于封口，熨斗的类型优选为可折叠熨斗(购自日本无印良品公司，型号TPA-MJ211)。

本发明中，为了方便密封，减少封口时间，熨斗的宽度优选为大于或等于定量盘的宽度，熨斗的宽度更优选为与定量盘的宽度相同。

在本发明中，将熨斗预热至封口温度140～180℃。

在本发明中，将熨斗的温度调节按钮设置到上述封口温度范围后，打开熨斗开关进行预热。

在本发明中，封口温度过低，会引起封口不严密，甚至达不到封口的效果，导致检测结果不准确甚至检测工作无法进行；封口温度过高，则会导致定量盘的破损、待测水样过热，进而影响检测结果的准确性，本发明中熨斗的封口温度优选为150～170℃，更优选地为150℃。

与程控定量封口机相比，本发明中熨斗预热的时间优选为2～3min，更优选地为2.5min，而程控定量封口机预热时间为15min，本发明以熨斗作为封口机的预热时间更短。

本发明在所述熨斗预热期间，将待测水样加入定量盘中，然后把定量盘平放于配套的垫板上。在本发明中，所述的待测水样的添加方式按照常规方法添加即可，本发明将定量盘平放于配套的垫板上是为了对定量盘封口，能够保证封口的方便、快捷，同时保证封口后的定量盘无破孔、无漏液。

本发明待熨斗加热至封口温度后，将熨斗从定量盘底部向定量盘的开口端移动进行封口。在本发明中，为了确保孔与孔之间封闭严实，应将熨斗从定量盘底部向定量盘的开口端移动。

本发明中，当熨斗在对定量盘进行封口时，在定量盘的同一位置，熨斗的停留时间优选的≤10s时，如果对局部水样加热过久，会导致定量盘破孔、漏液，进而影响检测结果的准确性。

在本发明中，重复将熨斗从定量盘底部向定量盘的开口端移动进行封口的步骤，至定量盘开口端无水样流出且孔与孔之间无液体流动，完成封口。

为了保证定量盘内的水样不会流出及定量盘每个孔穴都是完全封闭的，确保各孔穴之间的水样不再流通，封口操作重复次数优选为3～4次，更优选为4次。

本发明的熨斗与传统封口机相比：

传统封口机如程控定量封口机，尺寸：约为33cm×35.5cm×40.6cm，重量：约11kg，价格：3～5万元，本发明的熨斗如上述可折叠熨斗，体积：约为15.2cm×7cm×9.8cm(展开尺寸)，15.2cm×7cm×3.9cm(折叠尺寸)，重量：0.4kg，价格：0.03～0.04万元，因此本发明的熨斗具有体积小、重量轻，携行方便和价格低廉，克服了酶底物法在条件较差的农村或野外等环境应用中的限制。

本发明中，无论采用51孔定量盘还是97孔定量盘，经熨斗封口后，均能保证水质微生物检测结果的准确性，且并没有出现51孔或97孔定量盘的破孔、漏液的情况，因此，本发明采用熨斗作为定量盘的封口机，具有良好的封口效果，能够被广泛地应用于封口机领域。

下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种熨斗在定量盘封口中的应用，具体步骤如下：调节熨斗的温度按钮进行预热，熨斗预热期间，将混有培养基的100mL待测水样加入到51孔或97孔定量盘中，其中上述混有培养基的待测水样的培养基为科立得酶底物24h检测试剂，上述培养基在100mL待测水样的质量体积分数为2.6％，然后将51孔或97孔定量盘平放于配套的垫板上，当熨斗的温度分别达到110℃、130℃、150℃、170℃、190℃后，将熨斗从定量盘底部向定量盘的开口端移动进行封口，封口的操作重复4次，每次封口的时间为40s，且熨斗进行封口时，在定量盘的同一位置，熨斗的停留时间≤10s，最后比较在不同的封口温度下定量盘的漏液率，结果如下：

温度	110℃	130℃	150℃	170℃	190℃
						漏液率	100％	100％	0％	0％	33％

备注：漏液率为各个温度进行三次平行试验后的平均值。

实施例2

一种熨斗在定量盘封口中的应用，具体步骤如下：调节熨斗的温度按钮进行预热，熨斗预热期间，将混有培养基的100mL待测水样加入到51孔或97孔定量盘中，其中上述混有培养基的待测水样的培养基为科立得酶底物24h检测试剂，上述培养基在100mL待测水样的质量体积分数为2.6％，然后将51孔或97孔定量盘平放于配套的垫板上，熨斗预热2.5min后，熨斗的温度达到150℃后，将熨斗从定量盘底部缓慢向定量盘的开口端移动进行封口，封口的操作重复4次，每次封口的时间为40s，且熨斗进行封口时，在定量盘的同一位置，熨斗的停留时间≤10s。

实施例3

一种熨斗在定量盘封口中的应用，具体步骤如下：调节熨斗的温度按钮进行预热，熨斗预热期间，将混有培养基的100mL待测水样加入到51孔或97孔定量盘中，其中上述混有培养基的待测水样的培养基为科立得酶底物24h检测试剂，上述培养基在100mL待测水样的质量体积分数为2.6％，然后将51孔或97孔定量盘平放于配套的垫板上，熨斗预热2.7min后，熨斗的温度达到160℃后，将熨斗从定量盘底部缓慢向定量盘的开口端移动进行封口，封口的操作重复3次，每次封口的时间为50s，且熨斗进行封口时，在定量盘的同一位置，熨斗的停留时间≤10s。

实施例4

一种熨斗在定量盘封口中的应用，具体步骤如下：调节熨斗的温度按钮进行预热，熨斗预热期间，将混有培养基的100mL待测水样加入到51孔或97孔定量盘中，其中上述混有培养基的待测水样的培养基为科立得酶底物24h检测试剂，上述培养基在100mL待测水样的质量体积分数为2.6％，然后将51孔或97孔定量盘平放于配套的垫板上，熨斗预热2.9min后，熨斗的温度达到170℃后，将熨斗从定量盘底部缓慢向定量盘的开口端移动进行封口，封口的操作重复5次，每次封口的时间为35s，且熨斗进行封口时，在定量盘的同一位置，熨斗的停留时间≤10s。

实施例5

总大肠菌群、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测

大肠杆菌纯菌液的制备：将复苏的大肠杆菌接种于营养肉汤管中于37℃培养24h，然后采用平皿计数法测定菌液浓度，并对菌液进行梯度稀释，制备成浓度在10¹-10²CFU/100mL的样品，备用；大肠杆菌群纯菌液的检测：分别取上述制备好的样品各100mL倒入无菌的三角瓶中，按照实施例2所述方法进行封口作为试验组，以程控定量封口机采用本领域熟知的封口方法对大肠菌群纯菌液进行封口作为对照组，将封好口的定量盘分别置于37℃的培养箱中培养24h后，取出试验组、对照组的51孔和97孔定量盘，对定量盘上黄色孔计数，分别查51孔和97孔定量盘的MPN表即得到待测样品的浓度，其中试验组、对照组各进行5次平行试验。

分别取河水各100mL倒入无菌的三角瓶中，按照实施例3所述方法进行封口作为试验组，以程控定量封口机采用本领域熟知的封口方法对大肠菌群纯菌液进行封口作为对照组，将封好口的定量盘置于温度为37℃的培养箱培养24h，取出51孔和97孔定量盘，对定量盘上的黄色孔计数，分别查51孔和97孔定量盘的MPN表即得到河水中总大肠菌群的浓度。将有黄色孔的定量盘置于波长为366nm的紫外灯下对蓝色荧光孔计数，分别查51孔和97孔定量盘的MPN表即得到河水中大肠埃希氏菌的浓度，其中试验组、对照组各进行5次平行试验。

分别取河水各100mL倒入无菌的三角瓶中，按照实施例4所述方法进行封口作为试验组，以程控定量封口机采用本领域熟知的封口方法对大肠菌群纯菌液进行封口作为对照组，将封好口的定量盘置于温度为44.5℃的培养箱培养24h，取出51孔和97孔定量盘，对定量盘上的黄色孔计数，分别查51孔和97孔定量盘的MPN表即得到河水中耐热大肠菌群的浓度，其中试验组、对照组各进行5次平行试验。

其中51孔定量盘MPN表如表1所示：

表1 51孔定量盘MPN表

97孔定量盘MPN表具体参见中华人民共和国国家环境保护标准HJ1001-2018的附录B。

试验结果：

表2大肠杆菌浓度

表3总大肠菌群浓度

表4大肠埃希氏菌浓度

表5耐热大肠菌浓度

通过对试验组和对照组的总大肠菌群、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌浓度比较可知，试验组和对照组得到的总大肠菌群、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌浓度并无显著性差异，因此本发明以熨斗作为封口机同样可以保证数据的准确性。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。