一种9,10二氢菲类化合物在制备冠状病毒3cl蛋白酶抑制剂中的应用
阅读说明：本技术 一种9,10二氢菲类化合物在制备冠状病毒3cl蛋白酶抑制剂中的应用 (Application of 9, 10-dihydrophenanthrene compound in preparation of coronavirus 3CL protease inhibitor ) 是由 田平 葛广波 高顶顶 张建伟 熊媛 王风 朱广灏 林国强 于 2021-10-11 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种9,10二氢菲类化合物在制备冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂中的应用。本发明所述的9,10二氢菲类化合物对冠状病毒3CL蛋白酶具有良好的抑制作用,其中,具有式I所示结构的9,10二氢菲类化合物的IC-(50)值在1-70μM范围内；特别地,具有式II-C所示结构的9,10二氢菲类化合物的IC-(50)值可达到1.5-6μM范围内。(The invention provides an application of a 9, 10-dihydrophenanthrene compound in preparation of a coronavirus 3CL protease inhibitor. The 9, 10-dihydrophenanthrene compound has good inhibition effect on coronavirus 3CL protease, wherein the 9, 10-dihydrophenanthrene compound has the structure shown in formula I, and the structure is IC 50 The value is in the range of 1-70. mu.M; in particular, IC of 9,10 dihydrophenanthrenes having the structure shown in formula II-C 50 The value can reach 1.5-6 mu M range.)
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种9,10二氢菲类化合物在制备冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂中的应用。
背景技术
冠状病毒(Coronaviruses,CoVs)属于巢病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)，是一类有包膜的正链RNA(+ssRNA)病毒，在自然界中广泛存在。病毒颗粒呈球形或椭圆形，具有多形性，直径约60-220nm。冠状病毒科分为α，β，γ和δ四个属，其中β-CoVs对人类危害最严重，可以不同程度引起肺炎等下呼吸道疾病，也可影响胃肠道系统、中枢神经系统、心脏、肾脏和肝脏等，导致多器官衰竭。SARS-CoV-2是一种新型β-CoV，这种病毒已经在全球蔓延。3CL蛋白酶，也称为3CLpro或Mpro，是一种半胱氨酸蛋白酶，能够在不少于11个保守位点处理多聚蛋白前体pp1a和pp1ab。因此，它负责释放大部分非结构性功能蛋白(NSPS)，参与病毒的复制转录过程。3CLpro在病毒生命周期中的关键作用以及在人类细胞中无同源蛋白使得3CLpro成为抗SARS-CoV-2非常有吸引力的靶点。目前已经有许多以3CLpro为靶点的抑制剂被报道。
CN112574104A公开了一种用于SARS-CoV-2靶点Mpro抑制剂的乙酰胺类化合物，但是所述化合物的IC50值普遍在15-100μM之间，没有表现出对新型冠状病毒Mpro特别优异的抑制作用。
CN111773240A公开了一种海洋生物来源天然硫酸多糖在作为抗冠状病毒及所致疾病药物中的应用。该发明提供的海洋生物来源的天然硫酸多糖，不仅可以抑制冠状病毒表面的刺突蛋白(Spike)与宿主细胞结合，而且能抑制主蛋白酶(Mpro)和类木瓜蛋白酶(PLpro)活性，从而有效阻断冠状病毒感染宿主细胞；但是该发明提供的天然硫酸多糖结构复制，分离、提取制备工艺过于复杂。
综上，现在公开的SARS-CoV-2 3CLpro抑制剂存在着制备工艺复杂、活性不高的问题。因此，亟需开发一种安全、有效、制备工艺简单的冠状病毒3CLpro抑制剂。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种9,10二氢菲类化合物在制备冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂中的应用，为制备治疗新型冠状病毒和/或新型冠状病毒突变株所引起的疾病的药物提供了新策略。本发明所述的9,10二氢菲类化合物对冠状病毒3CL蛋白酶具有良好的抑制作用，其中，具有式I所示结构的9,10二氢菲类化合物的IC50值在1-70μM范围内；特别地，具有式II-C所示结构的9,10二氢菲类化合物的IC50值可达到1.5-6μM范围内。为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种9,10二氢菲类化合物在制备冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂中的应用。
在本发明所述的应用中，所述9,10二氢菲类化合物具有如下式I所示结构：
式I中，所述R1-R7各自独立地选自氢、氰基、硝基、羟基、醛基、羧基、磺酸基、酯基、酰基、砜基、卤素、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基中的任意一种；或者，R1-R7分别独立地与相邻苯环通过共价键形成饱和或不饱和的碳环或杂环；
式I中，所述R8选自取代或未取代的含氮杂环基；
式I中，所述R9选自羟基取代的烷基、酯基取代的烷基或杂原子取代的烷基中的任意一种。
其中，R1-R7分别独立地与相邻苯环通过共价键形成饱和或不饱和的碳环或杂环，指的是R1-R7中任意相邻两个取代位之间通过共价键形成并环结构；饱和或不饱和的碳环可以是烷基环、烯基环、炔基环、苯基环等等；杂环可以是吡啶环、咪唑环等。
具体地，通过共价键形成饱和或不饱和的碳环或杂环包括但不限于如下所示的结构：
在本发明中，所述R1-R7各自独立地选自取代的烷基、取代的烯基、取代的炔基、取代的烷氧基、取代的氨基、取代的杂环基或取代的芳基中的任意一种，所述烷基、烯基、炔基、烷氧基、氨基、杂环基和芳基的取代基各自独立地选自氰基、硝基、氨基、羟基、醛基、羧基、磺酸基、酯基、酰基、砜基或卤素中的任意一种。
优选地，所述R1选自氢、取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基中的任意一种，优选为未取代的C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)、卤素取代的C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)、氰基取代的C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)、未取代的C6-C12芳基(例如可以是C6芳基、C8芳基、C10芳基或C12芳基等)、卤素取代的C6-C12芳基(例如可以是C6芳基、C8芳基、C10芳基或C12芳基等)或氰基取代的C6-C12芳基中(例如可以是C6芳基、C8芳基、C10芳基或C12芳基等)的任意一种，进一步优选为未取代的C1-C3链烷基(例如可以是C1链烷基、C2链烷基或C3链烷基)、未取代的C5-C8环烷基(例如可以是C5环烷基、C6环烷基、C7环烷基或C8环烷基)、未取代的苯基、卤素取代的苯基或氰基取代的苯基中的任意一种。
优选地，所述R2、R3或R5-R7各自独立地选自氢、卤素、取代或未取代的烷基或取代或未取代的烷氧基中的任意一种，优选为氢、卤素、未取代的C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)或未取代的C1-C6烷氧基(例如可以是C1烷氧基、C2烷氧基、C3烷氧基、C4烷氧基、C5烷氧基或C6烷氧基)中的任意一种。
优选地，所述R2或R3选自氢。
优选地，所述R5选自氢、卤素、未取代的C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)或未取代的C1-C6烷氧基(例如可以是C1烷氧基、C2烷氧基、C3烷氧基、C4烷氧基、C5烷氧基或C6烷氧基)中的任意一种。
优选地，所述R6选自氢或未取代的C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)。
优选地，所述R7选自氢或未取代的C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)。
优选地，所述R4选自羟基或未取代的C1-C6烷氧基(例如可以是C1烷氧基、C2烷氧基、C3烷氧基、C4烷氧基、C5烷氧基或C6烷氧基)。
优选地，所述R8选自取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的喹啉基、取代或未取代的异喹啉基、取代或未取代的咪唑基、取代或未取代的吡咯并嘧啶基、取代或未取代的嘧啶基或取代或未取代的苯并咪唑基中的任意一种。
优选地，所述R8选自如下结构所示的含氮杂环，其中，代表取代基连接位置：
其中，Ra选自氢、C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)、C2-C6烯基(例如可以是C2烯基、C3烯基、C4烯基、C5烯基或C6烯基)、氰基、卤素、C1-C6烷氧基(例如可以是C1烷氧基、C2烷氧基、C3烷氧基、C4烷氧基、C5烷氧基或C6烷氧基)、C1-C6酰基(例如可以是C1酰基、C2酰基、C3酰基、C4酰基、C5酰基或C6酰基)、C1-C6磺酰基(例如可以是C1磺酰基、C2磺酰基、C3磺酰基、C4磺酰基、C5磺酰基或C6磺酰基)、C6-C12芳基(例如可以是C6芳基、C8芳基、C10芳基或C12芳基等)、烷基取代的氨基、芳基取代的氨基或C3-C6含氮杂环基(例如可以是C3含氮杂环基、C4含氮杂环基、C5含氮杂环基或C6含氮杂环基)中的任意一种。
优选地，所述R9选自酯基取代的C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)或羟基取代的C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)，优选为如下所示的结构，其中，代表取代基连接位置：
在本发明中，所述9,10二氢菲类化合物选自如下A1-A28中的任意一种：
在本发明中，所述9,10二氢菲类化合物具有如下式II所示的结构：
其中，R10为卤素，R11为氢或未取代的C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)中的任意一种，R12为氢或未取代的C1-C6酰基(例如可以是C1酰基、C2酰基、C3酰基、C4酰基、C5酰基或C6酰基)中的任意一种，R13为氰基、卤素、烷基取代的氨基、芳基取代的氨基、未取代的C1-C6烷基(例如可以是C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基)、未取代的C1-C6酰基(例如可以是C1酰基、C2酰基、C3酰基、C4酰基、C5酰基或C6酰基)、未取代的C1-C6磺酰基(例如可以是C1磺酰基、C2磺酰基、C3磺酰基、C4磺酰基、C5磺酰基或C6磺酰基)、未取代的C6-C12芳基(例如可以是C6芳基、C8芳基、C10芳基或C12芳基等)或C3-C6含氮杂环基(例如可以是C3含氮杂环基、C4含氮杂环基、C4含氮杂环基或C6含氮杂环基)中的任意一种。
优选地，所述9,10二氢菲类化合物具有如下II-B或II-C所示结构：
优选地，所述II-B选自如下B1-B20中的任意一种:
优选地，所述II-C选自如下C1-C7中的任意一种：
第二方面，本发明提供一种9,10二氢菲类化合物在制备治疗新型冠状病毒和/或新型冠状病毒突变株所引起的疾病的药物上的应用。
在本发明中，所述3CL蛋白酶抑制剂还包括药学上可接受的辅料。
在本发明中，所述药学上可接受的辅料包括维生素C、山梨醇、甘露醇、木糖醇、果糖、氨基酸、葡甲胺、糊精、硬脂酸镁或蔗糖中的任意一种或至少两种的组合。
在本发明中，所述3CL蛋白酶抑制剂的剂型包括注射制剂、口服制剂或冻干粉针剂中的任意一种。
在本发明中，所述3CL蛋白酶抑制剂的剂型为口服制剂，所述口服制剂包括片剂、散剂、胶囊剂或颗粒剂中的任意一种。
在本发明中，所述3CL蛋白酶抑制剂还包括药学上可接受的赋形剂。
优选地，所述药学上可接受的赋形剂包括载体、溶剂、乳化剂、分散剂、润湿剂、粘合剂、稳定剂或着色剂中的任意一种或至少两种的组合。
术语说明
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
术语“取代或未取代”代表该结构中的氢被所述取代基取代或该氢未被取代基取代。除非另有说明，任选取代的基团可以在该基团每一个可取代的位置上具有取代基，或者在结构中的多于一个(至该被取代的结构上取代位占满)位置可以被取代。
在本发明中，所述特定基团之前的“C1-C6”、“C6-C12”等表示基团中所含碳原子个数，例如“C1-C6”表示碳原子数可以为1、2、3、4、5或6的基团，“C6-C12”表示碳原子数可以为6、7、8、9、10、11或12的基团等等，以此类推。
基团定义
术语“烷基”表示饱和的链烷基或环烷基。
术语“链烷基”表示饱和的直链烷基或支链烷基，例如可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、特丁基、正戊基、异戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。
术语“环烷基”表示含有3个以上碳原子的饱和单环烃环基，例如可以是(环丙基)、(环丁基)或(环戊基)等，其中，代表取代基连接位置。
术语“烷氧基”表示烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，例如可以是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、特丁氧基等。
术语“卤素”表示F、Cl、Br或I。
术语“芳基”表示具有芳香性的碳环体系，所述芳基指含有芳香性的单环、双环和三环的碳环体系，例如可以是苯基、萘基和蒽基等。
术语“烯基”表示含有碳碳双键的不饱和烃基基团，例如可以是乙烯基、丙烯基、烯丙基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、正戊烯基、异戊烯基、正己烯基、异己烯基等。
术语“杂环基”表示含有杂原子的杂环烷基或杂环芳基，所述杂环烷基可以为氮杂环烷基、氧杂环烷基或硫杂环烷基，例如可以是四氢呋喃基、六氢吡啶基、二噁烷基、二噻烷基、四氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基等；所述杂环芳基可以为氮杂环芳基、氧杂环芳基或硫杂环芳基，例如可以是呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、喹啉基、嘌呤基、异喹啉基、苯并咪唑基、吡咯并嘧啶基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、哒嗪基、苯丙呋喃基、苯并噻唑基等。
术语“酰基”表示具有结构的基团；其中，代表取代基连接位置，除非另外限制，在本发明中，所述R’指具有1至20个碳原子的烷基或芳基。
术语“磺酰基”表示具有结构的基团；其中，代表取代基连接位置，除非另外限制，在本发明中，所述R”指具有1至20个碳原子的烷基或芳基。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明首次将9,10二氢菲类化合物应用在制备冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂中，为制备治疗新型冠状病毒和/或新型冠状病毒突变株所引起的疾病的药物提供了新策略。
(2)本发明所述的9,10二氢菲类化合物对冠状病毒3CL蛋白酶具有良好的抑制作用，其中，具有式I所示结构的9,10二氢菲类化合物的IC50值在1-70μM范围内；特别地，具有式II-C所示结构的9,10二氢菲类化合物的IC50值可达到1.5-6μM范围内。
附图说明
图1为B1-B20对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用示意图。
图2为C1-C7对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用示意图。
图3为C1对SARS-CoV-2 3CLpro的剂量抑制曲线图。
图4为C1对SARS-CoV-2 3CLpro抑制作用的Lineweaver-Burk图。
图5为C2对SARS-CoV-2 3CLpro的剂量抑制曲线图。
图6为C2对SARS-CoV-2 3CLpro抑制作用的Lineweaver-Burk图。
图7为C1和C2在人肝微粒体I期代谢系统中的代谢稳定性测试图。
图8为C1和C2在人肝微粒体II期代谢系统中的代谢稳定性测试图。
图9为化合物C1与SARS-CoV-2 3CLpro蛋白的二聚体交界面分子对接图。
图10为化合物C1与SARS-CoV-2 3CLpro蛋白的底物结合区域分子对接图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
以下实施例中仪器和试剂的来源如下所示：
化合物A1-A4、A6-A28和化合物B1的制备方法已经由CN111303017A公开，不再赘述。
制备例1
(8-环己基-5-羟基-1-(4-苯基吡啶-2-基)-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(A5)的制备
第一步2,4-二苯基吡啶(2a)的合成:在氮气保护下，将苯基硼酸(2a)(146mg,1.2mmol)、2-溴-4-苯基吡啶(3a)(234mg,1.0mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(3.5mg,0.5mol％)、K2CO3(387mg,2.8mmol)和DME/H2O(6mL,VDME:VH2O＝3:1)混合；将混合物在80℃搅拌约14小时，TLC监测反应完成。冷却至室温后，混合物用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤有机相，然后用无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩，硅胶柱层析得到无色油状液体，收率57.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.71(d,J＝5.1Hz,1H),8.04(d,J＝7.5Hz,2H),7.90(s,1H),7.65(d,J＝7.5Hz,2H),7.49–7.45(m,4H),7.43(d,J＝7.4Hz,1H),7.40(d,J＝6.8Hz,2H).ESI-HRMS[M+H]+calcd for C17H14N:232.1121,found:232.1131.
第二步化合物A5的合成：在氮气保护下，将化合物3a(0.4mmol)、化合物4a(60mg,0.2mmol)、[Cp*RhCl2]2(8mg,5mol％)、NaBArF4(55mg,24mol％)在CH3COOH(1.0mL)混合，将混合物100℃搅拌8小时，并通过TLC监测反应完成。冷却至室温后，加入NaHCO3水溶液调节PH至弱碱性。混合物用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机层，有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。柱层析分离得到白色固体，收率45.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.79(d,J＝5.2Hz,1H),8.16(d,J＝7.7Hz,1H),7.71(d,J＝7.2Hz,2H),7.67(d,J＝1.0Hz,1H),7.56(dd,J＝5.2,1.8Hz,1H),7.56(dd,J＝5.2,1.8Hz,1H),7.51(t,J＝7.4Hz,2H),7.47(d,J＝7.2Hz,1H),7.32(dd,J＝7.5,0.8Hz,1H),7.24(d,J＝7.7Hz,1H),7.00(d,J＝8.6Hz,1H),6.74(d,J＝8.5Hz,1H),3.87(dd,J＝10.8,5.7Hz,1H),3.48(t,J＝10.5Hz,1H),3.43–3.37(m,1H),2.92(dd,J＝15.5,2.0Hz,1H),2.78–2.69(m,2H),1.86–1.67(m,8H),1.57–1.51(m,1H),1.44–1.33(m,2H),1.29–1.22(m,2H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.78,160.42,151.69,149.05,148.99,139.79,137.99,137.05,135.64,133.24,132.79,129.31,129.23,128.08,128.01,127.10,126.07,125.92,122.61,121.71,119.87,116.46,63.65,38.97,35.90,33.62,33.08,28.15,27.10,26.25,20.51.ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C34H34NO3:504.2533,found:504.2540.
制备例2
(8-(4-溴苯基)-5-羟基-1-(4-苯基吡啶-2-基)-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B2)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
化合物B2为白色固体，收率68.5％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.78(d,J＝5.3Hz,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.70(d,J＝7.2Hz,2H),7.63(s,1H),7.58(dd,J＝5.3,1.6Hz,1H),7.52–7.45(m,6H),7.24(d,J＝7.7Hz,1H),7.11(d,J＝8.3Hz,2H),6.86(d,J＝8.3Hz,1H),6.71(d,J＝8.3Hz,1H),3.65(dd,J＝10.8,5.6Hz,1H),3.49(t,J＝10.5Hz,1H),3.13–3.09(m,1H),2.88(dd,J＝15.6,4.5Hz,1H),2.77(dd,J＝15.6,2.2Hz,1H),1.50(s,3H).13CNMR(150MHz,CDCl3)δ170.42,153.43,148.86,140.48,137.81,136.27,133.13,132.78,132.44,131.23,131.19,129.71,129.42,129.26,128.48,128.09,127.07,125.91,122.56,121.89,120.97,120.01,118.12,116.25,63.46,34.14,28.30,20.42.ESI-HRMS[M+H]+calcd for C34H27BrNO3:576.1169,found:576.1186.
制备例3
(8-(4-溴苯基)-5-羟基-1-(4-甲基吡啶-2-基)-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B3)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体4-甲基-2-苯基吡啶(2b)为白色固体，收率42.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.55(d,J＝5.0Hz,1H),7.97(d,J＝7.4Hz,2H),7.55(s,1H),7.47(t,J＝7.6Hz,2H),7.40(t,J＝7.3Hz,1H),7.06(d,J＝4.9Hz,1H),2.42(s,3H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd forC12H12N:170.0964,found:170.0965.
化合物B3为白色固体，收率40.9％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),8.56(d,J＝5.0Hz,1H),8.49(d,J＝7.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(t,J＝7.7Hz,1H),7.37(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.35(s,1H),7.33(d,J＝8.4Hz,2H),7.26(d,J＝5.0Hz,1H),7.04(q,J＝8.4Hz,2H),3.54(dd,J＝10.8,6.2Hz,1H),3.44(t,J＝10.2Hz,1H),3.24–3.19(m,1H),2.92-2.84(m,2H),2.43(s,3H),1.64(s,3H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ170.00,159.24,155.01,149.13,147.43,140.93,140.65,136.57,133.26,132.51,132.13,131.62,131.49,130.28,128.80,128.60,125.96,125.36,123.26,121.12,120.61,115.99,63.25,33.82,28.25,21.00,20.60.ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C29H25BrNO3:514.1012,found:514.1020.
制备例4
(8-(4-溴苯基)-1-(4-氯吡啶-2-基)-5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B4)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体4-氯-2-苯基吡啶(2c)为无色油状液体，收率54.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.57(d,J＝5.1Hz,1H),7.96(d,J＝7.3Hz,2H),7.72(s,1H),7.49–7.42(m,3H),7.23(d,J＝3.6Hz,1H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C11H9ClN:190.0418,found:190.0421.
化合物B4为白色固体，收率27.3％。1H NMR(600MHz,Acetone-d6)δ9.03(s,1H),8.66(d,J＝5.4Hz,1H),8.59(dd,J＝5.4,3.8Hz,1H),7.62(d,J＝8.3Hz,2H),7.60(d,J＝1.8Hz,1H),7.48(dd,J＝5.3,1.9Hz,1H),7.42(d,J＝1.8Hz,1H),7.41(s,1H),7.33(d,J＝8.3Hz,2H),7.06(q,J＝8.3Hz,2H),3.65(dd,J＝10.9,5.8Hz,1H),3.52(t,J＝10.5Hz,1H),3.31–3.26(m,1H),2.98(dd,J＝15.7,2.3Hz,1H),2.91–2.88(m,1H),1.66(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.42,153.43,140.48,137.81,137.73,136.27,136.23,133.13,132.78,132.44,132.33,131.19,129.71,129.26,128.48,127.07,125.91,122.56,121.89,120.97,120.01,116.25,63.46,34.14,28.30,20.42.ESI-HRMS[M+H]+ calcd forC28H22BrClNO3:534.0466,found:534.0475.
制备例5
(8-(4-溴苯基)-1-(4-氰基吡啶-2-基)-5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B5)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体2-苯基异烟腈(2d)为白色固体，收率77.8％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.78(d,J＝4.3Hz,1H),7.92(dd,J＝8.1,1.4Hz,2H),7.86(s,1H),7.45–7.39(m,3H),7.37(dd,J＝4.9,1.3Hz,1H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C12H9N2:181.0760,found:181.0772.
化合物B5为白色固体，收率69.9％。1H NMR(600MHz,Acetone-d6)δ9.05(d,J＝16.6Hz,1H),8.61(dd,J＝7.4,1.4Hz,1H),8.33(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),7.78(d,J＝8.2Hz,1H),7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.46–7.42(m,2H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H),7.08–7.02(m,2H),3.64(dd,J＝10.9,5.9Hz,1H),3.49(t,J＝10.4Hz,1H),3.30–3.25(m,1H),3.00(dd,J＝15.7,2.2Hz,1H),2.94(dd,J＝13.5,4.5Hz,1H),1.62(s,3H).13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ171.11,164.81,156.25,153.61,142.61,141.50,140.93,138.50,135.36,134.69,134.00,133.43,132.98,131.92,131.61,130.30,127.59,126.25,122.92,122.32,118.60,117.44,109.53,64.54,35.90,29.80,21.33.ESI-HRMS[M+Na]+ calcd for C29H21BrN2O3Na:547.0628,found:547.0635.
制备例6
(8-(4-溴苯基)-1-(4-甲酰基吡啶-2-基)--5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B6)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体2-苯基异烟醛(2e)为无色油状液体，收率95.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.02(s,1H),8.83(d,J＝4.8Hz,1H),8.02(s,1H),7.96(d,J＝7.3Hz,2H),7.52(dd,J＝4.8,1.1Hz,1H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.37(d,J＝7.2Hz,1H).ESI-HRMS[M+H]+ calcdfor C12H10NO:184.0757,found:184.0758.
化合物B6为黄色固体，收率35.8％。1H NMR(600MHz,Acetone-d6)δ10.23(s,1H),9.03(s,1H),8.97(d,J＝4.9Hz,1H),8.60(d,J＝7.7Hz,1H),7.96(s,1H),7.80(d,J＝4.8Hz,1H),7.60(d,J＝8.1Hz,2H),7.48–7.40(m,2H),7.31(d,J＝8.1Hz,2H),7.04(q,J＝8.3Hz,2H),3.64(dd,J＝10.8,5.9Hz,1H),3.51(t,J＝10.4Hz,1H),3.31–3.23(m,1H),3.00(d,J＝15.6Hz,1H),2.94–2.90(m,1H),1.57(s,3H).13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ192.34,169.32,161.24,154.49,150.52,142.34,140.88,139.77,136.73,133.43,132.75,132.16,131.65,131.17,130.01,129.30,128.48,125.69,122.84,121.30,120.48,119.83,115.63,62.80,48.89,34.15,19.49.ESI-HRMS[M+Na]+ calcd for C29H22BrNO4Na:550.0624,found:550.0631.
制备例7
(8-(4-溴苯基)-1-(4-(二甲氨基)吡啶-2-基)-5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B7)的制备
第一步N,N-二甲基-2-苯基吡啶-4-胺(2f)的合成：在氮气保护下，将苯硼酸(146mg,1.2mmol)、2-溴-N,N-二甲基吡啶-4-胺(1f)(234mg，1.0mmol)，Pd(PPh3)4(1.0mol％)、K2CO3(2.0mmol)的C2H5OH溶液混合。将混合物在75℃搅拌约15小时，TLC监测反应完成。冷却至室温后，混合物用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机层，有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，硅胶柱层析得白色固体，收率83.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.25(d,J＝6.0Hz,1H),7.89(d,J＝8.1Hz,2H),7.40(t,J＝7.5Hz,2H),7.35(d,J＝7.2Hz,1H),6.81(s,1H),6.38(d,J＝5.9Hz,1H),2.93(s,6H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C13H15N2:199.1230,found:199.1231.
第二步B7的合成，反应条件及后处理参见制备例1的第二步。白色固体，收率36.0。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.30(s,1H),8.26(d,J＝5.8Hz,1H),7.46(d,J＝7.7Hz,2H),7.09(d,J＝7.7Hz,2H),7.00(d,J＝3.7Hz,2H),6.77(s,2H),6.60(d,J＝4.4Hz,,1H),6.54(s,1H),3.60(dd,J＝10.6,5.7Hz,1H),3.46(t,J＝9.8Hz,1H),3.10(s,7H),2.88(d,J＝14.9Hz,1H),2.56(d,J＝15.1Hz,1H),1.63(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.37,155.76,155.00,141.05,135.58,133.32,132.70,131.39,131.23,131.04,129.46,127.48,125.32,121.54,120.62,116.97,107.22,105.24,64.07,39.55,33.98,29.71,28.44,20.64.ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C30H28BrN2O3:543.1278,found:543.1288.
制备例8
(8-(4-溴苯基)-5-羟基-1-(4-(吡咯烷-1-基)吡啶-2-基)-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B8)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体2-苯基-4-(吡咯烷-1-基)吡啶(2g)为白色固体，收率75.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.31(d,J＝5.9Hz,1H),7.93(d,J＝7.6Hz,2H),7.45(t,J＝7.5Hz,2H),7.40(t,J＝7.3Hz,1H),6.76(d,J＝2.0Hz,1H),6.38(dd,J＝5.9,2.1Hz,1H),3.39(t,J＝6.5Hz,4H),2.06(t,J＝6.6Hz,4H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C15H18N2:225.1386,found:225.1388.
化合物B8为白色固体，收率68.5％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.41–8.36(m,1H),8.11(d,J＝6.0Hz,1H),7.46(d,J＝8.3Hz,2H),7.09(d,J＝8.3Hz,2H),7.07(d,J＝4.1Hz,2H),7.03(d,J＝8.0Hz,1H),6.82(d,J＝8.3Hz,1H),6.55(dd,J＝6.8,2.2Hz,1H),6.43(d,J＝2.2Hz,1H),3.60(dd,J＝10.9,5.9Hz,1H),3.46(d,J＝10.5Hz,5H),3.12–3.16(m,1H),3.02(d,J＝13.6Hz,1H),2.55(d,J＝14.3Hz,1H),2.09(s,4H),1.62(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.36,154.85,153.92,140.77,135.56,133.76,132.74,131.47,131.38,131.12,130.62,130.04,127.64,126.05,120.96,120.74,116.92,107.77,105.99,64.05,48.14,33.98,28.62,25.24,20.68.ESI-HRMS[M+Na]+ calcd for C32H29BrN2O3Na:591.1254,found:591.1259.
制备例9
(8-(4-溴苯基)-5-羟基-1-(4-吗啉吡啶-2-基)-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B9)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体4-(2-苯基吡啶-4-基)吗啉(2h)为无色油状液体，收率61.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.40(d,J＝5.9Hz,1H),7.91(d,J＝7.6Hz,2H),7.45(t,J＝7.5Hz,2H),7.39(t,J＝7.3Hz,1H),7.08(d,J＝2.4Hz,1H),6.65(dd,J＝5.9,2.5Hz,1H),3.90–3.85(m,4H),3.39–3.33(m,4H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C15H17N2O:241.1335,found:241.1338.
化合物B9为白色固体，收率23.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝6.0Hz,1H),8.26(d,J＝7.8Hz,1H),7.47(d,J＝8.3Hz,2H),7.09(d,J＝8.3Hz,2H),7.05–6.98(m,2H),6.76–6.71(m,3H),6.63(d,J＝8.2Hz,1H),3.87–3.82(m,4H),3.56(dd,J＝10.8,6.0Hz,1H),3.49(t,J＝10.1Hz,1H),3.41–3.35(m,4H),3.06(s,1H),2.86(dd,J＝15.5,4.0Hz,1H),2.59(d,J＝14.1Hz,1H),1.65(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.35,156.05,154.52,141.03,135.76,132.89,131.52,131.35,131.06,129.25,127.62,125.09,121.87,120.67,116.75,108.66,106.49,66.33,64.09,46.10,34.01,28.39,20.71..ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C32H30BrN2O4:585.1383,found:585.1396.
制备例10
(8-(4-溴苯基)-5-羟基-1-(5-甲基吡啶-2-基)-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B10)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
化合物B10为白色固体，收率44.6％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.57(s,1H),8.20(t,J＝4.6Hz,1H),7.62(d,J＝7.8Hz,1H),7.48(d,J＝8.3Hz,2H),7.31(d,J＝7.9Hz,1H),7.16(d,J＝4.4Hz,2H),7.09(d,J＝8.3Hz,2H),6.82(d,J＝8.3Hz,1H),6.67(d,J＝8.3Hz,1H),3.64(dd,J＝10.9,5.9Hz,1H),3.44(t,J＝10.4Hz,1H),3.12–3.07(m,1H),2.82(dd,J＝15.5,4.5Hz,1H),2.70(dd,J＝15.5,2.0Hz,1H),2.44(s,3H),1.66(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.39,153.44,148.78,140.54,137.28,136.31,133.06,132.69,132.33,131.66,131.26,131.17,129.63,128.51,127.78,125.80,123.98,121.91,120.92,116.18,63.66,34.08,28.35,20.63,18.25.ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C29H25BrNO3:514.1012,found:514.1020.
制备例11
(8-(4-溴苯基)-1-(5-氟吡啶-2-基)-5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B11)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体4-氟-2-苯基吡啶(2j)为白色固体，收率82.9％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.46(d,J＝2.9Hz,1H),7.85(d,J＝7.4Hz,2H),7.63(dd,J＝8.7,4.3Hz,1H),7.42–7.36(m,3H),7.33(t,J＝7.3Hz,1H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C11H9FN:174.0714,found:174.0716.
化合物B11为白色固体，收率36.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.57(d,J＝2.6Hz,1H),8.21(dd,J＝6.8,2.0Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,3H),7.42(dd,J＝8.6,4.4Hz,1H),7.33–7.29(m,2H),7.13(d,J＝8.2Hz,2H),6.94(d,J＝8.3Hz,1H),6.77(d,J＝8.3Hz,1H),3.69(dd,J＝10.9,5.8Hz,1H),3.48(t,J＝10.4Hz,1H),3.17(s,1H),2.88–2.78(m,2H),1.68(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.47,155.90,153.06,140.27,139.16,137.11,136.96,136.42,133.05,132.81,131.28,131.22,129.96,128.71,128.02,126.19,125.32,123.39,123.26,121.69,121.11,115.99,63.50,34.13,28.34,20.64.ESI-HRMS[M+Na]+calcd for C28H21BrFNO3Na:540.0581,found:540.0590.
制备例12
(8-(4-溴苯基)-1-(5-氯吡啶-2-基)-5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B12)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体2k为无色油状液体，收率82.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.56(d,J＝2.4Hz,1H),7.89–7.86(m,2H),7.64(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.40(t,J＝7.5Hz,2H),7.36–7.33(m,1H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C11H9NCl:190.0418,found:190.0420.
化合物B12为白色固体，收率25.5％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.67(d,J＝2.1Hz,1H),8.22(dd,J＝6.9,1.7Hz,1H),7.76(dd,J＝8.3,2.4Hz,1H),7.51(d,J＝8.2Hz,2H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),7.34–7.29(m,2H),7.13(d,J＝8.2Hz,2H),6.94(d,J＝8.3Hz,1H),6.77(d,J＝8.3Hz,1H),6.71(s,1H),3.69(dd,J＝11.0,5.8Hz,1H),3.47(t,J＝10.4Hz,1H),3.17(s,1H),2.88–2.80(m,2H),1.68(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.44,157.72,152.96,147.78,140.21,139.07,136.45,136.17,133.04,132.84,132.79,131.27,131.19,130.64,130.01,128.67,128.11,126.28,125.12,121.61,121.11,115.96,63.47,34.11,28.36,20.64.ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C28H22BrClNO3:534.0466,found:534.0475.
制备例13
(8-(4-溴苯基)-1-(5-溴吡啶-2-基)-5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B13)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
化合物B13为黄色固体，收率20.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.77(d,J＝2.0Hz,1H),8.22(dd,J＝7.2,1.6Hz,1H),7.90(d,J＝8.3Hz,1H),7.51(d,J＝8.3Hz,2H),7.33(t,J＝8.7Hz,3H),7.14(d,J＝8.2Hz,2H),6.96(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H),6.80(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.40(s,1H),3.69(dd,J＝10.9,5.7Hz,1H),3.48(t,J＝10.4Hz,1H),3.19(s,1H),2.86(d,J＝3.3Hz,2H),1.69(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.41,157.98,152.86,150.05,140.16,138.96,136.53,133.04,132.90,132.84,131.29,131.19,130.09,128.69,128.00,127.13,126.40,125.59,121.59,121.14,119.26,115.93,63.44,34.13,28.38,20.65.ESI-HRMS[M+Na]+ calcd for C28H21Br2NO3Na:599.9780,found:599.9788.
制备例14
(8-(4-溴苯基)-1-(5-氰基吡啶-2-基)-5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B14)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体5-苯基烟腈(2m)为白色固体，收率93.4％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.94(dd,J＝2.1,0.7Hz,1H),8.04(dd,J＝7.9,1.7Hz,2H),8.01(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),7.85(dd,J＝8.3,0.8Hz,1H),7.53–7.50(m,3H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C12H9N2:181.0760,found:181.0763.
化合物B14为白色固体，收率26.9％。1H NMR(600MHz,Acetone-d6)δ9.05(s,1H),8.94(d,J＝5.0Hz,1H),8.61(d,J＝7.6Hz,1H),7.92(s,1H),7.75(dd,J＝5.0,1.3Hz,1H),7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.46–7.41(m,2H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H),7.07–7.03(m,2H),3.66(dd,J＝10.9,5.8Hz,1H),3.50(t,J＝10.4Hz,1H),3.30–3.25(m,1H),2.99–2.90(m,2H),1.63(s,3H).13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ169.34,160.87,154.52,150.32,140.84,138.93,136.66,133.50,132.80,132.15,131.65,131.18,130.09,129.62,128.50,125.88,125.76,123.30,121.16,120.50,120.35,116.61,115.65,62.78,34.13,27.89,19.55.ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C29H22BrN2O3:525.0808,found:525.0822.
制备例15
(8-(4-溴苯基)-1-(5-甲酰基吡啶-2-基)-5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B15)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体5-苯基烟醛(2n)为白色固体，收款79.1％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.16(s,1H),9.15(d,J＝1.9Hz,1H),8.26(dd,J＝8.2,2.2Hz,1H),8.11(dd,J＝8.0,1.5Hz,2H),7.93(d,J＝8.2Hz,1H),7.56–7.51(m,3H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C12H10NO:184.0757,found:184.0765.
化合物B15为白色固体，收率28.3％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.18(s,1H),9.17(s,1H),8.29–8.26(m,2H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.51(d,J＝8.0Hz,2H),7.43–7.36(m,2H),7.14(d,J＝7.9Hz,2H),6.97(d,J＝8.2Hz,1H),6.81(d,J＝8.2Hz,1H),6.40(s,1H),3.71(dd,J＝10.8,5.7Hz,1H),3.49(t,J＝10.4Hz,1H),3.19(s,1H),2.94–2.86(m,2H),1.66(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ190.36,170.36,164.75,152.84,151.49,140.07,139.26,136.54,136.09,133.25,133.04,132.98,131.32,131.17,130.20,129.67,128.87,128.75,126.51,124.86,121.46,121.20,115.96,63.40,34.11,28.51,20.62.ESI-HRMS[M+Na]+ calcd for C29H22BrNO4Na:550.0624,found:500.0632.
制备例16
(8-(4-溴苯基)-5-羟基-1-(5-(甲基磺酰基)吡啶-2-基)-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B16)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体4-(甲基磺酰基)-2-苯基吡啶(2o)为白色固体，收率99.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.20(d,J＝2.3Hz,1H),8.27(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),8.07(dd,J＝7.7,1.9Hz,2H),7.92(d,J＝8.4Hz,1H),7.55–7.50(m,3H),3.15(s,3H).ESI-HRMS[M+H]+ calcdfor C12H12NO2S:234.0583,found:234.0591.
化合物B16为白色固体，收款39.0％。1H NMR(600MHz,Acetone-d6)δ9.17(s,1H),9.04(s,1H),8.62(d,J＝7.6Hz,1H),8.40(dd,J＝8.2,2.2Hz,1H),7.81(d,J＝8.2Hz,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,2H),7.47–7.42(m,2H),7.31(d,J＝8.3Hz,2H),7.07–7.03(m,2H),3.64(dd,J＝10.9,5.9Hz,1H),3.50(t,J＝10.4Hz,1H),3.29(s,4H),3.00(d,J＝15.7Hz,1H),2.93(dd,J＝15.7,4.5Hz,1H),1.61(s,3H).13C NMR(150MHz,,Acetone-d6)δ170.29,165.03,155.44,148.65,141.80,140.11,137.69,136.53,136.50,134.52,133.92,133.17,132.61,132.15,131.08,130.72,129.51,126.75,125.50,122.11,121.48,116.63,63.79,44.73,35.06,29.01,20.54.ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C29H25BrNO5S:578.0631,found:578.0636.
制备例17
反应条件及后处理参见制备例1。
(1-(5-乙酰基吡啶-2-基)-8-(4-溴苯基)-5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B17)的制备
中间体1-(6-甲基吡啶-3-基)-乙酮(2p)为白色固体，收率75.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.26(d,J＝1.9Hz,1H),8.32(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),8.09(d,J＝7.0Hz,2H),7.87(d,J＝8.3Hz,1H),7.55–7.49(m,3H),2.69(s,3H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd forC13H12NO:198.0913,found:198.0915.
化合物B17为黄色固体，收款33.8％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.27(s,1H),8.33(d,J＝5.9Hz,1H),8.28(d,J＝6.5Hz,1H),7.56(d,J＝8.1Hz,1H),7.50(d,J＝8.3Hz,2H),7.31(q,J＝4.7Hz,2H),7.11(d,J＝8.3Hz,2H),6.91(d,J＝8.3Hz,1H),6.73(d,J＝8.3Hz,1H),3.68(dd,J＝11.0,5.8Hz,1H),3.47(t,J＝10.4Hz,1H),3.19–3.14(m,1H),2.91(dd,J＝15.6,4.5Hz,1H),2.81(d,J＝15.6Hz,1H),2.70(s,3H),1.66(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ196.40,170.45,163.70,153.22,149.11,140.25,138.99,136.36,136.08,133.06,133.04,132.62,131.27,131.19,130.55,129.95,128.88,128.57,126.18,124.46,121.53,121.09,116.04,63.53,34.05,28.46,26.82,20.65.ESI-HRMS[M+H]+ calcd forC30H25BrNO4:542.0961,found:542.0979.
制备例18
(8-(4-溴苯基)-1-(5-(二甲氨基)吡啶-2-基)-5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B18)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体N,N-二甲基-6-苯基吡啶-3-胺(2q)为白色固体，收率83.0％。1H NMR(600MHz,Acetone-d6)δ8.08(s,1H),7.91–7.84(m,2H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),7.28–7.25(m,2H),7.15(t,J＝6.6Hz,1H),7.04(dd,J＝9.6,2.3Hz,1H),2.90(s,6H).ESI-HRMS[M+H]+calcd for C13H15N2:199.1230,found:199.1231.
化合物B18为白色固体，收率48.1％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),8.18(d,J＝6.5Hz,1H),7.46(d,J＝6.5Hz,2H),7.24(s,1H),7.14–7.04(m,5H),6.75(d,J＝8.2Hz,1H),6.59(d,J＝8.2Hz,1H),3.61–3.59(m,1H),3.44(t,J＝10.2Hz,1H),3.06(s,7H),2.85(d,J＝13.0Hz,1H),2.70(d,J＝15.5Hz,1H),1.66(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.48,154.12,147.61,145.06,140.97,138.80,136.05,133.11,132.78,132.51,131.70,131.34,131.06,129.20,128.22,127.88,125.21,124.50,122.18,120.69,119.67,116.45,64.00,40.19,34.10,28.38,20.69.ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C30H28BrN2O3:543.1278,found:543.1290.
制备例19
(8-(4-溴苯基)-5-羟基-1-(5-苯基吡啶-2-基)-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B19)的制备
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体2,5-二苯基吡啶(2r)为无色油状液体，收率44.2％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.86(d,J＝2.3Hz,1H),7.97(d,J＝7.1Hz,2H),7.88(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),7.73(dd,J＝8.2,0.6Hz,1H),7.56(d,J＝7.1Hz,2H),7.42(t,J＝7.6Hz,4H),7.37–7.32(m,2H).ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C17H14N:232.1121,found:232.1172.
化合物B19为白色固体，收率43.8％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.99(s,1H),8.25(d,J＝7.7Hz,1H),8.02(d,J＝7.6Hz,1H),7.79(s,1H),7.67(d,J＝7.3Hz,2H),7.56–7.44(m,6H),7.34–7.27(m,2H),7.12(d,J＝7.5Hz,2H),6.89(d,J＝8.2Hz,1H),6.75(d,J＝8.2Hz,1H),3.71–3.65(m,1H),3.49(t,J＝10.3Hz,1H),3.16(s,1H),2.88(dd,J＝44.9,15.4Hz,2H),1.67(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.42,153.45,140.45,136.31,135.19,133.10,132.90,132.42,131.25,131.20,129.77,129.28,128.56,128.45,128.34,127.10,126.02,124.62,121.78,120.97,116.22,63.63,34.10,28.45,20.66.ESI-HRMS[M+H]+calcd for C34H27BrNO3:576.1169,found:576.1186.
制备例20
(1-(5-(苄基氨基)吡啶-2-基)-8-(4-溴苯基)-5-羟基-9,10-二氢菲-9-基)乙酸甲酯(B20)的合成
反应条件及后处理参见制备例1。
中间体N-苄基-6-苯基吡啶-3-胺(2s)为褐色油状液体，收率48.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.16(d,J＝2.8Hz,1H),7.89(d,J＝7.2Hz,2H),7.54(d,J＝8.6Hz,1H),7.42(t,J＝7.7Hz,2H),7.40–7.35(m,4H),7.33–7.29(m,2H),6.95(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),4.39(s,2H).ESI-HRMS[M+Na]+ calcd for C18H16N2Na:283.1206,found:283.1209.
化合物B20为黄色固体，收率87.0％。1H NMR(600MHz,MeOD)δ8.45(d,J＝7.9Hz,1H),7.96(d,J＝2.7Hz,1H),7.53(d,J＝8.2Hz,2H),7.38(d,J＝7.5Hz,2H),7.31(t,J＝7.7Hz,3H),7.25–7.21(m,2H),7.20–7.16(m,3H),7.07(dd,J＝8.5,2.8Hz,1H),6.96(d,J＝8.3Hz,1H),6.90(d,J＝8.3Hz,1H),4.40(d,J＝2.0Hz,2H),3.63(dd,J＝10.8,5.4Hz,1H),3.40(t,J＝10.6Hz,1H),3.17–3.12(m,1H),2.79(s,2H),1.56(s,3H).13C NMR(150MHz,MeOD)δ170.80,154.53,146.72,143.93,140.78,139.63,139.11,136.15,133.22,132.28,131.86,131.19,130.91,129.54,128.31,128.23,127.87,126.87,126.73,125.28,124.88,121.46,120.50,119.49,115.06,62.88,46.55,34.31,27.66,19.16.ESI-HRMS[M+H]+calcd for C35H30BrN2O3:605.1434,found:605.1443.
制备例21
1-(4-溴苯基)-10-(羟甲基)-8-(4-苯基吡啶-2-基)-9,10-二氢菲-4-醇(C1)的制备
合成步骤：将NaOH(1M)水溶液(3mL,3.00mmol)、CH3OH(3mL)和0.2mmol化合物B2混合搅拌2小时。然后真空除去甲醇，残留物用HCl(1M)酸化至pH≤2。然后用乙酸乙酯萃取，合并的有机溶剂用硫酸钠干燥并真空浓缩。硅胶柱层析分离得到C1白色固体，收率78.8％。1HNMR(600MHz,MeOD)δ8.59(d,J＝5.3Hz,1H),8.56(d,J＝7.8Hz,1H),7.89(s,1H),7.80(d,J＝7.3Hz,2H),7.68(dd,J＝5.3,1.6Hz,1H),7.54(d,J＝8.3Hz,2H),7.51(t,J＝7.4Hz,2H),7.46(d,J＝7.1Hz,1H),7.38(t,J＝7.7Hz,1H),7.35(d,J＝7.5Hz,1H),7.21(d,J＝8.3Hz,2H),6.95(d,J＝8.3Hz,1H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H),4.60(s,1H),3.29–3.27(m,1H),3.21(d,J＝14.3Hz,1H),3.11–3.03(m,2H),2.72(dd,J＝15.1,3.4Hz,1H).13C NMR(150MHz,MeOD)δ160.19,154.61,149.82,148.39,141.03,139.66,137.59,137.47,133.96,132.52,131.79,131.25,130.88,129.60,129.11,128.91,128.01,126.85,125.37,122.50,121.16,120.44,119.88,114.69,60.29,37.69,26.77.ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C32H25BrNO2,534.1063,found,534.1078.
制备例22
2-(8-(4-溴苯基)-5-羟基-9-(羟甲基)-9,10-二氢菲-1-基)异烟醛(C2)的制备
反应条件及后处理参见制备例21。化合物C2为无色油状液体，收率37.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.16(s,1H),8.82(d,J＝5.0Hz,1H),8.38(d,J＝7.9Hz,1H),7.96(s,1H),7.72(d,J＝5.0Hz,1H),7.51(d,J＝8.2Hz,2H),7.44(t,J＝7.8Hz,1H),7.32(d,J＝7.6Hz,1H),7.17(d,J＝8.2Hz,2H),6.99(d,J＝8.2Hz,1H),6.83(d,J＝8.2Hz,1H),6.17(s,1H),3.47–3.40(m,2H),3.27(t,J＝11.4Hz,1H),3.13–3.11(m,1H),2.55(dd,J＝14.7,3.4Hz,1H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ191.09,161.55,152.96,149.62,143.08,140.11,138.63,134.09,133.22,133.07,131.33,131.12,130.25,129.15,128.31,126.69,123.09,121.55,121.30,120.78,115.30,60.91,37.91,26.88.ESI-HRMS[M+Na]+ calcd forC27H20BrNO3Na:508.0519,found:508.0534.
制备例23
1-(4-溴苯基)-10-(羟甲基)-8-(5-甲基吡啶-2-基)菲-4-醇(C3)的制备
反应条件及后处理参见制备例21。化合物C3为白色固体，收率99.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.37(s,1H),8.28(d,J＝7.9Hz,1H),7.66(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.50(d,J＝8.2Hz,2H),7.44(d,J＝7.9Hz,1H),7.39(t,J＝7.8Hz,1H),7.25(s,1H),7.17(d,J＝8.2Hz,2H),6.97(d,J＝8.2Hz,1H),6.82(d,J＝8.2Hz,1H),6.26(s,1H),3.52(dd,J＝14.6,2.6Hz,1H),3.41(dd,J＝11.6,5.1Hz,1H),3.27(t,J＝11.4Hz,1H),3.12-3.07(m,1H),2.50(dd,J＝14.6,3.4Hz,1H),2.37(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ156.68,152.91,148.35,140.22,139.70,138.89,138.34,133.82,133.18,133.15,131.82,131.26,131.14,130.06,129.11,127.19,126.43,123.76,121.78,121.20,115.17,60.75,38.11,26.96,18.19.ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C27H23BrNO2 472.0907,Found 472.0914.
制备例24
1-(4-溴苯基)-8-(5-氟吡啶-2-基)-10-(羟甲基)-9,10-二氢菲-4-醇(C4)的制备
反应条件及后处理参见制备例21。C4为白色固体，收率83.0％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.42(d,J＝2.3Hz,1H),8.30(d,J＝7.9Hz,1H),7.60–7.53(m,2H),7.52(d,J＝8.2Hz,2H),7.41(t,J＝7.8Hz,1H),7.24(s,1H),7.16(d,J＝8.2Hz,2H),7.00(d,J＝8.2Hz,1H),6.84(d,J＝8.2Hz,1H),5.73(s,1H),3.46–3.37(m,2H),3.23(t,J＝11.4Hz,1H),3.10(dd,J＝7.0,3.8Hz,1H),2.52(dd,J＝14.7,3.4Hz,1H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ152.65,140.09,138.81,136.62,136.46,133.83,133.39,133.23,131.33,131.11,130.20,129.14,127.53,126.55,125.38,124.67,121.65,121.31,115.26,60.86,37.99,26.80.ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C26H20BrFNO2:476.0656,found:476.0667.
制备例25
1-(4-溴苯基)-8-(5-氯吡啶-2-基)-10-(羟甲基)-9,10-二氢菲-4-醇(C5)的制备
反应条件及后处理参见制备例21。C5为白色固体，收率84.4％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.52(d,J＝2.3Hz,1H),8.32(d,J＝7.9Hz,1H),7.83(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),7.50(t,J＝8.2Hz,3H),7.41(t,J＝7.8Hz,1H),7.25(d,J＝8.1Hz,1H),7.16(d,J＝8.3Hz,2H),6.99(d,J＝8.2Hz,1H),6.82(d,J＝8.3Hz,1H),6.02(s,1H),5.27(s,1H),3.45(dd,J＝14.8,2.7Hz,1H),3.39(s,1H),3.24(t,J＝11.4Hz,1H),3.13–3.09(m,1H),2.53(dd,J＝14.8,2.5Hz,1H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ157.82,152.83,147.15,140.10,138.71,138.58,137.54,133.93,133.27,133.11,131.32,131.11,130.81,130.23,129.03,127.89,126.59,125.20,121.59,121.29,115.26,60.88,37.93,26.84.ESI-HRMS[M+H]+ calcd forC26H20BrClNO2:492.0360,found:492.0373.
制备例26
6-(8-(4-溴苯基)-5-羟基-9-(羟甲基)-9,10-二氢菲-1-基)烟腈(C6)的制备
反应条件及后处理参见制备例21。C6为白色固体，收率80.0％。1H NMR(600MHz,MeOD)δ8.93(s,1H),8.58(d,J＝7.7Hz,1H),8.23(d,J＝8.1Hz,1H),7.79(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,2H),7.42–7.34(m,2H),7.21(d,J＝8.0Hz,2H),6.96(d,J＝8.3Hz,1H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H),3.25(dd,J＝10.3,4.1Hz,1H),3.09(d,J＝15.3Hz,1H),3.02(s,1H),2.97(t,J＝10.6Hz,1H),2.76(dd,J＝15.3,3.7Hz,1H).13C NMR(150MHz,MeOD)δ163.20,154.58,151.25,140.95,140.17,138.47,137.36,134.16,132.81,131.76,131.23,130.90,129.75,127.97,125.48,124.84,120.84,120.47,116.28,114.71,107.97,60.28,37.61,26.88.ESI-HRMS[M+H]+calcd for C27H20BrN2O2:483.0703,found:483.0724.
制备例27
1-(4-溴苯基)-8-(5-(二甲氨基)吡啶-2-基)-10-(羟甲基)-9,10-二氢菲-4-醇(C7)的制备
反应条件及后处理参见制备例21。化合物C7为白色固体，收率81.3％。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.21(d,J＝7.8Hz,1H),8.04(d,J＝2.9Hz,1H),7.50(d,J＝8.2Hz,2H),7.37(dd,J＝18.0,8.3Hz,2H),7.25(d,J＝7.7Hz,1H),7.17(d,J＝8.2Hz,2H),7.13(dd,J＝8.7,2.9Hz,1H),6.97(d,J＝8.2Hz,1H),6.84(d,J＝8.2Hz,1H),3.57(d,J＝14.2Hz,1H),3.40(dd,J＝11.6,5.1Hz,1H),3.26(t,J＝11.4Hz,1H),3.13–3.07(m,1H),2.99(s,6H),2.49(dd,J＝14.5,3.3Hz,1H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ152.85,144.97,140.30,139.02,133.71,133.30,133.19,131.24,131.16,129.94,129.09,126.37,124.07,121.95,121.17,115.18,60.73,40.06,38.23,27.07ESI-HRMS[M+H]+ calcd for C28H26BrN2O2:501.1172,found:501.1180.
实施例1
对SARS-CoV-2 3CLpro(冠状病毒3CL蛋白酶)的抑制作用测试
测试样本：化合物A1-A28、化合物B1-B20和化合物C1-C7
测试方法：
预孵液的配制：将2μL不同浓度的化合物溶液、10μL SARS-CoV-2 3CLpro和78μL磷酸盐缓冲液(pH＝7.4，含1mM乙二胺四乙酸)混合，得到所述预孵液。
测试步骤：将90μL预孵液加至黑色96孔板中，在37℃下预孵30min后，加入Dabcyl-KNSTLQSGLRKE-Edans(荧光底物)起始反应，于多功能酶标仪连续检测20min(激发波长为340nm，发射波长为490nm)，采集水解产物的荧光值，以双硫仑作为阳性药，每个化合物设置3次重复测试。以待测化合物浓度为横坐标，剩余酶活为纵坐标，绘制抑制曲线，由GraphPad Prism 7.0软件进行数据处理。其中剩余酶活的计算公式为：
剩余酶活(％)＝(F0-F1)/F0×100％
F0为预孵液中不加待测化合物时测得的荧光强度值，F1为预孵液中加入各待测化合物时测得的荧光强度值；使用软件计算IC50值。
A系列化合物(A1-A28)测试结果如表1所示；B系列化合物(B1-B20)的测试结果如表2所示；C系列化合物(C1-C7)的测试结果如表3所示。
表1
化合物
IC<sub>50</sub>±SD(μM)
化合物
IC<sub>50</sub>±SD(μM)
A1
61.15±3.60
A15
58.91±4.58
A2
33.06±8.58
A16
68.16±2.64
A3
29.46±1.64
A17
5.65±1.40
A4
9.06±0.34
A18
66.80±2.74
A5
6.44±0.64
A19
35.77±2.96
A6
19.32±1.92
A20
18.50±0.76
A7
11.39±0.64
A21
14.17±1.30
A8
>100
A22
11.97±0.68
A9
>100
A23
13.82±0.90
A10
>100
A24
>100
A11
85.58±2.36
A25
>100
A12
>100
A26
>100
A13
57.67±2.78
A27
>100
A14
53.81±8.49
A28
>100
表2
化合物
IC<sub>50</sub>±SD(μM)
化合物
IC<sub>50</sub>±SD(μM)
B1
8.54±0.94
B11
4.29±0.62
B2
2.46±0.14
B12
2.72±0.23
B3
9.82±1.16
B13
6.73±1.29
B4
4.79±0.22
B14
2.78±0.18
B5
10.26±0.66
B15
8.89±3.34
B6
3.32±0.25
B16
6.65±0.26
B7
10.00±0.47
B17
5.30±0.34
B8
11.23±0.70
B18
3.66±0.17
B9
7.39±0.11
B19
8.28±1.88
B10
5.25±0.24
B20
3.24±0.43
表3
由表1、表2和表3数据可知，针对SARS-CoV-2 3CLpro，A系列化合物、B系列化合物和C系列化合物的IC50值基本在1-70μM；其中A系列化合物的IC50值基本在10-100μM；B系列化合物的IC50值基本在2.7-12μM；C系列化合物的IC50值基本在1.5-6μM。
由表A可以看出，在A系列化合物中，A17对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用最强，IC50值为5.65μM，表明R8为苯基取代的吡啶，有利于提高化合物对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用；由表B可以看出，在B系列化合物中，B2、B12和B14对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用最强，IC50值为2μM左右，表明R13为苯基取代的吡啶、氯取代的吡啶或氰基取代的吡啶有助于提高化合物对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用；由表C可以看出，在C系列化合物中，化合物C1和C2对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用最强，IC50值为1.5μM左右，表明R13为苯基取代的吡啶或醛基取代的吡啶，有助于提高化合物对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用。
由图1所示，B1-B20对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用示意图，从图中可以看出，与空白对照相比，B1-B20对SARS-CoV-2 3CLpro具有明显的抑制作用，在10μM的浓度下，对于大多数化合物来说，剩余酶活均在40％以下。由图2所示，C1-C7对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用示意图，从图中可以看出，在10μM的浓度下，对于C1和C2，剩余酶活在30％左右，对SARS-CoV-2 3CLpro表现出明显的抑制作用。
实施例2
测定抑制常数Ki
测试样本：化合物C1和化合物C2
测试方法：将90μL预孵液加至黑色96孔板中，预孵液在37℃下预孵30min后，分别加入一系列不同浓度的Dabcyl-KNSTLQSGLRKE-Edans(荧光底物)起始反应，于多功能酶标仪连续检测20min(激发波长为340nm，发射波长为490nm)，采集水解产物的荧光值。以底物浓度的倒数为横坐标，水解产物荧光值的倒数为纵坐标，由GraphPad Prism 7.0软件进行数据处理，通过Lineweaver-Burk作图来确定被测物的抑制模式，Lineweaver-Burk的二次作图作图来计算相应的Ki值。
采用竞争性抑制方程(1)、非竞争性抑制方程(2)、混合抑制方程(3)拟合数据：
V＝(VmaxS)/[Km(+I/Ki)+S] (1)
V＝(VmaxS)/[(Km+S)(1+I/Ki)] (2)
V＝(VmaxS)/((Km+S)(1+I/αKi)) (3)
V是反应的速度；Ki是描述酶抑制剂亲和力的抑制常数；S和I分别为底物浓度和抑制剂浓度；Vmax为最大速度；Km是米凯利斯常数(底物浓度为0.5Vmax)。利用拟合优度参数来确定最合适的抑制动力学类型。
如图3所示C1对SARS-CoV-2 3CLpro的剂量抑制曲线图，从图中可以看出，当C1的浓度为0-20μM，化合物浓度对SARS-CoV-2 3CLpro抑制作用的影响很大，随着浓度的增大，剩余酶活急剧降低；当时当C1的浓度超过40μM，剩余酶活基本不变；如图4所示C1对SARS-CoV-23CLpro抑制作用的Lineweaver-Burk图，其中横坐标“荧光底物”为Dabcyl-KNSTLQSGLRKE-Edans；C1通过混合抑制方式，剂量依赖性地抑制SARS-CoV-23CLpro，Ki值为6.09μM。
如图5所示C2对SARS-CoV-2 3CLpro的剂量抑制曲线图从图中可以看出，当C2的浓度为0-10μM，化合物浓度对SARS-CoV-2 3CLpro抑制作用的影响很大，随着浓度的增大，剩余酶活急剧降低；当时当C2的浓度超过20μM，剩余酶活基本不变；图6为C2对SARS-CoV-23CLpro抑制作用的Lineweaver-Burk图，其中横坐标“荧光底物”为Dabcyl-KNSTLQSGLRKE-Edans，C2通过混合抑制方式，剂量依赖性地抑制SARS-CoV-23CLpro,Ki值为7.64μM。
实施例3
I相代谢(hCYPs)稳定性测试
测试样本：化合物C1和化合物C2
测试方法：将4μM待测化合物(C1和C2)分别加于1.5mL EP管中；按表4将缓冲液及各种辅因子加于EP管中，轻轻震荡混合后，于恒温混匀仪37℃预孵3分钟。以30s间隔，加入反应辅因子起始反应(NADP+)。反应进行不同时间后从孵育EP管中取样100μL置于含100μL冰乙腈溶液中，剧烈震荡终止反应。终止液在20000g(14300r/min)，4℃下离心20分钟，吸取上清液用于液相分析。
表4
其中，NADP+为烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸，G-6-P为6-磷酸葡萄糖，G-6-PDH为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，HLM为人肝微粒体。
实验结果如图7所示，相比阳性药睾酮，C1几乎不被hCYPs代谢，而C2易于被hCYPs代谢，体外半衰期为32.09min。
实施例4
II相代谢(hCYPs)稳定性测试
测试方法：将HLM与Brij 58(打孔剂)按1:1的体积比例于EP管中混合，放置冰中打孔20min。按表5所示浓度和体积分别将待测化合物、缓冲液及各种辅因子加入至1.5mL EP管中，轻轻震荡混合后，于恒温混匀仪37℃预孵3分钟。以30s间隔分别加入反应辅因子起始反应(UDPGA)。反应进行不同时间后从孵育EP管中取样100μL置于含100μL乙腈溶液中，剧烈震荡终止反应。终止液在20000g(14300r/min)，4℃下离心20分钟，吸取上清液用于液相分析。
表5
其中，UDPGA尿苷二磷酸葡萄糖醛酸，Tris-HCl为三羟甲基氨基甲烷盐酸盐。
实验结果如图8所示，相比阳性药7-羟基香豆素，C1几乎不被hUGTs代谢，而C2易于被hUGTs代谢，体外半衰期为81.88min。结合实施例3和实施例4，结果表明，C1的肝脏代谢稳定性突出，具有作为新型口服SARS-CoV-2-3CLpro抑制剂开发的巨大潜力。
实施例5
C1与SARS-CoV-2 3CLpro蛋白分子对接
对接方法：采用分子对接软件对C1与SARS-CoV-2 3CLpro蛋白的底物结合区域和二聚体交界面分别进行分子对接模拟，SARS-CoV-2 3CLpro蛋白的PDB为PBE7。
如图9所示，在二聚体交界面区域，化合物C1与SARS-CoV-2 3CLpro蛋白的Glu290可以形成1个氢键作用，距离为可以和Lys5形成一个阳离子-π作用；此外，化合物在该区域可以与Phe3、Tyr126形成疏水作用。
如图10所示，在底物结合区域，化合物C1的酚羟基作为氢键受体分别与Cys145、Gly143形成两个氢键作用，距离分别为醇羟基作为氢键供体与Gln189形成一个氢键作用，距离为此外，化合物在该区域与Leu167、Pro168形成疏水作用。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。