左氧氟沙星在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用
阅读说明：本技术 左氧氟沙星在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用 (Application of levofloxacin in preparation of anti-atherosclerosis drugs ) 是由 陈勇 容彤 盛青华 于 2021-06-15 设计创作，主要内容包括：本发明公开了左氧氟沙星在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用,属于心血管疾病药效学的技术领域。本发明研究发现,HPβCD-Lev、Lev对高脂饮食造模动脉粥样硬化的影响,明确HPβCD-Lev抗动脉粥样硬化的药效。本发明将Lev、HPβCD-Lev用于心血管疾病特别是动脉粥样硬化疾病的延缓或治疗,扩展左氧氟沙星用药范围,降低疾病治疗成本,具有重要的研究价值和临床应用前景。(The invention discloses an application of levofloxacin in preparing an anti-atherosclerosis medicament, belonging to the technical field of cardiovascular disease pharmacodynamics. The research of the invention finds that the HP beta CD-Lev and the HP beta CD-Lev have influence on high-fat diet modeling atherosclerosis, and the drug effect of the HP beta CD-Lev on atherosclerosis resistance is determined. The invention uses Lev and HP beta CD-Lev for delaying or treating cardiovascular diseases, particularly atherosclerosis diseases, expands the medication range of levofloxacin, reduces the cost of disease treatment, and has important research value and clinical application prospect.)
技术领域
本发明属于心血管疾病药效学的技术领域，具体涉及左氧氟沙星在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用。
背景技术
近年来动脉硬化症(Arteriosclerosis)在我国逐渐增多，已成为老年人死亡的主要原因之一，且仍呈上升趋势。动脉粥样硬化(Atherosclerosis)是动脉硬化症中常见的最重要的一种，其形成和发展是一个缓慢、长期的过程，牵涉到多种血清脂蛋白、多种细胞(包括血管内皮细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞和淋巴细胞等)以及多种分子。动脉粥样硬化可导致多种疾病或临床症状，其中最为人所知、最重要的是心肌梗塞、冠心病和中风等。可以说，动脉粥样硬化是许多重要常见疾病或死亡的根源。因此，找到预防、诊断和延缓或治疗动脉粥样硬化的有效方法和药物具有重大意义。
羟丙基-β-环糊精(HPβCD)是由β环糊精葡萄糖残基上羟基的2-位氢原子被羟丙基取代而制得，其单个分子同β环糊精一样具有外亲水内疏水的立体环形中空结构，被广泛应用于食品、药品、工业等多种领域，通过作为外壳进而增加被包合物的溶解性、可利用度、稳定性等，极大的提高了被包合物的应用率，例如，用HPβCD包合伊曲康唑显著提高了伊曲康唑的溶解度和溶出速率，用HPβCD包合难溶药物布洛芬使其溶解度增加约700倍，增溶作用较βCD提高70倍。
左氧氟沙星(Levofloxacin，Lev)是一种对很多微生物、致病因子或疾病都有抵御作用的喹诺酮类抗菌药物，常见的例如用于泌尿生殖系统细菌感染、呼吸道细菌感染、胃肠道细菌感染、皮肤软组织感染等等，它主要通过抑制细菌DNA解旋酶的活性，使细菌因为无法正常合成和复制DNA最终自亡而达到杀菌和抵御疾病的作用。关于左氧氟沙星与动脉粥样硬化疾病的关系至今暂无报道，本发明首次将左氧氟沙星用于动脉粥样硬化疾病的延缓治疗中，并达到显著的药效。
发明内容
针对现有技术中的不足与难题，本发明旨在提供一种左氧氟沙星的新用途，本发明研究发现，通过尾静脉注射方式将HPβCD-Lev、Lev给药于ApoE-/-C57BL/6小鼠，检测HPβCD-Lev、Lev对高脂饮食造模动脉粥样硬化的影响，明确HPβCD-Lev抗动脉粥样硬化的药效，因此，左氧氟沙星可以用作延缓或治疗血管动脉粥样硬化疾病。
本发明通过以下技术方案予以实现：
左氧氟沙星在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用，药物的有效成分为左氧氟沙星。
进一步地，药物通过羟丙基-β-环糊精包合左氧氟沙星。
进一步地，左氧氟沙星用量10～80mg/kg/2d。
与现有技术相比，本发明有益效果包括：
(1)本发明通过动物实验水平，明确了Lev、HPβCD-Lev在抗动脉粥样硬化方面的药效。
(2)本发明将Lev、HPβCD-Lev用于心血管疾病特别是动脉粥样硬化疾病的延缓或治疗，扩展左氧氟沙星用药范围，降低疾病治疗成本，具有重要的研究价值和临床应用前景。
(3)本发明通过用HPβCD包合Lev可以提高Lev的水溶性并降低Lev的毒副性。
附图说明
图1为实施例中各实验组全长血管斑块的染色图；
图2为实施例中各实验组全长主动脉的内壁脂滴/斑块定量检测，病变区占总主动脉面积的百分比；
图3为实施例中各实验组对主动脉瓣部位动脉粥样硬化斑块进行病理切片的成像展示图；
图4为实施例中各实验组对主动脉瓣部位动脉粥样硬化斑块定量检测，病变区占主动脉根部面积的百分比。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明作进一步地说明。
制备实施例：HPβCD包合Lev的包合物(HPβCD-Lev)的配备
将磁力搅拌器转子放入6ml玻璃瓶，用洗净的药匙和电子分析天平准确称取93mgLev粉末，375mg HPβCD粉末，将称量好的LEV和HPβCD粉末都倒入玻璃瓶，再加5ml PBS至玻璃瓶，盖上玻璃瓶盖子，用锡箔纸完全避光包封，在磁力搅拌器上充分溶解混匀，再持续低速搅拌48h完成包合。
将包合完成的HPβCD-Lev去掉盖子，保鲜膜封口，放-80冰箱冷冻30min至完全凝固，与此同时打开低温冷冻干燥机将仪器提前预冷30min，30min后快速取出HPβCD-Lev并用1ml注射器的针头在封口的保鲜膜上扎孔，而后放入冷冻干燥机，冷冻干燥18h，彻底除去HPβCD-Lev溶液中的水分，充分干燥后加入5ml三氯甲烷，盖上玻璃瓶瓶盖，在涡旋震荡器上充分溶解，将三氯甲烷溶解后的HPβCD-Lev溶液用0.22μm滤膜抽滤，因为Lev可以溶于三氯甲烷，而HPβCD在三氯甲烷中不溶，因此抽滤分别得到包合了Lev的HPβCD粘液状粉末和溶解了未被包合的Lev的三氯甲烷溶液，收集HPβCD-Lev粘液状粉末，在烘箱中充分干燥5h，取出干燥后的HPβCD-Lev粉末装入经过高压灭菌的4ml EP管，封口膜封口，锡箔纸包裹完全避光保存。
应用实施例
本实施例使用高脂喂食的ApoE-/-雄性C57BL/6小鼠作为动脉粥样硬化模式小鼠。
实验分成4个组(每组6只小鼠)，分别为：1、Control组(未经高脂喂食的正常ApoE-/-小鼠)；2、Model组(注射生理盐水的高脂喂食的ApoE-/-小鼠)；3、HPβCD-Lev组(尾静脉注射HPβCD-Lev 61.94mg/kg/2d)；4、Lev组(尾静脉注射Lev 61.94mg/kg/2d)，其中第2、3、4组在高脂喂食的同时持续用药12周。对各组实验小鼠进行检测分析如下。
(1)血脂检测
在用药12周后，取小鼠血液样本(取样前应让小鼠禁食12小时)；然后在3000rpm转速下离心10min获取血清样本；再用全自动生化分析仪(Beckman Coulter AU480)测量血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)的含量。
结果显示如下表1，与未经高脂喂食的正常ApoE-/-小鼠比较，高脂喂食的ApoE-/-小鼠的TG、TC、LDL-C与HDL-C水平均显著升高，表明经过高脂喂食后小鼠血脂升高，预示造模初步成功。经HPβCD-Lev、Lev用药后，TC和LDL-C水平显著下降(与高脂喂食的ApoE-/-小鼠相比呈现显著性差异)。这个结果反映了HPβCD-Lev、Lev都具有抑制血脂升高的功效，间接反映其抗动脉粥样硬化的潜能。
表1.HPβCD-Lev、Lev尾静脉给药后小鼠血脂含量
显著性差异：▲▲▲，P＜0.001，将Model与Control组比较；＊＊，p＜0.01，将HPβCD-Lev与Model组比较；##，p＜0.01，将Lev与Model组比。
(2)全长主动脉的内壁脂滴/斑块定量检测
用药12周后，取小鼠的全长主动脉(从主动脉跟部至腹主动脉，至分髂处)，用4％多聚甲醛固定3h；小心剔除周边的脂肪组织，纵向剖开；用油红O在异丙醇中室温下染色0.5h；用60％的异丙醇清洗2-3次后，将剖开的动脉血管内侧朝上地铺在载玻片上，覆盖上盖玻片使血管充分展开、拍照，斑块呈鲜红色，之后进行定量分析。
胸主动脉被纵向切开、暴露出血管内侧，斑块用油红O染色(红色)如图1所示，对斑块进行定量分析，结果如图2所示，(＊＊，P＜0.01将Model组与Control组比较；##，P＜0.01将HPβCD-Lev组与Model组比较；#，P＜0.05将Lev组与Model组比较)。
从图2中可以明显看出，未经高脂喂食的正常ApoE-/-小鼠的胸主动脉几乎没有动脉粥样硬化斑，而高脂喂食的ApoE-/-小鼠的胸主动脉上有大量的红色斑块(即油红O着色的动脉粥样硬化斑块)，定量比较呈显著性差异，说明小鼠的动脉粥样硬化模型成功构建。经HPβCD-Lev、Lev给药后，红色斑块面积与Model组相比呈现显著性差异，证明LEV具有抗动脉粥样硬化的效用。
(3)主动脉瓣部位动脉粥样硬化斑块的成像与定量
用药12周后，取小鼠的连接着主动脉弓的心脏，快速冰冻，用OCT组织冰冻剂包埋；使用冷冻切片机(Leica CM1520)切取8μm厚度的连续切片；用95％乙醇固定15min；用油红O和苏木精按常规方法染色后拍照和分析。
图3中(A-D)为各实验组病理切片的成像展示图；图4中(E)为斑块的定量分析(＊＊*，P＜0.001将Model与Control组比较；##，p＜0.01，将HPβCD-Lev、Lev组与Model组比较)。
从图3和图4可以明显看出，未经高脂喂食的正常ApoE-/-小鼠的主动脉瓣的血管内侧只有非常小的动脉粥样硬化斑块，而高脂喂食的ApoE-/-小鼠的主动脉根的血管内侧有很厚的红色斑块(即油红O着色的动脉粥样硬化斑块)，定量比较呈现显著性差异，再次说明小鼠的动脉粥样硬化模型成功构建。经HPβCD-Lev、Lev给药后，红色斑块厚度和面积与Model组相比呈现显著性差异，进一步证明HPβCD-Lev、Lev具有抗动脉粥样硬化的效用。
以上所述仅表达了本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形、改进及替代，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。