重楼皂苷ⅱ在制备增敏顺铂疗效药物中的应用
阅读说明：本技术 重楼皂苷ⅱ在制备增敏顺铂疗效药物中的应用 (Application of rhizoma paridis saponin II in preparing medicine with sensitization cisplatin curative effect ) 是由 高文远 满淑丽 吕盼盼 崔静霞 于 2021-09-02 设计创作，主要内容包括：本发明公开了重楼皂苷Ⅱ在制备增敏顺铂疗效药物中的应用,研究表明,在肺癌细胞株H446中,单独使用顺铂仅轻微降低细胞生存率,而顺铂联合重楼皂苷Ⅱ后使生存率大大降低。同时,通过两者多个浓度联合应用测定得到的联合指数CI低于1,表明重楼皂苷II能够增敏顺铂,提高其抗肿瘤疗效。中药重楼来源广泛,从该植物中提取分离出的重楼皂苷Ⅱ,经过比较详细的体外活性试验证明与一线化疗药顺铂合用,能有效地改善顺铂的耐药性,提高顺铂的抗肿瘤活性。(The invention discloses application of paris polyphylla saponin II in preparation of a sensitization cisplatin curative effect medicine, and researches show that in a lung cancer cell strain H446, the single use of cisplatin only slightly reduces the cell survival rate, and the cisplatin and the paris polyphylla saponin II greatly reduce the survival rate. Meanwhile, the combination index CI obtained by the combined application and determination of a plurality of concentrations of the two is lower than 1, which shows that the paris polyphylla saponin II can sensitize cisplatin and improve the anti-tumor curative effect of the cisplatin. The source of the traditional Chinese medicine rhizoma paridis is wide, and the rhizoma paridis saponin II extracted and separated from the plant is proved by a more detailed in vitro activity test to be used together with a first-line chemotherapeutic drug cis-platinum, so that the drug resistance of the cis-platinum can be effectively improved, and the anti-tumor activity of the cis-platinum is improved.)
技术领域
本发明属于肿瘤化疗增敏药物领域，涉及重楼皂苷Ⅱ的新用途，即重楼皂苷II在制备增敏顺铂疗效药物中的应用。
背景技术
顺铂是肺癌治疗不可或缺的一线化疗药物，具有独特的抗癌机制和广泛的抗癌谱，已发展成为目前临床上肺癌使用最广的化疗药物之一。顺铂是一种小分子铂化合物，通过细胞膜表面的运输通道被动运输进入细胞后，由于正常情况下胞质内氯离子浓度较水合离子低，氯离子被水取代，形成水合阳离子可与细胞核内DNA的碱基结合，形成DNA-铂三种形式的交联，造成DNA损伤，破坏核内DNA复制和转录，诱导DNA损伤产生，进而诱导细胞凋亡。顺铂临床化疗中存在的主要问题为普遍的耐药。大多数癌症最初对顺铂的治疗是有反应的，但几乎总是复发。顺铂的耐药机制主要包括胞质内顺铂药物浓度积累减少和增加DNA修复导致的抗凋亡作用等。因此，顺铂的耐药是临床化疗亟待解决的问题。
中药重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.或七叶一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara的干燥根茎，具有清热解毒，消肿止痛、凉肝定惊之功效，用于治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌打伤痛、凉风抽搐等症，现代药理作用表明该药具有止血、祛痰和抑菌、镇痛镇静、抗早孕杀灭精子、抗细胞毒等作用，在临床应用于治疗功能性子宫出血、神经性皮炎和外科炎症以及抑制肿瘤等，都有显著的疗效。
重楼所含化学成分主要有甾体皂苷类，植物蜕皮激素及黄酮类物质。其中，甾体类皂苷大多为重楼皂苷(Rhizoma Paridis Saponins，RPS)且具有广谱抗肿瘤活性，它主要包含薯蓣皂苷类和偏诺皂苷类，其中薯蓣皂苷类占其中一大部分。重楼皂苷Ⅱ属于薯蓣皂苷类，具有多种抗癌活性。例如重楼皂苷Ⅱ可以抑制T739小鼠肺癌的生长，还可以抑制HepG2细胞生长，主要通过诱导细胞发生凋亡和发生S期阻滞。重楼皂苷Ⅱ还能通过抑制血管生成和升高Bax，胞浆内细胞色素C、Caspase-3和Caspase-9的活性，从而促进卵巢癌细胞的凋亡发挥抗癌作用，同时还可以抑制NF-κB的信号通路。但重楼皂苷Ⅱ的作用机制复杂，具有很好的抗肿瘤作用而且有广泛的抗肿瘤活性，但未见重楼皂苷Ⅱ与常规化疗药顺铂联合作用是否可以提高顺铂敏感性的报道。
发明内容
本发明的发明目的是克服现有技术的不足，提供重楼皂苷Ⅱ在制备增敏顺铂疗效药物中的应用。
本发明的技术方案概述如下：
重楼皂苷Ⅱ在制备增敏顺铂疗效药物中的应用。
本发明的优点：
研究表明，在肺癌细胞株H446中，单独使用顺铂仅轻微降低细胞生存率，而顺铂联合重楼皂苷Ⅱ后使生存率大大降低。同时，通过两者多个浓度联合应用测定得到的联合指数CI低于1，表明重楼皂苷II能够增敏顺铂，提高其抗肿瘤疗效。
中药重楼来源广泛，从该植物中提取分离出的重楼皂苷Ⅱ，经过比较详细的体外活性试验证明与一线化疗药顺铂合用，能有效地改善顺铂的耐药性，提高顺铂的抗肿瘤活性。
附图说明
图1为重楼皂苷Ⅱ、顺铂单用及联合处理组的抗肿瘤活性实验结果。其中A为重楼皂苷Ⅱ的体外抗肿瘤活性；B为顺铂单用及联合组的抗肿瘤活性。
具体实施方式
重楼皂苷Ⅱ，分子式是C51H82O20，分子量是1015.18，白色结晶粉末，可溶于甲醇、DMSO等有机溶剂，也易溶于水；来源于百合科植物南重楼和北重楼Paris yunnanensisFranch的根茎。购于成都普菲德生物技术有限公司，CAS号：50773-42-7，结构式为：
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。
一抗肿瘤活性试验方法
1.体外抗肿瘤活性试验
1.1细胞株及培养
小细胞肺癌细胞系H446细胞株购于长沙优泽生物科技有限公司，为贴壁细胞，培养于含10％灭活胎牛血清，RPMI1640培养基(购于索莱宝公司，其中含有100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素)中，37℃，5％CO2培养箱及饱和湿度条件下培养，3-4天传代一次。
1.2药物抗肿瘤活性测定
(1)重楼皂苷Ⅱ抗肿瘤作用：将对数生长期H446细胞用胰酶消化后配制成浓度为3×105个/mL的细胞悬液，接种于96孔细胞培养板，每孔加200μL。在37℃、含5％CO2和饱和湿度条件培养24h后，加入终浓度分别为0.25、0.5、2、和5μmol/L的重楼皂苷II溶液(其中溶剂是DMSO)以及相应溶剂(1μLDMSO)为对照，受试药设5个剂量组，每组设8个平行孔。然后细胞于37℃继续培养24h后，每孔加用PBS(pH＝7.4)新鲜配制的0.5mg/mL MTT 100μL。继续培养4h轻轻吸掉培养基。每孔加100μL DMSO,溶解MTT甲簪颗粒，用微型振荡器振荡混匀后，于酶标仪选取570nm处测定吸光值OD，实验重复三次，取平均值。以溶剂对照处理肿瘤细胞为对照组且对照组细胞存活率设为100％，其余组由OD值计算细胞存活率，公式为：细胞存活率＝实验组OD值/对照组OD×100％。结果见图1A。
(2)重楼皂苷Ⅱ与顺铂联合用协同抗肿瘤作用：将处于对数期生长的人肺癌细胞系H446(3×105个/mL)接种至96孔细胞培养板，每孔加200μL。在37℃、含5％CO2和饱和湿度条件培养24h后加入终浓度(0.5μmol/L、1μmol/L)的重楼皂苷Ⅱ溶液，和加入不同剂量的终浓度(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L和500μmol/L)的顺铂溶液(其中溶剂是DMSO)以及相应溶剂(1μLDMSO)为对照。每一个浓度设置8个平行孔，然后细胞于37℃继续培养24h后，每孔加用PBS(pH＝7.4)新鲜配制的0.5mg/mL MTT 100μL，继续培养4h，然后，每孔加100μL DMSO，溶解MTT甲簪颗粒，用微型振荡器振荡混匀后，于酶标仪选取570nm处测定吸光值OD，实验重复三次，取平均值。所得结果如图1B所示，图1B为低浓度重楼皂苷Ⅱ与顺铂联合处理后细胞存活率的影响图。由图1B可以看出，低浓度(0.5μmol/L)重楼皂苷Ⅱ联合顺铂化学治疗时，100μmol/L、200μmol/L和300μmol/L的顺铂组的存活率分别从(96.41±0.03)降低至(56.24±0.43)，从(67.55±0.32)降低至(43.64±0.56)和从(56.65±0.43)降低至(26.65±0.73)，细胞存活率几乎都降低了一倍且联合治疗系数小于1(用CompuSyn软件得出)，表明两者联合有协同作用。因此低浓度0.5μmol/L的重楼皂苷Ⅱ可以明显提高肿瘤细胞的顺铂化学治疗疗效，增加顺铂的敏感性。
二抗肿瘤活性试验结果
见图1和表1。
表1重楼皂苷II和顺铂联合的联合指数
三结论
经实验证明，重楼皂苷Ⅱ具有较高的抗肺癌活性，且可作为顺铂化学治疗增敏剂应用于抗肿瘤。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：甜菜碱组合物及其应用