一种百部内生链霉菌中吡咯-2-羧酸酯类化合物的制备方法及其应用
阅读说明：本技术 一种百部内生链霉菌中吡咯-2-羧酸酯类化合物的制备方法及其应用 (Preparation method and application of pyrrole-2-carboxylate compound in streptomyces stemonae endophytic ) 是由 胡立宏 王吓长 赵慧敏 杨爱萍 丁宁 李世洋 彭任 朱友娟 于 2019-11-12 设计创作，主要内容包括：本发明阐述一株百部内生链霉菌中吡咯-2-羧酸酯类化合物的制备方法与应用,所述的吡咯-2-羧酸酯类化合物具有化合物1-10所示的结构。本发明首次从百部内生链霉菌中分离得到吡咯-2-羧酸酯类化合物,且所有化合物均从自然界首次分离得到。将上述化合物2,3,4,5,9,10,11(对叶百部碱),12(吡咯-2-羧酸),BS-1(链霉菌粗提物),IM(吡虫啉),BI(联苯肼酯)应用到蚜虫和二斑叶螨的防治中,数据表明该类化合物对棉蚜虫有高抑制活性(LC50范围：3.55-32.00ppm)；对二斑叶螨有中等抑制活性(LC50范围：197.6-685.5ppm)。(The invention discloses a preparation method and application of pyrrole-2-carboxylate compounds in streptomyces stemonae endophytic bacteria, wherein the pyrrole-2-carboxylate compounds have a structure shown by compounds 1-10. The pyrrole-2-carboxylate compound is separated from streptomyces stemonae endophytic for the first time, and all the compounds are separated from the nature for the first time. The compounds 2,3,4,5,9,10 and 11 (stemonine), 12 (pyrrole-2-carboxylic acid), BS-1 (streptomyces crude extract), IM (imidacloprid) and BI (bifenazate) are applied to the prevention and treatment of aphids and tetranychus urticae, and data show that the compounds have high inhibitory activity to cotton aphids (LC50 range: 3.55-32.00 ppm); has moderate inhibitory activity to Tetranychus urticae (LC50 range: 197.6-685.5 ppm).)
技术领域
本发明属于中药内生菌技术领域，具体涉及百部内生菌中吡咯-2-羧酸酯类新化合物的分离纯化及其在防治棉蚜虫和二斑叶螨的医药新应用。
背景技术
自从上世纪末文献报道发现植物内生真菌可以产紫杉醇后，国内外学者纷纷把目光转向植物(特别是药用植物)内生菌的研究，发现了植物内生菌除能够适应植物内部特殊环境外，还能够编码产生多种生物活性物质，用来增强植物对外界的抵抗力。此外，内生菌因长时间与宿主协同进化使其产生某些与宿主植物相同或结构相似的具有药用价值的代谢产物。近年来从植物内生菌发酵产物中分离得到的代谢产物结构类型多样，包括生物碱、甾体、萜类、蒽醌类、环肽类、黄酮类等。
中药百部是传统的止咳和杀虫药物，中国药典收载的百部有3种：直立百部、蔓生百部和对叶百部；活性成分百部生物碱以含饱和氮杂奥化吡咯环状母核结构为特征，具有镇咳、祛痰、杀虫、抗菌等药理作用。广西为百部的主要道地产区之一，但是由于近些年的破坏性采收和生态环境的破坏，百部资源正在锐减。
百部内生菌产生与宿主植物活性相似的化合物，其内生菌次生代谢产物可作为新型药物或农药的潜在来源。
本发明所要解决的技术问题是：
提供一种百部中内生链霉菌中吡咯-2-羧酸酯化合物的制备方法，有望解决用于杀虫作用的百部药材的替代品，以及提供百部内生菌中吡咯-2-羧酸酯类新化合物具有在防治蚜虫和二斑叶螨的医药新应用。
发明采用如下技术方案：
吡咯-2-羧酸酯类新化合物的结构式如下：
式I中：
R1和R2可以相同或不同；
R1选自氢、甲基、乙基、氨基、甲酰胺基、乙酰胺基中的一种；
R2选自氢、羟基、羟甲基、羟乙基、氨基、甲酰胺基、乙酰胺基中的一种；
n选自1到5。
吡咯-2-羧酸酯类化合物为中药百部中内生链霉菌分离得到的化合物，其中所有化合物均为新化合物。
所述的百部内生链霉菌BS-1是经过下述提取分离方法获得：采集百部新鲜药材，进行表面消毒处理。分别取百部的根茎叶切碎后放入离心管，加少量灭菌水，涡旋，80℃热水浴1min，取200uL涂板于ISP4和燕麦培养基(加双抗：两性霉素50mg/L；萘啶酸25mg/L)，28℃培养一到两个月，并用M2平板纯化。
所述的百部内生链霉菌发酵液粗提物通过下述方法得到：配制种子培养基，将BS-1菌株接入种子培养基，26～30℃，培养3～5天得种子培养液；将得到的种子培养液接入发酵培养基中，26～30℃，200rpm培养6～9天得发酵物。加入2～6％XAD-16树脂，继续振荡4～6小时，离心弃去上清液，加入甲醇提取，涡旋超声，离心，取上清甲醇溶液，蒸干得到菌株粗提物。
所述的百部链霉菌中的吡咯-2-羧酸酯类化合物是通过下述方法分离纯化：将所述BS-1粗提物，先后采用MCI、反相硅胶、Sephadex LH-20分离材料进行柱色谱分离，并辅以prep-HPLC方法进行纯化，获得单体化合物。
作为优选：分离纯化时，BS-1粗提物经过减压MCI柱层析，采用甲醇-水按0-100％甲醇梯度洗脱。再采用反相硅胶、Sephadex LH-20分离材料进行柱色谱分离，并辅以prep-HPLC方法进行纯化，获得单体化合物。所述吡咯-2-羧酸酯类化合物在制备杀虫剂中的用途，尤其是在制备杀二斑叶螨、棉蚜虫药物中的应用。
有益效果：数据结果表明本发明化合物2、3、4、5、9、10(结构见实施例1)、对叶百部碱(11)(购自南京金益柏生物科技有限公司)、吡咯-2-羧酸(12)(购自上海升泓生物科技有限公司)、BS-1粗提物(BS-1)对蚜虫和二斑叶螨成虫均具有杀虫活性；其中对叶百部碱(11)、吡咯-2-羧酸(12)、BS-1粗提物(BS-1)对蚜虫的杀虫活性较高，化合物3、对叶百部碱(11)对二斑叶螨的杀虫活性较高。
附图说明
图1为化合物1的ESI-MS图谱。
图2为化合物1的HR-ESIMS图谱。
图3为化合物1的1H NMR图谱。
图4为化合物1的13C NMR图谱。
图5为化合物2的1H NMR图谱。
图6为化合物3的1H NMR图谱。
图7为化合物4的1H NMR图谱。
图8为化合物5的1H NMR图谱。
图9为化合物6的1H NMR图谱。
图10为化合物7的1H NMR图谱。
图11为化合物8的1H NMR图谱。
图12为化合物9的1H NMR图谱。
图13为化合物10的1H NMR图谱。
具体实施方法
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1：
(1)百部内生链霉菌的分离：采集百部新鲜药材，进行表面消毒处理。分别取百部的根茎叶切碎后放入离心管，加少量灭菌水，涡旋，80℃热水浴1min，取200uL涂板于ISP4和燕麦培养基，28℃培养一到两个月，并用M2平板纯化。
(2)BS-1的菌种培养：配制ISP4培养基[ISP4 37g/L；agar 15g/L]；配制燕麦培养基[Oatmeal 65g/L]。配制M2培养基[glucose,4.0g/L；yeast extract,4.0g/L；maltextract,10.0g/L；CaCO3,2.0g/L；agar,18.0g/L]。120℃灭15-20分钟。
(3)BS-1的发酵液的培养：[corn flour,40.0g/L；glucose,10.0g/L；glutenpowder,5.0g/L；K2HPO4·3H2O,0.5g/L；bran,10.0g/L；CaCO3,2.0g/L；(NH4)2SO4,1.0g/L]。发酵液平均分装于150个250mL锥形瓶，120℃灭15-20分钟。将BS-1菌株接入配制好的种子培养基中，于28℃下，培养3天得种子培养液；将种子也以5％比例接入发酵液中。
实施例2：吡咯-2-羧酸酯类化合物的制备：将实施例1得到的发酵液和菌体分离，发酵液和菌体分别用等体积的甲醇萃取3次，合并萃取液后减压浓缩得到浸膏；浸膏经过减压MCI柱层析，采用甲醇-水按0-100％甲醇梯度洗脱，HPLC分析合并为12个组分(A-L)。组分B用制备液相制备，洗脱条件：35％甲醇-水等度洗脱，得化合物2(8.8mg)。组分C用制备液相制备，洗脱条件：35％甲醇-水等度洗脱，得化合物7(7mg)。组分F过凝胶，分成3个部分(F1-F3)，F2部分用制备液相制备，洗脱条件：30％甲醇-水等度洗脱，得化合物6(2mg)。组分G用制备液相制备，洗脱条件：0-30min，体积分数为40％的甲醇线性增加至60％的甲醇，得化合物4(14mg)和化合物1(7.7mg)。组分I部分用制备液相制备，洗脱条件：60％甲醇-水等度洗脱，得化合物3(23mg)。组分J过凝胶柱，分成三个部分(J1-J3)，J1部分用制备液相制备，洗脱条件：60％甲醇-水等度洗脱，得化合物10(34.6mg)。J2部分用制备液相制备，方法：0-30min，体积分数为50％的甲醇线性增加至80％的甲醇，得化合物5(19.0mg)。J3部分用制备液相制备，洗脱条件：0-30min，体积分数为40％的甲醇线性增加至70％的甲醇，得化合物8(11.7mg)。组分K用制备液相制备，洗脱条件：75％甲醇-水等度洗脱，得化合物9(61mg)。
化合物结构如下图：
实施例3：
取上述实施例2制备的化合物1，其鉴定过程：根据高分辨质谱数据212.0901[M+H]+，推算出该化合物1的分子式为C10H13NO4，不饱和度为5。氢谱数据显示，有两个甲基(δH 2.02,1.27)，一个亚甲基(δH 2.57)，三个次甲基(δH 6.77,6.53,5.24)。碳谱数据显示，有两个芳香碳(δC 121.6,119.0)，两个羰基(δC 159.7,171.7)。COSY谱图数据提示有两个结构单元：NH-1/H-5/4-CH3/H-3和7-CH3/H-7/H2-8。再由HMBC谱图信息，H-3(δH6.77)与C-2/C-4/C-5相关；H-5(δH 6.53)与C-3/C-4相关推出关键骨架4-甲基l-1H-吡咯-2-羧酸。通过H-3/C-6和H-7/C-6的HMBC相关把上面两个结构单元连接起来，见图1,2,3,4。
图5,6,7,8,9,10,11,12,13分别对应化合物2,3,4,5,6,7,8,9,10的氢谱图。其鉴定过程同化合物1一致，只在化合物1的基础上分别增加了脂肪链长度或者替换了C-4/C-9的取代基团。
化合物1-10的1H NMR数据见表1，化合物1-10的13C NMR数据见表2。
表1.化合物1-10的1H NMR数据
# measured in CD3OD.
表2.化合物1-10的13C NMR数据
# measured in CD3OD.
化合物1的绝对构型用合成法确定。R/S构型的羟基丁酸甲酯与吡咯羧酸反应生成R/S构型的吡咯羧酸酯，得到对应构型的产物1a/1b，比旋光度(1a,[α]20 D-12.0；1b,[α]20 D+9.0)；而化合物1比旋光度为[α]20 D-25.7，因此确定化合物1的绝对构型为7R。命名为endostemonine A。
其它9个吡咯-2-羧酸酯类化合物与化合物1为相同骨架化合物，只在其结构基础上有微小变化，其结构分析过程参照化合物1，命名为endostemonine B-J。
实施例4：
本发明吡咯-2-羧酸酯类化合物的抗虫活性的测定。
试验方法：取化合物2、3、4、5、9、10(结构见实施例1)，对叶百部碱(11)(购自南京金益柏生物科技有限公司)、吡咯-2-羧酸(12)(购自上海升泓生物科技有限公司)、BS-1粗提物(BS-1)、对照药(吡虫啉IM、联苯肼酯BI)(购自江苏省苏科农化有限责任公司)各对蚜虫和二斑叶螨进行活性测试。
药剂配制：将待测样品用少量无水甲醇溶解，然后用0.1％吐温-80水稀释到所需浓度。
蚜虫活性测试：选成蚜接到黄瓜叶片上，繁殖两天，剔除母蚜和较小的蚜虫，使叶片上保持25头左右的若蚜。将叶片剪下，连同蚜虫一起浸渍到药液中10s，用滤纸吸取多余的药液，晾干水渍。叶柄用脱脂棉包住，加水保湿；放到90mm培养皿中，用保鲜膜盖好，防止蚜虫爬出。处理后1d、2d和3d调查活虫数和死虫数，共调查3次。在体视镜下，用毛笔轻触虫体，不动的视为死亡。
二斑叶螨活性测试：选取带有二斑叶螨成螨的四季豆苗叶片，剪取叶片，剔除若螨，使叶片上保持30头左右的成螨，接到无虫叶片上；第二天剪下带有成螨的叶片(25头左右/叶片)，将叶片连同成螨一起浸渍到药液中10s，用滤纸吸取多余药液，晾干水渍；用吸水纸包住叶柄，放到一次性水杯中，杯中加水20ml，为防止叶片浸入水中，下面可垫吸水纸。处理后1d、2d和3d调查活虫数和死虫数，共调查3次。在体视镜下，用毛笔轻触虫体，不动的视为死亡。
计算方法：
Pt—处理组死亡率，单位为百分率(％)；P0—对照组死亡率，单位为百分率(％)；试验结果如下：
表3对蚜虫的校正死亡率测定
表4对二斑叶螨的校正死亡率测定
采用叶片浸渍法对蚜虫和二斑叶螨进行实验，吡咯-2-羧酸酯类化合物对蚜虫和二斑叶螨毒力测定如表3,4所示，结果与分析：化合物2、3、4、5、9、10、对叶百部碱(11)、吡咯-2-羧酸(12)、BS-1粗提物(BS-1)对蚜虫和二斑叶螨成虫均具有杀虫活性；其中对叶百部碱(11)、吡咯-2-羧酸(12)、BS-1粗提物(BS-1)对蚜虫的杀虫活性较高，化合物3、对叶百部碱(11)对二斑叶螨的杀虫活性较高。
不同浓度吡咯-2-羧酸酯类对蚜虫和二斑叶螨均有一定的毒力，且在相同时间内随着杀虫剂浓度的升高，其死亡率逐渐升高。
由表3,4数据拟合二元一次方程得吡咯-2-羧酸酯类对蚜虫和二斑叶螨的毒力测定结果，见表5,6。
表5.对蚜虫毒力测定结果
表6.对二斑叶螨毒力测定结果
“-“:无杀虫活性
表5,6的数据表明该类化合物对棉蚜虫有高抑制活性(LC50范围：3.55-32.00ppm)；对二斑叶螨有中等抑制活性(LC50范围：197.6-685.5ppm)，具有潜在的防治蚜虫和螨虫的功效。对叶百部碱(11)是百部植物中具有杀虫活性的主要成分，从表中数据来看，百部内生菌粗提物BS-1对蚜虫防治作用强于对叶百部碱，百部内生菌粗提物BS-1对二斑叶螨防治作用与对叶百部碱相当。
实验表明：吡咯-2-羧酸酯化合物能杀灭二斑叶螨、蚜虫。吡咯-2-羧酸酯化合物有望替代百部药材来发挥药材原本的杀虫效果。
具体实施方式
图1为化合物1的ESI-MS图谱。
图2为化合物1的HR-ESIMS图谱。
图3为化合物1的1H NMR图谱。
图4为化合物1的13C NMR图谱。
图5为化合物2的1H NMR图谱。
图6为化合物3的1H NMR图谱。
图7为化合物4的1H NMR图谱。
图8为化合物5的1H NMR图谱。
图9为化合物6的1H NMR图谱。
图10为化合物7的1H NMR图谱。
图11为化合物8的1H NMR图谱。
图12为化合物9的1H NMR图谱。
图13为化合物10的1H NMR图谱。
具体实施方法
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1：
(1)百部内生链霉菌的分离：采集百部新鲜药材，进行表面消毒处理。分别取百部的根茎叶切碎后放入离心管，加少量灭菌水，涡旋，80℃热水浴1min，取200uL涂板于ISP4和燕麦培养基，28℃培养一到两个月，并用M2平板纯化。
(2)BS-1的菌种培养：配制ISP4培养基[ISP4 37g/L；agar 15g/L]；配制燕麦培养基[Oatmeal 65g/L]。配制M2培养基[glucose,4.0g/L；yeast extract,4.0g/L；maltextract,10.0g/L；CaCO3,2.0g/L；agar,18.0g/L]。120℃灭15-20分钟。
(3)BS-1的发酵液的培养：[corn flour,40.0g/L；glucose,10.0g/L；glutenpowder,5.0g/L；K2HPO4·3H2O,0.5g/L；bran,10.0g/L；CaCO3,2.0g/L；(NH4)2SO4,1.0g/L]。发酵液平均分装于150个250mL锥形瓶，120℃灭15-20分钟。将BS-1菌株接入配制好的种子培养基中，于28℃下，培养3天得种子培养液；将种子也以5％比例接入发酵液中。
实施例2：吡咯-2-羧酸酯类化合物的制备：将实施例1得到的发酵液和菌体分离，发酵液和菌体分别用等体积的甲醇萃取3次，合并萃取液后减压浓缩得到浸膏；浸膏经过减压MCI柱层析，采用甲醇-水按0-100％甲醇梯度洗脱，HPLC分析合并为12个组分(A-L)。组分B用制备液相制备，洗脱条件：35％甲醇-水等度洗脱，得化合物2(8.8mg)。组分C用制备液相制备，洗脱条件：35％甲醇-水等度洗脱，得化合物7(7mg)。组分F过凝胶，分成3个部分(F1-F3)，F2部分用制备液相制备，洗脱条件：30％甲醇-水等度洗脱，得化合物6(2mg)。组分G用制备液相制备，洗脱条件：0-30min，体积分数为40％的甲醇线性增加至60％的甲醇，得化合物4(14mg)和化合物1(7.7mg)。组分I部分用制备液相制备，洗脱条件：60％甲醇-水等度洗脱，得化合物3(23mg)。组分J过凝胶柱，分成三个部分(J1-J3)，J1部分用制备液相制备，洗脱条件：60％甲醇-水等度洗脱，得化合物10(34.6mg)。J2部分用制备液相制备，方法：0-30min，体积分数为50％的甲醇线性增加至80％的甲醇，得化合物5(19.0mg)。J3部分用制备液相制备，洗脱条件：0-30min，体积分数为40％的甲醇线性增加至70％的甲醇，得化合物8(11.7mg)。组分K用制备液相制备，洗脱条件：75％甲醇-水等度洗脱，得化合物9(61mg)。
化合物结构如下图：
实施例3：
取上述实施例2制备的化合物1，其鉴定过程：根据高分辨质谱数据212.0901[M+H]+，推算出该化合物1的分子式为C10H13NO4，不饱和度为5。氢谱数据显示，有两个甲基(δH 2.02,1.27)，一个亚甲基(δH 2.57)，三个次甲基(δH 6.77,6.53,5.24)。碳谱数据显示，有两个芳香碳(δC 121.6,119.0)，两个羰基(δC 159.7,171.7)。COSY谱图数据提示有两个结构单元：NH-1/H-5/4-CH3/H-3和7-CH3/H-7/H2-8。再由HMBC谱图信息，H-3(δH6.77)与C-2/C-4/C-5相关；H-5(δH 6.53)与C-3/C-4相关推出关键骨架4-甲基l-1H-吡咯-2-羧酸。通过H-3/C-6和H-7/C-6的HMBC相关把上面两个结构单元连接起来，见图1,2,3,4。
图5,6,7,8,9,10,11,12,13分别对应化合物2,3,4,5,6,7,8,9,10的氢谱图。其鉴定过程同化合物1一致，只在化合物1的基础上分别增加了脂肪链长度或者替换了C-4/C-9的取代基团。
化合物1-10的1H NMR数据见表1，化合物1-10的13C NMR数据见表2。
表1.化合物1-10的1H NMR数据
# measured in CD3OD.
表2.化合物1-10的13C NMR数据
# measured in CD3OD.
化合物1的绝对构型用合成法确定。R/S构型的羟基丁酸甲酯与吡咯羧酸反应生成R/S构型的吡咯羧酸酯，得到对应构型的产物1a/1b，比旋光度(1a,[α]20 D-12.0；1b,[α]20 D+9.0)；而化合物1比旋光度为[α]20 D-25.7，因此确定化合物1的绝对构型为7R。命名为endostemonine A。
其它9个吡咯-2-羧酸酯类化合物与化合物1为相同骨架化合物，只在其结构基础上有微小变化，其结构分析过程参照化合物1，命名为endostemonine B-J。
实施例4：
本发明吡咯-2-羧酸酯类化合物的抗虫活性的测定。
试验方法：取化合物2、3、4、5、9、10(结构见实施例1)，对叶百部碱(11)(购自南京金益柏生物科技有限公司)、吡咯-2-羧酸(12)(购自上海升泓生物科技有限公司)、BS-1粗提物(BS-1)、对照药(吡虫啉IM、联苯肼酯BI)(购自江苏省苏科农化有限责任公司)各对蚜虫和二斑叶螨进行活性测试。
药剂配制：将待测样品用少量无水甲醇溶解，然后用0.1％吐温-80水稀释到所需浓度。
蚜虫活性测试：选成蚜接到黄瓜叶片上，繁殖两天，剔除母蚜和较小的蚜虫，使叶片上保持25头左右的若蚜。将叶片剪下，连同蚜虫一起浸渍到药液中10s，用滤纸吸取多余的药液，晾干水渍。叶柄用脱脂棉包住，加水保湿；放到90mm培养皿中，用保鲜膜盖好，防止蚜虫爬出。处理后1d、2d和3d调查活虫数和死虫数，共调查3次。在体视镜下，用毛笔轻触虫体，不动的视为死亡。
二斑叶螨活性测试：选取带有二斑叶螨成螨的四季豆苗叶片，剪取叶片，剔除若螨，使叶片上保持30头左右的成螨，接到无虫叶片上；第二天剪下带有成螨的叶片(25头左右/叶片)，将叶片连同成螨一起浸渍到药液中10s，用滤纸吸取多余药液，晾干水渍；用吸水纸包住叶柄，放到一次性水杯中，杯中加水20ml，为防止叶片浸入水中，下面可垫吸水纸。处理后1d、2d和3d调查活虫数和死虫数，共调查3次。在体视镜下，用毛笔轻触虫体，不动的视为死亡。
计算方法：
Pt—处理组死亡率，单位为百分率(％)；P0—对照组死亡率，单位为百分率(％)；试验结果如下：
表3对蚜虫的校正死亡率测定
表4对二斑叶螨的校正死亡率测定
采用叶片浸渍法对蚜虫和二斑叶螨进行实验，吡咯-2-羧酸酯类化合物对蚜虫和二斑叶螨毒力测定如表3,4所示，结果与分析：化合物2、3、4、5、9、10、对叶百部碱(11)、吡咯-2-羧酸(12)、BS-1粗提物(BS-1)对蚜虫和二斑叶螨成虫均具有杀虫活性；其中对叶百部碱(11)、吡咯-2-羧酸(12)、BS-1粗提物(BS-1)对蚜虫的杀虫活性较高，化合物3、对叶百部碱(11)对二斑叶螨的杀虫活性较高。
不同浓度吡咯-2-羧酸酯类对蚜虫和二斑叶螨均有一定的毒力，且在相同时间内随着杀虫剂浓度的升高，其死亡率逐渐升高。
由表3,4数据拟合二元一次方程得吡咯-2-羧酸酯类对蚜虫和二斑叶螨的毒力测定结果，见表5,6。
表5.对蚜虫毒力测定结果
表6.对二斑叶螨毒力测定结果
“-“:无杀虫活性
表5,6的数据表明该类化合物对棉蚜虫有高抑制活性(LC50范围：3.55-32.00ppm)；对二斑叶螨有中等抑制活性(LC50范围：197.6-685.5ppm)，具有潜在的防治蚜虫和螨虫的功效。对叶百部碱(11)是百部植物中具有杀虫活性的主要成分，从表中数据来看，百部内生菌粗提物BS-1对蚜虫防治作用强于对叶百部碱，百部内生菌粗提物BS-1对二斑叶螨防治作用与对叶百部碱相当。
实验表明：吡咯-2-羧酸酯化合物能杀灭二斑叶螨、蚜虫。吡咯-2-羧酸酯化合物有望替代百部药材来发挥药材原本的杀虫效果。
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