阅读说明：本技术 Geiparvarin在制备抗骨肉瘤产品中的应用 (Application of Geiparvarin in preparation of anti-osteosarcoma product ) 是由 邹华 许成雄 黄萍 陈姝 王斌 肖何 张志敏 张亮 于 2019-12-05 设计创作，主要内容包括：本发明公开了Geiparvarin在制备治疗骨肉瘤产品中的应用,以及Geiparvarin在制备抑制骨肉瘤增殖产品中的应用。本发明首次发现Geiparvarin对多种骨肉瘤细胞的活力均有显著抑制作用,证实Geiparvarin能抑制HOS和143B骨肉瘤细胞的集落形成,促进细胞的凋亡,干预细胞周期,使细胞阻滞在G2期,并减少G1期细胞数量,细胞分裂能力受到抑制；并抑制HOS和143B骨肉瘤细胞的迁移。动物实验证实化合物Geiparvarin能明显抑制裸鼠皮下143B细胞瘤的体积,能较好的抑制骨肉瘤的生长。本发明发现了Geiparvarin用于骨肉瘤抗肿瘤治疗的新应用。(The invention discloses application of Geiparvarin in preparation of a product for treating osteosarcoma and application of Geiparvarin in preparation of a product for inhibiting osteosarcoma proliferation. The invention discovers that Geiparvarin has obvious inhibiting effect on the activity of various osteosarcoma cells for the first time, proves that Geiparvarin can inhibit the colony formation of HOS and 143B osteosarcoma cells, promotes the apoptosis of the cells, intervenes the cell cycle, makes the cells blocked in the G2 stage, reduces the number of the cells in the G1 stage and inhibits the cell division capability; and inhibit migration of HOS and 143B osteosarcoma cells. Animal experiments prove that the compound Geiparvarin can obviously inhibit the volume of subcutaneous 143B cell tumor of a nude mouse and can better inhibit the growth of osteosarcoma. The invention finds a new application of Geiparvarin in anti-tumor treatment of osteoma.)

Geiparvarin在制备抗骨肉瘤产品中的应用

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种Geiparvarin在制备抗骨肉瘤产品中的应用。

背景技术

骨肉瘤每年发病率为1-3人/100万人，是一种较常见的发生在青少年或儿童的起源于间叶组织的非血液学恶性肿瘤。骨肉瘤具有发生肺转移和预后不良的高风险。目前骨肉瘤的治疗仍以手术联合系统化疗为主，近五十年骨肉瘤化疗依耐于高剂量甲氨蝶呤、多柔比星、顺铂和异环磷酰胺这四种药物的联合应用。这种治疗方式自20世纪70年代以来基本保持不变，治疗的效果也几乎没有改善。骨肉瘤5年的总体生存率60％左右，14％的患者对于标准化疗不敏感。骨肉瘤的治疗至今仍无突破性进展。因此，研发靶向性强、毒副作用少的新型化疗药物对骨肉瘤的治疗意义重大。

天然药物对现代药物的发现贡献很大。美国食品和药物管理局(FDA)于1931年至2013年批准的超过三分之一的新分子源自或启发于天然产物。过去五年中批准的抗癌药物中，天然药物的比例甚至更高，这些药物中有一半来于自然。天然产物的研究给抗肿瘤新药发现提供了源源不断的先导化合物，同时从天然产物中发现抗肿瘤新药的概率要远大于合成化合物。

Geiparvarin是从澳大利亚的植物Geijera parviflora所提取的天然化合物，该化合物结构1967年经Lahey F发现并报道，其分子式为C₁₉H₁₈O₅，分子量为326.34，并具有以下结构：

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供一种Geiparvarin在制备抗骨肉瘤产品中的应用。

本发明为了实现其目的，采用的技术方案是：

提供了Geiparvarin在制备治疗骨肉瘤产品中的应用。

提供了Geiparvarin在制备抑制骨肉瘤增殖产品中的应用。

所述产品为药物或试剂盒。

Geiparvarin为天然化合物，可不经过口服给药，以注射剂或输液剂等形式给药。

本发明的有益效果是：首次发现Geiparvarin对多种骨肉瘤细胞的活力均有显著抑制作用，进一步活性导向的成分研究发现可能因其具有3(2H)-furanone关键片段而显示抗肿瘤活性。本发明研究证实Geiparvarin能抑制HOS和143B骨肉瘤细胞的集落形成，促进HOS和143B细胞的凋亡，干预HOS和143B细胞周期，使细胞阻滞在G2期，并减少G1期细胞数量，细胞***能力受到抑制；并抑制HOS和143B骨肉瘤细胞的迁移。动物实验证实化合物Geiparvarin能明显抑制裸鼠皮下143B细胞瘤的体积，能较好的抑制骨肉瘤的生长。本发明发现了Geiparvarin用于骨肉瘤抗肿瘤治疗的新应用，提供一种新的骨肉瘤抗肿瘤治疗产品。

附图说明

图1是不同浓度Geiparvarin处理骨肉瘤细胞48h后细胞活性结果。

图2是同浓度Geiparvarin处理骨肉瘤细胞12天后观察Geiparvarin对细胞集落形成的抑制作用结果。

图3是不同浓度Geiparvarin与HOS细胞共培养后骨肉瘤细胞的存活率。

图4是Geiparvarin对HOS细胞周期的影响的流式检测结果图。

图5是Geiparvarin对HOS细胞周期的影响的统计结果图。

图6是Geiparvarin对143B细胞周期的影响的流式检测结果图。

图7是Geiparvarin对143B细胞周期的影响的统计结果图。

图8是Geiparvarin对143B和HOS细胞凋亡的影响流式检测结果图。

图9是Geiparvarin对143B和HOS细胞凋亡的影响统计结果图。

图10是Geiparvarin对143B和HOS细胞迁移的影响。

图11是Geiparvarin对143B细胞裸鼠皮下种植瘤肿瘤体积的影响。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但并不因此而限制本发明。

下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。

本发明实施例中所用试剂来源如下：

骨肉瘤HOS、Saos-2、9901、MG-63、9607、SW1353、U2OS细胞系购自ATCC(美国菌种保藏中心)；

骨肉瘤143B细胞系购自中国科学院上海生科院细胞资源中心；

Geiparvarin的CAS号为36413-91-9，本发明实施例用的是美国Unigen,inc.公司的产品。

小鼠购自中国人民解放军陆军军医大学实验动物中心；

DMEM培养基购自BI公司；

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司。

实施例1、Geiparvarin对骨肉瘤细胞增殖的影响

一、实验方法

将8株骨肉瘤细胞(细胞株如下表1所示)分别接种于96孔板，在含10％胎牛血清的DMEM培养基中培养24h，换液后分别在培养基中加入浓度为0，0.5，0.75，1，1.25，1.5，2μg/ml的Geiparvarin化合物与骨肉瘤细胞共培养48h，细胞的存活率见图1，通过线性回归，得到细胞存活率减少一半时(IC50)Geiparvarin浓度。分别将50个骨肉瘤143B和HOS细胞接种于6cm含0，0.25,0.5μg/ml Geiparvarin的琼脂糖培养基的表面，与143B和HOS细胞共培养12天，观察Geiparvarin对细胞集落形成的抑制作用，结果如图2所示。将HOS细胞接种于96孔板，含10％胎牛血清的DMEM培养基培养24h，换液后在培养基中加入浓度为0，0.5，1，1.25，1.5，2μg/ml的Geiparvarin与HOS细胞共培养12,24,48h，观察骨肉瘤细胞的存活率，结果如图3所示。

二、实验结果

结果如图1～3所示，Geiparvarin对8株骨肉瘤细胞的活力均有抑制作用，IC50的最高剂量为1.321μg/ml(如表1所示)；能抑制HOS和143B骨肉瘤细胞的集落形成；提示Geiparvarin对骨肉瘤细胞的增殖和克隆有较好的抑制作用。

表1.八个骨肉瘤细胞株的IC50

实施例2、Geiparvarin对143B和HOS细胞周期和凋亡的影响一、实验方法

将143B和HOS细胞分别接种于6cm培养皿，10％胎牛DMEM培养基培养24h后，换液，在培养基中加入0，0.25，0.5μg/ml的Geiparvarin与143B和HOS细胞共培养48h，用细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒对细胞染色，流式细胞仪检测各组细胞的周期与凋亡情况。

二、实验结果

Geiparvarin干预HOS和143B细胞周期(结果如图4～7所示)，使细胞阻滞在G2期，并减少G1期细胞数量，细胞***能力受到抑制；Geiparvarin化合物能促进HOS和143B细胞的凋亡(结果如图8、9所示)，结果有显著性差异且与Geiparvarin的浓度正相关。

实施例3、Geiparvarin对143B和HOS细胞迁移的影响一、实验方法

将143B和HOS细胞分别接种于6cm培养皿，10％胎牛DMEM培养基培养24h后，用移液枪枪头在贴壁培养的细胞上画直线，换液，在培养基中加入0，1，2μg/ml的Geiparvarin与143B和HOS细胞共培养48h，光学显微镜下观察细胞的迁移。

二、实验结果

结果如图10所示，Geiparvarin化合物能明显抑制HOS和143B骨肉瘤细胞的迁移且与Geiparvarin的浓度正相关。

实施例4、Geiparvarin对143B细胞裸鼠皮下种植瘤肿瘤体积的影响

一、实验方法

将143B细胞种植于裸鼠皮下，成瘤后尾静脉注射0，0.5，1mg/kg的Geiparvarin，5次/周，22d处死裸鼠，剥离裸鼠皮下肿瘤，测量肿瘤的体积。

二、实验结果

结果如图11所示，动物实验证实化合物Geiparvarin能抑制裸鼠皮下143B细胞瘤的体积，能较好的抑制骨肉瘤的生长。