一种乌发组合物及其应用
阅读说明：本技术 一种乌发组合物及其应用 (Hair-blacking composition and application thereof ) 是由 赵锴 于 2019-12-20 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种乌发组合物及其应用,属于医药技术领域。本发明乌发组合物包含补骨脂素和毛喉素,二者能协同促进黑素细胞的细胞增殖、酪氨酸酶的活性和黑素的产生,可用于治疗白发；由其制备而成的乌发膏不但对白发治愈率可达90％以上,而且制备工艺简单,各项卫生指标和感官指标也满足QB/T1857-2004标准的要求。(The invention provides a hair-blacking composition and application thereof, belonging to the technical field of medicines. The hair-blackening composition comprises psoralen and forskolin, which can synergistically promote cell proliferation of melanocytes, activity of tyrosinase and generation of melanin, and can be used for treating white hair; the hair-blacking cream prepared by the hair-blacking cream not only has a white hair cure rate of over 90 percent, but also has simple preparation process, and various sanitary indexes and sensory indexes also meet the requirements of QB/T1857-2004 standard.)
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种乌发组合物及其应用。
背景技术
人们随着年龄的增加，头发由黑变白是一种必然的生理趋势，也是人们衰老的表征之一，乌发便成为延年美颜的一个手段。据研究，在白发中，约80％的白发的毛囊中都含有黑色素细胞，但这些白发的毛***，产生黑色素的功能极低或者根本不产生黑色素，白发的产生是由于头发供应黑色素的黑色素细胞发生异常引起的。此外，遗传、精神刺激的障碍、内分泌失调和黑色素失落症也会产生白发。在黑色素的产生过程中，黑色素细胞中的酪氨酸酶起到很重要的作用。因此只要使用适当的物质激活酪氨酸酶以促进黑色素的产生，乌发过程就自然而然的完成了。纵观近年来中西药物治疗毛发早白的临床报道，目前无特效疗法，大多借助染发化妆品以达到修饰作用。随着美容科学的发展，迫切需要安全无毒、且不会引起皮肤过敏的乌发生发外用药物。因此，以科学合理的方法，探寻一种简便、有效的乌发生发的外用药物成为近年来治疗的一个重要课题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的上述缺陷，提供一种乌发组合物及其应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
第一方面，本发明提供了一种乌发组合物，包含补骨脂素和毛喉素。
作为本发明组合物的优选实施方式，所述补骨脂素和所述毛喉素的重量比为1～5:1～5。
作为本发明组合物更优选的实施方式，所述补骨脂素和所述毛喉素的重量比为2:3。
第二方面，本发明提供了上述的组合物的应用，其特征在于，所述组合物用于制备治疗白发的药物。
作为本发明应用的优选实施方式，所述药物包含以下重量百分含量的组分：补骨脂素0.01～0.05％，毛喉素0.01～0.05％。
作为本发明应用的更优选的实施方式，所述药物包含以下重量百分含量的组分：补骨脂素0.02％，毛喉素0.03％。
第三方面，本发明提供了一种乌发膏，其含有上述的组合物。
作为本发明乌发膏的优选实施方式，所述乌发膏包含以下重量百分含量的组分：补骨脂素0.01～0.05％，毛喉素0.01～0.05％。
作为本发明乌发膏更优选的实施方式，以所述乌发膏的总重量为基准计算，所述乌发膏包含以下重量百分含量的组分：补骨脂素0.02％，毛喉素0.03％。
作为本发明乌发膏的优选实施方式，所述乌发膏还含有以下重量百分含量的组分：十六十八醇10～15％，单硬脂酸甘油酯5～10％，凡士林4～5％，甘油3～5％，丙二醇1～3％，氮酮1～5％，维生素C 0.4～0.6％，尼泊金乙酯0.1％，香精0.2％，余量去离子水。
第四方面，本发明还提供了上述乌发膏的制备方法，其包括以下步骤：
(1)先将丙二醇和氮酮混合，再加入十六十八醇、单硬脂酸甘油酯、凡士林、尼泊金乙酯、补骨脂素、毛喉素以及维生素C，加热至完全融化，保温搅拌均匀，得到A相；将甘油与去离子水混合后，加热至与A相相同的温度，得到B相；
(2)将所述A相加入所述B相中进行均质搅拌，之后冷却至40℃以下，加入香精，搅拌至完全乳化，冷却至室温，即得上述乌发膏。
作为本发明制备方法的优选实施方式，所述步骤(1)中，加热温度均为80℃。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：本发明将补骨脂素和毛喉素复配，发现二者之间对黑素细胞的细胞增殖、酪氨酸酶的活性和黑素的产生有协同促进的作用；白发患者在使用本发明乌发霜后，白发治愈率可达90％以上，且本发明乌发膏制备工艺简单，各项卫生指标和感官指标也满足QB/T1857-2004标准的要求。
附图说明
图1为使用本发明乌发膏前、后头发变化图，其中图A为使用前，图B为使用1个疗程后，图C为使用2个疗程后。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1-3
实施例1-3均为本发明乌发膏的一种实施例，其组成如表1所示，制备方法均包括以下步骤：
(1)先将丙二醇和氮酮混合，再加入十六十八醇、单硬脂酸甘油酯、凡士林、尼泊金乙酯、补骨脂素、毛喉素以及维生素C，加热至80℃，完全融化后保温搅拌均匀，得到A相；将甘油与去离子水混合后，加热至80℃，得到B相；
(2)将上述A相加入上述B相中进行均质搅拌，之后冷却至40℃，加入香精，搅拌至完全乳化，冷却至室温，即得相应乌发膏。
表1实施例1-3中乌发膏的组成/wt.％
检测方法1：CCK-8法测定黑素细胞增值率
96孔板中的黑素细胞用新鲜培养基或含药物的新鲜培养基培养24h后用于检测黑素细胞增殖率，具体检测步骤如下：预先配制含10vol.％CCK-8的检测液，去除培养基，用PBS(磷酸盐缓冲液)润洗细胞2次，吸尽PBS，在96孔板每孔中加入100μL上述检测液，注意不要在孔中生成气泡以免影响O.D值(吸光度值)的读数，之后将培养板在37℃、5vol.％二氧化碳培养箱中孵育4h，然后用酶标仪检测在450nm处的O.D值。
检测方法2：多巴氧化法测酪氨酸酶活性
96孔板中的黑素细胞用新鲜培养基或含药物的新鲜培养基培养24h后用于检测黑素细胞中的酪氨酸酶活性，具体检测步骤如下：预先配制1wt.％L-DOPA(左旋多巴)溶液和1wt.％TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)溶液，去除培养基，用PBS润洗细胞2次，吸尽PBS，然后用0.1wt.％胰酶消化，再用含10wt.％胎牛血清的PBS中和，收集液体于离心管中，然后在室温下于1000r/min下离心3min，弃上清，加入200μL 1wt.％TritonX-100溶液，振荡15min，加入1wt.％L-DOPA溶液以稀释至1mL，然后将液体移至96孔板中，每孔100μL液体，在37℃、5vol.％二氧化碳培养箱中孵育1h，用酶标仪检测在490nm处的O.D值。
检测方法3：氢氧化钠法测黑素含量
96孔板中的黑素细胞用新鲜培养基或含药物的新鲜培养基培养24h后用于检测黑素细胞中的黑素含量，具体检测步骤如下：预先配制1g/L NaOH溶液(含10wt.％DMSO)，去除培养基，用PBS润洗细胞2次，吸尽PBS，然后用0.5wt.％胰酶消化，再用含10wt.％胎牛血清的PBS中和，收集液体于离心管中，然后在室温下于1000r/min下离心3min，弃上清，加入1mL1g/L NaOH溶液(含10wt.％DMSO)，用移液器吹打混匀，于60℃恒温孵育1h，然后用酶标仪检测在470nm处的O.D值。
效果例1
本效果例研究了单独使用补骨脂素时，其不同浓度对黑素细胞的细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素含量的影响，具体结果见表2，其中空白对照未使用任何药物。
表2单独使用补骨脂素时，其不同浓度对乌发效果的影响
补骨脂素浓度(wt.％)
细胞增殖率(％)
酪氨酸酶活性(％)
黑素含量(％)
0(空白对照组)
100
100
100
0.01
101.8±1.7
109.3±0.2
120.8±3.7
0.02
104.2±0.4
174.6±7.8
190±6.1
0.03
96.3±2.1
136.8±2.5
169.2±2.0
0.04
52.8±1.2
54±1.6
40±1.3
0.05
14.1±0.4
8.6±0.7
10.3±0.5
从表2可知，当补骨脂素浓度为0.2wt.％时，黑素细胞的细胞增殖率明显高于空白对照组；随着补骨脂素浓度的增加，黑素细胞的细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素含量呈现显著增长的趋势；当补骨脂素浓度为0.2wt.％时，其对黑素细胞的细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量的促进作用达到顶峰，当其浓度超过0.2wt.％后，补骨脂素表现出对细胞的抑制作用，这说明补骨脂素对细胞的促进作用具有一定的浓度依赖性。
效果例2
本效果例研究了单独使用毛喉素时，其不同浓度对黑素细胞的细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素含量的影响，具体结果见表3，其中空白对照未使用任何药物。
表3单独使用毛喉素时，其不同浓度对乌发效果的影响
毛喉素浓度(wt.％)
细胞增殖率(％)
酪氨酸酶活性(％)
黑素含量(％)
0(空白对照组)
100
100
100
0.01
98.1±0.6
138.0±8.7
179.8±6.2
0.02
105.8±0.8
142.8±11.3
210.4±8.6
0.03
101.7±1.1
178.2±14.6
248.9±15.0
0.04
99.0±0.6
174.5±13.1
238.1±13.8
0.05
106.3±0.4
180.3±10.7
244.1±12.1
从表3可知，随着毛喉素浓度的增加，黑素细胞的酪氨酸酶活性和黑素含量呈现先增加后降低的趋势，当其浓度为0.03wt.％时，黑素细胞的酪氨酸酶活性和黑素含量均达到最大值，同时，细胞增值率略有提高，但不明显。
效果例3
本效果例研究了补骨脂素和毛喉素联用对黑素细胞的细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素含量的影响，具体结果见表4，其中空白对照未使用任何药物。
表4补骨脂素和毛喉素联用对乌发效果的影响
从表4可知，补骨脂素和毛喉素联用处理组的酪氨酸酶活性和黑素含量与空白对照组相比提高近5～7倍；当补骨脂素浓度为0.02wt.％时，毛喉素浓度达到0.03wt.％后再增加对其酪氨酸酶活性和黑素含量影响不大，推测主要原因是二者联合后促使了细胞内的cAMP(环磷酸腺苷)含量的大大提高，活化了蛋白激酶A信号途径，即在细胞内环境下，诱导黑素细胞酪氨酸酶活性、黑素生成。
效果例4
本效果例研究了0.03wt.％的毛喉素分别与0.02wt.％的补骨脂素、其衍生物8-甲氧基补骨脂素联合使用时，对黑素细胞的细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素含量的影响，其中空白对照组未使用任何药物。
表5补骨脂素或其衍生物与毛喉素复配的效果对比
项目
细胞增殖率(％)
酪氨酸酶活性(％)
黑素含量(％)
空白对照组
100
100
100
补骨脂素
104.4±1.6
504.4±20.5
706.7±15.6
8-甲氧基补骨脂素
101.8±1.3
413.1±16.4
580.4±18.3
由表5可知，0.03wt.％毛喉素与0.02wt.％补骨脂素联合实验组、0.03wt.％毛喉素与0.02wt.％8-甲氧基补骨脂素联合实验组对细胞都不存在毒性，都具有对黑素细胞生长及酪氨酸酶活性和黑素产生有促进作用，且前者比后者作用更强。
效果例5
本效果例研究了不同剂量UVB对0.03wt.％的毛喉素与0.02wt.％的补骨脂素联合使用效果的影响，具体结果见表6，其中光照培养时间为24h，检测方法同检测方法1、检测方法2和检测方法3，空白对照组的细胞培养在无光照、无药物的条件下进行。
表6 UVB不同剂量对毛喉素和补骨脂素联合使用效果的影响
UVB剂量(mJ/cm<sup>2</sup>)
细胞增殖率(％)
酪氨酸酶活性(％)
黑素含量(％)
空白对照组
100
100
100
10
110.1±0.7
594.4±11.6
796.7±20.9
20
105.8±1.8
685.3±24.0
983.1±27.5
30
89.4±3.3
374.8±17.1
502.7±20.2
40
65.7±1.6
266.1±22.0
281.3±15.3
50
53.3±1.7
107.8±13.6
198.6±10.1
如表6显示，当UVB照射剂量为20m J/cm2时，毛喉素与补骨脂素联合使用效果明显促进了黑素细胞的细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素产生，当UVB照射剂量大于20m J/cm2时，随着照射剂量的增加，细胞增殖出现被抑制现象，同时酪氨酸酶活性降低，黑素含量减少。
效果例6
依据QB/T1857-2004标准对本发明乌发霜进行检测，结果显示其各项卫生指标和感官指标经检测均符合相关规定，具体结果如表7所示。
表7本发明乌发霜的卫生指标和感官理化指标
效果例7
将本发明乌发霜进行临床治疗，使用者均为年龄在15-70岁之间白发患者，共241人，其中15-20岁(不包含20岁)共29人，20-35岁(不包含35岁)共56人，35-55岁(不包含55岁)共80人，55-70岁共76人。每次将本发明乌发霜外部涂抹于头发，一天2次，早晚各一次，3个月为1个疗程，分别在使用1个疗程和2个疗程后统计白发转黑发的情况，具体结果如表8所示，其中白发的疗效的判定标准如下：
(1)有效：使用本品1-2个疗程后，白发转黑率达到30～50％，停止使用本品一年后转黑的白发没有出现复发；
(2)显效：使用本品1-2个疗程后，白发转黑率达到50～90％，停止使用本品一年后转黑的白发没有出现复发；
(3)治愈：使用本品1-2个疗程后，白发转黑率达到90％以上，停止使用本品一年后转黑的白发没有出现复发；
(4)无效：使用本品1-2个疗程后，白发转黑率未达到30％。
表8临床使用结果统计
从表8可以看出，本发明的乌发霜对各年龄段的白发均有明显的治疗效果，使用2个疗程后，平均治愈率为90.79％。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。