阅读说明：本技术 一种用于血培养瓶生产的试剂及血培养瓶生产工艺 (Reagent for blood culture bottle production and blood culture bottle production process ) 是由 孙月鹏 许琼杰 张娟丽 吕斌 谭韦丽 罗江卫 于 2019-10-22 设计创作，主要内容包括：本发明涉及医学化学发光免疫分析检测技术领域,具体涉及是一种用于血培养瓶生产的培养基及血培养瓶生产工艺,包括第一试剂制备、第二试剂制备和灌装入瓶。其中第一试剂包括硅胶RT601A、硅胶RT601B和氢氧化钠,第二试剂包括胰酪胨、脑心浸粉、明胶胨、葡萄糖、氯化钠、L-精氨酸、丙酮酸钠、SPS和Tris,通过设置在培养瓶底部的CO<Sub>2</Sub>传感器对样本活性进行检测,解决了现有血培养瓶基于传统检测方法检出率不高,且结果不稳定,采用新的检测方法未有与之相适配血培养瓶的问题。(The invention relates to the technical field of medical chemiluminescence immunoassay detection, in particular to a culture medium for blood culture bottle production and a blood culture bottle production process. Wherein the first reagent comprises silica gel RT601A, silica gel RT601B and sodium hydroxide, the second reagent comprises tryptone, brain heart extract powder, gelatin peptone, glucose, sodium chloride, L-arginine, sodium pyruvate, SPS and Tris, and the first reagent is prepared by placing CO at the bottom of a culture bottle 2 The sensor detects the activity of the sample, solves the problems that the detection rate of the existing blood culture bottle based on the traditional detection method is not high, the result is unstable, and the new detection method is adopted and the blood culture bottle is not matched with the traditional detection methodThe problem of bottle cultivation.)

一种用于血培养瓶生产的试剂及血培养瓶生产工艺

技术领域

本发明涉及医学化学发光免疫分析检测技术领域，具体涉及是一种用于血培养瓶生产的培养基及血培养瓶生产工艺。

背景技术

当微生物侵入血液迅速繁殖超出机体免疫系统清除这些微生物的能力时形成菌血症或真菌血症，并可感染血管外组织。临床实验室用来检测血液中存在微生物的常用方法是血培养，血培养是采集患者血液标本并接种到培养瓶中，用以发现、识别病原微生物。在病人血液循环中培养得到活的微生物，对病人的诊断与预后具有非常重要的意义。阳性的血培养结果，不仅能确立而且证实病人的疾病是由于感染病原菌引起，更重要的是，它还可以提供病原菌对于抗生素的敏感性试验，从而优化抗生素治疗。从预后的角度来看，血培养中一个临床重要的病原菌生长，表明了宿主原发感染部位的抵抗力下降，或是机体不能清除病原菌或根除感染灶。从血液中培养得到病原菌的种类，同样也对预后有重要的意义。

公开号为CN104450506A的中国专利公开了一种厌氧血培养基，培养瓶及培养瓶的制备方法，其中主要依托于两大组成分不同的培养基组分，虽然能够降低培养基中代谢过程中产生的细胞毒性物质，但是依托的是传统的检测方法，整体检出率依旧不高。

发明内容

本发明针对现有血培养瓶基于传统检测方法检出率不高，且结果不稳定，采用新的检测方法未有与之相适配血培养瓶的问题，提供一种用于血培养瓶生产的培养基及血培养瓶生产工艺。

本发明解决上述技术问题，采用的技术方案是，一种用于血培养瓶生产的培养基，包括第一试剂和第二试剂，第一试剂包括硅胶RT601A、硅胶RT601B和氢氧化钠，第二试剂包括胰酪胨、脑心浸粉、明胶胨、葡萄糖、氯化钠、L-精氨酸、丙酮酸钠、SPS和Tris。

进一步的，本申请还提供了一种血培养瓶生产工艺，包括第一试剂制备、第二试剂制备和灌装入瓶，第一试剂制备包括以下步骤：

S1，配剂，取适量第一试剂，在其中添加纯化水，制得硅胶混合物；

S2，搅拌，将硅胶混合物搅拌均匀；

S3，第一次灌装，将搅拌均匀的硅胶混合物灌装至底部设有CO₂传感器和选择性渗透CO₂的膜的培养瓶；

S4，干燥，对培养瓶进行加热，使得培养瓶底部的硅胶混合物干燥固化；

S5，灭菌，将干燥固化后的培养瓶进行灭菌处理，备用；

第二试剂制备包括以下步骤：

S1，配剂，取适量第二试剂，在其中添加纯化水，制得试剂混合溶液；

S2，湿热灭菌，将试剂混合溶液搅拌均匀后加入培养基制备器，湿热环境下灭菌；

灌装入瓶包括以下步骤：

S1，第二次灌装，取第一试剂制备的S5中备用的灭菌后培养瓶和第二试剂制备的S2中制得的灭菌后培养基，将灭菌后培养基灌装至灭菌后培养瓶中；

S2，加塞压盖，将灌装完毕后的培养瓶压盖密封；

S3，贴签，在加塞压盖后的培养瓶表面贴附标签。

进一步的，第一试剂制备步骤S1中，按重量份计算，硅胶RT601A为800～1000份，硅胶RT601B为50～150份，氢氧化钠为浓度是1mol/L的氢氧化钠溶液，添加量为2～4份，纯化水添加量为50～100份。

可选的，第一试剂制备步骤S1中，按重量份计算，硅胶RT601A为900份，硅胶RT601B为100份，氢氧化钠为浓度是1mol/L的氢氧化钠溶液，添加量为3份，纯化水添加量为70份。

进一步的，第二试剂制备步骤S1中，按重量份计算，胰酪胨为13～17份、脑心浸粉为7～9份、明胶胨为8～12份、葡萄糖为3～7份、氯化钠为3～7份、L-精氨酸为0.5～1.5份、丙酮酸钠为2～4份、SPS为0.15～0.35份、Tris为1.4～1.8份，纯化水添加量为850～1150份。

可选的，第二试剂制备步骤S1中，按重量份计算，胰酪胨为15份、脑心浸粉为8份、明胶胨为10份、葡萄糖为5份、氯化钠为5份、L-精氨酸为1份、丙酮酸钠为3份、SPS为0.25份、Tris为1.6份，纯化水添加量为1000份。

可选的，第二试剂制备步骤S2中，在120℃～130℃的环境下加热30min进行湿热灭菌。

进一步的，在灌装入瓶步骤后还有抽样检测，抽样检测包括以下步骤：

S1，从贴签培养瓶中每个批次抽取一定数量，检验其是否合格；

S2，对满足合格率的批次进行入库，对不满足合格率的批次进行销毁。

本发明的有益效果至少包括以下之一；

1、通过选用由硅胶RT601A、硅胶RT601B和氢氧化钠组成的第一试剂和胰酪胨、脑心浸粉、明胶胨等成分组成的第二试剂，其中第一试剂主要为整个培养基提供必要的基体，第二试剂为培养基提供必要的营养成分，便于培养的样本产生足够的CO₂，样本接种血培养瓶后，如果存在活体微生物，在培养基中生长能产生CO₂。通过血培养瓶底部设置的CO₂传感器，CO₂传感器通过可选择性渗透CO₂的膜与液体培养基分开，CO₂可穿过膜置换氢离子并扩散，使传感器酸化，传感器会发生颜色变化，同时在监测系统上会引起反射光的信号变化。仪器通过监测传感器光信号的变化来判别培养瓶内是否有微生物生长，较之传统检测方法在检出率高，且结果稳定。

2、解决了现有血培养瓶基于传统检测方法检出率不高，且结果不稳定，采用新的检测方法未有与之相适配血培养瓶的问题。

附图说明

图1为血培养瓶生产工艺流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点能够更加清晰明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明保护内容。

实施例1

一种血培养瓶生产工艺，包括第一试剂制备、第二试剂制备和灌装入瓶，第一试剂制备包括以下步骤：

S1，配剂，取适量第一试剂，在其中添加纯化水，其中按重量份计算，硅胶RT601A为800份，硅胶RT601B为50份，氢氧化钠为浓度是1mol/L的氢氧化钠溶液，添加量为2份，纯化水添加量为20份制得硅胶混合物；

S2，搅拌，将硅胶混合物搅拌均匀；

S3，第一次灌装，将搅拌均匀的硅胶混合物灌装至底部设有CO₂传感器和选择性渗透CO₂的膜的培养瓶；

S4，干燥，对培养瓶进行加热，在45℃的环境下加热10h，使得培养瓶底部的硅胶混合物干燥固化；

S5，灭菌，将干燥固化后的培养瓶进行灭菌处理，备用；

第二试剂制备包括以下步骤：

S1，配剂，取适量第二试剂，在其中添加纯化水，按重量份计算，胰酪胨为13份、脑心浸粉为7份、明胶胨为8份、葡萄糖为3份、氯化钠为3份、L-精氨酸为0.5份、丙酮酸钠为2份、SPS为0.15份、Tris为1.4份，纯化水添加量为850份，制得试剂混合溶液；

S2，湿热灭菌，将试剂混合溶液搅拌均匀后加入培养基制备器，在120℃～130℃的环境下加热30min进行湿热灭菌；

灌装入瓶包括以下步骤：

S1，第二次灌装，取第一试剂制备的S5中备用的灭菌后培养瓶和第二试剂制备的S2中制得的灭菌后培养基，将灭菌后培养基灌装至灭菌后培养瓶中；

S2，加塞压盖，将灌装完毕后的培养瓶压盖密封；

S3，贴签，在加塞压盖后的培养瓶表面贴附标签。

本实施例中SPS为聚茴香脑磺酸钠，Tris为三羟甲基氨基甲烷，通过选用由硅胶RT601A、硅胶RT601B和氢氧化钠组成的第一试剂和胰酪胨、脑心浸粉、明胶胨等成分组成的第二试剂，其中第一试剂主要为整个培养基提供必要的基体，第二试剂为培养基提供必要的营养成分，便于培养的样本产生足够的CO₂，胰酪胨、脑心浸粉、明胶胨、葡萄糖为微生物提供合适的碳源和氮源，氯化钠维持微生物渗透压的平衡，样本接种血培养瓶后，如果存在活体微生物，在培养基中生长能产生CO₂。通过血培养瓶底部设置的CO₂传感器，CO₂传感器通过可选择性渗透CO₂的膜与液体培养基分开，CO₂可穿过膜置换氢离子并扩散，使传感器酸化，传感器会发生颜色变化，同时在监测系统上会引起反射光的信号变化。仪器通过监测传感器光信号的变化来判别培养瓶内是否有微生物生长，较之传统检测方法在检出率高，且结果稳定。解决了现有血培养瓶基于传统检测方法检出率不高，且结果不稳定，采用新的检测方法未有与之相适配血培养瓶的问题。

需要指出的是本申请中RT601A型号硅胶与RT601B型号硅胶均使用Wacker透明硅胶ELASTOSIL，胰酪胨即胰蛋白胨。

实施例2

一种血培养瓶生产工艺，包括第一试剂制备、第二试剂制备和灌装入瓶，第一试剂制备包括以下步骤：

S1，配剂，取适量第一试剂，在其中添加纯化水，其中按重量份计算，硅胶RT601A为1000份，硅胶RT601B为150份，氢氧化钠为浓度是1mol/L的氢氧化钠溶液，添加量为4份，纯化水添加量为40份制得硅胶混合物；

S2，搅拌，将硅胶混合物搅拌均匀；

S3，第一次灌装，将搅拌均匀的硅胶混合物灌装至底部设有CO₂传感器和选择性渗透CO₂的膜的培养瓶；

S4，干燥，对培养瓶进行加热，在45℃的环境下加热10h，使得培养瓶底部的硅胶混合物干燥固化；

S5，灭菌，将干燥固化后的培养瓶进行灭菌处理，备用；

第二试剂制备包括以下步骤：

S1，配剂，取适量第二试剂，在其中添加纯化水，按重量份计算，胰酪胨为17份、脑心浸粉为9份、明胶胨为12份、葡萄糖为7份、氯化钠为7份、L-精氨酸为1.5份、丙酮酸钠为4份、SPS为0.35份、Tris为1.8份，纯化水添加量为1150份，制得试剂混合溶液；

S2，湿热灭菌，将试剂混合溶液搅拌均匀后加入培养基制备器，在120℃～130℃的环境下加热30min进行湿热灭菌；

灌装入瓶包括以下步骤：

S1，第二次灌装，取第一试剂制备的S5中备用的灭菌后培养瓶和第二试剂制备的S2中制得的灭菌后培养基，将灭菌后培养基灌装至灭菌后培养瓶中；

S2，加塞压盖，将灌装完毕后的培养瓶压盖密封；

S3，贴签，在加塞压盖后的培养瓶表面贴附标签。

本实施例中SPS为聚茴香脑磺酸钠，Tris为三羟甲基氨基甲烷，通过选用由硅胶RT601A、硅胶RT601B和氢氧化钠组成的第一试剂和胰酪胨、脑心浸粉、明胶胨等成分组成的第二试剂，其中第一试剂主要为整个培养基提供必要的基体，第二试剂为培养基提供必要的营养成分，便于培养的样本产生足够的CO₂，样本接种血培养瓶后，如果存在活体微生物，在培养基中生长能产生CO₂。通过血培养瓶底部设置的CO₂传感器，CO₂传感器通过可选择性渗透CO₂的膜与液体培养基分开，CO₂可穿过膜置换氢离子并扩散，使传感器酸化，传感器会发生颜色变化，同时在监测系统上会引起反射光的信号变化。仪器通过监测传感器光信号的变化来判别培养瓶内是否有微生物生长，较之传统检测方法在检出率高，且结果稳定。解决了现有血培养瓶基于传统检测方法检出率不高，且结果不稳定，采用新的检测方法未有与之相适配血培养瓶的问题。

实施例3

一种血培养瓶生产工艺，包括第一试剂制备、第二试剂制备和灌装入瓶，第一试剂制备包括以下步骤：

S1，配剂，取适量第一试剂，在其中添加纯化水，其中按重量份计算，硅胶RT601A为900份，硅胶RT601B为100份，氢氧化钠为浓度是1mol/L的氢氧化钠溶液，添加量为3份，纯化水添加量为30份制得硅胶混合物；

S2，搅拌，将硅胶混合物搅拌均匀；

S3，第一次灌装，将搅拌均匀的硅胶混合物灌装至底部设有CO₂传感器和选择性渗透CO₂的膜的培养瓶；

S4，干燥，对培养瓶进行加热，在45℃的环境下加热10h，使得培养瓶底部的硅胶混合物干燥固化；

S5，灭菌，将干燥固化后的培养瓶进行灭菌处理，备用；

第二试剂制备包括以下步骤：

S1，配剂，取适量第二试剂，在其中添加纯化水，按重量份计算，胰酪胨为15份、脑心浸粉为8份、明胶胨为10份、葡萄糖为5份、氯化钠为5份、L-精氨酸为1份、丙酮酸钠为3份、SPS为0.25份、Tris为1.6份，纯化水添加量为1000份，制得试剂混合溶液；

S2，湿热灭菌，将试剂混合溶液搅拌均匀后加入培养基制备器，在120℃～130℃的环境下加热30min进行湿热灭菌；

灌装入瓶包括以下步骤：

S1，第二次灌装，取第一试剂制备的S5中备用的灭菌后培养瓶和第二试剂制备的S2中制得的灭菌后培养基，将灭菌后培养基灌装至灭菌后培养瓶中；

S2，加塞压盖，将灌装完毕后的培养瓶压盖密封；

S3，贴签，在加塞压盖后的培养瓶表面贴附标签。

本实施例中SPS为聚茴香脑磺酸钠，Tris为三羟甲基氨基甲烷，通过选用由硅胶RT601A、硅胶RT601B和氢氧化钠组成的第一试剂和胰酪胨、脑心浸粉、明胶胨等成分组成的第二试剂，其中第一试剂主要为整个培养基提供必要的基体，第二试剂为培养基提供必要的营养成分，便于培养的样本产生足够的CO₂，样本接种血培养瓶后，如果存在活体微生物，在培养基中生长能产生CO₂。通过血培养瓶底部设置的CO₂传感器，CO₂传感器通过可选择性渗透CO₂的膜与液体培养基分开，CO₂可穿过膜置换氢离子并扩散，使传感器酸化，传感器会发生颜色变化，同时在监测系统上会引起反射光的信号变化。仪器通过监测传感器光信号的变化来判别培养瓶内是否有微生物生长，较之传统检测方法在检出率高，且结果稳定。解决了现有血培养瓶基于传统检测方法检出率不高，且结果不稳定，采用新的检测方法未有与之相适配血培养瓶的问题。

实施例4

如图1，一种血培养瓶生产工艺，包括第一试剂制备、第二试剂制备、灌装入瓶和抽样检测，第一试剂制备包括以下步骤：

S1，配剂，取适量第一试剂，在其中添加纯化水，其中按重量份计算，硅胶RT601A为900份，硅胶RT601B为100份，氢氧化钠为浓度是1mol/L的氢氧化钠溶液，添加量为3份，纯化水添加量为30份制得硅胶混合物；

S2，搅拌，将硅胶混合物搅拌均匀；

S3，第一次灌装，将搅拌均匀的硅胶混合物灌装至底部设有CO₂传感器和选择性渗透CO₂的膜的培养瓶；

S4，干燥，对培养瓶进行加热，在45℃的环境下加热10h，使得培养瓶底部的硅胶混合物干燥固化；

S5，灭菌，将干燥固化后的培养瓶进行灭菌处理，备用；

第二试剂制备包括以下步骤：

S1，配剂，取适量第二试剂，在其中添加纯化水，按重量份计算，胰酪胨为15份、脑心浸粉为8份、明胶胨为10份、葡萄糖为5份、氯化钠为5份、L-精氨酸为1份、丙酮酸钠为3份、SPS为0.25份、Tris为1.6份，纯化水添加量为1000份，制得试剂混合溶液；

S2，湿热灭菌，将试剂混合溶液搅拌均匀后加入培养基制备器，在120℃～130℃的环境下加热30min进行湿热灭菌；

灌装入瓶包括以下步骤：

S1，第二次灌装，取第一试剂制备的S5中备用的灭菌后培养瓶和第二试剂制备的S2中制得的灭菌后培养基，将灭菌后培养基灌装至灭菌后培养瓶中；

S2，加塞压盖，将灌装完毕后的培养瓶压盖密封；

S3，贴签，在加塞压盖后的培养瓶表面贴附标签；

抽样检测包括以下步骤：

S1，从贴签培养瓶中每个批次抽取一定数量，检验其是否合格；

S2，对满足合格率的批次进行入库，对不满足合格率的批次进行销毁。

本实施例中SPS为聚茴香脑磺酸钠，Tris为三羟甲基氨基甲烷，通过选用由硅胶RT601A、硅胶RT601B和氢氧化钠组成的第一试剂和胰酪胨、脑心浸粉、明胶胨等成分组成的第二试剂，其中第一试剂主要为整个培养基提供必要的基体，第二试剂为培养基提供必要的营养成分，便于培养的样本产生足够的CO₂，样本接种血培养瓶后，如果存在活体微生物，在培养基中生长能产生CO₂。通过血培养瓶底部设置的CO₂传感器，CO₂传感器通过可选择性渗透CO₂的膜与液体培养基分开，CO₂可穿过膜置换氢离子并扩散，使传感器酸化，传感器会发生颜色变化，同时在监测系统上会引起反射光的信号变化。仪器通过监测传感器光信号的变化来判别培养瓶内是否有微生物生长，较之传统检测方法在检出率高，且结果稳定。解决了现有血培养瓶基于传统检测方法检出率不高，且结果不稳定，采用新的检测方法未有与之相适配血培养瓶的问题。

同时在制得的血培养瓶中进行抽样检测，将不合格批次进行销毁，提高整体稳定性。