一种五气朝阳草颗粒及其标煎液干粉的一板多信息薄层鉴别方法
阅读说明：本技术 一种五气朝阳草颗粒及其标煎液干粉的一板多信息薄层鉴别方法 (One-plate multi-information thin-layer identification method for five-qi Korean-yang grass particles and standard decoction dry powder thereof ) 是由 牛丽颖 姜晓娅 张泽昭 王迎春 王鑫国 于 2021-09-23 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种五气朝阳草颗粒及标煎液干粉的一板多信息薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与五气朝阳草药材溶液,分别点于同一块薄层板上,展开后,在5种检视条件下检视到五气朝阳草颗粒及标煎液干粉的17种信息斑点,归属于约13种不同的化学成分。显色前的斑点、荧光斑点、无荧光斑点、硫酸乙醇溶液显色后的荧光斑点和呈色的斑点,不同的斑点代表不同的化学成分,不但发挥了信息斑点互补,而且方法之简便、成本之低、薄层板之少,检视条件之多,检测信息量之大,应是屈指可数的,其新颖性、创造性和实用性是显而易见的。目前还未查阅到有关五气朝阳草颗粒及标煎液干粉一板多信息薄层鉴别方法报道。(The invention relates to a one-plate multi-information thin-layer identification method for five-qi Korean-yang grass particles and standard decoction dry powder. The method is characterized in that: a test sample and a five-qi yang-rising herbal medicine solution are obtained by a simple and quick pretreatment method, are respectively spotted on the same thin-layer plate, and after being unfolded, 17 information spots of five-qi yang-rising herbal medicine particles and standard decoction dry powder are detected under 5 detection conditions and belong to about 13 different chemical components. The spots before color development, the fluorescent spots, the non-fluorescent spots, the fluorescent spots after color development of sulfuric acid ethanol solution and the colored spots, different spots represent different chemical components, not only the information spot complementation is exerted, but also the method is simple and convenient, the cost is low, the number of thin layer plates is small, the inspection condition is high, the detection information amount is large, the index can be calculated, and the novelty, the creativity and the practicability are obvious. At present, no report on a one-board multi-information thin-layer identification method of five-qi Korean-yang grass particles and standard decoction dry powder is found.)
技术领域
本发明涉及一种五气朝阳草颗粒及其标煎液干粉的一板多信息薄层鉴别方法。属于中药的薄层鉴别领域。即，采用薄层色谱鉴别，在同一块薄层板上，5种不同的检视条件下，检视到五气朝阳草颗粒及其标煎液干粉的17种信息斑点，归属于约13种不同的化学成分。
背景技术
所谓的一板多信息薄层鉴别方法，顾名思义就是在一块薄层板上，5种不同的检视条件下，检视到十多种信息斑点，且方法简便、快捷、高效，供试品溶液和对照药材溶液，不需要反复提纯处理，无有毒溶剂的蒸发、浓缩等污染环境的操作程序，多是以适宜的溶剂超声提取后，离心，上清液点样、展开、检视，即可得到多种检视条件下的多种化学成分信息斑点。
五气朝阳草也称作蓝布正，收载于中国药典2020年版一部，为蔷薇科植物路边青Geum aleppicun Jacq.或柔毛路边草Geum japonicum Thunb.var.chinenseBolle的干燥全草。具益气健脾，补血养阴，润肺化痰之功效。用于气血不足，虚痨咳嗽，脾虚带下。是一种常用的民族中药材。主含三萜类、黄酮类、鞣质类、木质素类、挥发油等化学成分。此外，还有一些脂肪酸类、酚类、糖类等。虽所含的化学成分繁多，但对其薄层鉴别研究报道的却不多，多是采用中国药典的方法，以没食子酸为检测指标，进行薄层展开，其详细鉴别方法如下：
取蓝布正(即五气朝阳草)粉末1g，加稀乙醇20ml，超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用三氯甲烷洗涤2次，每次10ml，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯，振摇提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加丙酮2ml使溶解，作为供试品溶液。另取蓝布正对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取没食子酸对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各2～3μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(5∶5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。该方法较繁琐、费时，其操作完成需要花费时间2.5小时，提取和展开溶剂130ml，最重要的是仅检测没食子酸一种成分，而且没食子酸是多种植物中的共有成分，其专属性不强。
针对民族中药配方颗粒质量检测方法的研究相对滞后，检测指标低，难以有效进行质量监督的现状，为适用患者临床应用的便捷性、安全性和有效性，首先对五气朝阳草颗粒、标煎液干粉的制备工艺进行了研究；接着又对其颗粒及标煎液干粉进行了专题薄层鉴别研究。获得了一种简便、快捷、无环境污染的一板多信息薄层鉴别方法。现就五气朝阳草药材、颗粒及标煎液干粉的制备工艺叙述如下：
五气朝阳草药材系指按中药炮制规范，将采集的五气朝阳草，除去杂质，洗净，切段，晒干或适宜温度烘干，即为五气朝阳草饮片(也称药材)。
五气朝阳草颗粒系指将五气朝阳草饮片，用水煎煮2次，每次1～2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩到适宜的相对密度，喷雾干燥，将干燥粉，加适量糊精，混合均匀，制成颗粒，即得。
五气朝阳草标煎液干粉系指将五气朝阳草饮片，用水煎煮2次，每次1～2小时，滤过，合并滤液，常温浓缩到适宜相对密度，加适量糊精，搅拌均匀，置60℃烘箱内，烘干，粉碎，即得。
发明内容
首次创建了一种五气朝阳草颗粒及标煎液干粉的一板多信息薄层鉴别方法。即，用简便、快捷的前处理方法得到供试品与五气朝阳草药材溶液，分别点于同一块薄层板上，展开后，在5种检视条件下检视到五气朝阳草颗粒及标煎液干粉的17种信息斑点，归属于约13种不同的化学成分。显色前的斑点、荧光斑点、无荧光斑点、硫酸乙醇溶液显色后的荧光斑点和呈色的斑点，不同的斑点代表不同的化学成分，不但发挥了信息斑点互补，而且方法之简便、成本之低、薄层板之少，检视条件之多，检测信息量之大，应是屈指可数的，其新颖性、创造性和实用性是不言而喻的。目前还未查阅到有关五气朝阳草颗粒及标煎液干粉一板多信息薄层鉴别方法的报道。
本发明解决其技术问题所采用的方案为：
取五气朝阳草颗粒和其标煎液干粉适量，研细，分别称取0.3g，加甲醇2ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为各自供试品溶液；另取五气朝阳草对照药材1g，加40％乙醇50ml，回流提取30分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加3ml石油醚，转动容器脱脂，弃去石油醚，挥至无醚味，残渣加95％甲醇1ml，使溶解，作为对照药材溶液；吸取供试品溶液7μl、对照药材溶液8-9μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比7∶6.3∶1.4∶0.2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的亮蓝色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的褐色主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色，置紫外灯光365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝绿色荧光主斑点；置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
本发明的原理如下：
依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用适宜的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着选用的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在薄层板上得以良好分离。借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，呈现出各自不同的颜色斑点，获得多信息的薄层色谱图。
本发明的创新点及有益效果如下：
1.首次创建了一种五气朝阳草颗粒及标煎液干粉的一板多信息薄层鉴别方法。即，用简便、快捷的前处理方法得到供试品与小红参药材溶液，分别点于同一块薄层板上，展开后，在5种检视条件下检视到五气朝阳草颗粒及标煎液干粉的17种信息斑点，归属于约13种不同的化学成分。显色前的斑点、荧光斑点、无荧光斑点、硫酸乙醇溶液显色后的荧光斑点和呈色的斑点，不同的斑点代表不同的化学成分，不但发挥了信息斑点互补，而且方法之简便、成本之低、薄层板之少，检视条件之多，检测信息量之大，应是屈指可数的，其新颖性、创造性和实用性是不言而喻的。目前还未查阅到有关五气朝阳草颗粒及标煎液干粉一板多信息薄层鉴别方法报道。
2.以体积比7∶6.3∶1.4∶0.2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸为展开剂，展开五气朝阳草颗粒及标煎液干粉，热风吹干薄层板后，在日光下检视，药材、颗粒和标煎液干粉，都呈现了1个浅灰色的主斑点，置于暗室内透过灯光检视，提升了斑点的清晰度(图1)；置紫外光灯365nm下检视，药材和样品均检视到5个荧光斑点，因叶绿素的干扰，药材有1个荧光斑点是带粉红色的，而样品的都是亮蓝色的，所以规定：与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点，限定了斑点的颜色，排除了粉红色叶绿素荧光斑点的干扰(图2)；置紫外光灯254nm下检视，药材和样品均检视到4个褐色的斑点，其中1个含量很高(图3)；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，检出了3个荧光斑点，其中2个荧光斑点是新增的，一个为亮蓝色，一个为亮绿色(图4)；再置暗室内，通过灯光检视到药材和样品的4个棕褐色斑点(图5)。至此，在同一块薄层板上，五种不同的检视条件下，共检出信息斑点17个。对比5种检视条件下的斑点大小、形状、Rf值，这些斑点归属于约13种不同的化学成分。
3.本发明的创新之处，还在于展开剂的组分、极性和分离能力都达到了预期的目标，使五气朝阳草的化学成分均匀地分布在薄层板的全区域内，其Rf值均落在0.2～0.8的范围。基本上做到了众多的成分斑点，虽然相互重叠、交叉，但在各自的检视条件下，却互补干扰，都能呈现出较清晰的斑点，做到了信息斑点互补，实现了薄层板最少，检视条件最多，检测信息量最大目标，其技术难度是常规薄层鉴别无法相比的。在不增加任何工作量和检测成本的前提下，大幅度提升了检测指标与监督力度。目前还未见相同报道，具新颖性、创造性与节约资源、提高效率、保证颗粒质量的实用性。
4.从展开剂组成与比例分析，本鉴别检视到的多种斑点系中极性的成分。
5.由于五气朝阳草所含化学成分的特殊性，为排除其叶绿素成分的干扰，采用与颗粒剂相同的水煎煮、煎煮液浓缩至干，甲醇定容的方式，即便煎煮40分钟，浓缩30分钟，也无法得到与颗粒剂相同的信息斑点，考虑可能是所含化学成分的特殊性造成。薄层鉴别的要求是：对照药材所呈现的斑点大致要与样品一致，其处理方法又尽量简便、快捷，是不能照搬需要数小时的生产工艺的。所以经多种处理方法的探讨研究，以40％乙醇回流提取，提取液挥干，石油醚脱脂，95％甲醇定容，仅需约1小时，获得了对照药材与样品的信息斑点基本一致薄层结果。
6.本申请方法与中国药典收载的方法相比，供试品溶液的制备时间短、溶剂用量少、且无有毒溶剂的浓缩与蒸干，最关键的还是：不再是以专属性差的没食子酸为指标，而是以众多的化学成分为指标，使检测信息量大幅度提升，且方法还比药典的简便、快捷、绿色环保。
附图说明
图1为五气朝阳草颗粒及标煎液干粉展开后，直接在暗室内，透过灯光检视的薄层TLC图。
图2为五气朝阳草颗粒及标煎液干粉展开后，在紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图3为五气朝阳草颗粒及标煎液干粉展开后，在紫外光灯254nm下检视的薄层TLC图。
图4为五气朝阳草颗粒及标煎液干粉展开后，喷雾硫酸乙醇溶液显色，在紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图5为五气朝阳草颗粒及标煎液干粉展开后，喷雾硫酸乙醇溶液显色，在暗室内，透过灯光检视的薄层TLC图。
图1、2、3、4、5为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.2为五气朝阳草颗粒；3、4为五气朝阳草标煎液干粉；5.6.为气朝阳草药材；
本发明
具体实施方式
取五气朝阳草颗粒和其标煎液干粉适量，研细，分别称取0.3g，加甲醇2ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为各自供试品溶液；另取五气朝阳草对照药材1g，加40％乙醇50ml，回流提取30分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加3ml石油醚，转动容器脱脂，弃去石油醚，挥至无醚味，残渣加95％甲醇1ml，使溶解，作为对照药材溶液；吸取供试品溶液7μl、对照药材溶液8-9μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比7∶6.3∶1.4∶0.2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的亮蓝色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的褐色主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色，置紫外灯光365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝绿色荧光主斑点；置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。