一种新冠肺炎检查方法

文档序号:1958958 发布日期:2021-12-14 浏览:5次 >En<

阅读说明:本技术 一种新冠肺炎检查方法 (Method for examining neocoronal pneumonia ) 是由 许建坡 于 2021-01-12 设计创作,主要内容包括:本发明属于医疗技术领域,尤其为一种新冠肺炎检查方法,其方法包括:1)发病症状:发病症状以发热、乏力、干咳为主要表现;少数患者伴有鼻塞、流涕、咽痛和腹泻等症状;重症患者多在发病一周后出现呼吸困难或低氧血症,严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和凝血功能障碍及多器官功能衰竭。该一种新冠肺炎检查方法,该一种新冠肺炎检查方法,新冠病毒S蛋白-ODC422-461融合蛋白可以用于在DC细胞内部诱导表达,有助于DC细胞呈递肿瘤抗原,并提高体内T细胞的抗原呈递效率,激活T细胞杀伤肿瘤细胞,此外该融合蛋白可用于细胞治疗,因为该融合蛋白的半衰期很短,作为药物其毒性与副作用较小。(The invention belongs to the technical field of medical treatment, and particularly relates to a new coronary pneumonia inspection method, which comprises the following steps: 1) onset symptoms: the onset symptoms are mainly manifested by fever, hypodynamia and dry cough; a few patients are accompanied by symptoms such as nasal obstruction, watery nasal discharge, pharyngalgia, diarrhea and the like; severe patients often develop dyspnea or hypoxemia after one week of onset, and severe patients rapidly progress to acute respiratory distress syndrome, septic shock, refractory metabolic acidosis and coagulation dysfunction, and multiple organ failure. According to the new coronary pneumonia detection method, the new coronavirus S protein-ODC 422-461 fusion protein can be used for induction expression in DC cells, is beneficial to presenting tumor antigens by the DC cells, improves the antigen presentation efficiency of T cells in vivo, activates the T cells to kill the tumor cells, and can be used for cell therapy because the half-life of the fusion protein is short, and the toxicity and side effects of the fusion protein as a medicine are small.)

一种新冠肺炎检查方法

技术领域

本发明涉及医疗技术领域,具体为一种新冠肺炎检查方法。

背景技术

新型冠状病毒肺炎是一种急性感染性肺炎,其病原体是一种先前未在人类中发现的新型冠状病毒,即2019新型冠状病毒,2020年2月7日,人们决定将“新型冠状病毒感染的肺炎”,暂命名为“新型冠状病毒肺炎”,简称“新冠肺炎”,导致了大量的患者死亡,故而需要一种有效的治疗方法。

以往的肿瘤疫苗研究以通过激活患者自身免疫系统,利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应,增强机体的抗癌能力,阻止肿瘤的生长、扩散和复发,以达到清除或控制肿瘤的目的,新冠病毒S蛋白抗原作为肿瘤相关性抗原,其免疫性和抗原性存在差异,有些不能够高效刺激T细胞产生免疫反应,有些难以与T细胞结合进而不能够被有效递呈。

综上所述,现有的新冠病毒S蛋白抗原作为肿瘤相关性抗原,其免疫性和抗原性存在差异,有些不能够高效刺激T细胞产生免疫反应的缺点。针对上述问题,急需在原有医疗基础上进行创新设计。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新冠肺炎检查方法,以解决上述背景技术中提出加工气味较大,人力加工成本较高和产能较低的问题。

为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:一种新冠肺炎检查方法,包括以下步骤:

1)发病症状:发病症状以发热、乏力、干咳为主要表现;少数患者伴有鼻塞、流涕、咽痛和腹泻等症状;重症患者多在发病一周后出现呼吸困难或低氧血症,严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和凝血功能障碍及多器官功能衰竭;

2)核酸检测:新冠核酸检测首先是要采集标本,患者的肺泡灌洗液、痰液、鼻咽分泌物都可以作为检测的标本,采集标本的医务工作者必须做好个人防护,目前急诊以及发热门诊最常用的是鼻咽拭子,医护人员采用二级防护,也就是N95口罩加加面屏或者眼罩加一次性隔离衣,标本采集后必须装入密封的离心管中,在运输到实验室前也要对容器外壁做好消毒工作,标本的运送要使用专门的密封箱,检测人员在负压的实验室生物安全柜内打开样本提取核酸,从实验室收样到得出检测结果,因为各个地方的实验室条件以及标本量不同,需要24-72h才能有结果;

3)治疗:新型冠状病毒治疗的方法有以下几点:对症支持治疗,包括呼吸支持、循环支持等等,使患者能够通过吸氧,应用活血药物使相关的症状有所改善;通过心理辅导的方式进行对症治疗,通过心理疏导改善患者的焦虑、恐惧等等不良的情绪;针对于病原体进行治疗,这方面应用的药物比较少,有些药物正在开发,抗艾滋病的药物也可以适当应用,临床上对于抗病毒的药物需酌情应用;中药方剂的应用,像双黄连口服液、蓝芩口服液、蒲地蓝口服液等等,在医生的辨证下可以酌情应用;

优选的,所述冠状病毒宿主范围和组织嗜性的变化很大程度上是因为S 蛋白的多样性,S蛋白是一类很大的糖蛋白,N端(S1)和C端(S2)具有截然不同功能的结构域,一般认为S1超变区与冠状病毒的趋向性有密切关系。

优选的,所述ODC是最重要的调控多胺生物合成的关键限速酶,由此成为当前抗肿瘤药物设计新的分子靶点,研究表明,ODC在乳腺癌、大肠癌、及食管癌等恶性肿瘤中的表达及活性均高于正常肿瘤新生血管的形成组织,ODC 的过度表达能增强肿瘤细胞的侵袭性,并诱导肿瘤新生血管的形成。

优选的,所述DC细胞它是机体功能最强的专职抗原递呈细胞,它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原,未成熟DC具有较强的迁移能力,成熟DC能有效激活初始型T细胞,处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节,DC 与肿瘤的发生、发展有着密切关系,大部分实体瘤内浸润的DC数量多则患者预后好,有效的抗肿瘤免疫反应的核心是产生以CD8T细胞为主体的细胞免疫应答,这也是DC作为免疫治疗手段的基础。

优选的,所述肿瘤疫苗通常是含有肿瘤特异性抗原(TSA)或肿瘤相关抗原(TAA)的肿瘤细胞或碎片、片段,进入人体后,可激活患者自身免疫系统,诱发特异性免疫反应,克服免疫抑制状态,提高自身免疫力,是一种主动免疫治疗方法,肿瘤疫苗不良反应轻微、耐受性好,兼具预防和治疗作用,是一类很有开发前景的特异性药物。

优选的,所述慢病毒载体属于逆转录病毒科,为双链RNA结构,其基因组结构复杂,除gag、pol和env这3个和单纯逆转录病毒相似的结构基因外,还包括4个辅助基因,vif、vpr、nef、vpu和2个调节基因tat和rev,慢病毒利用不同的方法与宿主细胞染色体相互作用,不会优先整合到邻近的转录起始位点,而是整合到染色体表达基因富集的内含子区域并远离转录起始位点,慢病毒载体在基因治疗中的另一个显著优点是因其PIC入核方式不同,既能感染分裂细胞,又能感染非分裂细胞,这个特点是慢病毒独有的,从根本上扩展了能够进行基因转移的细胞范围。

优选的,所述慢病毒载体是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,具有感染谱广泛、可有效感染分裂期和静止期细胞、免疫原性低、运载基因容量大、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。

优选的,所述小鼠鸟氨酸脱羧酶C-末端的氨基酸包含一个PEST序列的降解域,这个降解域促进该蛋白的降解,使蛋白的半衰期很短,通过基因工程将含有重组新冠病毒S蛋白-ODC422-461序列通过慢病毒载体表达在巨噬细胞上,改造使巨噬细胞表达新冠病毒S蛋白-ODC422-461融合蛋白。

优选的,所述当DC细胞表达出抗原后,新冠病毒S蛋白-ODC422-461融合蛋白存在的时间与半衰期大大缩短,在DC细胞表达体系内能够诱导性瞬时表达,新冠病毒S蛋白能够迅速被降解为小的抗原片段,更易被抗原递呈细胞包括树突状细胞等摄取后加工和递呈给CD4+T细胞或CD8+T细胞,刺激其合成IL-2,增殖分化为对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用的CTL,完成对肿瘤细胞的有效杀伤,起到肿瘤疫苗的作用。

与现有技术相比,本发明的有益效果是:该一种新冠肺炎检查方法,新冠病毒S蛋白-ODC422-461融合蛋白可以用于在DC细胞内部诱导表达,有助于DC细胞呈递肿瘤抗原,并提高体内T细胞的抗原呈递效率,激活T细胞杀伤肿瘤细胞,此外该融合蛋白可用于细胞治疗,因为该融合蛋白的半衰期很短,作为药物其毒性与副作用较小,并能够与免疫细胞产生协同效应。

附图说明

图1为S-蛋白RBD结构域;

图2为2019年nCoV疫苗设计的S蛋白表位候选基因;

图3为2019年nCoV疫苗设计中M-蛋白的表位候选;

图4为2019年nCoV疫苗设计中E-蛋白的表位候选。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。

一种新冠肺炎检查方法,包括以下步骤:

1)发病症状:发病症状以发热、乏力、干咳为主要表现;少数患者伴有鼻塞、流涕、咽痛和腹泻等症状;重症患者多在发病一周后出现呼吸困难或低氧血症,严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和凝血功能障碍及多器官功能衰竭;

2)核酸检测:新冠核酸检测首先是要采集标本,患者的肺泡灌洗液、痰液、鼻咽分泌物都可以作为检测的标本,采集标本的医务工作者必须做好个人防护,目前急诊以及发热门诊最常用的是鼻咽拭子,医护人员采用二级防护,也就是N95口罩加加面屏或者眼罩加一次性隔离衣,标本采集后必须装入密封的离心管中,在运输到实验室前也要对容器外壁做好消毒工作,标本的运送要使用专门的密封箱,检测人员在负压的实验室生物安全柜内打开样本提取核酸,从实验室收样到得出检测结果,因为各个地方的实验室条件以及标本量不同,需要24-72h才能有结果;

3)治疗:新型冠状病毒治疗的方法有以下几点:对症支持治疗,包括呼吸支持、循环支持等等,使患者能够通过吸氧,应用活血药物使相关的症状有所改善;通过心理辅导的方式进行对症治疗,通过心理疏导改善患者的焦虑、恐惧等等不良的情绪;针对于病原体进行治疗,这方面应用的药物比较少,有些药物正在开发,抗艾滋病的药物也可以适当应用,临床上对于抗病毒的药物需酌情应用;中药方剂的应用,像双黄连口服液、蓝芩口服液、蒲地蓝口服液等等,在医生的辨证下可以酌情应用;

冠状病毒宿主范围和组织嗜性的变化很大程度上是因为S蛋白的多样性, S蛋白是一类很大的糖蛋白,N端(S1)和C端(S2)具有截然不同功能的结构域,一般认为S1超变区与冠状病毒的趋向性有密切关系。

ODC是最重要的调控多胺生物合成的关键限速酶,由此成为当前抗肿瘤药物设计新的分子靶点,研究表明,ODC在乳腺癌、大肠癌、及食管癌等恶性肿瘤中的表达及活性均高于正常肿瘤新生血管的形成组织,ODC的过度表达能增强肿瘤细胞的侵袭性,并诱导肿瘤新生血管的形成。

DC细胞它是机体功能最强的专职抗原递呈细胞,它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原,未成熟DC具有较强的迁移能力,成熟DC能有效激活初始型T细胞,处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节,DC与肿瘤的发生、发展有着密切关系,大部分实体瘤内浸润的DC数量多则患者预后好,有效的抗肿瘤免疫反应的核心是产生以CD8T细胞为主体的细胞免疫应答,这也是DC 作为免疫治疗手段的基础。

肿瘤疫苗通常是含有肿瘤特异性抗原(TSA)或肿瘤相关抗原(TAA)的肿瘤细胞或碎片、片段,进入人体后,可激活患者自身免疫系统,诱发特异性免疫反应,克服免疫抑制状态,提高自身免疫力,是一种主动免疫治疗方法,肿瘤疫苗不良反应轻微、耐受性好,兼具预防和治疗作用,是一类很有开发前景的特异性药物。

慢病毒载体属于逆转录病毒科,为双链RNA结构,其基因组结构复杂,除gag、pol和env这3个和单纯逆转录病毒相似的结构基因外,还包括4个辅助基因,vif、vpr、nef、vpu和2个调节基因tat和rev,慢病毒利用不同的方法与宿主细胞染色体相互作用,不会优先整合到邻近的转录起始位点,而是整合到染色体表达基因富集的内含子区域并远离转录起始位点,慢病毒载体在基因治疗中的另一个显著优点是因其PIC入核方式不同,既能感染分裂细胞,又能感染非分裂细胞,这个特点是慢病毒独有的,从根本上扩展了能够进行基因转移的细胞范围。

慢病毒载体是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,具有感染谱广泛、可有效感染分裂期和静止期细胞、免疫原性低、运载基因容量大、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。

小鼠鸟氨酸脱羧酶C-末端的氨基酸包含一个PEST序列的降解域,这个降解域促进该蛋白的降解,使蛋白的半衰期很短,通过基因工程将含有重组新冠病毒S蛋白-ODC422-461序列通过慢病毒载体表达在巨噬细胞上,改造使巨噬细胞表达新冠病毒S蛋白-ODC422-461融合蛋白。

当DC细胞表达出抗原后,新冠病毒S蛋白-ODC422-461融合蛋白存在的时间与半衰期大大缩短,在DC细胞表达体系内能够诱导性瞬时表达,新冠病毒S蛋白能够迅速被降解为小的抗原片段,更易被抗原递呈细胞包括树突状细胞等摄取后加工和递呈给CD4+T细胞或CD8+T细胞,刺激其合成IL-2,增殖分化为对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用的CTL,完成对肿瘤细胞的有效杀伤,起到肿瘤疫苗的作用。

新冠病毒S蛋白-ODC422-461重组质粒通过慢病毒载体导入iPS细胞中,令iPS定向诱导分化为DC细胞表达新冠病毒S蛋白-ODC422-461融合蛋白,并鉴定阳性,ODC422-461是一种独特的氨基酸降解域,该降解域与新冠病毒 S蛋白蛋白进行融合后能够促进该蛋白的降解,从而形成小的抗原片段,更易被免疫细胞呈递后诱发免疫应答,加速清除肿瘤。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

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