一种cited2异常打开与nmn治疗的相关性的体外实验法
阅读说明：本技术 一种cited2异常打开与nmn治疗的相关性的体外实验法 (In vitro experimental method for correlation of CITED2 abnormal opening and NMN treatment ) 是由 张培东 吴畏 覃小桓 于 2019-11-14 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的体外实验法,包括如下步骤：构建CITED2基因过表达VECs,并分为NMN干预组和对照组,NMN干预组给予NMN进行孵育,对照组则进行常规培养；对NMN干预组和对照组均进行划痕实验、Transwell实验和成管实验；构建CITED2基因过表达小鼠模型,并分为NMN治疗组和常规喂养对照组,检测NMN治疗组和常规喂养对照组的高龄小鼠的心功能；基于实验、检测及观察数据,进一步的利用RT-qPCR和WB,检测细胞和心肌组织的CITED2蛋白和基因表达水平。本发明实现了CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的实验,且整个实验过程程序简单,便于进行操作,进而有利于进行推广运用。(The invention discloses an in vitro experimental method for correlation between CITED2 abnormal opening and NMN treatment, which comprises the following steps: constructing CITED2 gene over-expression VECs, and dividing the CITED2 gene over-expression VECs into an NMN intervention group and a control group, wherein the NMN intervention group is used for incubation of NMN, and the control group is used for conventional culture; carrying out scratch experiments, Transwell experiments and tube forming experiments on the NMN intervention group and the control group; constructing a CITED2 gene overexpression mouse model, dividing the model into an NMN treatment group and a conventional feeding control group, and detecting the heart function of the aged mice of the NMN treatment group and the conventional feeding control group; based on experimental, detection and observation data, RT-qPCR and WB are further utilized to detect the CITED2 protein and gene expression level of cells and myocardial tissues. The invention realizes the experiment of the correlation between CITED2 abnormal opening and NMN treatment, and the whole experiment process has simple program and is convenient to operate, thereby being beneficial to popularization and application.)
技术领域
本发明涉及医疗技术领域，尤其涉及一种CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的体外实验法。
背景技术
伴随着当今社会的发展，结合科学技术的进行，人们时刻在进行着人类血管抗衰老的研究，在人类血管抗衰老的研究过程中，CITED2分子开关异常打开与NMN治疗的相关性的问题一直是人们所研究的，在针对CITED2分子开关异常打开与NMN治疗的相关性进行研究的过程中，现有技术没有相关的体外实验法。为此，我们提出了一种CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的体外实验法。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的体外实验法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的体外实验法，包括如下步骤：
S1：构建CITED2基因过表达VECs,并分为NMN干预组和对照组，NMN干预组给予NMN进行孵育，且一天更换一次，对照组则进行常规培养；
S2：对步骤S1中的NMN干预组和对照组均进行划痕实验、Transwell实验和成管实验，在所述划痕实验中，观察NMN干预组和对照组的细胞增殖的时间和速度，在Transwell实验中，观察NMN干预组和对照组的中迁移的HUVECs数量即细胞迁移现象，在成管实验中，检测NMN干预组和对照组中HUVECs形成微管网密度及分支点个数即成管密度；
S3：构建CITED2基因过表达小鼠模型，并分为NMN治疗组和常规喂养对照组，NMN治疗组通过饮用水给予NMN喂食高龄小鼠，持续1个月后，针对NMN治疗组和常规喂养对照组的高龄小鼠，利用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术，检测每个高倍视野下的微管数目和微管/肌纤维比，并通过NT-proBNP和心脏彩超检测NMN治疗组和常规喂养对照组的高龄小鼠的心功能；
S4：基于步骤S2和S3的实验、检测及观察数据，进一步的利用RT-qPCR和WB，检测细胞和心肌组织的CITED2蛋白和基因表达水平。
优选的，在步骤S1中，所述NMN的浓度为0.5mM。
优选的，在步骤S2中，所述划痕实验、Transwell实验和成管实验均在步骤S1中NMN干预组孵育和对照组培养的12h、24h、48h和72h段进行施行。
优选的，在步骤S3中，所述高龄小鼠所食用的NMN量为400mg/kg/d。
本发明提出的一种CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的体外实验法，有益效果在于：本方案在进行的过程中，构建了CITED2基因过表达VECs模型，给予NMN干预，利用RT-qPCR和WB技术，检测CITED2表达变化，通过划痕实验、Transwell、成管实验，观察细胞增殖、迁移和微细血管新生情况；通过构建CITED2基因过表达高龄小鼠模型，给予饮水添加NMN治疗，利用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术，检测每个高倍视野下的微管数目和微管/肌纤维比，并通过NT-proBNP和心脏彩超检测NMN治疗组和常规喂养对照组的高龄小鼠的心功能；伴随着针对CITED2表达变化的检测完成以及针对高龄小鼠的观察、检测的完成，即能够获得CITED2分子开关异常打开与NMN治疗的相关性，因此本方案实现了CITED2分子开关异常打开与NMN治疗的相关性的实验，且整个实验过程程序简单，便于进行操作，进而有利于进行推广运用。
附图说明
图1为本发明提出的一种CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的体外实验法的流程示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
参照图1，一种CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的体外实验法，包括如下步骤：
S1：构建CITED2基因过表达VECs,并分为NMN干预组和对照组，NMN干预组给予NMN进行孵育，且一天更换一次，对照组则进行常规培养；
S2：对步骤S1中的NMN干预组和对照组均进行划痕实验、Transwell实验和成管实验，在所述划痕实验中，观察NMN干预组和对照组的细胞增殖的时间和速度，在Transwell实验中，观察NMN干预组和对照组的中迁移的HUVECs数量即细胞迁移现象，在成管实验中，检测NMN干预组和对照组中HUVECs形成微管网密度及分支点个数即成管密度；
S3：构建CITED2基因过表达小鼠模型，并分为NMN治疗组和常规喂养对照组，NMN治疗组通过饮用水给予NMN喂食高龄小鼠，持续1个月后，针对NMN治疗组和常规喂养对照组的高龄小鼠，利用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术，检测每个高倍视野下的微管数目和微管/肌纤维比，并通过NT-proBNP和心脏彩超检测NMN治疗组和常规喂养对照组的高龄小鼠的心功能；
S4：基于步骤S2和S3的实验、检测及观察数据，进一步的利用RT-qPCR和WB，检测细胞和心肌组织的CITED2蛋白和基因表达水平。
在步骤S1中，所述NMN的浓度为0.5mM。
在步骤S2中，所述划痕实验、Transwell实验和成管实验均在步骤S1中NMN干预组孵育和对照组培养的12h、24h、48h和72h段进行施行。
在步骤S3中，所述高龄小鼠所食用的NMN量为400mg/kg/d。
综上所述：本发明在进行的过程中，构建了CITED2基因过表达VECs模型，给予NMN干预，利用RT-qPCR和WB技术，检测CITED2表达变化，通过划痕实验、Transwell、成管实验，观察细胞增殖、迁移和微细血管新生情况；通过构建CITED2基因过表达高龄小鼠模型，给予饮水添加NMN治疗，利用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术，检测每个高倍视野下的微管数目和微管/肌纤维比，并通过NT-proBNP和心脏彩超检测NMN治疗组和常规喂养对照组的高龄小鼠的心功能；伴随着针对CITED2表达变化的检测完成以及针对高龄小鼠的观察、检测的完成，即能够获得CITED2分子开关异常打开与NMN治疗的相关性，因此本发明实现了CITED2分子开关异常打开与NMN治疗的相关性的实验，且整个实验过程程序简单，便于进行操作，进而有利于进行推广运用。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。