三棱素c在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用
阅读说明：本技术 三棱素c在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用 (Application of scirpusin C in preparation of medicine for treating cerebral ischemic stroke ) 是由 王淑美 梁生旺 贤明华 谢媛媛 蔡家乐 梁嘉茵 詹锶楷 沈琳 林惠婷 于 2021-08-13 设计创作，主要内容包括：本发明提供了三棱素C在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用。本发明通过将三棱素C分别与过氧化氢损伤BV2细胞、缺氧缺糖损伤BV2细胞共培养,结果表明,三棱素C能够提高过氧化氢损伤BV2细胞和缺氧缺糖损伤BV2细胞的存活率。本发明通过采用三棱素C干预大脑中动脉阻塞再灌注模型大鼠来评价三棱素C的抗缺血性脑卒中的性能,实验结果表明,三棱素C能够抑制神经功能损伤,减少缺血性脑卒中引发的大脑梗死面积,降低脑湿重,显著缓解脑水肿,修复血脑屏障。三棱素C还能够明显减少细胞坏死,维持细胞正常状态,降低缺血性脑卒中大鼠血清中的LDH、MDA含量、TNF-α和IL-1β含量,以及提高SOD含量。(The invention provides an application of scirpusin C in preparation of a medicine for treating cerebral ischemic stroke. According to the invention, the scirpusin C is co-cultured with the hydrogen peroxide damaged BV2 cell and the hypoxia and glucose-deficient damaged BV2 cell respectively, and the result shows that the scirpusin C can improve the survival rate of the hydrogen peroxide damaged BV2 cell and the hypoxia and glucose-deficient damaged BV2 cell. According to the method, the performance of the sparganin C in resisting ischemic stroke is evaluated by adopting the sparganin C to intervene in a middle cerebral artery occlusion reperfusion model rat, and experimental results show that the sparganin C can inhibit nerve function damage, reduce the cerebral infarction area caused by the ischemic stroke, reduce the cerebral dampness weight, obviously relieve cerebral edema and repair the blood brain barrier. The sparganium C can also obviously reduce cell necrosis, maintain the normal state of cells, reduce the contents of LDH and MDA, TNF-alpha and IL-1 beta in the serum of rats with ischemic stroke, and improve the SOD content.)
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体地，涉及三棱素C在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用。
背景技术
缺血性脑卒中(Stroke)是指由于脑的供血动脉(颈动脉和椎动脉)狭窄或闭塞、脑供血不足导致的脑组织坏死的总称。缺血性脑卒中是世界成人残疾和死亡的主要原因，与遗传和环境因素相关的多因素异质性疾病。目前全球对于缺血性脑卒中的治疗手段主要是静脉溶栓和血管内治疗，但溶栓后再灌注的过程中会引发炎症反应，氧化应激和兴奋性氨基酸等变化，进一步加重脑损伤。让病人在预后生活质量减弱，有一定的致死率和致残率。缺血再灌注后发生组织细胞的进一步损害，是缺血性脑卒中的一个必经阶段。因此，对于缺血性脑卒中再灌注脑损伤的治疗也是研究的热门，其中，有效针对再灌注过程中产生的炎症和氧化以及细胞凋亡问题的药物是科研者的目标之一。开发一种疗效好，毒副作用小且对于再灌注脑损伤具有显著保护作用的药物具有极好的临床应用价值。
三棱素C是从三棱中提取的一种肽类化合物。公开号为CN 103520160 A公开了三棱中肽类化合物的应用，具体公开了三棱中肽类化合物对凝血酶原时间、活化部分凝血酶原时间和凝血酶时间有延长趋势作用，具有很好的抗凝血活性；公开号为CN109172577A的中国专利中公开了三棱中三棱素C具有抗血瘀证的作用。然而，关于三棱素C在制备抗缺血性脑卒中的药物中的应用目前尚未被报道。
发明内容
本发明的目的在于拓展三棱素C的用途，提供三棱素C在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用。
本发明的第二个目的在于提供一种包含有效量的三棱素C的抗缺血性脑卒中药物。
本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
本发明通过将三棱素C分别与过氧化氢损伤BV2细胞、缺氧缺糖损伤BV2细胞共培养，结果表明，三棱素C能够提高过氧化氢损伤BV2细胞和缺氧缺糖损伤BV2细胞的存活率。本发明还通过设置三棱素C高、中、低剂量组干预大脑中动脉阻塞再灌注模型大鼠来评价三棱素C的抗缺血性脑卒中的作用。从脑组织切片的结果可知，与模型组相比较，三棱素C高、中、低剂量组的梗死症状明显减轻，且随着剂量的增高，脑梗死症状减轻越明显。从脑组织的神经病学功能评分的结果可知，给药后均有不同程度的神经学改善，且均低于模型组，其中三棱素C高剂量组显著性改善神经行为学功能。通过脑湿重结果可知，三棱素C高剂量组给药后，显著缓解脑水肿；通过大鼠脑组织切片的HE染色图可知，模型组大鼠脑组织切片细胞坏死、固缩，细胞核缩小，反应了脑组织细胞广泛坏死；三棱素C高剂量组可以明显减少细胞坏死，维持细胞正常状态。通过测定大鼠血清中的乳酸脱氢酶(LDH)活性，丙二醛(MDA)和超氧歧化酶(SOD)含量的结果可知，与模型组相比较，三棱素C能够不同程度降低LDH、MDA的含量以及提高SOD的含量。其中，三棱素C中剂量组的LDH含量显著降低，三棱素C低剂量组的MDA含量显著降低，三棱素C中剂量组的SOD含量显著提高。通过测定大鼠血清中的TNF-α、IL-1β含量的结果可知，与模型组相比较，三棱素C高、中、低剂量组均能够降低大鼠血清中的TNF-α、IL-1β含量，其中，三棱素C高剂量组的TNF-α浓度下降最显著；三棱素C低剂量组的IL-1β浓度下降最显著。
因此，以下应用均应在本发明的保护范围之内：
本发明提供了三棱素C在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用。
具体地，所述应用是指三棱素C在制备脑缺血再灌注损伤药物中的应用。
具体地，所述应用是指三棱素C在制备抑制缺血性脑卒中患者细胞自由基积累损伤的药物中的应用。
具体地，所述应用是指三棱素C在制备抑制缺血性脑卒中患者细胞缺氧缺糖损伤的药物中的应用。
具体地，所述应用是指三棱素C在制备抑制缺血性脑卒中患者脑损伤或脑梗死的药物中的应用。
进一步具体地，所述脑损伤为血脑屏障的破坏或脑水肿。
具体地，所述应用是指三棱素C在改善神经功能缺损的药物中的应用。
具体地，所述应用是指三棱素C在制备抑制缺血性脑卒中患者脑组织细胞坏死的药物中的应用。
具体地，所述应用是指三棱素C在制备抑制缺血性脑卒中患者血清中的乳酸脱氢酶或抑制自由基发生过氧化反应的药物中的应用。
进一步具体地，所述抑制自由基发生过氧化反应体现在降低缺血性脑卒中患者血清中的丙二醛含量。
具体地，所述应用是指三棱素C在制备提高缺血性脑卒中患者血清中的超氧歧化酶含量的药物中的应用。
具体地，所述应用是指三棱素C在制备降低缺血性脑卒中患者血清中的TNFα、IL-β含量的药物中的应用。
所述三棱素C(Cyc-(Phe-Tyr))的结构式如式(I)所示：
本发明还提供了一种包含有效量的三棱素C的抗缺血性脑卒中药物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明首次提出三棱素C在制备抗缺血性脑卒中的药物中的应用。通过采用三棱素C干预大脑中动脉阻塞再灌注模型大鼠来评价三棱素C的抗缺血性脑卒中的性能，实验结果表明，三棱素C对自由基积累损伤、缺氧缺糖损伤细胞具有显著的保护作用，能够抑制神经功能损伤，减少缺血性脑卒中引发的大脑梗死面积，降低脑湿重，显著缓解脑水肿，修复血脑屏障。三棱素C还能够明显减少细胞坏死，维持细胞正常状态，降低缺血性脑卒中患者血清中的LDH、MDA含量、TNF-α和IL-1β含量，以及提高SOD含量。
附图说明
图1为不同浓度三棱素C对缺氧缺糖BV2细胞存活率的影响(n＝6，SD±SEM)；注：####表示和control组比较，p＜0.001，***表示和model组比较，p＜0.005，**表示和model组比较，p＜0.01，*表示和model组比较，p＜0.05。
图2为大鼠每日体重变化情况。
图3为大鼠脑组织的梗死情况。
图4为大鼠脑组织的梗死面积统计结果；注：####表示与假手术组比较，p＜0.001，*表示与模型组比较，p＜0.05，**表示与模型组比较，p＜0.01。
图5为大鼠的神经学评分结果；注：###与假手术组比较，p＜0.005，**与模型组相比，p＜0.01。
图6为大鼠的脑湿重结果；注：###与假手术组比较，p＜0.005，*与模型组比较，p＜0.05。
图7为大鼠的大脑组织HE染色结果。
图8为大鼠血清中的LDH含量结果图，(n≥6)，Mean±SEM；注：##表示与假手术组比较，p＜0.01，**表示与模型组比较，p＜0.01，*表示与模型组比较，p＜0.05。
图9为大鼠血清中的MDA含量结果图，(n≥6)，Mean±SEM；注：##表示与假手术组比较，p＜0.01，*表示与模型组比较，p＜0.05。
图10为大鼠血清中的SOD含量，(n≥6)，Mean±SEM；
图11为各大鼠血清中的TNF-α浓度结果图，(n≥8)；注：###表示与假手术比较，p＜0.005，***表示与模型组比较，p＜0.005，**表示与模型组比较p＜0.01，ns表示与模型组比较p＞0.05。
图12为大鼠血清中的IL-1β浓度结果图，(n≥8)，###表示与假手术比较，p＜0.005，***表示与模型组比较，p＜0.005。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1三棱素C对BV2细胞过氧化氢损伤、缺氧缺糖损伤的抑制作用实验
一、实验材料
(1)实验细胞
BV2细胞株(小鼠小胶质细胞)，从上海细胞资源中心购买所得。
(2)实验试剂
(3)实验仪器
二、三棱素C对BV2细胞过氧化氢损伤模型的保护作用
(1)实验方法
根据过往研究过氧化氢所致BV2细胞损伤模型建立的方法，并加以改进，最后采用400μmol/L、损伤24h，BV2细胞的存活率为59.4％作为造模条件，对三棱素C进行药效探索。
将复苏后培养至5-20代的BV2细胞，按照8000/孔的密度接种在96孔板中，每孔100μL，最外围一圈加入PBS150μL，防止出现边缘效应。种板24h后，细胞在96孔板中进入对数生长期，使用培养基配制400μmol/L过氧化氢溶液，使用含400μmol/L过氧化氢溶液的培养基配制浓度为200μmol/L维生素E作为阳性药，使用含400μmol/L过氧化氢溶液的培养基配制浓度为10μmol/L，5μmol/L，2μmol/L，0.2μmol/L三棱素C作为给药组，空白组中加入等量不含过氧化氢溶液培养基，吸去96孔板中原溶液，每个孔加入100μL相应溶液，每个组设6个复孔，放入培养箱中继续培养24h。再加入5mg/mL MTT溶液10μL，4h后，将液体吸出并加入二甲基亚砜(DMSO)150μL，培养箱中放置10min，于490nm处测吸光度，计算存活率。存活率的计算公式如式(II)所示：
(2)实验结果
不同浓度的三棱素C对过氧化氢损伤BV2细胞的存活率结果如表1所示，可以看出，在2μmol/L浓度时细胞存活率最高为71.9±5.92％(P＜0.01)；在0.2μmol/L浓度时细胞存活率为68.9±4.32％(P＜0.01)；在5μmol/L浓度时细胞存活率为68.6±7.04％(P＜0.01)，表明三棱素C对自由基积累损伤BV2细胞具有保护作用。
表1不同浓度的三棱素C对BV2细胞过氧化氢损伤后细胞的存活率结果
注：##表示与空白组比较，P＜0.01；*表示与模型组比较，P＜0.05；**表示与模型组比较，P＜0.01。
三、三棱素C对BV2细胞缺氧缺糖模型的保护作用
(1)实验方法
根据过往研究缺氧缺糖所致BV2细胞损伤模型建立的方法，并加以改进，最后采用95％N2和5％CO2条件下缺氧缺糖2h，复氧复糖1h，BV2细胞的存活率为72.2％作为造模条件，对三棱素C进行药效探索。
将复苏后培养至5-20代的BV2细胞，按照10000/孔的密度接种在96孔板中，每孔100μL，最外围一圈加入PBS150μL，防止出现边缘效应。种板12h后，细胞在96孔板中进入对数生长期，使用DMEM/F12培养基配制含10μmol/L，3μmol/L，1μmol/L，500nmol/L，200nmol/L，100nmol/L，50nmol/L，20nmol/L三棱素C作为给药组，空白组和模型组只加等体积DMEM/F12培养基，阳性组为：用DMEM/F12培养基配制含200μmol/L的依达拉奉溶液。加入相应培养基后培育过夜，其余操作一样。12h后，吸去96孔板中原溶液，每个孔加入100μL无糖DMEM，每个组设6个复孔，放入缺氧小室中继续培养2h。空白组每孔加入100μL含糖DMEM。结束后将所有组别的溶液吸走，换成DMEM/F12培养基继续培养1h，再加入5mg/mL MTT溶液10μL，4h后，将液体吸出并加入二甲基亚砜(DMSO)100μL，培养箱中放置10min，于490nm处测吸光度，计算存活率。存活率的计算公式和式(II)相同。
(2)实验结果
不同浓度的三棱素C对缺氧缺糖损伤BV2细胞的存活率结果如图1所示，可以看出，各个浓度下三棱素C对缺氧缺糖再复氧复糖损伤的BV2细胞具有不同程度的保护作用，且在该条件下保护作用均强于依达拉奉阳性药组。在0.02～0.1μmol/L浓度时显著提高细胞存活率(p＜0.001)，其中0.02μmol/L浓度的效果最为显著。说明三棱素C具有很好的缺氧缺糖细胞保护作用。缺氧缺糖再复氧复糖是缺血性脑卒中再灌注脑损伤主要的病理过程，三棱素C在此条件下有效保护细胞，提示三棱素C在机体内缺血性脑卒中再灌注脑损伤中可以有效发挥保护作用。
实施例2三棱素C对大鼠脑缺血再灌注脑损伤的药效实验
一、实验材料
(1)实验动物
SPF级SD大鼠(雄性，体重230±20g)，实验大鼠由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(粤)2013-0002。由广东药科大学实验动物中心饲养。
(2)实验仪器
(3)实验试剂
二、三棱素C对大鼠脑缺血再灌注损伤的药效实验方法和实验结果
1、实验动物分组、给药
将雄性SD大鼠随机分成5组，分别为假手术组(Sham)，模型组(Model)，三棱素C高剂量组(SC-High)，三棱素C中剂量组(SC-Middle)，三棱素C低剂量组(SC-Low)，共5组。将三棱素C溶解于0.5％CMC-Na(称量0.5g CMC-Na溶于水，定容到100mL)，三棱素C高、中、低剂量组分别给药10mg/kg、3mg/kg、1mg/kg，假手术组和模型组灌胃0.5％CMC-Na。连续灌胃给药4天(每100g体重给药1mL)，第5天给药2h后，进行手术构建MCAO模型(造模前12h禁食不禁水)，造模后8h再灌胃1次，再灌注20h后灌胃一次，再灌注22h后取材。
2、大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO/R)的建立
于末次灌胃2h后，采用线栓法构造大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebralartery occlusion reperfusion，MCAO/R)再灌注模型，假手术组不插线栓，其余操作一样，使用0.8L/min异氟烷对大鼠进行麻醉，待其完全麻醉后维持流速在0.2L/min保持麻醉状态，将大鼠仰卧固定于手术台，剪毛后涂抹碘伏，在颈部正中位纵行切口(25cm处)，分离大鼠右侧颈总动脉(CCA)及颈外动脉(ECA)，并结扎这两个动脉的近心端，用微型动脉夹夹闭颈内动脉(ICA)，用眼科剪于CCA结扎的远心端(距离颈总动脉分叉处约5cm)剪一小口插入栓线，松开ICA动脉夹，迅速调整栓线的力度及方向，栓线从CCA进入ICA，直至大脑前动脉的起始区域，遇阻力后稍加用力插入然后停止。将缝合伤口后给大鼠腹腔注射1.5mL生理盐水并使用电热毯保持大鼠体温在37℃，缺血2h后将栓线拔出至标志的黑点处。再灌注21h后，采用Longa改良法进行神经损伤症状评分，再灌注22h后使用异氟烷麻醉，腹主动脉取血，心脏处使用生理盐水灌流后取大鼠脑组织，部分脑组织进行TTC染色，部分脑组织为脑梗半球和非脑梗半球，采用试剂盒测定血清中大鼠IL-1β，TNF-α，LDH，SOD和MDA的含量。
3、神经病学功能评分和梗死面积的测定
(1)实验方法
神经功能损伤按5分进行评分：没有明显神经功能缺损症状：0分；提鼠尾，右前肢不能完全伸直：1分；右前肢阻，行走偏右侧：2分；右侧旋转行走：3分；原地右旋：4分；完全右瘫：5分。再灌注后21小时后观察状况并进行评分、记录，除假手术组外1分以上即造模成功。剔除死亡大鼠、造模不成功的大鼠。
在灌注22h后，称重，使用异氟烷麻醉后，并进行腹主动脉取血，从心尖处使用冷生理盐水灌流，立马将大鼠开颅取脑(去除小脑和嗅球部分)，用滤纸将脑组织的水分吸干，并使用电子天平称量脑组织的湿重，并计算大鼠脑指数，后将脑组织放入-20℃冰箱中冷冻10min，取出放置于脑模上，进行切片，沿视神经交叉部分及视神经2mm处将大脑切成5片。将切片置于37℃的1％TTC中进行染色(避光)，正染和反染各5min，后取出放于4％多聚甲醛固定液中，24h后拍照，用ImageJ测量脑组织梗死面积，并算出梗死面积百分比，记录数据。脑指数的计算公式如式(III)所示；脑梗死面积百分比的计算公式如式(IV)所示。
(2)实验结果
各组大鼠给药五天后，体重变化如图2所示，可以发现各组大鼠体重差异不大，第五天禁食后体重下降，第六天造模后，假手术动物体重变化不大，但由于手术创伤，模型组和给药组均体重下降，但比较起六天的体重而言，三棱素C给药组并未出现体重异常的情况，提示在这个给药剂量下，三棱素C未表现出毒性作用。各组大鼠脑组织的梗死情况与梗死面积统计结果分别如图3、4所示。从图3可以看出，假手术组未出现梗死灶，而模型组明显出现梗死灶，说明造模成功。从图4可以看出，梗死面积统计的结果显示三棱素C高、中、低剂量组的梗死情况比模型组明显减轻，并呈剂量依赖性，这与图3的结果一致。各组大鼠脑组织的神经病学功能评分和脑湿重结果如图5和图6所示。从图5可以看出，三棱素C高中低组(分别给药10mg/kg，3mg/kg，1mg/kg)给药后均有不同程度的神经学行为改善，且均低于模型组，高剂量组显著性改善神经行为学功能。图6可以看出造模后大鼠脑湿重增加，可能是由于发生缺血性脑卒中后血脑屏障遭到破坏，发生脑水肿而引起，血脑屏障的破坏以及脑水肿均会加剧脑损伤，使缺血性脑卒中再灌注脑损伤进一步恶化。三棱素C高剂量组给药后，显著缓解脑水肿，说明三棱素C可能具有修复血脑屏障的潜在功能，缓解脑水肿，发挥保护作用。
4、假手术组、模型组、三棱素C高剂量组大脑HE染色结果
(1)实验过程
依次将切片放入二甲苯浸泡20min，更换二甲苯浸泡20min，无水乙醇浸泡5min，更换无水乙醇浸泡5min，75％乙醇5min，自来水洗。切片入苏木素染液染3～5min，自来水洗，分化液分化，自来水洗，返蓝液返蓝，流水冲洗。然后切片依次入85％、95％的梯度酒精脱水各5min，放入伊红染液中染色5min。再把切片依次放入无水乙醇5min，更换无水乙醇浸泡5min，再次更换无水乙醇浸泡5min，二甲苯5min，更换二甲苯浸泡5min，中性树胶封片。显微镜镜检，图像采集分析。
(2)实验结果
各组大鼠的大脑组织HE染色结果如图7所示，可以看出造模后，模型组大鼠脑组织切片细胞坏死、固缩，细胞核缩小，反应了脑组织细胞广泛坏死。三棱素C高剂量组可以明显减少细胞坏死，维持细胞正常状态。
5、各组大鼠血清中LDH、MDA和SOD含量的测定
(1)实验方法
大鼠腹主动脉取血后，将血液静止一段时间，离心(3000rpm/min，4℃，10min)。离心后取上清液，后放置于-80℃冰箱中，测SOD，MDA含量、LDH活性(根据南京建成生物工程研究所试剂盒说明书)。
(2)实验结果
乳酸脱氢酶(LDH)是体内能量代谢过程中的重要酶。当机体内组织坏死后，LDH会泄露到血液中，因此LDH的含量是衡量机体细胞凋亡的重要指标。大鼠血清中的LDH含量结果如图8所示，造模后血清中LDH含量显著上升，说明造模后脑组织中发生损伤，释放出LDH到血液中，三棱素C给药可以不同程度降低LDH的含量，其中，三棱素C中剂量组显著降低LDH的含量(p＜0.01)。
机体内通过酶系统和非酶系统产生自由基，自由基可以攻击生物膜中的不饱和脂肪酸引发脂质过氧化作用，进而产生醛基(丙二醛，MDA)以及酮基，羰基等，进一步放大氧化作用，加重机体损伤。MDA的含量能够在一定程度上反应体内自由基的水平，推断缺血性脑卒中再灌注后脑组织受自由基损伤的情况。各组大鼠血清中MDA含量的结果如图9所示，可以看出，不同浓度三棱素C给药后均可以降低大鼠血清中MDA的含量，且在低剂量(1mg/kg)浓度时显著降低MDA的含量，说明三棱素C可以通过抑制缺血性脑卒中再灌注后脑组织产生氧自由基，对脑组织发挥保护作用。超氧歧化酶(SOD)是一类广泛分布于组织细胞的金属酶，用于产生催化超氧阴离子自由基发生歧化反应的酶，它对于平衡机体内氧化与抗氧化系统，免除自由基损伤具有重要作用，SOD的含量与自由基含量水平呈负相关关系。因此，SOD是衡量缺血性脑卒中再灌注后脑组织以及血液中氧自由基含量的重要指标。各组大鼠血清中SOD含量的结果如图10所示，可以看出，三棱素C给药后，高、中、低剂量均可以提高SOD含量，其中中剂量组(3mg/kg)可以显著提高SOD含量。说明三棱素C可以通过提高超氧歧化酶活性，降低缺血性脑卒中后脑组织中产生氧自由基含量，对脑组织发挥保护作用。
6、各组大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量的测定
(1)实验方法
从-80℃冰箱中将血清取出，测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量(根据酶联免疫生物试剂盒说明书)。
(2)实验结果
脑组织在经历缺血再灌注损伤后，会产生炎症风暴，炎症反应会进一步加重脑损伤，致使神经元细胞，小胶质细胞和星形胶质细胞等细胞损伤或死亡。TNF-α和IL-1β的含量是经典的炎症反应衡量指标，该指标升高，则说明炎症反应加剧。检测TNF-α和IL-1β的含量能够观察三棱素C能否通过降低炎症因子，对脑损伤发挥保护作用。各组大鼠血清中的TNF-α、IL-1β浓度结果分别如图11、12所示。从图11可以看出，与假手术组相比较，模型组的TNF-α浓度显著增高；三棱素C给药后，大鼠血清中TNF-α浓度均降低，均低于模型组，且三棱素C的剂量越高，TNF-α浓度降低程度越显著。由图12可知，与假手术组相比较，模型组的IL-1β浓度显著增高；三棱素C给药后，大鼠血清中IL-1β浓度均降低，均低于模型组，且大鼠血清中IL-1β的浓度呈剂量依赖性降低，三棱素C的剂量越低，IL-1β浓度降低程度越显著。研究表明，三棱素C可以显著减轻大鼠缺血性脑卒中再灌注后的炎症风暴，提示三棱素C可能通过缓解炎症作用，发挥缺血性脑卒中脑损伤的保护作用。