阅读说明：本技术 两性霉素b的固体口服调配物 (Solid oral formulations of amphotericin B ) 是由 彼得·海尼克 罗奇·泰伯特 艾美斯特·贝坦科尔特 于 2018-02-21 设计创作，主要内容包括：本公开描述了包括两性霉素B的固体剂型。本文还描述了治疗真菌感染和利什曼原虫(Lesishmania)感染的方法。(The present disclosure describes solid dosage forms comprising amphotericin B. Also described herein are methods of treating fungal infections and leishmania (leshmania) infections.)

两性霉素B的固体口服调配物

相关申请的交叉引用

本申请要求于2017年2月21日提交的美国临时申请第62/461,427号的优先权，所述美国临时申请以全文引用的方式并入本文中。

背景技术

两性霉素B是有效的抗真菌剂并且是治疗严重的全身性真菌感染和利什曼原虫(Lesishmania)感染的首选药物。然而，两性霉素B具有若干严重阻碍其用作治疗剂的不利特性。第一，两性霉素B不溶于水。第二，两性霉素B不能在胃肠道(GIT)中被吸收。第三，两性霉素B在胃酸环境中不稳定。这些特性中的每个特性都限制了两性霉素B的生物利用度。

为了克服导致生物利用度受限的上述问题，将两性霉素B以脂质体组合物形式或作为胶体分散体进行施用。然而，静脉内注射和输注两性霉素B具有明显的缺点。首先，静脉内注射和输注两性霉素B已经伴有相当大的副作用，如发烧、发冷、骨痛、肾毒性和血栓性静脉炎。其次，静脉内两性霉素B必须在30-40天内进行施用，并且因此这种给药方案较为昂贵并且可能会有较低的患者依从性。这些缺点在发生利什曼原虫感染的发展中国家尤其成问题。

U.S.8,592,382和U.S.8,673,866描述了口服施用的液体调配物，所述液体调配物包括两性霉素B和脂肪酸甘油酯与含聚环氧乙烷的脂肪酸酯的混合物。脂肪酸甘油酯和含聚环氧乙烷的脂肪酸酯以相对于两性霉素B明显过量的量(大于180:1)存在，这被描述为对于以口服剂型实现两性霉素B的生物利用度是至关重要的。然而，这些调配物中的大量油性组分可能会引起如恶心和腹泻等胃部不适，这限制了患者依从性(特别是因为需要延长的给药方案)。另外，给药这种液体悬浮液是很麻烦的事并且由于分配错误、溢出和/或分配装置中残留的残余调配物损失而可能会导致剂量不足或过量。因此，需要提供两性霉素B的稳定的生物可利用剂型，理想地固体剂型，所述剂型不展现出已知两性霉素B调配物的局限性。

本公开提供了克服常规两性霉素B组合物的局限性的固体剂型。

发明内容

在各个实施例中，本公开涉及包括亲脂性药物(例如，两性霉素B)的固体剂型(例如，固体或半固体剂型)。在实施例中，本文所公开的固体剂型实现了与通常用于施用两性霉素B的液体调配物相当的生物利用度。

在一些实施例中，所述固体剂型包括涂覆在固体载剂上的两性霉素B和至少一种亲脂性组分。在其它实施例中，所述固体剂型中的两性霉素B的％w/w大于所述至少一种亲脂性组分的％w/w。在另外的实施例中，两性霉素B的％w/w的范围为所述固体剂型的总重量的约20％到约30％。

在一些实施例中，两性霉素B以范围为约50mg到约200mg的量存在于所述固体剂型中。在其它实施例中，两性霉素B以约100mg的量存在。在仍其它实施例中，其中所述两性霉素B以约150mg的量存在。

在一些实施例中，所述至少一种亲脂性组分选自由以下组成的组：含聚环氧乙烷的脂肪酸酯、脂肪酸甘油酯以及其组合。

在一些实施例中，所述固体载剂为珠粒或糖类。在其它实施例中，本公开提供了一种包括本文所描述的固体剂型的胶囊。

在一些实施例中，本公开提供了一种治疗利什曼病的方法，所述方法包括施用有效量的本文所描述的固体剂型。

附图说明

图1展示了两性霉素B/Gelucire/Peceol/TPGS/粉状赋形剂调配物的制备。

图2示出了调配物1-3的两性霉素B(23％)的热重分析(TGA)曲线。

图3示出了调配物1-3的两性霉素B的溶出曲线。

图4示出了相比于调配物1、调配物2的在T＝0/初始时放大调配物1A和调配物1B中的两性霉素B的溶出曲线。

图5示出了胶囊中的固体和半固体两性霉素B调配物在水中的0.5％SDS中的溶出曲线。

图6示出了胶囊中的固体和半固体两性霉素B调配物在pH值为5.8的FeSSIF中的溶出曲线。

图7示出了包括基于脂质的调配物的100mg胶囊的溶出曲线。

图8示出了在T＝0时以及在稳定性储存条件下胶囊中的两性霉素B颗粒调配物的溶出曲线。

图9示出了在T＝0时以及在稳定储存条件下调配物5A的两性霉素B基于脂质的胶囊的溶出曲线。

图10示出了在犬模型中测量的两性霉素B的组织浓度。

图11示出了针对调配物1A(A)、调配物B(B)和常规脂质调配物(C)测量的两性霉素B的血浆浓度。

图12示出了在向犬口服给药调配物1A中的500mg两性霉素B后两性霉素B的单独血浆水平。

图13示出了在向犬口服给药调配物1A中的500mg两性霉素B后两性霉素B的平均血浆水平。

具体实施方式

本文中的所有出版物、专利和专利申请(包含任何附图和附录)出于所有目的以全文引用的方式并入，在程度上就像每个单独的出版物、专利或专利申请、附图或附录被特别地和单独地指出以出于所有目的以全文引用的方式并入相同。

术语“药学上可接受的”是指对于在动物或人类体内使用是生物学或药理学上相容的，并且可以指被联邦或州政府的管理机构批准的或者在美国药典或其它普遍认可的药典中列出的用于动物并且更特别地用于人类。

如本文所用，术语“受试者”包括任何以及所有生物体并且包含术语“患者”。“受试者”可以指人或任何其它动物。

术语“治疗”意指缓解、减轻、延迟、减少、逆转、改善或管理受试者病状的至少一种症状中的一种或多种。术语“治疗”还可以意指阻滞、延迟发作(即，在病状的临床表现之前的时期)或降低病状发生或恶化的风险中的一种或多种。

如本文所用，当位于具体成分的剂量或剂量范围之前时，术语“约”是指略高于和/或略低于所陈述的量或范围的量或范围，所述量或范围不会明显改变所陈述的量或范围的具体成分的治疗效果。

可以使用本文所公开的固体剂型来调配任何亲脂性治疗剂。例如，可以使用本文所公开的调配物和方法施用的具体的治疗剂包含四环素、多西霉素、土霉素、氯霉素、红霉素、阿昔洛韦、碘苷、曲金刚胺、咪康唑、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、益康唑、灰黄霉素、两性霉素B、特比萘芬、甲硝唑、苯甲酸甲硝唑、替硝唑、吲哚美辛、布洛芬、吡罗昔康、双氯芬酸、色甘酸二钠、***、硝酸异山梨酯、维拉帕米、硝苯地平、地尔硫卓、地高辛、***、环孢菌素、丁丙诺啡、利多卡因、***、硝西泮、氟西泮、艾司***、氟硝西泮(flunitrazepam)、***仑、阿普***、咪达***、替马西泮、氯甲西泮、溴替***、氯巴占、氯硝西泮(clonazepam)、劳拉西泮、奥沙西泮、丁螺环酮、舒马曲坦、麦角胺衍生物、桂利嗪、抗组胺、昂丹司琼、托烷司琼、格拉司琼、甲氧氯普胺、二硫龙、维生素K、紫杉醇、多西他赛、喜树碱、SN38、顺铂、卡铂、依法韦仑、沙奎那韦、利托那韦和氯法齐明。

在特定实施例中，固体剂型包括两性霉素B。在另外的实施例中，本公开的两性霉素B固体剂型可以进一步包含第二治疗剂，例如本文所公开的那些治疗剂中的任何治疗剂。

在实施例中，本文所描述的固体剂型中的两性霉素B的生物利用度至少等同于常规液体调配物，如在U.S.8,592,382和U.S.8,673,866中所公开的那些调配物，所述专利中的每个专利出于所有目的以全文引用的方式并入本文中。例如，在U.S.8,673,866中所公开的两性霉素B调配物利用亲脂性组分(油、表面活性剂、溶剂和共溶剂/表面活性剂)的各向同性混合物，所述各向同性混合物相对于两性霉素B的重量比超过约189:1，以实现合适水平的生物利用度，这产生引起胃部不适的油性调配物。令人惊讶且出乎意料的是，本发明的发明人发现，在不引起胃部不适的情况下，可以使用包括量显著减少的亲脂性组分的固体剂型实现同等水平的生物利用度。

在一些实施例中，本公开的固体剂型提供了与上文所提及的常规液体调配物相当的生物利用度，其中两性霉素B相对于调配物的一种或多种亲脂性组分的比率较大，而常规液体两性霉素调配物采用亲脂性组分与两性霉素B的较大比率，以提供充足的生物利用度。在实施例中，本公开的固体组合物的两性霉素B与亲脂性组分的重量比的范围为约100:1到约1:1，例如约100:1、约95:1、约90:1、约85:1、约80:1、约75:1、约70:1、约65:1、约60:1、约55:1、约50:1、约45:1、约40:1、约35:1、约30:1、约25:1、约20:1、约15:1、约10:1、约9.5:1、约9:1、约8.5:1、约8:1、约7.5:1、约7:1、约6.5:1、约6:1、约5.5:1、约5:1、约4.5:1、约4:1、约3.5:1、约3:1、约2.5:1、约2:1、约1.5:1或约1:1，包含其间的所有范围和子范围。

在其它实施例中，与常规液体调配物相比，本公开的固体剂型提供了与上文所提及的液体调配物相当的生物利用度，并且具有相对于两性霉素B较小过量的亲脂性组分。在实施例中，本公开的固体剂型中的一种或多种亲脂性组分(例如，一种、两种、三种等亲脂性组分)与两性霉素B的重量比的范围为约100:1到约1:1，例如约100:1、约95:1、约90:1、约85:1、约80:1、约75:1、约70:1、约65:1、约60:1、约55:1、约50:1、约45:1、约40:1、约35:1、约30:1、约25:1、约20:1、约15:1、约10:1、约9.5:1、约9:1、约8.5:1、约8:1、约7.5:1、约7:1、约6.5:1、约6:1、约5.5:1、约5:1、约4.5:1、约4:1、约3.5:1、约3:1、约2.5:1、约2:1、约1.5:1或约1:1，包含其间的所有范围和子范围。

在替代性实施例中，本公开的固体剂型包括约10-30重量％的两性毒素B和约1-10(总)重量％的一种或多种亲脂性组分。例如，两性毒素B的重量％为约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％、约26％、约27％、约28％、约29％或约30％，包含其间的所有范围和子范围；并且亲脂性组分的总重量％为约1％、约1.5％、约2％、约2.5％、约3％、约3.5％、约4％、约4.5％、约5％、约5.5％、约6％、约6.5％、约7％、约7.5％、约8％、约8.5％、约9％、约9.5％或约10％，包含其间的所有范围和子范围。

在一些实施例中，至少一种亲脂性组分与治疗剂(例如，两性霉素B)组合使用。在其它实施例中，至少一种亲脂性组分用于促进将治疗剂涂覆到固体载剂上。亲脂性组分可以包含任何疏水性材料，治疗剂(例如，两性霉素B)可以溶解或悬浮于所述疏水性材料中，并且所述疏水性材料是药学上可接受的。可以基于治疗剂和亲脂性组分或者脂质和任选的有机溶剂的亲水-亲脂平衡(HLB)来选择用于溶解治疗剂的亲脂性组分，以促进两性霉素B溶解于亲脂性组分中。用于溶解治疗剂(例如，两性霉素B)的合适的脂质材料的HLB值可以与治疗剂的HLB值相等或以其它方式足以使治疗剂溶解于适当的溶剂中。例如，适合于使两性霉素B溶解于乙醇中的亲脂性组分的HLB可以为14或更小(例如，13、12、11或10)。

本公开的组合物中的每种亲脂性组分可以选自天然来源(源于人的、源于动物的或源于植物的)或合成来源。亲脂性组分在室温下可以是液体或固体的，条件是固体可以在加热时熔融并且熔融后的亲脂性组分不会使治疗剂(例如，两性霉素B)降解或变性。在一些实施例中，至少一种亲脂性组分可以用于溶解治疗剂(例如，亲脂性药物，例如两性霉素B)。在其它实施例中，亲脂性组分可以被选择成改善治疗剂(两性霉素B)的口腔吸收。在另外的实施例中，亲脂性组分可以被选择成改善治疗剂(两性霉素B)的生物利用度。在仍其它实施例中，亲脂性组分可以包含表面活性剂。在一些这种实施例中，亲脂性组分可以是非离子表面活性剂。在甚至另外的实施例中，亲脂性组分为促进将治疗剂涂覆或粘附到固体载剂上的亲脂性粘合剂材料。

在实施例中，本文所公开的剂型可以包含一种亲脂性组分或两种或更多种亲脂性组分的混合物(例如，3种亲脂性组分、4种亲脂性组分、5种亲脂性组分等的混合物)。在需要两种亲脂性组分的实施例中，第一亲脂性组分与第二亲脂性组分的重量比的范围为约99:1到约1:99，例如约99:1、约95:5、约90:10、约85:15、约80:20、约75:25、约70:30、约65:35、约60:40、约55:45、约50:50、约45:55、约40:60、约35:65、约30:70、约25:75、约20:80、约15:85、约10:90、约5:95以及约1:99，包含其间的所有范围和子范围。

可用于本文所公开的固体剂型的亲脂性组分的非限制性实例包含药学上可接受的脂肪、脂肪物质、油、磷脂、甾醇和蜡。脂肪通常是指甘油的酯(例如，甘油的单酯、二酯或三酯和脂肪酸)。合适的脂肪和脂肪物质包含但不限于脂肪醇(如月桂醇、肉豆蔻醇、硬脂醇、鲸蜡醇或十八十六醇等)、脂肪酸和衍生物，包含但不限于脂肪酸酯、脂肪酸甘油酯(甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯)以及氢化脂肪。脂肪在正常室温下可以是固体或液体的，这取决于其结构和组成。

合适的油包含药学上可接受的动物(例如，脂肪酸酯)、矿物质(例如，石蜡油)、植物(例如，植物油)或在室温下为液体的合成烃。药学上可接受的油的实例包含但不限于：矿物油，如石蜡油；植物油，如蓖麻油、氢化植物油、芝麻油和花生油；以及动物油脂，如甘油三酯和黄油。部分氢化的植物油源自于天然产物，并且通常包括C_14-20脂肪酸(具体地，棕榈酸和硬脂酸)的甘油酯混合物。部分氢化的植物油的合适的实例包含部分氢化的棉籽油、大豆油、玉米油、花生油、棕榈油、向日葵籽油或其混合物。部分氢化的植物油的化学等价物包含合成产生的C_14-20脂肪酸甘油酯，所述甘油酯与上文所描述的天然来源的产物具有相同的特性。

合适的磷脂包含药学上可接受的植物磷脂、动物磷脂和合成磷脂。药学上可接受的磷脂的实例包含胆碱磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油，如但不限于磷脂酰胆碱、1,2-二油酰基卵磷脂、1,2-二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、1,2-二油酰磷脂酰胆碱、1,2-二油酰磷脂酰丝氨酸、1,2-二硬脂酰磷脂酰甘油、1,2-二棕榈酰磷脂酰胆碱、1,2-二硬脂酰磷脂酰胆碱、1,2-二硬脂磷脂酰甘油、蛋磷脂酰胆碱、蛋磷脂酰甘油、大豆磷脂酰胆碱、甘油磷酰胆碱、氢化大豆磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、N-(羰基-甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂磷酯酰乙醇胺钠盐、胞壁酰三肽-磷脂酰乙醇胺、1-棕榈酰基-2-亚油酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-亚油酰磷脂酰甘油、1-棕榈酰基-2-油酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰磷脂酰甘油、多烯基磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-硬脂酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-硬脂酰磷脂酰甘油、1-硬脂酰基-2-亚油酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰基-2-亚油酰磷脂酰甘油、神经鞘髓磷脂、1-硬脂酰基-2-油酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰基-2-油酰磷脂酰甘油等。

合适的蜡包含动物蜡、植物蜡、矿物蜡和石油蜡。蜡的实例包含但不限于山嵛酸甘油酯、甘油单硬脂酸酯、硬脂酸、棕榈酸、月桂酸、巴西棕榈蜡、鲸蜡醇、硬脂酸甘油酯、蜂蜡、石蜡、地蜡(ozokerite)、小烛树蜡、鲸蜡醇、硬脂醇、鲸蜡、巴西棕榈蜡、杨梅蜡、褐煤蜡、纯地蜡(ceresin)和微晶蜡。

在特定实施例中，适用于本文所公开的固体剂型的亲脂性组分包含脂肪酸甘油酯、含聚环氧乙烷的脂肪酸酯以及其组合。

在具体实施例中，本公开的两性霉素B调配物包含一种或多种脂肪酸甘油酯。如本文所用，术语“脂肪酸甘油酯”是指在甘油与包含单酯、二酯和三酯(即，甘油酯)的一种或多种脂肪酸之间形成的酯。合适的脂肪酸包含具有八(8)个到二十二(22)个碳原子的饱和与不饱和脂肪酸(即，C8-C22脂肪酸)。在某些实施例中，合适的脂肪酸包含C12-C18脂肪酸。可用于调配物中的脂肪酸甘油酯可以通过可商购获得的来源提供。脂肪酸甘油酯的代表性来源是作为(嘉法狮公司(Gattefosse)，Saint Priest Cedex，法国)可商购获得的单酯、二酯和三酯混合物(通常称为“油酸甘油酯”或“单油酸甘油酯”)。在一些实施例中，当用作调配物中的脂肪酸甘油酯的来源时，脂肪酸甘油酯包括约32重量％到约52重量％的脂肪酸甘油单酯、约30重量％到约50重量％的脂肪酸甘油二酯以及约5重量％到约20重量％的脂肪酸甘油三酯。脂肪酸甘油酯包括大于约60重量％的油酸(C18:1)甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。其它脂肪酸甘油酯包含棕榈酸(C16)酯(小于约12％)、硬脂酸(C18)酯(小于约6％)、亚油酸(C18:2)酯(小于约35％)、亚麻酸(C18:3)酯(小于约2％)、花生酸(C20)酯(小于约2％)以及二十烷酸(C20:1)酯(小于约2％)。还可以包含游离甘油(通常约1％)。在一个实施例中，脂肪酸甘油酯包括约44重量％的脂肪酸甘油单酯、约45重量％的脂肪酸甘油二酯和约9重量％的脂肪酸甘油三酯，并且脂肪酸甘油酯包括约75重量％的油酸(C18:1)甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。其它脂肪酸甘油酯包含棕榈酸(C16)酯(约4％)、硬脂酸(CI5)酯(约2％)、亚油酸(CIS:2)酯(约12％)、亚麻酸(C18:3)酯(小于约1％)、花生酸(C20)酯(小于约1％)以及二十烷酸(C20:1)酯(小于约1％)。

在实施例中，脂肪酸甘油酯可以是两性霉素B调配物中的唯一脂质。在其它实施例中，调配物可以包含混合物脂肪酸甘油酯，例如本文所公开的那些混合物脂肪酸甘油酯中的任何混合物脂肪酸甘油酯。在仍其它实施例中，一种或多种脂肪酸甘油酯可以与如本文所描述的其它亲脂性组分组合使用，如本文所描述的一种或多种含聚环氧乙烷的脂肪酸酯。

在一些实施例中，本文所描述的两性霉素B调配物包括如脂肪酸酯等至少一种含聚环氧乙烷的亲脂性组分。如本文所用，术语“含聚环氧乙烷的脂肪酸酯”是指包含通过酯键共价耦接到脂肪酸的聚环氧乙烷基团(即，聚乙二醇基团)的脂肪酸酯。含聚环氧乙烷的脂肪酸酯包含聚乙二醇的单脂肪酸酯和二脂肪酸酯。合适的含聚环氧乙烷的脂肪酸酯衍生自脂肪酸，所述脂肪酸包含具有八(8)个到二十二(22)个碳原子的饱和与不饱和脂肪酸(即，C8-C22脂肪酸的聚环氧乙烷酯)。在某些实施例中，合适的含聚环氧乙烷的脂肪酸酯衍生自脂肪酸，所述脂肪酸包含具有十二(12)个到二十八(18)个碳原子的饱和与不饱和脂肪酸(即，C12-C18脂肪酸的聚环氧乙烷酯)。代表性含聚环氧乙烷的脂肪酸酯包含饱和的C8-C22脂肪酸酯。在某些实施例中，合适的含聚环氧乙烷的脂肪酸酯包含饱和的C12-C18脂肪酸。

可以改变含聚环氧乙烷的脂肪酸酯的聚环氧乙烷基团的分子量，以优化治疗剂(例如，两性霉素B)在调配物中的溶解度。聚环氧乙烷基团的代表性平均分子量可以为约350到约2000。在一个实施例中，聚环氧乙烷基团的平均分子量为约1500。

在一些实施例中，当两性霉素B调配物包含亲脂性组分中的含聚环氧乙烷的脂肪酸时，亲脂性组分可以仅包含一种类型的含聚环氧乙烷的脂肪酸。在其它实施例中，亲脂性组分中的含聚环氧乙烷的脂肪酸可以包含含聚环氧乙烷的脂肪酸酯(聚乙二醇的单脂肪酸酯和二脂肪酸酯)的混合物。

可用于本公开的调配物的含聚环氧乙烷的脂肪酸酯可以通过可商购获得的来源提供。代表性含聚环氧乙烷的脂肪酸酯(单酯和二酯的混合物)可以以(嘉法狮公司，Saint Priest Cedex，法国)的名称商购获得。合适的含聚环氧乙烷的脂肪酸酯包含44/14、50/13、53/10和48/16。这些名称中的数字分别指这些材料的熔点和亲水/亲脂平衡(HLB)。44/14、50/13、53/10和48/16是(a)甘油(甘油酯)的单酯、二酯和三酯以及(b)聚乙二醇(polyethylene glycol)(聚乙二醇(macrogol))的单酯和二酯的混合物。GELUCIRE还可以包含游离聚乙二醇(例如，PEG 1500)。

月桂酸(C12)是44/14中甘油酯和聚乙二醇酯的主要脂肪酸组分。44/14被称为二月桂酸甘油酯(月桂酸二酯与甘油)与PEG二月桂酸酯(月桂酸二酯与聚乙二醇)的混合物，并且通常称为PEG-32甘油月桂酸(嘉法狮公司)月桂酰聚乙二醇-32甘油酯EP或月桂酰聚氧甘油酯USP/NF。44/14由氢化棕榈仁油与聚乙二醇(平均分子量1500)反应而产生。44/14包含约20％的甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯；约72％的聚乙二醇1500的单脂肪酸酯和二脂肪酸酯；以及约8％的聚乙二醇1500。

44/14包含月桂酸(C12)酯(30到50％)、肉豆蔻酸(C14)酯(5到25％)、棕榈酸(C16)酯(4到25％)、硬脂酸(C18)酯(5到35％)、辛酸(C8)酯(小于15％)和癸酸(C10)酯(小于12％)。44/14还可以包含游离甘油(通常小于约1％)。在代表性调配物中，44/14包含月桂酸(C12)酯(约47％)、肉豆蔻酸(C14)酯(约18％)、棕榈酸(C16)酯(约10％)、硬脂酸(C18)酯(约11％)、辛酸(C8)酯(约8％)和癸酸(C10)酯(约12％)。

棕榈酸(C16)(40-50％)和硬脂酸(C18)(48-58％)是50/13中甘油酯和聚乙二醇酯的主要脂肪酸组分。50/13被称为PEG-32棕榈酸硬脂酸甘油酯(嘉法狮公司)、硬脂酰基聚乙二醇甘油酯EP或硬脂酰基聚氧甘油酯USP/NF。50/13包含棕榈酸(C16)酯(40到50％)、硬脂酸(C18)酯(48到58％)(硬脂酸酯和棕榈酸酯大于约90％)、月桂酸(C12)酯(小于5％)、肉豆蔻酸(C14)酯(小于5％)、辛酸(C8)酯(小于3％)和癸酸(C10)酯(小于3％)。50/13还可以包含游离甘油(通常小于约1％)。在代表性调配物中，50/13包含棕榈酸(C16)酯(约43％)、硬脂酸(CIS)酯(约54％)(硬脂酸酯和棕榈酸酯约97％)、月桂酸(C12)酯(小于1％)、肉豆蔻酸(C14)酯(约1％)、辛酸(C8)酯(小于1％)和癸酸(C10)酯(小于1％)。硬脂酸(C18)是53/10中甘油酯和聚乙二醇酯的主要脂肪酸组分。53/10被称为PEG-32硬脂酸甘油酯(嘉法狮公司)。

在一个实施例中，含聚环氧乙烷的脂肪酸酯为月桂酸酯、棕榈酸酯或硬脂酸酯(即，聚乙二醇的单月桂酸酯和二月桂酸酯、聚乙二醇的单棕榈酸酯和二棕榈酸酯、聚乙二醇的单硬脂酸酯和二硬脂酸酯)。也可以使用这些酯的混合物。

在一些实施例中，固体剂型包括至少一种脂肪酸甘油酯和至少一种含聚环氧乙烷的脂肪酸酯。在这种实施例中，至少一种脂肪酸甘油酯与至少一种含聚环氧乙烷的脂肪酸酯的比率的范围为约90:10到约10:90，包含约90:10、约85:15、约80:20、约75:25、约70:30、约65:35、约60:40、约55:45、约50:50、约45:55、约40:60、约35:65、约30:70、约25:75、约20:80、约15:85或约10:90，包含其间的所有范围和子范围。在另外的实施例中，固体剂型包括和44/14(如本文所描述的)。在实施例中，与44/14的比率的范围为约90:10到约10:90，包含约90:10、约85:15、约80:20、约75:25、约70:30、约65:35、约60:40、约55:45、约50:50、约45:55、约40:60、约35:65、约30:70、约25:75、约20:80、约15:85或约10:90，包含其间的所有范围和子范围。

本文所公开的两性霉素B调配物任选地包含稳定剂。在一些实施例中，稳定剂为热稳定剂，例如生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(例如，TPGS或维生素E TPGS)。在一些实施例中，稳定剂为抗氧化剂，如丁基化羟基苯甲醚(BHA)或丁基化羟基甲苯(BHT)。这种热稳定剂和/或抗氧化剂增强了调配物的热稳定性，这进而可以增加调配物的保质期，这对于世界上的热带地区尤为重要，这些地方通常长期暴露于高温下并且冷藏药用储存较为困难。

在结构上，生育酚聚乙二醇琥珀酸酯具有通过琥珀酸酯连接子共价耦接到生育酚(例如，α-生育酚或维生素E)的聚乙二醇(PEG)。因为PEG为聚合物，所以可以使用各种聚合物分子量来制备TPGS。在一个实施例中，TPGS为生育酚聚乙二醇琥珀酸酯1000，其中PEG的平均分子量为1000。一种合适的生育酚聚乙二醇琥珀酸酯是可从伊士曼公司(Eastman)商购获得的维生素E TPGS。

在一些实施例中，本公开的固体剂型的两性霉素B的剂量范围为约1mg到约500mg，包含约1mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg或约500mg，包含其间的所有范围和子范围。

在一些实施例中，固体剂型中两性霉素B的％w/w为至少约1％、或至少约5％、或至少约10％、或至少约15％、或约20％、或至少约25％、或至少约30％、或至少约35％、或至少约40％、或至少约45％、或至少约50％、或至少约55％、或至少约60％、或至少约65％或至少约70％。在一些实施例中，固体剂型中两性霉素B的％w/w的范围为约1％到约70％、或约5％到约70％、或约5％到约60％、或约5％到约50％、或约5％到约40％、或约10％到约40％、或约15％到约40％、或约20％到约40％、或约20％到约40％、或约20％到约35％或约20％到约30％。

本公开的固体剂型可以通过任何合适的方法来制备，所述方法包含造粒具有赋形剂(例如，本领域已知的和本文所描述的填充剂、助流剂、润滑剂等)的治疗剂(例如，两性霉素B)、挤出具有赋形剂的治疗剂、直接压制具有赋形剂的治疗剂以形成片剂等。

在特定实施例中，本公开的固体剂型可以通过涂覆活性剂来制备，例如将两性霉素B涂覆在固体载剂上。固体载剂可以是任何可以涂覆含药物的组合物并且适合于人类食用的材料。可以使用任何常规涂覆过程。例如，治疗剂(例如，两性霉素B)可以与任选的粘合剂或可替代地与本文所描述的亲脂性组分中一种或多种亲脂性组分一起溶解或悬浮在合适的溶剂(例如，乙醇)中，并且可以通过本领域已知的方法(例如，流化床涂覆方法或锅涂覆方法)沉积在固体载剂上。可以例如通过在涂覆过程期间(例如，在流化床涂覆期间)和/或在随后的干燥步骤中进行干燥来除去溶剂或原位除去所述溶剂。

在一些实施例中，固体载剂可以是惰性珠粒或惰性颗粒。在其它实施例中，固体载剂为核蕊(non-pareil seed)、酸性缓冲晶体、碱性缓冲晶体或经过包封的缓冲晶体。

在一些实施例中，固体载剂可以是糖球、纤维球、乳糖球、乳糖-微晶(MCC)球、甘露醇-MCC球或二氧化硅球。

在其它实施例中，固体载剂可以是糖类、糖醇或其组合。合适的糖类包含乳糖、蔗糖、麦芽糖以及其组合。合适的糖醇包含甘露醇、山梨醇、木糖醇、麦芽糖醇、阿糖醇、核糖醇、卫茅醇、艾杜糖醇、异麦芽糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇以及其组合。

在实施例中，固体载剂可以通过将上述物质中的任一种物质与填充剂进行组合而形成。可以用于形成固体载剂的合适填充剂的实例包含乳糖、微晶纤维素、硅化微晶纤维素、甘露醇-微晶纤维素和二氧化硅。

在其它实施例中，本文所公开的剂型不包含固体载剂。

在实施例中，本文所公开的固体剂型可以包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂包含填充剂、稀释剂、助流剂、崩解剂、粘合剂以及润滑剂。其它药学上可接受的赋形剂包含酸味剂、碱性剂、防腐剂、抗氧化剂、缓冲剂、螯合剂、着色剂、络合剂、乳化剂和/或增溶剂、调味剂、香味剂、保湿剂、甜味剂以及润湿剂。

合适的填充剂和/或粘合剂的实例包含乳糖(例如，喷雾干燥的乳糖、α-乳糖、β-乳糖、各个等级的或)、微晶纤维素(各个等级的或)、羟丙基纤维素、L-羟丙基纤维素(低取代的)、低分子量羟丙基甲基纤维素(HPMC)(例如，来自陶氏化学公司(Dow Chemical)的Methocel E、F和K；来自信越化学有限公司(Shin-Etsu，Ltd)的Metolose SH)、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基羟乙基纤维素和其它纤维素衍生物、蔗糖、琼脂糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、糊精、麦芽糖糊精、淀粉或改性淀粉(包含马铃薯淀粉、玉米淀粉和大米淀粉)、磷酸钙(例如，碱性磷酸钙、磷酸氢钙、磷酸二钙水合物)、硫酸钙、碳酸钙、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇。

药学上可接受的稀释剂的实例包含碳酸钙、磷酸氢钙、磷酸三钙、硫酸钙、微晶纤维素、粉状纤维素、葡聚糖、糊精、葡萄糖、果糖、高岭土、乳糖、甘露醇、山梨醇、淀粉、预胶凝淀粉、蔗糖和糖。

药学上可接受的崩解剂包含海藻酸、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠(例如，和)、胶体二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮(例如，和)、瓜尔胶、硅酸铝镁、甲基纤维素、微晶纤维素、波拉克林钾、粉状纤维素、预胶凝淀粉、海藻酸钠、羟基乙酸淀粉钠(例如，Explotab)、马铃薯淀粉和淀粉。

药学上可接受的助流剂的实例包含胶体二氧化硅、三硅酸镁、粉状纤维素、淀粉、滑石和磷酸三钙。

药学上可接受的润滑剂包含硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙或其它金属硬脂酸盐(例如，硬脂酸锌)、甘油单硬脂酸酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、蜡和甘油酯、氢化蓖麻油、氢化植物油、轻质矿物油、聚乙二醇、山嵛酸甘油酯、胶体氧化硅、氢化植物油、玉米淀粉、月桂基硫酸钠、硬脂酰醇富马酸钠、聚乙二醇、烷基硫酸酯、苯甲酸钠、滑石和乙酸钠。

调味剂和增味剂使剂型对患者更加可口。可以包含在本发明的组合物和/或组合中的药物产品的常用调味剂和增味剂包含麦芽酚、香草醛、乙基香草醛、薄荷醇、柠檬酸、富马酸、乙基麦芽酚和酒石酸。

固体组合物也可以使用任何药学上可接受的着色剂来染色，以改进其外观和/或促进患者对产品和单位剂量水平的识别。

本文所公开的组合物可以调配为固体剂型。合适的固体剂型包含片剂和胶囊，如明胶胶囊或本领域已知的合适的合成胶囊，如HPMC(羟丙基甲基纤维素)胶囊。

在实施例中，本文所描述的固体剂型可以通过以下制备：

(a)将至少一种脂质和治疗剂溶解在溶剂中，由此形成包括治疗剂的液体混合物；

(b)将包括治疗剂的混合物涂覆在固体载剂上；以及

(c)除去溶剂；

由此形成药物涂覆的颗粒。

亲脂性组分和治疗剂可以溶解于的任何溶剂可以用于制备本文所描述的固体剂型。合适的溶剂的实例包含亲脂性溶剂，如亲脂性有机溶剂。溶剂的非限制性实例包含醇(例如，乙醇、丙醇、异丙醇等)、酮(例如，丙酮等)、二甲基亚砜、二氯甲烷等。

可以按照需要来研磨药物涂覆的颗粒并且使其通过一个或多个网筛以产生具有所期望的尺寸范围的颗粒。在各个实施例中，药物涂覆的颗粒的平均粒径的范围可以为10-2000μm，例如100-1000μm或500-1000μm。

在实施例中，可以将药物涂覆的颗粒填充到胶囊中或者任选地与如本文所描述的各种赋形剂组合压制成片剂。

在其它实施例中，治疗剂(例如，两性霉素B)与合适量的室温固体亲脂性组分(如本文所描述的)的熔体可以混合在一起(例如，使用方法，而不是U.S.8,592,382和U.S.8,673,866中所公开的组合物)，任选地与合适量的溶剂(如乙醇)混合在一起，直到形成均匀的混合物或溶液。然后，允许对所得混合物或溶液进行冷却，由此形成半固体组合物。然后，可以将半固体组合物填充到明胶胶囊中，由此提供固体剂型。

在实施例中，本文所公开的两性霉素B剂型与常规液体调配物具有生物等效性。也就是说，固体剂型具有平均最大血浆浓度(C_max)、平均AUC和平均T_max，当施用于人或动物(如大鼠模型或比格犬模型)时，所述平均C_max、所述平均AUC和所述平均T_max处于常规液体组合物的平均C_max、平均AUC和平均T_max中的每一个的约80％到约125％内。如本文所用，C_max、AUC和T_max是指针对受试者群体所测量的此类值的平均值。

当以4.5mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒(Sprague Dawley)大鼠时，常规液体剂型提供的两性霉素B的C_max为71±10ng/mL，或者当以10mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，所述常规液体剂型提供的两性霉素B的C_max为96±15ng/mL。

在一些实施例中，当以4.5mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的C_max处于61ng/mL到81ng/mL的约80％到约125％的范围内(即，约71±10ng/mL)，例如约45ng/mL、约50ng/mL、约55ng/mL、约60ng/mL、约65ng/mL、约70ng/mL、约75ng/mL、约80ng/mL、约85ng/mL、约90ng/mL、约95ng/mL、约100ng/mL、约105ng/mL，包含其间的所有值和子范围。

在其它实施例中，当以10mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的C_max处于81ng/mL到111ng/mL的约80％到约125％的范围内(即，96±15ng/mL)，例如约60ng/mL、约65ng/mL、约70ng/mL、约75ng/mL、约80ng/mL、约85ng/mL、约90ng/mL、约95ng/mL、约100ng/mL、约105ng/mL、约110ng/mL、约115ng/mL、约120ng/mL、约125ng/mL、约130ng/mL、约135ng/mL、约140ng/mL、约145ng/mL，包含其间的所有值和子范围。

当以4.5mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，常规液体剂型提供的两性霉素B的AUC(_0-24)为991±170h·ng/mL，或者当以10mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，所述常规液体剂型提供的两性霉素B的AUC(_0-24)为1534±229h·ng/mL。

在一些实施例中，当以4.5mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的AUC(_0-24)处于约821h·ng/mL到约1161h·ng/mL的约80％到约125％的范围内(即，991±170h·ng/mL)，例如约600h·ng/mL、约650h·ng/mL、约700h·ng/mL、约750h·ng/mL、约800h·ng/mL、约850h·ng/mL、约900h·ng/mL、约950h·ng/mL、约1000h·ng/mL、约1050h·ng/mL、约1100h·ng/mL、约1150h·ng/mL、约1200h·ng/mL、约1250h·ng/mL、约1300h·ng/mL、约1350h·ng/mL、约1400h·ng/mL、约1450h·ng/mL、约1500h·ng/mL或约1550h·ng/mL，包含其间的所有值和子范围。

在其它实施例中，当以10mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的AUC(_0-24)处于约1305h·ng/mL到约1763h·ng/mL的约80％到约125％的范围内(即，1534±229h·ng/mL)，例如约1000h·ng/mL、约1050h·ng/mL、约1100h·ng/mL、约1150h·ng/mL、约1200h·ng/mL、约1250h·ng/mL、约1300h·ng/mL、约1350h·ng/mL、约1400h·ng/mL、约1450h·ng/mL、约1500h·ng/mL、约1550h·ng/mL、约1600h·ng/mL、约1650h·ng/mL、约1700h·ng/mL、约1750h·ng/mL、约1800h·ng/mL、约1850h·ng/mL、约1900h·ng/mL、约1950h·ng/mL、约2000h·ng/mL、约2050h·ng/mL、约2100h·ng/mL、约2150h·ng/mL、约2200h·ng/mL或约2250h·ng/mL，包含其间的所有值和子范围。

当以10mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，常规液体剂型提供的两性霉素B的AUC(_0-48)为2695±433h·ng/mL。

在实施例中，当以10mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，本文所公开的两性霉素B固体剂型提供的两性霉素B的AUC(_0-48)处于约2262h·ng/mL到约3128h·ng/mL的约80％到约125％的范围内，例如约1750h·ng/mL、约1800h·ng/mL、约1850h·ng/mL、约1900h·ng/mL、约1950h·ng/mL、约2000h·ng/mL、约2050h·ng/mL、约2100h·ng/mL、约2150h·ng/mL、约2200h·ng/mL、约2250h·ng/mL、约2300h·ng/mL、约2350h·ng/mL、约2400h·ng/mL、约2450h·ng/mL、约2500h·ng/mL、约2550h·ng/mL、约2600h·ng/mL、约2650h·ng/mL、约2700h·ng/mL、约2750h·ng/mL、约2800h·ng/mL、约2850h·ng/mL、约2900h·ng/mL、约2950h·ng/mL、约3000h·ng/mL、约3050h·ng/mL、约3100h·ng/mL、约3150h·ng/mL、约3200h·ng/mL、约3250h·ng/mL、约3300h·ng/mL、约3350h·ng/mL、约3400h·ng/mL、约3450h·ng/mL、约3500h·ng/mL、约3550h·ng/mL、约3600h·ng/mL、约3650h·ng/mL、约3700h·ng/mL、约3750h·ng/mL、约3800h·ng/mL、约3850h·ng/mL、约3900h·ng/mL、约4000h·ng/mL，包含其间的所有值和子范围。

当以4.5mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，常规液体剂型提供的两性霉素B的T_max为6.3±0.9h，或者当以10mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，所述常规液体剂型提供的两性霉素B的T_max为12.5±2.7h。

在实施例中，当以4.5mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，本文所公开的两性霉素B固体剂型提供的两性霉素B的T_max处于约5.4h到约7.2h的约80％到约125％的范围内，例如约4.1h、约4.2h、约4.3h、约4.4h、约4.5h、约4.6h、约4.7h、约4.8h、约4.9h、约5.0h、约5.1h、约5.2h、约5.3h、约5.4h、约5.5h、约5.6h、约5.7h、约5.8h、约5.9h、约6.0h、约6.1h、约6.2h、约6.3h、约6.4h、约6.5h、约6.6h、约6.7h、约6.8h、约6.9h或约7.0h、约7.1h、约7.2h、约7.3h、约7.4h、约7.5h、约7.6h、约7.7h、约7.8h、约7.9h、约8.0h、约8.1h、约8.2h、约8.3h、约8.4h、约8.5h、约8.6h、约8.7h、约8.8h、约8.9h、约9h、约9.1h、约9.2h、约9.3h、约9.4h或约9.5h，包含其间的所有值和子范围。

在实施例中，当以10mg/kg的剂量口服施用于雄性斯普拉格-杜勒大鼠时，本文所公开的两性霉素B固体剂型提供的两性霉素B的T_max处于约9.8h到约15.2h的约80％到约125％的范围内，例如约7.0h、约7.1h、约7.2h、约7.3h、约7.4h、约7.5h、约7.6h、约7.7h、约7.8h、约7.9h、约8.0h、约8.1h、约8.2h、约8.3h、约8.4h、约8.5h、约8.6h、约8.7h、约8.8h、约8.9h、约9h、约9.1h、约9.2h、约9.3h、约9.4h、约9.5h、约9.6h、约9.7h、约9.8h、约9.9h、约10.0h、约10.1h、约10.2h、约10.3h、约10.4h、约10.5h、约10.6h、约10.7h、约10.8h、约10.9h、约11.0h、约11.1h、约11.2h、约11.3h、约11.4h、约11.5h、约11.6h、约11.7h、约11.8h、约11.9h、约12.0h、约12.1h、约12.2h、约12.3h、约12.4h、约12.5h、约12.6h、约12.7h、约12.8h、约12.9h、约13.0h、约13.1h、约13.2h、约13.3h、约13.4h、约13.5h、约13.6h、约13.7h、约13.8h、约13.9h、约14.0h、约14.1h、约14.2h、约14.3h、约14.4h、约14.5h、约14.6h、约14.7h、约14.8h、约14.9h、约15.0h、约15.1h、约15.2h、约15.3h、约15.4h、约15.5h、约15.6h、约15.7h、约15.8h、约15.9h、约16.0h、约16.1h、约16.2h、约16.3h、约16.4h、约16.5h、约16.6h、约16.7h、约16.8h、约16.9h、约17.0h、约17.1h、约17.2h、约17.3h、约17.4h、约17.5h、约17.6h、约17.7h、约17.8h、约17.9h、约18.0h、约18.1h、约18.2h、约18.3h、约18.4h、约18.5h、约18.6h、约18.7h、约18.8h、约18.9h、约19.0h、约19.1h、约19.2h、约19.3h、约19.4h、约19.5h，包含其间的所有值和子范围。

本文所描述的固体剂型已经施用于比格犬，并且在施用后测量平均血浆浓度。在实施例中，在将100mg的剂量口服施用于比格犬后1小时与24小时之间，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的血浆浓度处于约7.61ng/mL到约52.21ng/mL的约80％到约125％的范围内，例如约10ng/mL、约15ng/mL、约20ng/mL、约25ng/mL、约30ng/mL、约35ng/mL、约40ng/mL、约45ng/mL、约50ng/mL、约55ng/mL，包含其间的所有值和子范围。

在一些实施例中，在将100mg的剂量口服施用于比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的C_max(在比格犬中)的范围为约39.3ng/mL到约53.5ng/mL(即，46.4±53.5ng/mL)的约80％到约125％，例如约25ng/mL、约30ng/mL、约35ng/mL、约40ng/mL、约45ng/mL、约50ng/mL、约55ng/mL、约60ng/mL、约65ng/mL、约70ng/mL，包含其间的所有值和子范围。在其它实施例中，在将100mg的剂量口服施用于比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的C_max(在比格犬中)的范围为约45.3ng/mL到约59.7ng/mL(即，52.5±7.2ng/mL)的约80％到约125％，例如约30ng/mL、约35ng/mL、约40ng/mL、约45ng/mL、约50ng/mL、约55ng/mL、约60ng/mL、约65ng/mL、约70ng/mL、约75ng/mL、约80ng/mL，包含其间的所有值和子范围。

在其它实施例中，在将100mg的剂量口服施用于比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的T_max(在比格犬中)的范围为约9.5h到约18.5h(即，14.0±4.5h)的约80％到约125％，例如约7.5h、约8.0h、约9.0h、约9.5h、约10h、约10.5h、约11h、约11.5h、约12h、约12.5h、约13h、约13.5h、约14h、约14.5h、约15h、约15.5h、约16h、约16.5h、约17h、约17.5h、约18h、约18.5h、约19h、约19.5h、约20h、约20.5h、约21h、约21.5h、约22h、约22.5h、约23h、约23.5h、约24h、约24.5h、约25h、约25.5h，包含其间的所有值和子范围。

在其它实施例中，在将100mg的剂量口服施用于比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的T_max(在比格犬中)的范围为约4.7h到约11.3h(即，8.0±3.3h)的约80％到约125％，例如约3.5h、约3.6h、约3.7h、约3.8h、约3.9h、约4.0h、约4.1h、约4.2h、约4.3h、约4.4h、约4.5h、约4.6h、约4.8h、约4.9h、约5.0h、约5.1h、约5.2h、约5.3h、约5.4h、约5.5h、约5.6h、约5.7h、约5.8h、约5.9h、约6.0h、约6.1h、约6.2h、约6.3h、约6.4h、约6.5h、约6.6h、约6.7h、约6.8h、约6.9h、约7.0h、约7.1h、约7.2h、约7.3h、约7.4h、约7.5h、约7.6h、约7.7h、约7.8h、约7.9h、约8.0h、约8.1h、约8.2h、约8.3h、约8.4h、约8.5h、约8.6h、约8.7h、约8.8h、约8.9h、约9h、约9.1h、约9.2h、约9.3h、约9.4h、约9.5h、约9.6h、约9.7h、约9.8h、约9.9h、约10.0h、约10.1h、约10.2h、约10.3h、约10.4h、约10.5h、约10.6h、约10.7h、约10.8h、约10.9h、约11.0h、约11.1h、约11.2h、约11.3h、约11.4h、约11.5h、约11.6h、约11.7h、约11.8h、约11.9h、约12.0h、约12.1h、约12.2h、约12.3h、约12.4h、约12.5h、约12.6h、约12.7h、约12.8h、约12.9h、约13.0h、约13.1h、约13.2h、约13.3h、约13.4h、约13.5h、约13.6h、约13.7h、约13.8h、约13.9h、约14.0h、约14.1h、约14.2h、约14.3h、约14.4h、约14.5h，包含其间的所有值和子范围。

在一些实施例中，在将100mg的剂量口服施用于比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的AUC_0-Tlast(ng*hr/mL)(在比格犬中)的范围为约1409ng*hr/mL到约1991ng*hr/mL(即，1700±291ng*hr/mL)的约80％到约125％，例如约1100ng*hr/mL、约1200ng*hr/mL、约1300ng*hr/mL、约1400ng*hr/mL、约1500ng*hr/mL、约1600ng*hr/mL、约1700ng*hr/mL、约1800ng*hr/mL、约1900ng*hr/mL、约2000ng*hr/mL、约2100ng*hr/mL、约2200ng*hr/mL、约2300ng*hr/mL、约2400ng*hr/mL、约2500ng*hr/mL，包含其间的所有值和子范围。在其它实施例中，在将100mg的剂量口服施用于比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的AUC_0-Tlast(ng*hr/mL)(在比格犬中)的范围为约1777ng*hr/mL到约2515ng*hr/mL(即，2146±369ng*hr/mL)的约80％到约125％，例如约1400ng*hr/mL、约1500ng*hr/mL、约1600ng*hr/mL、约1700ng*hr/mL、约1800ng*hr/mL、约1900ng*hr/mL、约2000ng*hr/mL、约2100ng*hr/mL、约2200ng*hr/mL、约2300ng*hr/mL、约2400ng*hr/mL、约2500ng*hr/mL、约2600ng*hr/mL、约2700ng*hr/mL、约2800ng*hr/mL、约2900ng*hr/mL、约3000ng*hr/mL、约3100ng*hr/mL、约3200ng*hr/mL，包含其间的所有值和子范围。

在一些实施例中，在将100mg的剂量口服施用于比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的MRT_Last(在比格犬中)的范围为约26.1hr到约27.3hr(即，26.7±0.6hr)的约80％到约125％，例如约20hr、约20.5hr、约21hr、约21.5hr、约22hr、约22.5hr、约23hr、约23.5hr、约24hr、约24.5hr、约25hr、约25.5hr、约26hr、约26.5hr、约27hr、约27.5hr、约28hr、约28.5hr、约29hr、约29.5hr、约30hr、约31.5hr、约32hr、约32.5hr、约33hr、约33.5hr、约34hr、约34.5hr以及约35hr，包含其间的所有值和子范围。在一些实施例中，在将100mg的剂量口服施用于比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的MRT_Last(在比格犬中)的范围为约25.5hr到约29.1hr(即，27.3±1.8hr)的约80％到约125％，例如约20hr、约20.5hr、约21hr、约21.5hr、约22hr、约22.5hr、约23hr、约23.5hr、约24hr、约24.5hr、约25hr、约25.5hr、约26hr、约26.5hr、约27hr、约27.5hr、约28hr、约28.5hr、约29hr、约29.5hr、约30hr、约31.5hr、约32hr、约32.5hr、约33hr、约33.5hr、约34hr、约34.5hr、约35hr、约35.5hr、约36hr、约36.5hr以及约37hr，包含其间的所有值和子范围。

在一些实施例中，在进食和禁食状态之间，AUC、C_max、T_max和/或MRT_Last的变化不超过20％。也就是说，在一些实施例中，进食和禁食状态下AUC_0-Tlast(ng*hr/mL)的百分比差异小于或等于20％，例如小于或等于约20％、约15％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0.5％以及约0.1％，包含其间的所有值。在一些实施例中，进食和禁食状态下C_max(ng*hr/mL)的百分比差异小于或等于20％，例如小于或等于约20％、约15％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0.5％以及约0.1％，包含其间的所有值。

在一些实施例中，在将500mg的剂量口服施用于禁食状态下的比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的C_max(在比格犬中)的范围为约40.63ng/mL到约82.57ng/mL(即，61.6±20.97ng/mL)的约80％到约125％，例如约30ng/mL、约35ng/mL、约40ng/mL、约45ng/mL、约50ng/mL、约55ng/mL、约60ng/mL、约65ng/mL、约70ng/mL、约75ng/mL、约80ng/mL、约85ng/mL、约90ng/mL、约95ng/mL、约100ng/mL以及约105ng/mL，包含其间的所有值和子范围。

在一些实施例中，在将500mg的剂量口服施用于进食状态下的比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的C_max(在比格犬中)的范围为约44ng/mL到约88.75ng/mL(即，66.5±22.5ng/mL)的约80％到约125％，例如约30ng/mL、约35ng/mL、约40ng/mL、约45ng/mL、约50ng/mL、约55ng/mL、约60ng/mL、约65ng/mL、约70ng/mL、约75ng/mL、约80ng/mL、约85ng/mL、约90ng/mL、约95ng/mL、约100ng/mL以及约105ng/mL，包含其间的所有值和子范围。

在一些实施例中，在将500mg的剂量口服施用于禁食状态下的比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的AUC_0-Tlast(ng*hr/mL)(在比格犬中)的范围为约568ng*hr/mL到约1682ng*hr/mL(即，1125±557ng*hr/mL)的约80％到约125％，例如约400ng*hr/mL、约500ng*hr/mL、约600ng*hr/mL、约700ng*hr/mL、约800ng*hr/mL、约900ng*hr/mL、约1000ng*hr/mL、约1100ng*hr/mL、约1200ng*hr/mL、约1300ng*hr/mL、约1400ng*hr/mL、约1500ng*hr/mL、约1600ng*hr/mL、约1700ng*hr/mL、约1800ng*hr/mL、约1900ng*hr/mL、约2000ng*hr/mL、约2100ng*hr/mL、约2200ng*hr/mL、约2300ng*hr/mL、约2400ng*hr/mL、约2500ng*hr/mL，包含其间的所有值和子范围。

在一些实施例中，在将500mg的剂量口服施用于进食状态下的比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的AUC_0-Tlast(ng*hr/mL)(在比格犬中)范围为约657ng*hr/mL到约1791ng*hr/mL(即，1224±567ng/mL)的约80％到约125％，例如约500ng*hr/mL、约600ng*hr/mL、约700ng*hr/mL、约800ng*hr/mL、约900ng*hr/mL、约1000ng*hr/mL、约1100ng*hr/mL、约1200ng*hr/mL、约1300ng*hr/mL、约1400ng*hr/mL、约1500ng*hr/mL、约1600ng*hr/mL、约1700ng*hr/mL、约1800ng*hr/mL、约1900ng*hr/mL、约2000ng*hr/mL、约2100ng*hr/mL、约2200ng*hr/mL、约2300ng*hr/mL、约2400ng*hr/mL、约2500ng*hr/mL，包含其间的所有值和子范围。

在一些实施例中，在将500mg的剂量口服施用于进食或禁食状态下的比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的T_max(在比格犬中)的范围为约5h到约13h(即，9±4h)的约80％到约125％，例如约3.9h、约4.0h、约4.1h、约4.2h、约4.3h、约4.4h、约4.5h、约4.6h、约4.8h、约4.9h、约5.0h、约5.1h、约5.2h、约5.3h、约5.4h、约5.5h、约5.6h、约5.7h、约5.8h、约5.9h、约6.0h、约6.1h、约6.2h、约6.3h、约6.4h、约6.5h、约6.6h、约6.7h、约6.8h、约6.9h、约7.0h、约7.1h、约7.2h、约7.3h、约7.4h、约7.5h、约7.6h、约7.7h、约7.8h、约7.9h、约8.0h、约8.1h、约8.2h、约8.3h、约8.4h、约8.5h、约8.6h、约8.7h、约8.8h、约8.9h、约9h、约9.1h、约9.2h、约9.3h、约9.4h、约9.5h、约9.6h、约9.7h、约9.8h、约9.9h、约10.0h、约10.1h、约10.2h、约10.3h、约10.4h、约10.5h、约10.6h、约10.7h、约10.8h、约10.9h、约11.0h、约11.1h、约11.2h、约11.3h、约11.4h、约11.5h、约11.6h、约11.7h、约11.8h、约11.9h、约12.0h、约12.1h、约12.2h、约12.3h、约12.4h、约12.5h、约12.6h、约12.7h、约12.8h、约12.9h、约13.0h、约13.1h、约13.2h、约13.3h、约13.4h、约13.5h、约13.6h、约13.7h、约13.8h、约13.9h、约14.0h、约14.1h、约14.2h、约14.3h、约14.4h、约14.5h、约14.6h、约14.7h、约14.8h、约14.9h、约15.0h、约15.1h、约15.2h、约15.3h、约15.4h、约15.5h、约15.6h、约15.7h、约15.8h、约15.9h、约16.0h、约16.1h、约16.2h以及约16.3h，包含其间的所有值和子范围。

在一些实施例中，在将500mg的剂量口服施用于禁食状态下的比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的MRT_Last(在比格犬中)的范围为约10.29hr到约14.69hr(即，12.49±2.2hr)的约80％到约125％，例如约8.0h、约8.1h、约8.2h、约8.3h、约8.4h、约8.5h、约8.6h、约8.7h、约8.8h、约8.9h、约9h、约9.1h、约9.2h、约9.3h、约9.4h、约9.5h、约9.6h、约9.7h、约9.8h、约9.9h、约10.0h、约10.1h、约10.2h、约10.3h、约10.4h、约10.5h、约10.6h、约10.7h、约10.8h、约10.9h、约11.0h、约11.1h、约11.2h、约11.3h、约11.4h、约11.5h、约11.6h、约11.7h、约11.8h、约11.9h、约12.0h、约12.1h、约12.2h、约12.3h、约12.4h、约12.5h、约12.6h、约12.7h、约12.8h、约12.9h、约13.0h、约13.1h、约13.2h、约13.3h、约13.4h、约13.5h、约13.6h、约13.7h、约13.8h、约13.9h、约14.0h、约14.1h、约14.2h、约14.3h、约14.4h、约14.5h、约14.6h、约14.7h、约14.8h、约14.9h、约15.0h、约15.1h、约15.2h、约15.3h、约15.4h、约15.5h、约15.6h、约15.7h、约15.8h、约15.9h、约16.0h、约16.1h、约16.2h、约16.3h、约16.4h、约16.5h、约16.6h、约16.7h、约16.8h、约16.9h、约17h、约17.1h、约17.2h、约17.3h、约17.4h、约17.5h、约17.6h、约17.7h、约17.8h、约17.9h、约18.0h、约18.1h、约18.2h、约18.3h、约18.4h以及约18.5h，包含其间的所有值和子范围。

在一些实施例中，在将500mg的剂量口服施用于进食状态下的比格犬后，本文所描述的固体剂型提供的两性霉素B的MRT_Last(在比格犬中)的范围为约10.29hr到约14.69hr(即，12.06±1.4hr)的约80％到约125％，例如约8.0h、约8.1h、约8.2h、约8.3h、约8.4h、约8.5h、约8.6h、约8.7h、约8.8h、约8.9h、约9h、约9.1h、约9.2h、约9.3h、约9.4h、约9.5h、约9.6h、约9.7h、约9.8h、约9.9h、约10.0h、约10.1h、约10.2h、约10.3h、约10.4h、约10.5h、约10.6h、约10.7h、约10.8h、约10.9h、约11.0h、约11.1h、约11.2h、约11.3h、约11.4h、约11.5h、约11.6h、约11.7h、约11.8h、约11.9h、约12.0h、约12.1h、约12.2h、约12.3h、约12.4h、约12.5h、约12.6h、约12.7h、约12.8h、约12.9h、约13.0h、约13.1h、约13.2h、约13.3h、约13.4h、约13.5h、约13.6h、约13.7h、约13.8h、约13.9h、约14.0h、约14.1h、约14.2h、约14.3h、约14.4h、约14.5h、约14.6h、约14.7h、约14.8h、约14.9h、约15.0h、约15.1h、约15.2h、约15.3h、约15.4h、约15.5h、约15.6h、约15.7h、约15.8h、约15.9h、约16.0h、约16.1h、约16.2h、约16.3h、约16.4h、约16.5h、约16.6h、约16.7h、约16.8h、约16.9h、约17h、约17.1h、约17.2h、约17.3h、约17.4h、约17.5h、约17.6h、约17.7h、约17.8h、约17.9h、约18.0h、约18.1h、约18.2h、约18.3h、约18.4h以及约18.5h，包含其间的所有值和子范围。

可以根据任何合适的给药方案来施用所描述的两性霉素B剂型，所述给药方案足以治疗有需要的受试者的病状。在特定实施例中，向受试者施用如本文所描述的两性霉素B调配物一次或多次、两次或更多次、三次或更多次、四次或更多次、五次或更多次、或六次或更多次，其中每次提供之间存在持续时间。在一些实施例中，可能需要同时施用多种剂型以提供所需剂量。在特定实施例中，向受试者(例如，人)提供两性霉素B调配物一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次或十次，其中每次提供之间存在持续时间。在特定实施例中，每天向受试者提供两性霉素B调配物约一次持续约四天、每天约一次持续约五天、每天约一次持续约六天或每天约一次持续约一周。在特定实施例中，一天向受试者提供两性霉素B调配物一次、一天两次、一天三次或一天四次，例如持续本文所描述的持续时间中的任一持续时间。在特定实施例中，一天向受试者提供两性霉素B调配物约一次、一天两次、一天三次、一天四次或每两天一次持续约三天、四天、五天、六天、一周、两周、三周、一个月或两个月或更长时间。在特定实施例中，所述天数和/或周数是连续的。在一些实施例中，调配本文所描述的两性霉素B剂型以每日施用一次。

在一些实施例中，两性霉素B的每日总剂量的范围为约50mg/天到约1500mg/天，例如约100mg/天、150mg/天、200mg/天、250mg/天、200mg/天、250mg/天、300mg/天、350mg/天、400mg/天、450mg/天、500mg/天、550mg/天、600mg/天、650mg/天、700mg/天、750mg/天、800mg/天、850mg/天、900mg/天、950mg/天、1000mg/天、1050mg/天、1100mg/天、1150mg/天、1200mg/天、1250mg/天、1200mg/天、1250mg/天、1300mg/天、1350mg/天、1400mg/天、1450mg/天或约1500mg/天，包含其中的所有值和子范围。

在一些实施例中，每天多次向受试者提供本文所公开的两性霉素B调配物。在一些这种实施例中，两性霉素B以单剂量存在的量的范围为约50mg/天到约1500mg/天，例如约100mg/天、150mg/天、200mg/天、250mg/天、200mg/天、250mg/天、300mg/天、350mg/天、400mg/天、450mg/天、500mg/天、550mg/天、600mg/天、650mg/天、700mg/天、750mg/天、800mg/天、850mg/天、900mg/天、950mg/天、1000mg/天、1050mg/天、1100mg/天、1150mg/天、1200mg/天、1250mg/天、1200mg/天、1250mg/天、1300mg/天、1350mg/天、1400mg/天、1450mg/天或约1500mg/天，包含其中的所有值和子范围。

在一些实施例中，本文所公开的单剂量的两性霉素B调配物包含多剂型(例如，多个胶囊)。例如，在一些实施例中，单剂量的两性霉素B调配物可以包含至少约1种剂型、至少约2种剂型、至少约3种剂型、至少约4种剂型、至少约5种剂型、至少约6种剂型、至少约7种剂型、至少约8种剂型、至少约9种剂型或至少约10种剂型等。在其它实施例中，单剂量的两性霉素B调配物包含约1种剂型到约10种剂型，例如约2种剂型、约3种剂型、约4种剂型、约5种剂型、约6种剂型、约7种剂型、约8种剂型或约9种剂型，包含其中的所有值和子范围。

可以施用两性霉素B剂型来治疗对两性霉素B有响应的任何感染。在一些实施例中，本文所描述的两性霉素剂型可以用于治疗如真菌感染、人类免疫缺陷病毒(HIV)和寄生虫感染等感染性疾病。可通过本文所公开的方法和调配物治疗的感染性疾病包含真菌感染(曲霉菌病、芽生菌病、念珠菌病、球孢子菌病、隐球菌病、组织胞浆菌病、毛霉菌病、副球孢子菌病和孢子丝菌病)、内脏利什曼病、皮肤利什曼病、查加斯病(Chagas disease)以及发热性中性粒细胞减少症。已经示出，两性霉素B与淀粉样蛋白结合并且防止原纤维的形成。因此，本文所公开的两性霉素B可以用于治疗与原纤维形成有关的疾病，如阿尔茨海默氏病。

在一些实施例中，本公开提供了用于治疗内脏利什曼病的方法，所述方法包括口服施用本文所描述的固体剂型，所述固体剂型包括施用于有需要的受试者的有效量的两性霉素B。在另一个实施例中，本公开提供了一种治疗真菌感染的方法，所述方法包括口服施用本文所描述的固体剂型，所述固体剂型包括施用于有需要的受试者的有效量的本文所描述的两性霉素B。在特定实施例中，治疗有效量的两性霉素B足以达到0.01μM到10mM、0.01μM到1mM、0.01μM到100nM或0.01μM到10mM的血浆水平。所施用的两性霉素B的治疗有效量可以根据受试者和病状的严重程度而变化。在一个实施例中，治疗有效量的范围可以为约0.01mg/kg到约1000mg/kg、约0.1mg/kg到约100mg/kg、约0.5mg/kg到约50mg/kg、约1mg/kg到约20mg/kg受试者体重或约5mg/kg到约10mg/kg，例如约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg或约10mg/kg。

实例

实例1：材料和方法

表1提供了对用于本文所描述的分析研究的材料的描述。两性霉素(AmpB)储存在2-8℃下，避光并且防潮。其它材料储存在室温下(RT)。

表1：材料

样品制备1

·将2粒胶囊的内容物倒空到200ml低光化烧瓶中。

·添加NMP(约80％的体积)并且超声处理15分钟，同时在浴中加入冰袋。

·摇晃15分钟。

·混合溶液并使其平衡至室温。

·用NMP稀释到一定体积。

·用稀释剂A(25％乙酸铵溶液/25％NMP/50％甲醇)将5mL上述溶液稀释到50mL。

·用0.45μm尼龙过滤器进行过滤，丢弃前3ml。

样品制备2

·将2粒胶囊的内容物倒空到200ml低光化烧瓶中。

·添加50ml的NMP并且超声处理15分钟，同时在浴中加入冰袋。

·摇晃15分钟。

·添加约90％体积的稀释剂B(乙酸铵溶液/甲醇1:2)。

·使溶液充分混合并使其平衡至室温。

·用稀释剂B稀释到一定体积。

·用稀释剂A(25％乙酸铵溶液/25％NMP/50％甲醇)将5mL上述溶液稀释到50mL。

·用0.45μm尼龙过滤器进行过滤，丢弃前3ml。

样品制备3

·将4粒胶囊的内容物和空明胶胶囊转移到500ml低光化烧瓶中。

·添加125ml的NMP并且超声处理30-45分钟(在浴中加入冰袋以尽量减少加热)直到样品完全分散。在超声处理期间，以规律的间隔用力摇晃。注意：胶囊壳保持完整。

·添加约90％体积的稀释剂B(乙酸铵溶液/甲醇1:2)。

·使溶液充分混合并使其平衡至室温(置于冰箱中以快速冷却)。

·用稀释剂B稀释到一定体积。

·用稀释剂A(25％乙酸铵溶液/25％NMP/50％甲醇)将3mL上述溶液稀释到25mL。

·用0.45μm尼龙过滤器进行过滤，丢弃前3ml。

样品制备4

·将3粒胶囊的内容物转移到500ml低光化烧瓶中。

·用水中的0.5％SDS填满体积。

·加入搅拌棒并且搅拌最少90分钟。

·用水中的0.5％SDS将8mL上述溶液稀释到50mL。

·用0.45μm尼龙过滤器进行过滤，丢弃前3ml。

实例2：固体调配物

基于表5中的参考iCo/Wasan液体调配物，如表2-4中所示制备具有含Gelucire/Peceol/TPGS的调配物的两性霉素B。

熔融第一Gelucire和TPGS并且对其进行称重，两者都在同一容器中进行。对Peceol进行称重并且将其添加到Gelucire-TPGS混合物中。对乙醇进行称重并将其添加到Gelucire-TPGS-Peceol混合物中，并且使用搅拌加热板在约40℃的温度下进行混合直到所有成分溶解(图1中的#1)。将溶液添加到API(图1中的#2)中并且使用研杵混合约5分钟。此混合物在25℃下呈‘乳脂状’(图1中的#3)。使用V型共混器在25rpm下将内相粉末赋形剂单独混合2分钟。使用研杵/研钵将两种混合物混合约5分钟。将所得混合物(图1中的#4)置于40℃下的烘箱中1-2小时以蒸发乙醇，并且然后从烘箱中取出并且在22-25℃下保持约2小时。通过20目(850μm)的筛进行研磨来获得颗粒。使用V型共混器将润滑剂(例如，硬脂酸镁)与颗粒混合2分钟。将最终共混物(图1中的#5)包封到尺寸为“0”的硬壳明胶胶囊(435mg/胶囊)中。使用敲击/捣固技术按体积填充胶囊。

表2：调配物1

项a-h为内相组分，并且项i为外相组分。

表3：调配物2

项a-g为内相组分，并且项h为外相组分。

表4：调配物3

项a-g为内相组分，并且项h为外相组分。

表5：iCo/Wasan调配物与调配物1-3的对比

实例2.来自实例1的固体调配物的放大试验

将调配物1和调配物2从20g放大到100g(表6-7；分别为调配物1A和调配物2A)。使用GMX顶驱高剪切造粒/混合系统进行造粒，其中将Gelucire、Peceol和TPGS溶解在乙醇中，并且以26g/分钟加入此溶液并在60rpm下混合到API，持续3分钟。使用V型共混器将粉状成分单独混合2分钟。将此粉末共混物添加到Gelucire/Peceol/TPGS/乙醇/药物混合物中，并且以850/1800rpm的叶轮/斩波器速度混合6分钟。然后使用流化床干燥器在40℃下除去乙醇。保持流化直到挥发性化合物含量小于或等于3％(约20分钟)。通过干燥失重(LOD)技术确定挥发性化合物含量。通过18目的筛子进行筛选来对干燥颗粒的尺寸进行调整，然后进行最终润滑。

表6：调配物1A

项a-h为内相组分，并且项i为外相组分。

表7：调配物2A

项a-g为内相组分，并且项h为外相组分。

实例3.半固体调配物

按照iCo调配物组合物(表8)来制备填充到用于口服施用的胶囊中的基于半固体脂质的调配物(调配物4和调配物5，表8A)。然而，与iCo/Wasan液体法相反，采用了熔融法。实际上，使用热板磁力搅拌器在35-40℃下熔融半固体赋形剂(Gelucire/TPGS)、对其进行称重并将其与Peceol(液体赋形剂)混合，直到获得澄清的溶液。停止加热并且加入AmpB并混合5分钟。保持搅拌最终液体共混物，并且将其热填充到含有4mg AmpB的尺寸为00的硬明胶胶囊(填充重量：804mg)中。制造另外的含有相同量的脂质赋形剂的批次(调配物5)，但是‘掺入’更多的AmpB以产生100mg剂量的胶囊(填充重量：900mg)。

表8A：iCo/Wasan液体调配物、调配物4和调配物5

*＝0.95mL

实例4.来自实例3的半固体调配物的放大试验

将基于脂质的调配物5的批次大小从23g放大到360g(表8B)。使每种赋形剂在其原始容器中熔融，然后进行搅拌，以确保取样前的均匀性。将称重的熔融样品混合在一起并且在搅拌下加入AmpB。将混合物保持在40℃下并且在恒定搅拌下保持至少30分钟，以确保完全分散/溶解。将最终混合物填充到硬明胶胶囊中。一旦胶囊的内容物冷却到室温，就使用纯化水和乙醇(50:50v/v)的混合物密封胶囊。在封闭胶囊的主体和盖子的连接处周围轻轻地涂覆几滴溶液。使用干净且干燥的布立即擦去多余的溶液。通过竖直搁置在铜板上来使胶囊单独干燥。将密封的胶囊储存在4℃下，直到开始稳定性研究。

表8B：100mg两性霉素B脂质调配物5A

成分	mg/剂量	％w/w	g/批
				两性毒素B	100	11.1	40.0
TPGS	40	4.4	16.0
				Peceol	380	42.2	152.0
Gelucire 44/14	380	42.2	152.0
				总计：	900	100	360

实例5.物理和化学特性

通过堆密度/振实密度和粉末流动性质以及残留溶剂来评估最终混合物。

堆密度/振实密度–粉末流动性质-USP<616>

使用USP<616>方法通过Vanderkamp振实密度测试仪模型10700(VanKelIndustries公司)和Mettler Toledo平衡模型AT200确定堆密度和振实密度。使用50mL刻度玻璃量筒一式两份地确定每个参数。通过测量刻度量筒中已知质量的粉末样品的体积来确定堆密度，同时通过机械地敲击量筒来测量振实密度，直到观察不到另外的体积变化。如在以下段落中所描述的，使用卡氏可压性指数(Carr’s Compressibility Index)和豪斯纳比率(Hausner ratio)评估粉末流动性质。

卡氏可压性指数(CI)：当拟合到以下等式时，使用堆密度数据和振实密度数据计算此流动性质：

可压性指数＝(振实密度-堆密度)/振实密度×100％

豪斯纳比率(HR)：此流动性质被计算为振实密度与堆密度的比率。

表9呈现了根据USP<1174>的可压缩性指数(CI)和豪斯纳比率(HR)值解释以及描述性定性实例。

表9：流动性量表

可压性指数(％)	流动特性	豪斯纳比率	实例
				≤10	优	1.00-1.11	自由流动颗粒
11-15	良	1.12-1.18	粉状颗粒
				16-20	一般	1.19-1.25	粗粉
21-25	尚可	1.26-1.34	细粉
				26-31	差	1.35-1.45	可流体化粉
32-37	很差	1.46-1.59	粘附性粉
				>38	非常非常差	>1.60	非常有粘附性的粉

表10示出了密度和粉末流动性质。调配物展现出足够的流动性。为了将435mg最终共混物从调配物1填充到尺寸为0的胶囊中，需要进行振实和捣固。使用密度更高的赋形剂(例如，200或302型微晶纤维素或高官能度和多官能赋形剂，如硅化微晶纤维素(微晶纤维素和胶体二氧化硅的组合))，可以通过高剪切造粒增加堆密度。硅化微晶纤维素(ProsolvHD 90)的堆密度为0.38-0.50g/cm³并且用于调配物2中，导致堆密度增加。

表10：密度和流动性质(n＝2)

胶囊重量均匀性

作为示出足够流动性质的实例，对调配物1的12粒胶囊进行统计学测试(表11)。确认重量均匀性的RSD<6.0％，并且没有单位处于标示量的85-115％的范围之外。

表11：对调配物1的尺寸为0的胶囊(n＝12)中100mg两性霉素B的包封统计

统计数据	值(mg，总重量)
		平均值	527.8
标准偏差	1.8
		RSD(％)	0.3
最小值	525.0
		最大值	529.9

表12中示出了半固体调配物的统计数据。按重量计将调配物4胶囊填充到胶囊体积的大约90％以得到4mg两性霉素B/胶囊。将具有100mg两性霉素B/胶囊的调配物5和调配物5A填充到胶囊体积的100％。

表9：对调配物4、调配物5和调配物5A的尺寸为00的胶囊(n＝6)中两性霉素B半固体调配物的包封统计

残留溶剂

使用TA仪器Q50热重分析仪，在25℃到200℃的温度范围内，以10℃min^-1的扫描速度通过热重分析(TGA)对残留溶剂进行测定。在氮气氛(60mL min^-1)下，将样品(11-13mg)在铂敞口盘中加热。

图2中展示了两性霉素B(23％)固体口服剂量调配物的最终混合物的TGA曲线。TGA示出介于25℃与100℃之间的重量会损失2.4-3.8％，这通常与挥发性化合物(溶剂和水分)的蒸发有关。考虑到微晶纤维素的水分含量介于3％与5％之间(来自CofA的水分数据)，此重量损失较低。因此，对于含有较高量的微晶纤维素的样品(如调配物2和调配物3)，与调配物1(2.4％)相比，重量损失似乎略有增加(3.8％)是正常的。

实例6.分析测试：

调配物1

表13中示出了两性霉素B调配物的测定和有关物质结果。使用样品制备1来制备复制品1和复制品2，并且使用样品制备2来制备复制品3，以尝试将稀释剂中的NMP消耗降到最低。用两种样品制备程序获得了类似的萃取效率。测定和有关物质的萃取程序达到了约95％的回收率。溶出曲线变化相当迅速，其中在45分钟时释放95％(图3)。在桨速增加后，实现了100％的释放。

表13：调配物1的100mg两性毒素B胶囊的分析结果

调配物2和调配物3

表14中示出了使用改进的萃取程序进行的两性霉素B的测定和有关物质结果。使用样品制备3(详请参见方法)萃取每个样品复制品的来自4粒胶囊的内容物和倒空的胶囊壳。一些样品需要更长的超声处理时间来破碎形成的附聚物。更长的超声处理时间也增加了样品制备过程中产生的降解量。图3中示出了溶出曲线。调配物3最初看起来有些慢，但是迅速重新融入了其它调配物的特性。

表15示出了用于调配物的AmpB的杂质特性，所述杂质特性表明用于产生剂型的方法不会对AmpB产生不利影响。

表14：调配物2和调配物3的100mg两性毒素B胶囊的分析结果

峰≥报告的0.10％

^A超声处理一个复制品显著更长的时间以破碎样品中存在的附聚物，这会导致更高水平的降解。

表10：AMpB的杂质特性

峰≥报告的0.10％

调配物1A和调配物2A

使用改进的萃取程序(表16)在初始时间点(T＝0)处执行胶囊中两性霉素B的测定和有关物质。使用样品制备4(详情参见方法)萃取每个样品复制品的来自3粒胶囊的内容物。放大批次的溶出曲线与之前的批次相当(图4)。

表11：调配物1A和调配物2A的100mg两性毒素B胶囊的分析结果

峰≥报告的0.10％

调配物4和调配物5

根据iCo调配物组合物和Corealis改性方法来制备用于口服施用的胶囊中的基于半固体脂质的调配物。在当前0.1N HCl+0.5％SDS培养基和模拟进食肠液(pH值为5.8的FeSSIF)中分析胶囊的溶出曲线(表17，图5)。

与‘固体’胶囊调配物1A(23％的载药量)相比，半固体调配物—调配物4(0.5％的载药量)和调配物5(11.1％的载药量)在水中的0.5％SDS中示出略微较慢的溶出曲线，溶出时间可达30分钟。在两性霉素B的溶解度可能受限的pH值为5.8的FeSSIF培养基中，对于‘固体’胶囊调配物，溶出曲线最大可达到约35％溶解，并且对于半固体调配物，溶解曲线小于15％溶解(图6)。在此体外模型中，具有增加的脂质浓度的半固体调配物未显示出溶出曲线有所改进。与固体口服剂型调配物1A相比，调配物4和调配物5两者显示出类似的最终结果。

表12：调配物1A、调配物4和调配物5的两性霉素B半固体胶囊的溶出结果.

^A在15分钟时一次注射的样品L268-01021显示溶解130％，在随后的时间点处观察到溶解约90％。重新注入小瓶，并且峰面积没有变化。未对此非典型值进行报告

调配物5和调配物5A

调配物5和调配物5A是相同的组合物，但是制备规模不同。因此，混合时间增加。此外，调配物5A和调配物5A-1胶囊来自相同的最终共混物，其中仅有一个差异，其中对调配物5A胶囊进行密封，并且随后填充调配物5A-1并且不对其进行密封。图7中示出的初始/T＝0数据显示所有三个批次的溶出曲线不同。然而，60分钟后，溶解了AmpB的90-100％。随后，还发现，观察到在40℃/75％的RH下储存1个月的调配物5A以及在5℃下储存约5个月的调配物5的较低的溶出曲线。

在不受理论束缚的情况下，溶出曲线根据时间下降可能归因于在处理不同批量批次期间溶解AmpB的不同程度。

实例7.稳定性研究

调配物1A和调配物2A

开始对调配物1A和调配物2A进行稳定性研究。将胶囊包装在具有感应密封的PP盖的30cc HDPE瓶子中，并且在ICH稳定性条件下将瓶子储存在25℃/60％RH的湿度室中并在加速条件下储存在40℃/75％RH的湿度室中。制备后，在将胶囊置于稳定性室中之前将其直接储存在4-8℃下。

表18到20中总结了100mg两性霉素B胶囊调配物1A和调配物2A的稳定性测试结果。图8中比较了溶出曲线。两种调配物在25℃/60％RH和40℃/75％RH下可稳定长达6个月，与初始(T＝0)结果相比，在测定、有关物质和溶出曲线方面无显著变化。

表13：调配物1A和调配物2A的稳定性测试结果

注意：所述测定仅针对API进行定量。不考虑色谱杂质。

表19：调配物1A和调配物2A的相关物质

相对于AmpB

注意：峰≥报告的0.10％；报告的杂质特性(％面积)在API溶液和样品溶液中是等效的。

*由于所述峰更加广泛，所以在之前的时间点处未对其进行整合，现在观察到了更尖锐的峰并对其进行了报告。

表20：调配物1A和调配物2A的稳定性测试结果(溶解度)

调配物5A

开始对调配物5A进行另一稳定性研究。根据调配物1A和调配物2A来包装胶囊并且在相同条件下进行储存。

制备硬壳胶囊中的两性霉素B/TPGS/Peceol/Gelucire44/14半固体基于脂质的调配物(调配物5A)并且在ICH控制的稳定性条件下进行储存。储存3个月后，调配物保持稳定，没有效力损失(表21)并且有关物质没有增加(表22)。然而，溶出曲线降低了(表23和图9)。如前所述，这种行为可能是AmpB再结晶或聚集的结果。

表21：调配物5A的稳定性结果

^A没有足够的样品单位可用于n＝6

表22：调配物5A的有关物质稳定性结果

注意：峰≥报告的0.10％；报告的杂质特性(％面积)在API溶液和样品溶液中是等效的。

^B在RRT 0.73和RRT 0.74处观察到的两个峰先前作为RRT 0.73处的一个峰观察。

^E在RRT 0.74处观察到的峰由2个仅在2分钟的时间点处分析时单独观察到的共洗脱峰构成。

表23：调配物5A的溶出曲线稳定性结果

^C在50rpm下45分钟后，胶囊碎片和其内容物保留在沉降片中。

^D与在40℃/75％RH(3个月)下的样品相比，所述胶囊缓慢崩解。

实例8.调配物1A和调配物5A的药代动力学

在单次口服给药后，在比格犬中对调配物1A和调配物5的药代动力学进行评估，并且将其与液体调配物(即，上述iCo/Wasan液体调配物)进行比较。在比格犬中重复口服给药三天每天一次后24小时，还对这些两性霉素B胶囊调配物的组织分布进行了评估。

如在下表24中所概述的，将调配物1A、调配物5A和液体调配物(即，iCo/Wasan调配物)中的两性霉素B施用于雄性犬：

表24：比格犬研究设计

在第1天、第2天和第3天(给药后最多72小时)收集血液以进行TK评估。接受胶囊调配物的犬随后又接受了三天多(4-6天)的单次口服给药，并且在最后一次给药后24小时使犬安乐死并且收集随后的组织样品(大约1g，肠系膜***除外)：脑(大脑、小脑、髓质)、心脏、肾脏(皮质和髓质)、肝脏、肺、脾、睾丸、肠系膜***和胃肠道组织(十二指肠、空肠、回肠和结肠)。还收集了肠内容物的样品。使用合格的LC/MS/MS分析方法来分析两性霉素B内容物的血浆样品和组织。

以100mg的剂量口服施用所有调配物中的两性霉素B对犬具有良好的耐受性，并且没有观察到相关的不良临床体征。

在口服给药三种不同的调配物中的两性霉素B后，两性霉素B的平均血浆水平开始快速且以类似的方式上升(给药后最多2小时)并且然后以较慢的速率上升以达到平台期(给药后6-24小时)，并且之后慢慢下降。下表25中总结了在单次给药两性霉素B后在所有犬中确定的Wasan调配物、调配物1A和调配物5A的药代动力学参数(±SE)。对于三种调配物，平均C_max值、T_max值、AUC_0-Tlast值和MRT_Last值彼此没有显著差异。

表25.药代动力学

在施用调配物1A、调配物5A和口服液体剂型(即，上文所描述的iCo/Wasan调配物)后测量两性霉素B的血浆浓度。表26中报告了这些结果。

表26.比格犬中两性毒素B的血浆浓度

NPD＝未检测到峰

*示出的所有浓度均低于LLOQ(100ng/mL)

将定量限定为100ng/mL，并且使用此定量限来建立生物分析方法。对于单次给药后以及在重复给药调配物后24小时的所有犬，没有观察到高于100ng/mL的定量限的血浆水平。

用调配物1A和调配物5A给药后24小时的两性霉素B的血浆浓度分别为56.0±6.9ng/mL和52.3±4.6ng/mL(也参见图11)。

为了验证冷冻保存的血浆样品没有稳定性问题，向一只犬给药单个胶囊(调配物1A)，并且在给药后2小时和4小时采集血液样品并测量新鲜样品和冷冻样品中的两性霉素B。冷冻样品和新鲜样品中的两性霉素B的水平类似，并且与上文所呈现的血浆水平处于相同的范围内。

作为研究的另外的部分，文献综述了两性霉素的药代动力学研究。发现了两份报告。通过HPLC和LC-MS两者，使用设置为20ng/mL的较低定量限量化两性霉素B。在第一份出版物(S.Kalbag等人,Cambridge(CAmB)-Focus-Tox-Poster,2013年4月)中，以15mg/kg、30mg/kg和45mg/kg的剂量向犬(雄性和雌性)口服给药经过调配的两性霉素B；15mg/kg接近于本研究中的剂量(约10mg/kg)，范围为51.9-67.3ng/mL(雄性-雌性)值的血浆C_max接近于在本研究中观察到的血浆C_max，并且类似血浆浓度曲线涉及24小时。在口服施用新颖脂质调配物(E.K.Wasan(合著者),《抗菌化学疗法期刊(J.Antimicrobial Chemotherapy)》64:101-108,2009)中的两性霉素B之后的大鼠中进行的研究中，在给药10mg/kg之后，C_max为96ng/mL，所述血浆水平处于我们观察到的原始溶液的血浆水平的范围内。因此，基于所获得的研究和血浆曲线，在检测限与量化限之间测量的血浆浓度代表所获得的实际血浆浓度。

在实验室管理规范(GLP)/剂量范围探索(DRF)研究中，在施用剂型调配物1A和调配物5后测量比格犬中两性霉素B的组织浓度。表27示出了两性霉素B的组织水平(还参见图10)。

表27.犬模型中两性霉素B的组织浓度.

值表示为n＝6的均值±SE，并且包含高于检测限但低于量化限的血浆浓度以及高于量化上限的值；将未检测到峰的样品作为零值包含在均值中。

通过将平均组织水平除以在重复给药原型调配物1A和调配物5A后观察到的两性霉素B的平均血浆水平并且假设1g组织代表1mL组织体积来计算组织分配系数¹Kp。

在重复给药调配物—调配物1A和调配物5—中的两性霉素B后，两性霉素B在组织和肠内容物中的分布是相似的。胃肠组织和内容物含有最高水平，其中肠内容物水平的范围为1938.8-3106.6ng/g w/w.样品，并且组织水平和组织/血浆比率的范围分别为69.0-703.3ng/g w/w.组织和1.24-12.55。在非胃肠组织中，肝脏和肠系膜***后的肾皮质和髓质具有最高水平，其中组织水平和组织/血浆比率的范围分别为21.7-157.8ng/g w/w.和0.42-3.03。剩余的组织具有非常低水平的两性霉素B，其中组织水平和组织/血浆比率的范围分别为0.0-7.6ng/g w.w.和0.00-0.17ng/g w.w.。

总之，口服给药调配物1A、调配物5中含有的100mg两性霉素B和液体调配物对犬具有良好的耐受性。来自iCo-010(iCo/Wasan液体调配物)和调配物1A与调配物5(胶囊调配物)的两性霉素B的口服生物利用度相似，注意到，调配物组之间没有C_max、T_max和AUC_0-Tlast的显著差异。在给药调配物1A和调配物5后两性霉素B的组织分布相似，其中在胃肠组织中发现最高水平，其次是肾脏、肝脏和肠系膜***，在肺、脾和睾丸中观察到较低水平，并且在大脑和心脏区域观察到非常低的水平。

实例9.口服施用于进食和禁食比格犬后两性霉素B的药代动力学

此研究涉及通过口服途径在两个不同的阶段和以如表28中所概述的交叉设计对测试项进行给药。

表28.研究概述

序列	犬的编号	两性霉素B的剂量(mg)	阶段1	冲洗和观察阶段	阶段2
						I	2M	500	进食	7天	禁食
II	2M	500	禁食	7天	进食

M＝雄性

测试项的施用

如下在每个剂量阶段施用测试项胶囊。

禁食给药：

使犬禁食过夜。第二天早上大约8:30到9:00开始给药。通过一次在舌背上放置一粒胶囊来口服给药五(5)粒胶囊，每粒胶囊含有100mg经过调配的两性霉素B。在给药最后一粒胶囊后，立即通过口腔角落的注射器缓慢施用约20mL自来水以确保吞咽。再次对犬的口腔进行检查，以确保口腔中没有胶囊的痕迹。在2小时的血液采样时间后施用食物(LabDiet认证的犬类饲料#5007)。自由饮水。

进食剂量：

使犬禁食过夜。第二天早上大约8:30到9:00开始给药。通过一次在舌背上放置一粒胶囊来口服给药五(5)粒胶囊，每粒胶囊含有100mg经过调配的两性霉素B。给药后，立即通过口腔角落的注射器缓慢施用约20mL自来水以确保吞咽。再次对犬的口腔进行检查以确保口腔中没有胶囊痕迹，并且从食物碗中供应300(±5)克湿狗粮(配有真鸡肉的肉质面包)。所有犬在4-5分钟内食用300±5克罐装湿狗粮。自由饮水。

生命期观察

死亡率：进行死亡率检查并且在给药日每日记录两次，并且在研究期间的非给药日每日记录一次。在给药日，在给药后的前60分钟对动物进行密切监测。

体重：在每次给药之前以及在7天的观察期结束时记录体重。

药代动力学血液采样：如下在给药后从所有动物收集血液样品：在给药第1天和第8天，在给药后0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时和24小时进行血液样品收集。

出于收集上述样品的目的，从每只动物的颈静脉取血。将每个血液样品(大约2mL)收集到含有抗凝血剂(K2EDTA)的真空管中。记录每个样品的时间(实际时间，与给药的日期和给药时间一起记录)。

收集后，将血液在2000rpm下置于冷冻离心机中20分钟，以分离血浆。将回收的血浆储存在完全一样的小瓶中并且冷冻(在-80±10℃下)等待分析。对于制备血浆中的每个步骤，尽可能地保护样品免受环境光的影响。

在最后一次采血之后，将每只动物送回Nucro-Technics的犬群。

样品分析：使用合格的LC-MS/MS方法在Nucro-Technics生物分析实验室进行血浆样品分析以测定两性霉素B。在发布最终报告后，血浆样品将保留三个月。

药代动力学分析：通过非隔室方法来分析血浆浓度-时间数据，以使用经过验证的6.3版软件(Pharsight Corp)获得药代动力学参数。

计算了主要参数(如下文所列)：

AUC_0-Tlast：使用线性梯形法计算从零时到时间tlast处的最后可量化浓度时间的血浆浓度-时间曲线下面积。

AUC_0-∞：从零时外推到无穷大的血浆浓度曲线下面积。AUC0-∞计算为AUC_0-Tlast+(Clast/k_e)

C_max：最高血浆浓度

T_max：根据血液采样的标称时间确定的最大浓度时间

k_e：消除速率常数。使用半对数浓度-时间曲线的末期的线性回归估计所述消除速率常数。最少三个数据点将用于计算k_e。未将加权应用于回归线。

t_1/2(e)：根据ln(2)/k_e计算的终端消除半衰期

另外的参数(如平均停留时间(MRT)；口服给药后清除率(CL/F)；以及由软件生成的分布/口服给药后(Vz/F)的体积)可以由研究负责人酌情报告。

统计分析：将AUC_0-Tlast和C_max用作主要结果变量以比较进食状态与禁食状态之间的生物利用度，并且考虑T_max用于吸收。使用学生t-检验并且采用p<0.05的水平作为两个调配物组之间在统计学上有显著差异的指标来评估两个调配物组之间关于AUC_0-Tlast、C_max和T_max的显著差异。通过将F-检验用于两个组并且接受将p<0.05的水平作为方差之间的显著差异指标来评估分组数据的方差之间的显著差异。

结果

临床观察

以500mg的剂量(包含在五粒胶囊中)口服施用调配成调配物1A的两性霉素B对犬具有良好的耐受性，并且没有观察到相关的不良临床体征。在整个治疗阶段维持体重(表29)。

表29.体重概述

禁食犬和进食犬的药代动力学

表30中呈现了两性霉素B的平均血浆浓度，并且图12和13中呈现了两性霉素的单独血浆浓度和平均血浆浓度相对于时间的曲线。表31中呈现了源自于血浆浓度相对于时间的曲线的药代动力学参数。

在口服给药调配成调配物1A的两性霉素B后，两性霉素B的平均血浆水平开始快速且以类似的方式上升(给药后最多2小时)并且然后以较慢的速率上升以达到平台期(给药后6-24小时)或在给药后4小时达到峰值，并且之后下降。在大多数情况下，消除期定义不明确，导致不能确定终端消除期药代动力学参数。对表31中所呈现的药代动力学参数的回顾表明，对于禁食和进食状态，平均C_max值、T_max值和AUC_0-Tlast值彼此没有显著差异。由于给药后4小时两性霉素B的血浆浓度显著下降，所以禁食组和进食组中的每个组中的一只不同的犬具有较低的AUC_0-Tlast。所报告的药代动力学参数的变化在禁食组与进食组之间没有差异。

禁食状态和进食状态的药代动力学参数与其方差之间缺乏显著差异表明食物的存在对从调配物iCo-019中吸收两性霉素B几乎没有影响。

表30.向禁食犬和进食犬口服给药调配物1A后两性霉素B的血浆浓度

此数据表示为n＝4的均值±SE；n.a.—不适用

表31.向禁食犬和进食犬口服给药配制成调配物1A的500mg两性霉素B后两性霉素B的PK参数

禁食状态与进食状态之间的统计参数和其方差均无显著差异。

结论

总之，口服胶囊给药500mg的作为调配物1A的两性霉素B对犬具有良好的耐受性。认为禁食和进食状态下的犬的C_max、T_max、AUC_0-Tlast和MRT_last没有显著差异。因此，此研究表明，食物的存在不会影响比格犬中从调配物1A口服吸收两性霉素B。