阅读说明：本技术 一种用作基准物质的黄芪桂枝五物汤冻干粉及其制备方法 (Radix astragali and cassia twig five-material decoction freeze-dried powder used as reference substance and preparation method thereof ) 是由 朱立彬 黄志军 陈骞 曾庆恢 李霞 翟莉 李蓉芝 于 2019-11-11 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种用作基准物质的黄芪桂枝五物汤冻干粉的制备方法,该方法通过严格控制提取条件,并针对黄芪桂枝五物汤化学成分不稳定的特点,通过采取冷冻干燥以及使用多种辅料,减少了成分在制剂成型过程中以及贮存期间的氧化、降解,使提取物中的成分种类更多,含量更高,更能全面反映黄芪桂枝五物汤的内在质量,从而能准确地控制和指导黄芪桂枝五物汤及其制剂的生产。(The invention discloses a method for preparing astragalus and cassia twig five-substance decoction freeze-dried powder used as a reference substance, which reduces the oxidation and degradation of components in the preparation forming process and the storage period by strictly controlling the extraction conditions and aiming at the characteristic of unstable chemical components of the astragalus and cassia twig five-substance decoction, so that the components in the extract have more types and higher content, and the internal quality of the astragalus and cassia twig five-substance decoction can be comprehensively reflected, thereby accurately controlling and guiding the production of the astragalus and cassia twig five-substance decoction and a preparation thereof.)

一种用作基准物质的黄芪桂枝五物汤冻干粉及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种用作基准物质的黄芪桂枝五物汤冻干粉的制备方法。

背景技术

黄芪桂枝五物汤是一种中医经典名方，为温里剂，具有益气温经，和血通痹之功效。临床常用于治疗皮肤炎、末梢神经炎、中风后遗症等疾病，目前在该方剂的基础上已开发出大量中成药。

自2016年《中医药法》制定实施以来，为鼓励和规范经典名方中药的开发，国家开始制定“经典名方的物质基准”，即以古代医籍中记载的古代经典名方制备方法为依据制备中药药用物质的标准，它能全面反映中药的质量信息。

黄芪桂枝五物汤中成分复杂，物质基准用于在经典名方研究中考察各成分从药材-煎煮液-成品中的量值传递规律，包括工艺中的各个环节，如提取、浓缩、干燥、纯化、成型等，故煎煮液中的初始成分及各成分的比例很重要，另外，基准物质中的成分在制剂成型和储存运输期间不能发生氧化、降解，必须具有很高的稳定性。

发明内容

本发明的目的是提供一种用作基准物质的黄芪桂枝五物汤冻干粉的制备方法，它能更全面地反映中药内在质量信息，更准确地控制和指导黄芪桂枝五物汤及其制剂的生产质量。

本发明提供的制备方法包括以下步骤：

1)将黄芪桂枝五物汤各药材饮片，黄芪、白芍、桂枝、生姜、大枣加少量水浸润10-60min，然后加3-10倍重量水煎煮1-3次，每次1-3小时，合并煎液，静置沉降后取上清液；

2)向上清液中按重量加入20-50％冻干保护剂、0.5-5％抗氧剂、1-10％稳定剂，混匀后进行冷冻真空干燥，得冻干粉，

所述冻干保护剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖中的一种或多种；

所述抗氧剂选自硫代硫酸钠、维生素C、维生素E、茶多酚中的一种或多种；

所述稳定剂选自聚维酮K30、明胶、环糊精、二氧化硅中的一种或多种。

优选地，所述黄芪、白芍、桂枝、生姜、大枣的重量比为1:1:1:2:1。

优选地，所述稳定剂为聚维酮K30、环糊精和二氧化硅组合，用量分别为上清液重量的0.5-3％、2-5％、1-3％。

优选地，所述冷冻真空干燥包括预冻、升华干燥、解析干燥三个步骤，各步骤的具体程序如下：

预冻：直接将混匀后的物料温度迅速降至-30～-60℃，保持1～5小时；

升华干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升高到-10～5℃并保温10～15小时；

解析干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升到15～35℃，保温2～5小时。

进一步优选地，所述冷冻真空干燥各步骤的具体程序如下：

预冻：直接将混匀后的物料温度迅速降至-50℃，保持3小时；

升华干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升高到-5℃并保温12小时；

解析干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升到25℃，保温3小时。

根据本发明的一个具体实施例，所述基准物质的最佳制备方法如下：

1)将黄芪桂枝五物汤各药材饮片，黄芪、白芍、桂枝、生姜、大枣加少量水浸润30min，然后加6倍水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并两次煎液，静置沉降12小时，取上清液，所述黄芪、白芍、桂枝、生姜、大枣的重量比为1:1:1:2:1；

2)向上清液中按重量加入30％甘露醇、2％硫代硫酸钠、1％聚维酮K30、3％倍他环糊精和2％二氧化硅，混匀后进行冷冻真空干燥，程序如下：

预冻：直接将混匀后的物料温度迅速降至-50℃，保持3小时；

升华干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升高到-5℃并保温12小时；

解析干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升到25℃，保温3小时。

该最佳工艺制备的基准物质中，反映中药内在质量的成分更丰富，含量相对较高，稳定性更好。

本发明的有益效果是：

1)本发明严格控制提取条件，提取物中的成分种类更多，含量更高，更能全面反映黄芪桂枝五物汤的内在质量。

2)本发明针对黄芪桂枝五物汤化学成分不稳定的特点，通过采取冷冻干燥并严格控制干燥条件，以及使用多种辅料，减少了成分在制剂成型过程中以及贮存期间的氧化、降解，进一步提高了产品质量，并延长了贮存期，从而能更准确地控制和指导黄芪桂枝五物汤及其制剂的生产质量。

附图说明

图1是实施例1基准物质的指纹图谱。

图2是对比例基准物质的指纹图谱。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行详细地说明。

实施例1

1)将黄芪桂枝五物汤各药材饮片，黄芪41.4g、白芍41.4g、桂枝41.4g、生姜82.8g、大枣41.4g，加少量水浸润30min，然后加6倍水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并两次煎液，静置沉降12小时，取上清液；

2)向上清液中按重量加入30％甘露醇、2％硫代硫酸钠、1％聚维酮K30、3％倍他环糊精和2％二氧化硅，混匀后进行冷冻真空干燥，程序如下：

预冻：直接将混匀后的物料温度迅速降至-50℃，保持3小时；

升华干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升高到-5℃并保温12小时；

解析干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升到25℃，保温3小时。

实施例2

1)将黄芪桂枝五物汤各药材饮片，黄芪41.4g、白芍41.4g、桂枝41.4g、生姜82.8g、大枣41.4g，加少量水浸润45min，然后加5倍水煎煮3次，第一次2小时，第二次1小时，第二次0.5小时，合并三次煎液，静置沉降12小时，取上清液；

2)向上清液中按重量加入26％甘露醇、5％茶多酚、2％聚维酮K30、2％倍他环糊精和3％二氧化硅，混匀后进行冷冻真空干燥，程序如下：

预冻：直接将混匀后的物料温度迅速降至-40℃，保持4小时；

升华干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升高到0℃并保温12小时；

解析干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升到30℃，保温4小时。

实施例3

1)将黄芪桂枝五物汤各药材饮片，黄芪41.4g、白芍41.4g、桂枝41.4g、生姜82.8g、大枣41.4g，加少量水浸润60min，然后加4倍水煎煮3次，每次1小时，合并三次煎液，静置沉降12小时，取上清液；

2)向上清液中按重量加入30％乳糖、3.5％维生素C、0.5％明胶、4％倍他环糊精，混匀后进行冷冻真空干燥，程序如下：

预冻：直接将混匀后的物料温度迅速降至-30℃，保持5小时；

升华干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升高到5℃并保温10小时；

解析干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升到35℃，保温2小时。

实施例4

1)将黄芪桂枝五物汤各药材饮片，黄芪41.4g、白芍41.4g、桂枝41.4g、生姜82.8g、大枣41.4g，加少量水浸润15min，然后加10倍水煎煮1次，时间1小时，过滤取煎液，静置沉降12小时，取上清液；

2)向上清液中按重量加入28％葡萄糖、1％维生素E、1％茶多酚、5％倍他环糊精、3％二氧化硅，混匀后进行冷冻真空干燥，程序如下：

预冻：直接将混匀后的物料温度迅速降至-60℃，保持1小时；

升华干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升高到-10℃并保温15小时；

解析干燥：控制真空度在20帕以下，将物料温度升到15℃，保温5小时。

对比例

1)将黄芪桂枝五物汤各药材饮片，黄芪41.4g、白芍41.4g、桂枝41.4g、生姜82.8g、大枣41.4g，加8倍水煎煮2次，每次1小时，过滤取煎液，静置沉降12小时，取上清液；

2)向上清液中按重量加入38％甘露醇，然后真空浓缩、干燥，粉碎成细粉。

试验例

1.含量测定

实施例1～4，以及对比例所得到的的干燥粉末，对其中的指标性成分进行了含量测定，测定成分为芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、桂皮醛、6-姜辣素，方法如下：

照高效液相色谱法(中国药典2015年版通则0512)测定。

检测条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％甲酸溶液为流动相B，将样品甲醇超声提取后进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml，检测波长为220nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000。

含量测定结果如下表1。从试验结果可以得出，本发明制备的基准物质中各成分的含量均显著高于对比例，且实施例1中各成分含量最高。

表1基准物质中各成分的含量(％)

2.指纹图谱检测

梯度洗脱程序如下表2，其它检测条件与含量测定相同。

表2指纹图谱梯度洗脱程序

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0～30	5→22	95→78
30～60	22→60	78～40
			60～77	60	40

从指纹图谱(图1)可以看出，本发明制备的样品指纹图谱色谱峰的数量明显比对比例多，峰面积明显比对比例大。说明本发明制备的基准物质成分更加丰富，含量更高。

3.稳定性检测

将样品置于透明聚乙烯薄膜袋中，密封，然后分别于高温和强光照射条件下放置10天，检测各成分的含量并与0天比较，计算含量变化幅度。高温和强光具体条件如下：

高温：温度60℃。

强光照射：照度为4500lx±500lx。

高温试验结果见表3，强光照射试验结果见表4。

表3高温条件下放置10天的含量变化幅度(％)

注：+为含量增加，-为含量降低。

从表3中的数据发现，芍药苷在高温条件下比较稳定，桂皮醛、6-姜辣素在高温条件下含量略有下降，而毛蕊异黄酮葡萄糖苷对高温比较敏感，含量下降明显，与采用普通方法制备的基准物质相比，本发明能显著降低毛蕊异黄酮葡萄糖苷、桂皮醛、6-姜辣素在高温条件下的降解。

表4强光条件下放置10天的含量变化幅度(％)

注：+为含量增加，-为含量降低。

从表4中的数据可以看出，芍药苷在光照条件下比较稳定，而毛蕊异黄酮葡萄糖苷、桂皮醛、6-姜辣素对强光照射比较敏感，含量有明显下降，与采用普通方法制备的基准物质相比，本发明能显著降低毛蕊异黄酮葡萄糖苷、桂皮醛、6-姜辣素在光照条件下的降解，从而提高了产品的稳定性，试验结果也提示本发明应采用避光材料包装。