阅读说明：本技术 一种治疗及预防眼科疾病的药物及其应用 (Medicine for treating and preventing ophthalmic diseases and application thereof ) 是由 郭涛 范先群 范宇晨 郭丽 彭玉豪 魏嘉洪 于 2018-06-13 设计创作，主要内容包括：本发明涉及医药技术领域。一种治疗及预防眼科疾病的药物,其特征在于：所述药物中含有蛇床子素和/或蛇床子素的衍生物。本发明通过蛇床子素及其衍生物治疗部分眼科疾病,为眼科相关的纤维化等细胞外基质蛋白异常的疾病提供新的治疗思路。本发明的药物,可用于治疗及预防细胞外基质蛋白异常导致的眼科疾病。所述眼科疾病可以为青光眼。所述眼科疾病可以为结膜瘢痕化、假性上睑下垂、眼部皮肤疤痕、老年性黄斑变性、糖尿病视网膜病变或后发性白内障。所述眼科疾病可以为小梁网切除术后滤过道疤痕化导致的手术治疗失败及小梁网切除术后滤过道疤痕化。(The invention relates to the technical field of medicines. A medicament for the treatment and prevention of ophthalmic diseases, characterized by: the medicine contains osthole and/or osthole derivatives. The invention treats partial ophthalmic diseases through the osthole and the derivatives thereof, and provides a new treatment idea for diseases of extracellular matrix protein abnormality such as fibrosis related to ophthalmology. The medicine of the present invention may be used in preventing and treating eye diseases caused by extracellular matrix protein abnormality. The ophthalmic disease may be glaucoma. The ophthalmic disease may be conjunctival scarring, pseudoptosis, ocular skin scarring, age-related macular degeneration, diabetic retinopathy or secondary cataract. The ophthalmic disease can be surgical treatment failure caused by filter channel scarring after trabeculectomy and filter channel scarring after trabeculectomy.)

一种治疗及预防眼科疾病的药物及其应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域领域，具体涉及眼科药物。

背景技术

眼科常见的各种增生性病变中，尽管发病机制、治疗方式和预后各不相同，但其共同之处是许多细胞和细胞因子的激活和刺激，引起细胞外基质蛋白异常，导致细胞的迁移和增殖，对临床的治疗和预后造成了极大的困难。

原发性开角型青光眼、青光眼术后滤过泡瘢痕化、增生性玻璃体视网膜病变、增生性糖尿病视网膜病变、后发性白内障等疾病是眼科常见的增生性病变。尽管它们的发病机制、治疗方式和预后各不相同，但其共同之处是许多细胞和细胞因子一起参与病变的发生和发展，病变区炎性因子的激活和刺激，引起细胞外基质蛋白异常，导致细胞的迁移和增殖，给眼科医生的临床工作和手术预后带来了极大的挑战。

1.在原发性开角型青光眼中，房水排出途径的病理改变特别是小梁网的改变会引起房水流出受阻和眼压升高，这些改变与小梁网细胞的细胞外基质蛋白比如纤维连接蛋白(FN)层粘连蛋白(LA)等异常累积引起的小梁网纤维化和小梁网增厚，网眼变窄或闭塞有密切关系。此外小梁网分泌的一些细胞因子比如Transforming Growth Factor-β2((TGF-β2)等也不同程度的影响着房水的流出。目前青光眼的治疗只局限于通过降低眼压来缓解症状。临床上常用的降眼压药物可以按它们的作用机制分为两大类：抑制房水生成和促进经葡萄膜巩膜途径的房水外流。青光眼手术也只注重创建通路以增加房水外流的速率。这些治疗方法的特点是它们虽然可以降低眼压，但都没有直接针对青光眼小梁网房水外流阻塞的病理机制进行治疗，可以说是治标不治本，因此患者必须终身用药。此外，由于小梁网的病理改变持续加重，这些治疗手段通常在治疗几年后疗效便会逐渐降低，从而不能有效控制眼压，致使患者必须联合使用多种药物并加以手术治疗。

2.青光眼最常用的手术方式为小梁切除术，但目前仍然存在一些问题影响手术的成功率，最常见的是术后滤过区Tenon's囊纤维增殖，细胞外基质蛋白异常，造成滤过道的瘢痕化，阻碍房水经由滤过道的正常循环，无法降低眼压。研究发现，引起青光眼术后滤过道瘢痕化的原因主要是滤过区Tenon's囊成纤维细胞发生增殖、收缩和迁移，细胞外基质合成增加所致，此外许多细胞因子参与并诱导成纤维细胞的增殖。所以术中会使用抗代谢药物如丝裂霉素C、5－氟尿嘧啶等防止滤过道瘢痕化，但这些药物仍然可能引起一系列并发症，如术后滤过泡渗漏、角膜水肿、结膜、巩膜坏死、眼内炎等。因此，MMC和5－FU等药物在防止青光眼术后滤过道瘢痕化的形成仍存在缺陷。

3.白内障患者通过超声乳化吸除联合人工晶状体植入术获得了较为显著的疗效，多数患者的视力较术前得到不同程度的提高。但是术中保留的部分晶状体前囊膜及完整的后囊膜，使残留的晶状体上皮细胞出现增殖、迁移和分化而产生晶状体前囊膜纤维化，转化为成纤维细胞，导致后发性白内障形成，是白内障术后常见的并发症之一。在此过程中，转化生长因子β(TG F－β)与碱性成纤维生长因子之间的平衡被破坏，前者调控晶状体上皮细胞的上皮－间叶转分化，使细胞外基质蛋白异常，囊膜纤维化；后者调控晶状体结构的再生和细胞增殖，成为白内障术后影响患者视功能的主要原因。通过术前选择不同设计的人工晶状体能够减少后发性白内障的发生，通过Nd:YAG激光可以治疗后发性白内障，但仍有可能引起炎症、眼压升高、人工晶状体损伤、黄斑水肿及视网膜脱离等并发症。仍需寻找更有效地方法和药物预防和治疗后发性白内障的发生发展。

4.增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)是眼科常见的增殖性病变，外伤、糖尿病、视网膜脱离及视网膜脱离术后等都可引起增生性病变。其主要病理特征为视网膜色素上皮细胞和神经胶质细胞增殖，细胞外基质蛋白异常，并伴有视网膜下和视网膜前膜纤维细胞膜形成。视网膜受到损伤后，视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial，RPE)、神经胶质细胞、巨噬细胞等在细胞因子的作用下发生迁移，聚集在玻璃体腔和视网膜下，在此过程中，细胞发生显型转变，形成具有收缩功能的纤维增殖膜，最终导致视网膜脱离。目前，手术切除增殖膜可明显提高手术成功率，但仍然有许多患者的术后视力不理想。尤其是严重的PVR无论是手术方式还是术后情况都不理想，常需要多次手术。近年来，许多学者研究PVR的基因治疗，但是由于技术尚不完善，载体的靶向性和组织特异性差、转导成功率低以及安全性问题，还未能完全应用于临床。由此可见，眼科疾病术后增殖性病变为眼科医生的临床治疗工作带来了重大挑战，因此，许多学者尝试寻找更安全有效的药物能够预防和治疗增殖性病变。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种治疗及预防眼科疾病的药物，以用于预防或治疗上述眼科疾病。

本发明的目的还在于，提供上述治疗及预防眼科疾病的药物的应用。

本发明所解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现：

一种治疗及预防眼科疾病的药物，其特征在于：所述药物中含有蛇床子素和/或蛇床子素的衍生物。

进一步，所述药物为片剂、胶囊、丸剂、口服液、针剂、眼药水、眼药膏，外用药膏中的任意一种。再进一步，所述针剂为采用经静脉注射、肌肉注射、皮下注射、眼周注射、眼球后注射、结膜下注射、巩膜注射或眼内注射的针剂。

进一步，所述药物为眼药膏或眼药水，所述蛇床子素和/或蛇床子素的衍生物的浓度为10μmol/l～10mmol/l。再进一步，所述蛇床子素和/或蛇床子素的衍生物的浓度为20μmol/l～100μmol/l。

进一步，所述药物为眼内注射针剂、结膜下注射针剂、巩膜下注射针剂、玻璃体腔内注射针剂或前房内注射针剂，所述蛇床子素和/或蛇床子素的衍生物的浓度为20μmol/l～100μmol/l。

所述药物中还含有辅料。辅料为药学上可接受的辅料。

治疗及预防眼科疾病的药物，可用于治疗及预防细胞外基质蛋白异常导致的眼科疾病。

所述眼科疾病可以为青光眼。

所述眼科疾病可以为结膜瘢痕化、假性上睑下垂、眼部皮肤疤痕、老年性黄斑变性、糖尿病视网膜病变或后发性白内障。

所述眼科疾病可以为小梁网切除术后滤过道疤痕化导致的手术治疗失败及小梁网切除术后滤过道疤痕化。

附图说明

图1为实验1中不同实验组的FN的表达水平的条状图；

图2为实验1中不同实验组的Col-IV的表达水平的条状图；

图3为实验1中不同实验组的LN的表达水平的条状图；

图4为实验1中不同浓度蛇床子素作用下第一天样品的细胞存活率的试验结果；

图5为实验1中不同浓度蛇床子素作用下第四天样品的细胞存活率的试验结果；

图6为实验1中不同浓度蛇床子素作用下第七天样品的细胞存活率的试验结果；

图7为实验1中加入***不同浓度蛇床子素作用下样品第一天细胞存活率的试验结果；

图8为实验1中加入***不同浓度蛇床子素作用下样品第四天细胞存活率的试验结果；

图9为实验1中加入***不同浓度蛇床子素作用下样品第七天细胞存活率的试验结果；

图10为实验2蛇床子素对高眼压模型小鼠眼压干预结果；

图11为实验2蛇床子素对高眼压模型小鼠眼压治疗结果。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示进一步阐述本发明。

一种治疗及预防眼科疾病的药物，药物中含有蛇床子素和/或蛇床子素的衍生物。本专利通过蛇床子素及其衍生物治疗部分眼科疾病，为眼科相关的纤维化等细胞外基质蛋白异常的疾病提供新的治疗思路。本专利的药物，可用于治疗及预防细胞外基质蛋白异常导致的眼科疾病。眼科疾病可以为青光眼。眼科疾病可以为结膜瘢痕化、假性上睑下垂、眼部皮肤疤痕、老年性黄斑变性、糖尿病视网膜病变或后发性白内障。眼科疾病可以为小梁网切除术后滤过道疤痕化导致的手术治疗失败及小梁网切除术后滤过道疤痕化。

实验1

1.细胞铺板：人正常小梁网细胞(Normal Trabecular Meshwork Cells，NTM)用含10％胎牛血清(FBS)的F12培养，待生长状态良好的人正常小梁网细胞融合至75％-80％时，将细胞用胰酶消化，铺种到6孔板内加2ml培养液。

2.实验分组：将人正常小梁网细胞正常培养作为空白对照组，将人正常小梁网细胞加入***作为实验对照组，将人正常小梁网细胞加入***和不同浓度蛇床子素作为实验组。(实验对照组和实验组的培养液中***浓度均为10-7mol/l，蛇床子素浓度分别为1，3，10，30，100μmol/l)，培养小梁网细胞至第0，3，6，12，24，48h。***可诱导细胞中转化生长因子β(TGFβ)，纤维连接蛋白(FN)，IV型胶原(COL-IV)，层粘连蛋白(LN)等表达量升高红，引起细胞纤维化。故通过***引起纤维化模拟眼科疾病的产生。

3.小梁网细胞外基质蛋白基因和蛋白分泌检测：设计层粘连蛋白(LN)、IV型胶原蛋白(Col-IV)和纤维连接蛋白(FN)基因的引物序列，RT-PCR检测LN、COL-IV、FN的信使RNA表达；利用Anti-LN、Anti-Col-IV、Anti-FN抗体，ICC检测小梁网细胞外基质蛋白表达水平，检测结果见图1、图2、图3、图4、图5、图6、图7、图8和图9。

实验结论：蛇床子素干预后，TGFβ，FN，COL-IV，LN表达含量降低。因此，蛇床子素及其衍生物能够抑制小梁网细胞的纤维化，能够治疗或者预防因细胞纤维化造成的眼科疾病。

实验2

1.将蛇床子素粉末溶解于生理盐水中，配置得30mg/kg溶液；

2.选取雄性Balb/cJ小鼠8～12周龄，体重约10～15克，均符合一级动物标准。饲养室温15～20℃，相对湿度55～75％，12h光照维持，自由摄食饮水。纳入标准：①无眼部疾病。②双眼瞳孔直接对光反射和间接对光反射正常；

3.测量每只小鼠在清醒状态时左右两只眼的眼压，并进行记录；

4.对每只小鼠进行体重测量，采用4％水合氯醛腹腔注射方式麻醉小鼠，麻醉剂量为10μl/g；

5.对造模小鼠玻璃体腔进行TGFβ2过表达腺病毒注射，注射剂量为3μl，浓度为3×107pfu/μl，对侧眼玻璃体腔注射相同剂量及浓度的空载腺病毒；

6.造模后随机分为模型组(n＝6)、蛇床子素干预组(n＝10)、蛇床子素治疗组(n＝10)以及正常对照组(n＝6)，其中蛇床子素干预组组于造模后立即开始给药，蛇床子素治疗组待模型组眼压升高且处于稳定状态后立即开始给药，按30mg/kg蛇床子素腹腔注射，每日1次。

7.于造模当天测量小鼠眼压一次，造模后第二天测量小鼠眼压一次，之后每隔一段时间测量一次小鼠眼压，避免因眼压测量过于频繁导致小鼠眼角膜造成损伤，此外，腹腔注射蛇床子素应于每日测量小鼠眼压之后，避免由于给药对眼压造成影响，另外每次测量眼压应于同一时间段进行，避免昼夜变化对小鼠眼压造成影响。

蛇床子素对高眼压模型小鼠眼压干预结果，参见图10：蛇床子素干预后第10天，干预组的眼压低于模型组。

蛇床子素对高眼压模型小鼠眼压治疗结果，参见图11：蛇床子素治疗后第8天，治疗组的眼压低于模型组。

作为一种优选方案，药物可以为片剂、胶囊、丸剂、口服液、针剂、眼药水、眼药膏，外用药膏中的任意一种。针剂优选为采用经静脉注射、肌肉注射、皮下注射、眼周注射、眼球后注射、结膜下注射、巩膜注射或眼内注射的针剂。当药物为眼药膏或眼药水时，蛇床子素和/或蛇床子素的衍生物的浓度为10μmol/l～mmol/l。进一步优选为蛇床子素和/或蛇床子素的衍生物的浓度为20μmol/l～100μmol/l。当药物为眼内注射针剂、结膜下注射针剂、巩膜下注射针剂、玻璃体腔内注射针剂或前房内注射针剂时，蛇床子素和/或蛇床子素的衍生物的浓度为20μmol/l～100μmol/l。药物为片剂、胶囊、丸剂，蛇床子素和/或蛇床子素的衍生物的质量优选为在0.3g/g以上，进一步优选为0.4g/g-0.5g/g。

作为一种优选方案，药物是眼药水，眼药水包括如下原料，5mmol/l～10mmol/l蛇床子素、2mmol/l～5mmol/l决明子、1mmol/l～3mmol/l银杏叶、0.5mmol/l～1mmol/l金银花、1mmol/l～2mmol/l毛果芸香碱，余量为富硒山泉水，用氢氧化钠或者盐酸将酸碱度调至7.3-7.5。本专利通过优化眼药水的配方，进而实现对眼病的治疗效果。本发明中，决明子：味苦、甘而性凉，具有清肝火、祛风湿、益肾明目等功能；金银花：清热解毒，凉散风热，用于痈肿疔疮，喉痺、丹毒、热毒血痢，其功效为：具有清热解毒、通经活络、广谱抗菌及抗病毒等功效，具有“中药抗生素”、银杏叶：性味甘苦涩平，有益心敛肺、化湿止泻，平喘，活血化瘀，止痛等功效；毛果芸香碱可能的通过扩张巩膜静脉窦周围的小血管以及收缩睫状肌后，小梁网结构发生改变而使眼内压下降，有助于缓解或消除青光眼症状。富硒山泉水保护细胞膜免受氧化损伤；富硒山泉水中的硒-P蛋白其实也就是会具有螯合重金属等一系列毒物，能降低毒物本身的毒性作用。

进一步优选为眼药水包括如下质量百分比的原料，8mmol/l蛇床子素、3mmol/l决明子、1.5mmol/l银杏叶、0.5mmol/l金银花、2mmol/l毛果芸香碱，余量为富硒山泉水，用氢氧化钠或者盐酸将酸碱度调至7.4。本发明的诸药合理配伍，相辅相成，具有益气养阴、活血利水的作用，根据辩证施治的传统医学理论和人体五脏六腑、经脉络属的表里关系，药物四气五味的性味归经之性能，直接传导药力药效眼中治疗青光眼，疏通体内眼部血脉，血脉通，经络通，病疼自消，使疾病得以康复，达到了标本兼治的目的。

作为另一种优选方案，所述药物是眼药水，眼药水包括如下质量百分比的原料，0.2％磷酸氢二钠、0.75％氯化钠、0.01％乙二胺四乙酸二钠、0.01％苯扎氯铵、0％-0.3％羟丙基甲基纤维素、0.05％聚山梨酯、0.01％-1％蛇床子素或蛇床子素的衍生物，余量为纯化水，用氢氧化钠或者盐酸将溶液酸碱度调至7.0-7.6，优选7.4。该配方中磷酸氢二钠系缓冲剂，氯化钠系渗透剂、乙二胺四乙酸二钠系防腐剂；聚山梨酯是表面活性剂。由于甲基纤维素水溶液的渗透压与眼泪相同，因此对眼睛刺激小，添加眼药中，作为接触眼球水晶体的润滑剂。因此羟丙基甲基纤维素最好有，含量优选0.1％-0.3％。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。