白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用
阅读说明：本技术 白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用 (Application of resveratrol and ketoconazole in preparation of antifungal product ) 是由 万一 王军 张绪 高磊 张月娟 王璐 于 2019-11-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开白藜芦醇及白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌感染疾病药物中的应用。本研究首次利用白藜芦醇和酮康唑药物联用具有协同抗真菌的作用,能显著降低酮康唑的使用浓度,对白色念珠菌、红色毛癣菌及石膏小孢子菌的抑菌效果均优于单独使用两种物质,抑菌率均高达90%以上,明显提高抑菌率,通过白藜芦醇和酮康唑联用在制备抗真菌感染疾病药物中的应用,具有广阔的开发应用前景。(The invention discloses an application of resveratrol and resveratrol combined ketoconazole in preparing a medicine for resisting fungal infection diseases. The research utilizes the synergistic antifungal effect of the resveratrol and ketoconazole for the first time, can obviously reduce the use concentration of the ketoconazole, has better bacteriostatic effect on candida albicans, trichophyton rubrum and microsporum gypseum than that of two substances used independently, has bacteriostatic rate of over 90 percent, obviously improves the bacteriostatic rate, and has wide development and application prospect through the application of the resveratrol and ketoconazole in the preparation of the antifungal infection disease medicine.)
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用的技术领域。
背景技术
真菌是存在于自然界的一类真核细胞生物，种类繁多且分布广泛，能够感染人体与动物的不同部位。真菌感染可分为浅部真菌感染和深部真菌感染两类：浅部真菌感染通常是由皮肤真菌的感染引起，感染表皮、手足、毛发、指甲等部位，一般主要表现为癣症、皮炎等，难治愈而且易反复发作；深部真菌感染包括皮下组织感染及全身真菌感染，全身真菌感染能感染人体皮下组织、内脏、血液、骨骼和中枢神经系统，严重的可引起死亡。近年来，真菌感染的发病率和致死率呈明显上升趋势，已成为威胁人们健康的重大疾病之一，尤其对那些存在功能性免疫缺陷如器官移植、癌症、艾滋病患者等更是致命性的伤害。其中白色念珠菌是临床上最常见的致病真菌，约有一半以上真菌感染是由白色念珠菌引起。
目前，临床上使用的抗真菌药物可分为：酮康唑类、烯丙胺类、棘白菌素类、唑类四大类。唑类药物是临床治疗和预防白色念珠菌的首选药物，在控制致病真菌感染上发挥出巨大作用。但唑类药物的大量应用使对唑类敏感的念珠菌不断出现耐药性，给临床抗真菌感染带来极大挑战。面临多重耐药真菌所致药效减弱的问题，需要高剂量药物才能达到治疗效果，由此引起严重的肾毒性和肝毒性，严重影响人们身体健康。抗真菌药物联合应用目前备受关注，可减少给药用量与给药次数，降低药物不良反应，扩大抗菌范围，提高药物抗真菌作用。
本发明提供的白藜芦醇和酮康唑的联合应用能增效减毒，二者联用在药物和保健品、美容产品上体现出重要的应用价值，目前应用白藜芦醇和酮康唑药物联用制备抗真菌产品的研究尚无报道。
发明内容
针对现有技术中尚未记载有关白藜芦醇和酮康唑的联合应用制备抗真菌产品的技术现状，且筛选能够减少给药用量与给药次数、降低药物不良反应、扩大抗菌范围、提高药物抗真菌作用的抗真菌药物联合应用目前备受关注。本发明的目的在于：克服目前真菌耐药及抗真菌药物毒副作用大的问题，提供一种提供抗真菌药物组合物，该药物组合物是以白藜芦醇和酮康唑为主要活性成分。首次通过利用互动筛选模型从粘细菌代谢产物中分离得到和酮康唑具有协同抗真菌作用的白藜芦醇，能显著降低酮康唑的使用浓度，并克服了白藜芦醇本身几乎无抗白色念珠菌的能力的缺陷，同时能够明显提高抑菌率。
本发明的提供一种白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用。
优选的，所述真菌为红色毛癣菌或白色念珠菌或石膏样小孢子菌。
优选的，所述白藜芦醇优先通过由粘细菌(Myxococcus virescens)发酵生产制备获得。
优选的，所述的粘细菌(Myxococcus virescens)采用的发酵培养基为HT培养基：可溶性淀粉3.0％，磷酸氢二钾0.1％，氯化钙0.01％，七水合硫酸镁0.015％，氯化亚铁0.001％，硝酸钠0.25％，pH 7.2。
本发明的提供一种白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用，当制备抗白色念珠菌的产品时，白藜芦醇使用量为50-400μg/mL，酮康唑的使用量为0.09-22.5μg/mL。
优选的，当制备抗白色念珠菌的产品时，白藜芦醇最佳使用量为200μg/mL，酮康唑的使用量为11.25μg/mL。
本发明的提供一种白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用，当制备抗红色毛癣菌的产品时，白藜芦醇使用量为200μg/mL，酮康唑的使用量为0.39-0.0551μg/mL。
优选的，当制备抗红色毛癣菌的产品时，白藜芦醇最佳使用量为200μg/mL，酮康唑的使用量为0.19μg/mL。
本发明的提供一种白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用，当制备抗石膏样小孢子菌的产品时，白藜芦醇使用量为200μg/mL，酮康唑的使用量为0.78-0.011μg/mL。
优选的，当制备抗石膏样小孢子菌的产品时，白藜芦醇最佳使用量为200μg/mL，酮康唑的使用量为0.39-0.78μg/mL。
本发明采用的粘细菌(Myxococcus virescens)，公众可通过公知菌种保藏单位或其它公共渠道购买获得实施本发明。
通过实施本发明提供上述具体技术方案，可以达到以下有益效果：
(1)本发明采用的菌种粘细菌(Myxococcus virescens)具有较高的发酵生产白藜芦醇的特性，同时具有培养条件简单，繁殖快的特点。
(2)本发明公开了白藜芦醇及白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌感染疾病药物中的应用。当白藜芦醇与酮康唑联合运用时，相同使用浓度下，对白色念珠菌、红色毛癣菌及石膏样小孢子菌的抑菌效果均优于单独使用两种物质，其中，当两者单独作用于白色念珠菌时，白藜芦醇与酮康唑对白色念珠菌的半数抑菌浓度分别为3200μg/mL和45μg/mL，当两者联合作用于白色念珠菌时，白藜芦醇浓度为200μg/mL、酮康唑浓度为0.18μg/mL，对白色念珠菌的抑菌率可达50％以上；白藜芦醇浓度为200μg/mL、酮康唑浓度为11.25μg/mL，对白色念珠菌的抑菌率可到95％以上。其中，当两者单独作用于红色毛癣菌时，白藜芦醇与酮康唑，对红色毛癣菌的半数抑菌浓度分别为400μg/mL和0.045μg/mL，当两者联合作用于红色毛癣菌时，白藜芦醇浓度为200μg/mL、酮康唑浓度为0.011μg/mL，对红色毛癣菌的抑菌率可到50％以上；白藜芦醇浓度为200μg/mL、酮康唑浓度为0.09μg/mL，对红色毛癣菌的抑菌率可到95％以上。其中，当两者单独作用于石膏样小孢子菌时，白藜芦醇与酮康唑，对石膏样小孢子菌的半数抑菌浓度分别为150μg/mL和0.39-0.78μg/mL，当两者联合作用于石膏样小孢子菌时，白藜芦醇浓度为200μg/mL、酮康唑浓度为0.39μg/mL，对石膏样小孢子菌的抑菌率可到91％以上；可见，以天然的白藜芦醇取代部分酮康唑用于抑制真菌，可减少酮康唑的使用量，有利于新型、高效、天然的抗真菌感染药物的研发。
附图说明
图1所示为粘细菌菌株代谢产物的HPLC组分收集图。
图2所示为化合物1的1H-NMR及分子结构图。
图3所示为白藜芦醇和酮康唑联合应用对白色念珠菌生长曲线影响效果图。
图4所示为白藜芦醇和酮康唑联合应用对红色毛癣菌的抑菌效果图。
图5所示为白藜芦醇和酮康唑联合应用对石膏样小孢子菌的抑菌效果图
图6所示为不同浓度的六种药物单独应用及其与白藜芦醇联合应用时的抑菌率图。
其中A图为两性霉素B、图B为咪康唑、图C为伊曲康唑、图D为氟胞嘧啶、图E为氟康唑、图F为酮康唑。
具体实施方式
下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。本发明中选用的所有原辅材料，以及选用的菌种培养方法都为本领域熟知选用的，本发明中涉及到的％都为重量百分比，除非特别指出除外。
本发明采用的粘细菌(Myxococcus virescens)属于常见的粘细菌，公众可通过公知菌种保藏单位或其它公共渠道购买获得实施本发明。
本发明实施例中粘细菌(Myxococcus virescens)采用如下基础培养基：HT培养基，可溶性淀粉3.0％，磷酸氢二钾0.1％，氯化钙0.01％，七水合硫酸镁0.015％，氯化亚铁0.001％，硝酸钠0.25％，pH 7.2。
本发明实施例中采用如下试剂及材料：HP20大孔树脂、水、甲醇、二甲基亚砜(DMSO)、沙氏肉汤培养基、酮康唑、土豆马铃薯固体培养基、两性霉素B、咪康唑、伊曲康唑、氟胞嘧啶、氟康唑
实施例一：一种白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用
本发明的提供一种白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用。
优选的，所述真菌为红色毛癣菌或白色念珠菌或石膏样小孢子菌。
所述白藜芦醇优先通过由粘细菌(Myxococcus virescens)发酵生产代谢制备获得。
本发明的提供一种白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用，当其作为抗白色念珠菌的产品时，白藜芦醇使用量为50-400μg/mL，酮康唑的使用量为0.09-22.5μg/mL。
优选的，当其作为抗白色念珠菌的产品时，白藜芦醇最佳使用量为200μg/mL，酮康唑的使用量为11.25μg/mL。
本发明的提供一种白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用，当其作为抗红色毛癣菌的产品时，白藜芦醇使用量为200μg/mL，酮康唑的使用量为0.39-0.0055μg/mL。
优选的，当其作为抗红色毛癣菌的产品时，白藜芦醇最佳使用量为200μg/mL，酮康唑的使用量为0.045μg/mL。
本发明的提供一种白藜芦醇联合酮康唑在制备抗真菌产品中的应用，当其作为抗石膏样小孢子菌的产品时，白藜芦醇使用量为200μg/mL，酮康唑的使用量为0.78-0.011μg/mL。
优选的，当其作为抗石膏样小孢子菌的产品时，白藜芦醇最佳使用量为200μg/mL，酮康唑的使用量为0.39-0.78μg/mL。
实施例二：白藜芦醇的制备
实验菌株为外购的粘细菌粘球菌属(Myxococcus virescens)，经发酵培养基HT培养基的培养，经发酵液过滤，用HP20大孔树脂吸附，分别以10倍树脂体积的水、甲醇依次洗脱。甲醇洗脱液50℃减压蒸馏除去溶剂，得到甲醇粗提物。甲醇粗提物进行硅胶柱层析，CHCl3-MeOH梯度洗脱，每100mL洗脱液为一收集单位，TLC检测洗脱进程。利用酮康唑与各组分对白色念珠菌进行互动活性追踪筛选，选择活性较好的几个部位段进行分离纯化，最后用制备液相收集活性单体化合物。利用1H-NMR进行化合物结构鉴定。鉴定结果如附图1所示。TLC显示得到两个极性不同的淡黄色单一斑点，分别为化合物1和化合物2，其中化合物1互动活性较好，进一步对其结构进行鉴定。鉴定结果如附图2及表1所示。
表1：化合物1的NMR数据
如附图2和表1所示，通过对化合物谱图数据的分析，结合必要的物理化学手段和文献查阅，经鉴定，化合物1为反式白藜芦醇，分子式均为C14H12O3，分子量为228.24，化学名为3,4',5-三羟基二苯乙烯。
实施例三：白藜芦醇对白色念珠菌的半数抑菌浓度(MIC50)检测
基于实施例二，将上述制得的化合物1反式白藜芦醇溶于100％的二甲基亚砜(DMSO)中制得浓度为20mg/ml的白藜芦醇样液，用二倍稀释法将白藜芦醇样液加入沙氏肉汤培养基中至白藜芦醇浓度分别为8000、4000、2000、1000、500、250、125μg/mL。取96孔细菌培养板，每孔加入100μL浓度为105CFU/ml的白色念珠菌菌液及100μL各浓度的白藜芦醇样液，并设置空白对照(不含白藜芦醇样液的培养基+菌液)和溶剂对照(DMSO溶液+菌液)，同时设置对照培养板(不加菌液)。30度培养箱中培养24h，取出96孔培养板置于酶标仪，线性振荡30s，于630nm下检测吸光值，根据实验数据通过公式：抑菌率(％)＝(1-测定孔OD630nm值/空白对照孔OD630nm值)×100％计算各浓度白藜芦醇对白色念珠菌的抑菌率，结果见表2。
表2：不同浓度白藜芦醇对白色念珠菌的抑菌率
不同浓度组
浓度μg/mL
抑菌率(％)
空白
0
0
1
62.5
-4.15％
2
125
-5.05％
3
250
-1.13％
4
500
3.42％
5
1000
5.74％
6
2000
15.57％
7
4000
83.69％
由表2可知，低浓度的白藜芦醇对白色念珠菌几乎无抑制作用。随着浓度升高至1000μg/mL以上，其对白色念珠菌的抑制活性开始显现，由其抑制率可以得出，其半数抑菌浓度MIC50值为3200μg/mL。因此，浓度低于1000μg/mL的白藜芦醇对白色念珠菌几乎无抑菌活性。
实施例四：酮康唑对白色念珠菌的半数抑菌浓度(MIC50)检测
将酮康唑溶于100％的二甲基亚砜(DMSO)中制得浓度为10mg/ml的酮康唑样液，用二倍稀释法将酮康唑样液加入沙氏肉汤培养基中至酮康唑浓度分别为200、100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39μg/mL。取96孔细菌培养板，每孔加入100μL浓度为105CFU/ml的白色念珠菌菌液及100μL各浓度的酮康唑样液，使酮康唑终浓度分别为100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.19μg/mL。并设置空白对照(不含酮康唑样液的培养基+菌液)和溶剂对照(DMSO溶液+菌液)，同时设置对照培养板(不加菌液)。30度培养箱中培养24h，取出96孔培养板置于酶标仪，线性振荡30s，于630nm下检测吸光值，根据实验数据通过公式：抑菌率(％)＝(1-测定孔OD630nm值/空白对照孔OD630nm值)×100％计算各浓度酮康唑对白色念珠菌的抑菌率，结果见表3。
表3：不同浓度酮康唑样液对白色念珠菌的抑菌率
由表3可知，酮康唑对白色念珠菌的抑制率具有浓度依赖性，随着浓度升高，其对白色念珠菌的抑制活性逐渐增强，由其抑制率可以得出，其半数抑菌浓度MIC50值为25-50μg/mL之间，经计算为45μg/mL。
实施例五：白藜芦醇联合酮康唑对白色念珠菌的抑菌作用研究
基于实施例三及实施例四，根据上述测定的白藜芦醇对白色念珠菌的MIC50，用二倍稀释法分别将20mg/ml的白藜芦醇样液加入沙氏肉汤培养基中至各样液中白藜芦醇的浓度分别为1/2MIC50、1/4MIC50、1/8MIC50、和1/16MIC50，即1600μg/mL、800μg/mL、400μg/mL、200μg/mL。根据上述测定的酮康唑对白色念珠菌的MIC，用二倍稀释法分别将10mg/ml的酮康唑样液加入沙氏肉汤培养基中至各样液中酮康唑的浓度分别为2MIC50、MIC50、1/2MIC50、1/4MIC50、1/8MIC50、1/16MIC50、1/32MIC50、1/64MIC50和1/128MIC50。取96孔细菌培养板，每孔各加入50μL经培养基稀释的各浓度的白藜芦醇样液和酮康唑样液，然后向每孔加入100μL浓度为105CFU/ml的白色念珠菌菌液，并设置空白对照(不含白藜芦醇和酮康唑样液的培养基+菌液)、溶剂对照(DMSO+菌液)，同时设置对照培养板(不加菌液)。30度培养箱中培养24h，取出96孔培养板置于酶标仪，线性振荡30s，于630nm下检测吸光值，根据实验数据通过公式：抑菌率(％)＝(1-测定孔OD630nm值/空白对照孔OD630nm值)×100％计算各浓度白藜芦醇联合酮康唑对白色念珠菌的抑菌率。实验设置3个重复，酮康唑和白藜芦醇联合用药的作用通过分级抑菌浓度指数，结合棋盘法进行评估，酮康唑和白藜芦醇联组合的FICI指数由以下公式计算得出：
FICI＝MICa联合/MICa单独+MICb联合/MICb单独
判断标准为：若FICI≤0.5，则为协同效应；若0.5<FICI≤1时，为相加作用；FICI>4时，为拮抗作用；1<FICI≤4时，无相关作用。
抑菌率计算结果见表4。
表4:用棋盘法表示酮康唑与白藜芦醇的联合用药抗白色念珠菌的抑菌率
由表4可知，酮康唑和白藜芦醇联合应用时对白色念珠菌的MIC50值显著降低。酮康唑浓度为1/256MIC50(0.18μg/mL)，白藜芦醇浓度为1/16MIC50(200μg/mL)时，对白色念珠菌的抑菌率达到50％以上。FICI＝1/256+1/16＝0.066。即酮康唑和白藜芦醇联合应用时对白色念珠菌有协同抗菌作用。尤其值得注意的是，单独使用酮康唑时，100μg/mL的酮康唑浓度对白色念珠菌的抑菌率仅56％左右，但联合应用时使用1/4MIC50(11.25μg/mL)的酮康唑和1/16MIC50(200μg/mL)的白藜芦醇，对白色念珠菌的抑菌率达到95％以上。可见，酮康唑和白藜芦醇联合应用时对白色念珠菌有协同抗菌作用，且联合应用时抗白色念珠菌效果非常明显。
实施例六：白藜芦醇和酮康唑联用对白色念珠菌生长曲线的影响
取96孔细菌培养板，第一列分别加入50μL经培养基稀释的800μg/mL白藜芦醇样液和50μL培养基，使终浓度为200μg/mL。第二列分别加入50μL经培养基稀释的45μg/mL酮康唑样液和50μL培养基，使终浓度为11.25μg/mL，第三列分别加入50μL经培养基稀释的800μg/mL白藜芦醇样液和50μL经培养基稀释的45μg/mL酮康唑样液，使终浓度分别为200μg/mL和11.25μg/mL。第四列为空白对照。然后向每孔加入100μL浓度为105CFU/ml的白色念珠菌菌液。将96孔培养板置于酶标仪30度培养，连续监测30h，每次检测前线性振荡30s，于630nm下检测吸光值。研究白藜芦醇和酮康唑联合应用对白色念珠菌生长曲线的影响。测定结果如附图3所示。酮康唑和白藜芦醇联合应用(浓度分别为11.25μg/mL和200μg/mL)对白色念珠菌的抑菌率可达到95％以上。单独使用酮康唑时，100μg/mL的酮康唑浓度对白色念珠菌的抑菌率仅56％左右。1/4MIC50浓度的酮康唑和白藜芦醇联合应用时的抑菌效果已非常明显，对白色念珠菌的抑菌率可达到95％以上，其对白色念珠菌的作用从抑菌向杀菌转变。
实施例七：白藜芦醇和酮康唑联合应用对临床白色念珠菌的抑菌作用研究
基于上述实施例二至实施例六，从陕西省人民医院取得临床白色念珠菌30株。经活化后，依据内容4的方法，检测联合白藜芦醇和酮康唑联合应用对30株临床白色念珠菌的抑菌作用，并计算FICI数值。将各个临床菌株的FICI值列表如表5所示。
表5：白藜芦醇和酮康唑联合应用对临床白色念珠菌的抑菌作用
由以上结果可知，30株不同来源的测试菌株中，协同作用的有24株，相加作用的有4株，无关作用的为2株。可见，白藜芦醇和酮康唑联合应用对临床分离的白色念珠菌同样有明显的协同抑菌作用。在临床分离得到的白色念珠菌中，具有协同作用的菌株占比80％以上。
实施例八：白藜芦醇和酮康唑联合应用对红色毛癣菌的抑菌效果
基于上述实施例二至实施例四，红色毛癣菌在土豆马铃薯固体培养基上活化，28度培养箱培养7d。然后继续活化一次，培养7d后，向固体平板上加入4ml无菌生理盐水，用无菌刮铲轻轻将孢子刮下溶解在生理盐水中，制得孢子混悬液。静置3min后，将上层孢子混悬液转移至无菌离心管中，漩涡震荡20s。用无菌双层纱布过滤，去除菌丝获得最终的孢子悬液。孢子悬液通过血球计数板计数。用土豆马铃薯培养基将孢子溶液稀释至105CFU/ml。将酮康唑溶于100％的二甲基亚砜(DMSO)中制得浓度为10mg/ml的酮康唑样液，用二倍稀释法将酮康唑样液加入土豆马铃薯培养基中至酮康唑浓度分别为0.78、0.39、0.19、0.09、0.045、0.022、0.011μg/mL。取96孔细菌培养板，每孔加入100μL浓度为105CFU/ml的红色毛癣菌孢子溶液及100μL各浓度的酮康唑样液，使酮康唑终浓度分别为0.39、0.19、0.09、0.045、0.022、0.011、0.0055μg/mL。并设置空白对照(不含酮康唑样液的培养基+菌液)和溶剂对照(DMSO溶液+菌液)，同时设置对照培养板(不加菌液)。将96孔培养板置于酶标仪30度培养，连续监测7d，每次检测前线性振荡30s，于630nm下检测吸光值，根据实验数据通过公式：抑菌率(％)＝(1-测定孔OD630nm值/空白对照孔OD630nm值)×100％计算各浓度酮康唑对红色毛癣菌的抑菌率，从而计算MIC50。另外，在96孔板各孔各加入50μL经培养基稀释的终浓度为200μg/mL白藜芦醇样液和不同浓度酮康唑样液，设置空白对照和溶剂对照，同样方法培养，检测630nm下吸光值，检测白藜芦醇和酮康唑联合应用对红色毛癣菌的抑菌效果。白藜芦醇和酮康唑联合应用对红色毛癣菌的抑菌效果如附图4及表6所示。
表6：不同浓度酮康唑单独及其与白藜芦醇联合应用对红色毛癣菌的抑菌率
不同浓度组
浓度μg/mL
单独抑菌率
联合抑菌率
空白
0
0
36.94％
1
0.0055
7.94％
42.46％
2
0.011
21.29％
58.92％
3
0.022
29.11％
67.78％
4
0.045
51.90％
72.38％
5
0.09
69.85％
96.55％
6
0.19
84.12％
98.62％
7
0.39
97.12％
98.39％
由表6和附图4可知，酮康唑对红色毛癣菌的抑制率具有浓度依赖性，随着浓度升高，其对红色毛癣菌的抑制活性逐渐增强，由其抑制率可以得出，其MIC50值为0.045μg/mL左右。同时，仅加200μg/mL白藜芦醇时其抑菌率为36.94％。可见白藜芦醇单独应用对红色毛癣菌有一定抑制作用，白藜芦醇和酮康唑联合应用时抑菌率提高，其联合应用的抑菌作用为相加作用。因此，白藜芦醇和酮康唑联合应用时对红色毛癣菌有相加的抑菌作用。
实施例九：白藜芦醇和酮康唑联合应用对石膏样小孢子菌的抑菌效果
基于实施例八，仅将酮康唑样液终浓度更换为0.78、0.39、0.19、0.09、0.045、0.022、0.011μg/mL。以检测白藜芦醇和酮康唑联合应用对石膏样小孢子菌的抑菌效果。抑菌率统计结果如附图5及表7所示。
表7：不同浓度酮康唑单独及其与白藜芦醇联合应用对石膏样小孢子菌的抑菌率
不同浓度组
浓度μg/mL
单独抑菌率
联合抑菌率
空白
0
0
63.0％
1
0.011
1.0％
64.7％
2
0.022
2.1％
66.4％
3
0.045
8.9％
72.5％
4
0.09
17.4％
75.6％
5
0.19
28.1％
78.9％
6
0.39
35.4％
91.4％
7
0.78
62.4％
97.1％
由表7和附图5可知，酮康唑对石膏样小孢子菌的抑制率具有浓度依赖性，随着浓度升高，其对石膏样小孢子菌的抑制活性逐渐增强，由其抑制率可以得出，其MIC50值在0.39-0.78μg/mL之间。同时，单独应用200μg/mL白藜芦醇时其抑菌率为63％。可见，白藜芦醇对石膏样小孢子菌有明显抑制作用，白藜芦醇和酮康唑联合应用时抑菌率提高，其联合应用的抑菌作用为相加作用。白藜芦醇和酮康唑联合应用时对石膏样小孢子菌有相加的抑菌作用。
实施例十：白藜芦醇联合其他抗真菌药物对白色念珠菌的抑菌效果研究
基于实施例二、实施例三及实施例五，测定其他五种抗真菌药物与白藜芦醇联合作用对白色念珠菌的抑菌效果。五种药物包括：两性霉素B、咪康唑、伊曲康唑、氟胞嘧啶和氟康唑。计算六种药物的MIC50值。研究1/2MIC50、1/4MIC50、1/8MIC50浓度药物单独应用和与200μg/mL白藜芦醇联合作用时的抑菌率。测定结果如附图6所示。白藜芦醇与不同浓度的六种药物联合应用时其抑菌率如附图6所示。左侧为3个不同浓度药物单独使用时的抑菌率，右侧为3个同样浓度药物与白藜芦醇联合应用时的抑菌率。可见，白藜芦醇与酮康唑联合应用时抑菌率明显提高，二者有明显的协同抗菌作用，与咪康唑联用有一定的协同抗菌作用，与两性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑没有明显相互作用。
上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所延伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。