化合物kya1797k制备抗hbv病毒药物中的应用
阅读说明：本技术 化合物kya1797k制备抗hbv病毒药物中的应用 (Application of compound KYA1797K in preparation of anti-HBV (hepatitis B virus) medicines ) 是由 曾木圣 戴丹玲 文石军 钟茜 冯国开 张小勇 谢楚 于 2021-09-26 设计创作，主要内容包括：本发明公开了化合物KYA1797K制备抗HBV病毒药物中的应用,本发明发现了化合物KYA1797K的抗病毒作用,特别是抗HBV作用,实验发现小分子KYA1797K能抑制HBV在细胞水平和在小鼠体内抑制HBV的复制。该小分子可以作为治疗HBV感染及相关疾病的潜在临床试验药物,有望成为新的治疗手段,延长患者生存期,改善患者的生存质量。(The invention discloses application of a compound KYA1797K in preparation of anti-HBV drugs, discovers the anti-viral effect, particularly anti-HBV effect, of a compound KYA1797K, and finds that a small molecule KYA1797K can inhibit HBV replication at a cell level and in a mouse. The small molecule can be used as a potential clinical test medicine for treating HBV infection and related diseases, is expected to become a new treatment means, prolongs the life cycle of patients and improves the life quality of the patients.)
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及化合物KYA1797K制备抗HBV病毒药物中的应用。
背景技术
肝癌是全球癌症相关死亡的第四大原因，而乙型肝炎病毒(HBV)感染是肝癌的主要致病因素。HBV感染宿主后，肝脏会发生肝炎、肝硬化、低度发育不良结节、高度发育不良结节、早期肝癌、肝癌进展、晚期肝癌等过程，最终导致肝癌的发生。因此，寻找有效地抑制HBV复制的药物对治疗HBV相关疾病有着重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供化合物KYA1797K或其衍生物在有效抑制HBV复制中的应用。
本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一方面，提供化合物KYA1797K或其衍生物在以下(I)～(III)任一种中的应用：
(I)制备抗病毒或抑制病毒的产品；
(II)制备抑制病毒复制的产品；
(III)治疗或预防感染病毒引起的疾病的产品。
在本发明的一些实施方式中，所述衍生物包括化合物其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体、立体异构体、同位素衍生物或前药。
在本发明的一些实施方式中，所述病毒为DNA病毒。
在本发明的一些优选实施方式，所述病毒为优选为乙型肝炎病毒(HBV)。
本发明的第二方面，提供一种产品，所述产品包含化合物KYA1797K，所述产品具有如下(I)～(III)任一种所述功能：
(I)制备抗病毒或抑制病毒；
(II)制备抑制病毒复制；
(III)治疗或预防感染病毒引起的疾病。
在本发明的一些实施方式中，所述产品还包括其可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
在本发明的一些实施方式中，所述病毒为DNA病毒。
在本发明的一些优选实施方式中，所述病毒为HBV病毒。
在本发明的一些实施方式中，所述产品为试剂盒或药物。
在本发明的一些实施方式中，所述药物制成散剂、丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、膏剂、颗粒剂、合剂、栓剂、气雾剂或注射剂。
本发明第三方面，提供一种方法，其包括将KYA1797K或其衍生物与病毒接触，所述方法用于如下(I)～(III)任一种：
(I)制备抗病毒或抑制病毒；
(II)制备抑制病毒复制；
(III)治疗或预防感染病毒引起的疾病。
在本发明的一些实施方式中，所述方法不用于疾病的诊断和治疗。
在本发明的一些实施方式中，所述病毒为DNA病毒，优选为乙型肝炎病毒。
本发明的有益效果是：
本发明提供了化合物KYA1797K的抗病毒作用，主要是小分子KYA1797K能抑制HBV在细胞水平和在小鼠体内抑制HBV的复制。该小分子可以作为治疗HBV感染及相关疾病的潜在临床试验药物，有望成为新的治疗手段，延长患者生存期，改善患者的生存质量。
附图说明
图1为小分子KYA1797K抑制细胞水平HBV的复制。
图2为小分子KYA1797K能抑制小鼠体内HBV的复制。其中图2A为DNA的拷贝数；图2B为HBsAg的表达量；图2C为检测小鼠的体重。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
实施例1
HepG2细胞加入不同浓度(0.375μM、1.5μM、6μM)的小分子KYA1797K预处理细胞并瞬转HBV质粒48小时，收取细胞上清进行免疫酶联反应使用上海荣盛生物药业公司的乙型肝炎病毒e抗原检测试剂盒(Elisa)检测血清中的HBeAg抗原的表达。关键实验操作过程如下：
(1)酶联免疫法检测乙型肝炎病毒e抗原
a)实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将洗涤液作1:20稀释。
b)加待测样本：加入待测样本每孔50μl，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，均50μl，空白对照1孔。
c)加酶结合物：每孔50μl，空白对照孔不加，充分混匀，贴上胶纸，置37℃孵育30分钟。
d)洗板：弃去反应板条孔内的液体，在吸水纸上拍干，用洗涤液注满每孔，静置5秒，弃去孔内的洗涤液拍干，重复5次。
e)加显色剂：先加显色剂A，每孔50μl，再加显色剂B，每孔50μl，充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。
f)终止反应液：每孔加入终止液50μl，混匀。
g)测定：用酶标仪读数，选择波长450nm读取各孔的OD值，并在10分钟内完成读数。
结果见图1，可以看到小分子KYA1797K能浓度依赖性抑制HBV的复制，其中加入1.5μM小分子KYA1797K后能抑制50％的HBV的复制，加入6μM的小分子KYA1797K能抑制75％的HBV的复制。
实施例2
5周龄的C57BL/6雄鼠通过高压尾静脉注射pAAV-HBV1.2(μg)质粒，第十天开始腹腔注射25mg/kg的小分子，眼眶取血使用中山大学达安基因乙型肝炎病毒核酸定量测定试剂盒(PCR-荧光探针法)(货号：DA0032)检测血清中HBV的DNA的拷贝数。其中关键实验操作如下：
(1)血清HBV的DNA拷贝数的检测
a)小鼠眼球取血后，将血清常温放置2个小时，5000rpm离心10分钟。吸取上层血清，转移到1.5ml灭菌离心管。
b)取200μl样品，加入450μl的DNA提取液I和4μl的内标溶液，用振荡器剧烈振荡混匀15秒，瞬时离心数秒。100℃恒温处理10分钟。
c)配置每管PCR反应混合液：27μl的PCR反应液+3μl的Taq酶。
d)在上述反应液中分别加入提取后的待测样本核酸、HBV阴性质控品、HBV强阳性质控品、HBV临界阳性质控品和阳性定量参考品的上清各20μl。盖紧管盖，8000rpm离心数秒。
e)使用lightcycler480仪器进行PCR：
打开软件后，选择“new experiment”，设置检测模式为“multicolor hydrolysisprobe”,检测通道为FAM,VIC。设置循环条件(表1)：
表1 PCR循环条件
选择“sample editor”，设置样品的名称、类型，在“standard concentration”框中输入阳性定量参考品浓度，保存文件，运行程序。
(2)小鼠高压尾静脉注射HBV质粒
a)将5周龄小鼠固定在固定器中。
b)取2ml的PBS+6μg的pAAV HBV1.2的质粒混匀，吸入注射器中。
c)用酒精棉球擦拭小鼠尾巴，将质粒通过高压注射装置注射小鼠尾静脉中。
血清中HBV的DNA的拷贝数检测具体见图2A；免疫酶联反应检测HBsAg的表达量，具体见图2B；检测小鼠的体重，具体见图2C；可以看出在第十天开始注射小分子后，相对于对照组来说，小分子KYA1797K组处理的小鼠的HBV的DNA拷贝数更低，并且血清中的HBsAg表达量更低，说明该小分子KYA1797K能在小鼠体内显著抑制HBV的复制及表达。同时我们发现该小分子KYA1797K对小鼠的体重没有影响，说明小分子KYA1797K该治疗浓度对小鼠生长没有毒性。
上述具体实施方式对本发明作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。