一种薄层色谱的构建方法和鉴定方法及其应用
阅读说明：本技术 一种薄层色谱的构建方法和鉴定方法及其应用 (Thin-layer chromatography construction method, identification method and application thereof ) 是由 张志强 董文凤 李国鹏 王冬月 高扬 付静 于 2021-08-06 设计创作，主要内容包括：本发明属于中药检测技术领域,具体提供了一种薄层色谱的构建方法和鉴定方法及其应用,该薄层色谱的构建方法包括如下步骤：猫爪草供试品溶液的制备：取猫爪草供试品、水与无机酸混合,加热水解,用有机溶剂提取,得到提取液,干燥,溶解,得到供试品溶液；对供试品溶液进行薄层色谱检测,即得供试品的薄层色谱,使用上述构建方法不仅操作步骤简便,耗时短,溶剂种类且用量少,节约成本、易于推广应用；而且供试品溶液中的多种成分很好的分离,使得薄层检测中斑点分离效果好,清晰,能够显出多个斑点,使得鉴别过程更加快速方便、鉴别结果更加准确可靠。(The invention belongs to the technical field of traditional Chinese medicine detection, and particularly provides a thin-layer chromatography construction method, an identification method and application thereof, wherein the thin-layer chromatography construction method comprises the following steps: preparing a radix ranunculi ternati test solution: mixing a radix ranunculi ternati test sample, water and inorganic acid, heating for hydrolysis, extracting with an organic solvent to obtain an extracting solution, drying, and dissolving to obtain a test sample solution; the thin-layer chromatography detection is carried out on the test solution to obtain the thin-layer chromatography of the test, and the construction method has the advantages of simple and convenient operation steps, short time consumption, small solvent types and dosage, cost saving and easy popularization and application; and the multiple components in the test solution are well separated, so that the spot separation effect in the thin-layer detection is good and clear, a plurality of spots can be displayed, the identification process is quicker and more convenient, and the identification result is more accurate and reliable.)
技术领域
本发明属于中药检测技术领域，具体涉及一种薄层色谱的构建方法和鉴定方法及其应用。
背景技术
猫爪草来源为毛莨科植物小毛莨Ranunculus ternatus Thunb.的干燥块根，具有清热解毒、软坚化痰、散结消肿、截疟等功效。猫爪草主要含有糖类、脂类、氨基酸、黄酮和苷类等成分，具有抗结核菌、抗肿瘤、镇咳、祛痰、消炎等临床应用。
目前，猫爪草的药典质量标准中薄层鉴别主要针对其中的氨基酸成分，但在猫爪草标煎冻干粉中难以检测，无法定性考察猫爪草成分在药材、饮片、水提物中的传递性；现有技术中，猫爪草也未检索出对配方颗粒的薄层鉴别方法，因而，无法评价猫爪草从药材、饮片到猫爪草标准汤剂冻干粉及猫爪草配方颗粒工艺过程是否稳定存在。
例如，杨志芬公开了一种猫爪草的鉴别方法，陈赤等公开了一种野生与野生抚育猫爪草药材的分析比较方法，上述两种方法仅能够对猫爪草药材进行鉴别，难以实现对猫爪草标准汤剂冻干粉、配方颗粒物质成分的定性鉴别。
因此，亟需建立一种能够同时应用于猫爪草药材、饮片、猫爪草标准汤剂冻干粉及猫爪草配方颗粒中猫爪草成分的定性鉴别方法，以作为猫爪草从药材、饮片到猫爪草标准汤剂冻干粉及猫爪草配方颗粒工艺过程稳定性的定性评价方法之一。
发明内容
因此，本发明的目的在于解决现有技术中的方法无法同时应用于鉴定猫爪草药材、饮片和猫爪草药物制剂中猫爪草成分的问题。
为此，本发明提供了一种薄层色谱的构建方法，包括如下步骤：
猫爪草供试品溶液的制备：取猫爪草供试品、水与无机酸混合，加热水解，用有机溶剂提取，得到提取液，干燥，溶解，得到供试品溶液；
对供试品溶液进行薄层色谱检测，即得供试品的薄层色谱。
所述薄层色谱检测包括如下步骤：
(1)取猫爪草供试品溶液在薄层板上点样；
(2)采用环己烷-乙酸乙酯-甲酸的混合液为展开剂展开，取出，溶剂挥发，显色，即得。
进一步的，采用的薄层板为硅胶G薄层板；
优选的，薄层板的长度≥10cm，更优选为10-20cm；
优选的，点样体积为1-30μl；更优选为1-4μl。
进一步的，薄层色谱检测中，采用紫外下显色或者硫酸乙醇溶液为显色剂显色。具体的，可以采用含体积百分数为10％的硫酸的乙醇溶液。
在某些优选的实施方式中，采用365nm的紫外下显色。
进一步的，所述猫爪草供试品溶液的制备中，满足如下a-g中的任意一项或者多项：
a，所述猫爪草供试品的质量与水、无机酸的体积之比为0.3-0.7：20-50：1-3，其中，若质量的单位为g，对应的体积的单位为ml。
b，所述猫爪草供试品的质量与有机溶剂的体积比为0.3-0.7：30-60，其中，若质量的单位为g，对应的体积的单位为ml。
c，加热水解的温度为90-100℃，时间为0.5-2h。
d，有机溶剂提取次数为1-5次，每次提取加入20-60倍量的有机溶剂，合并每次的提取液。
e，所述无机酸为盐酸和/或硫酸；
f，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、正丁醇和乙醚中的至少一种；
g，提取步骤之后还包括取提取液进行浓缩处理的步骤；或者，还包括取提取物干燥、溶解的步骤，优选地，溶解步骤采用的溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的至少一种。更优选地，所述猫爪草供试品的质量与溶剂的体积比为0.3-0.7：1-3，其中，若质量的单位为g，对应的体积的单位为ml。
进一步地，在猫爪草供试品溶液的制备过程中，水和无机酸可以先后与猫爪草供试品混合，也可以先混合成含无机酸的水溶液再混入猫爪草供试品。
所述猫爪草供试品选自猫爪草药材、饮片或者猫爪草药物制剂，其中猫爪草药物制剂是以猫爪草为原料药按照本领域常规技术手段，加入或者不加入药学上常规辅料制成的制剂。
优选的，所述猫爪草药物制剂选自猫爪草的固体制剂、半固体制剂或者液体制剂。
其中，固体制剂可以但不局限于片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂等；
半固体制剂可以但不局限于软膏剂、糊剂、乳膏剂等；
液体制剂可以但不局限于汤剂、合剂、口服液、注射剂、乳剂、混悬剂、纳米液体制剂等。
猫爪草的汤剂可以选择猫爪草药材或者饮片的水提液。
猫爪草药的粉剂可以选择猫爪草标准汤剂冻干粉。
本发明还提供了本发明中任一所述的构建方法得到的薄层色谱。
本发明还提供了一种鉴定猫爪草、饮片或者猫爪草药物制剂的方法，包括将待测猫爪草供试品的薄层色谱与对照药材的薄层色谱比较的步骤；
其中，所述待测猫爪草供试品的薄层色谱为使用待测猫爪草供试品并且按照本发明任一所述的构建方法得到。
优选地，所述对照药材的薄层色谱为使用猫爪草对照药材按照供试品溶液的制备方法同法制备得到，为了使对照药材溶液显色更加明显，优选地方案中，所述对照药材的薄层色谱为采用猫爪草药材与水混合经煎煮，固液分离，干燥，得到猫爪草药材提取物，然后取猫爪草药材提取物代替猫爪草供试品并且按照本发明任一所述的构建方法得到。不进行煎煮和固液分离的步骤得到的实验结果图谱不清晰，采用增大对照药材溶液浓度或者点样量的方式可以提高清晰度。
所述对照药材的薄层色谱构建中，煎煮的温度为煎煮的温度为90-150℃，时间为0.5-2h；和/或，猫爪草药材的质量与水的体积之比为0.5-3：20-100；和/或，固液分离为过滤或者离心。
本发明还提供了本发明的鉴定猫爪草药材、饮片或者猫爪草药物制剂的方法在猫爪草药材、饮片或者猫爪草药物制剂的质量检测中的应用。
本发明还提供了一种中药产品的质量检测方法，
包括将猫爪草药材、饮片或者猫爪草药物制剂按照所述的方法鉴定猫爪草药材、饮片或者猫爪草药物制剂的步骤。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的薄层色谱的构建方法，包括猫爪草供试品溶液的制备，以及对该供试品溶液进行薄层色谱检测，即得供试品的薄层色谱，供试品溶液的制备方法包括，取猫爪草供试品、水与无机酸混合，加热水解，用有机溶剂提取，即得。使用上述特定的供试品溶液的制备方法不仅操作步骤简便，耗时短，溶剂种类且用量少，易于推广应用；而且供试品溶液中的多种成分很好的分离，使得薄层检测中斑点分离效果好，清晰，能够显出多个斑点，使得鉴别过程更加快速方便、鉴别结果更加准确可靠，此外该方法能够同时应用于猫爪草药材、饮片、猫爪草标准汤剂冻干粉及猫爪草配方颗粒中猫爪草成分的定性鉴别方法，以作为猫爪草从药材、饮片到猫爪草制剂工艺过程稳定性的定性评价方法。
2.本发明提供的薄层色谱的构建方法，结合采用本发明的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，斑点分离效果更好，更加清晰，尤其是采用体积比为0.5-1.5：1：0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，在该特定体积配比下的展开剂能够应用于猫爪草药材、饮片、猫爪草标准汤剂冻干粉及猫爪草配方颗粒中猫爪草成分的定性鉴别，分离度高，斑点多且清晰不聚集，色谱信息全面，且不受无阴性干扰。
3.本发明提供的薄层色谱的构建方法，薄层色谱检测中，在薄层板上点样供试品溶液，采用的薄层板为硅胶G薄层板，价格低廉，性能好，优选的，薄层板的长度≥10cm，能够提高样品的分离度。
4.本发明提供的薄层色谱的构建方法，采用365nm的紫外下对展开后的薄层板进行显色能够使特征斑点颜色更加明显，易于待检测成分同其他成分区分，专属性强。
5.本发明提供的薄层色谱的构建方法，尤其是控制所述猫爪草供试品的质量与水、无机酸的体积之比为0.3-0.7：20-50：1-3；或者，所述猫爪草供试品的质量与有机溶剂的体积比为0.3-0.7：30-60，或者，采用加热水解的温度为90-100℃，时间为0.5-2h；使得鉴别过程更加快速方便、鉴别结果更加准确可靠。
6.本发明提供的鉴定方法，供试品色谱中，有5个与猫爪草对照药材色谱相应位置颜色相同的斑点，鉴别结果准确可靠。
附图说明
为了更清楚地说明本发明
具体实施方式
或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1的薄层色谱图；
图2为实施例2的薄层色谱图；
图3为实施例3的薄层色谱图；
图4为实施例4的薄层色谱图；
图5为实验例1点样量优化的薄层色谱图；
图6为实验例1中温度为28℃，湿度为15％的薄层色谱图；
图7为实验例1中温度为3℃，湿度为48％的薄层色谱图；
图8为实验例1中温度为28℃，湿度为79％的薄层色谱图；
图9为实验例1中Merck KGaA生产的硅胶G薄层板的薄层色谱图；
图10为实验例1中烟台市化学工业研究所硅胶G薄层板的薄层色谱图；
图11为实施例1中烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂硅胶G薄层板的薄层色谱图；
图12为不同批号的猫爪草标准汤剂冻干粉的薄层色谱图；
图13为不同批号的猫爪草配方颗粒的薄层色谱图；
图14为不同批号的猫爪草药材的薄层色谱图；
图15为实验例2的薄层色谱图；
图16为对比例1的薄层色谱图；
图17为对比例2的薄层色谱图；
图18为对比例3的薄层色谱图；
图19为对比例4的薄层色谱图。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
仪器：JY20002电子天平(梅特勒·托利多)，DZKW-4恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)硅胶G板(Merck KGaA，烟台市化学工业研究所，烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂)。
试药：猫爪草对照药材(批号：121593-201202，中国食品药品检定研究院)
猫爪草标准汤剂冻干粉：200602-464400-01、200610-453400-02、200618-461670-03、200703-458000-04、200703-458000-05、200703-456250-06、200703-473200-07、200703-474250-08、200703-473000-09、200703-475500-10、200831-458000-11、200831-458000-12、200831-456250-13、200831-473200-14、200831-474250-15、200831-473000-16、200831-475500-17、200831-454150-18。
猫爪草配方颗粒(批号：KL200602-464400-01、KL200610-453400-02、KL200618-461670-03)。
试剂：环己烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲苯、甲醇、乙醇、乙酸、甲酸、盐酸均为分析纯。
其中，猫爪草标准汤剂冻干粉和猫爪草配方颗粒可采用现有的常规方法制备，例如，本发明的，猫爪草标准汤剂冻干粉和猫爪草配方颗粒的制备方法如下：
(1)猫爪草标准汤剂冻干粉的制备：取猫爪草药材适量，煎煮2次，一煎加8倍水量(每克猫爪草药材加入8ml水)，沸腾后提取30min，二煎加6倍水量(每克猫爪草药材加入6ml水)，沸腾后提取25min，滤过，65℃滤液减压浓缩成相对密度为1.05±0.03(60℃)的纯浸膏，喷雾干燥，即得。
(2)猫爪草配方颗粒的制备：取猫爪草药材适量，煎煮2次，一煎加12倍水量(每克猫爪草药材加入12ml水)，沸腾后提取30min，二煎加6倍水量(每克猫爪草药材加入6ml水)，沸腾后提取25min，滤过，65℃滤液减压浓缩成相对密度为1.05±0.03(60℃)的纯浸膏，喷雾干燥，加饮片量10％的麦芽糊精(每克猫爪草药材加入0.1g辅料)，制粒，即得。
实施例1
本实施例提供了一种鉴别猫爪草的方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取猫爪草标准汤剂冻干粉0.5g，研细，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液的制备：取猫爪草对照药材1g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液旋干，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。
(3)薄层色谱检测：吸取上述供试品溶液2μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(1：1：0.1)为展开剂，预饱和30min，展开，取出，晾干，置紫外(365nm)下检视。
结果见图1。
其中编号1为供试品色谱；2为对照药材色谱。
比较可知，在该展开剂条件下，供试品色谱斑点与对照药材色谱相应位置显颜色相同的斑点，并且分离效果好。
实施例2
本实施例提供了一种鉴别猫爪草的方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取猫爪草标准汤剂冻干粉0.5g，研细，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液的制备：取猫爪草对照药材1g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液旋干，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。
(3)薄层色谱检测：吸取上述供试品溶液2μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(0.5：1：0.1)为展开剂，预饱和30min，展开，取出，晾干，置紫外(365nm)下检视。
结果见图2。
其中编号1为供试品色谱；2为对照药材色谱。
比较可知，在该展开剂条件下，供试品色谱斑点与对照药材色谱相应位置显颜色相同的斑点，并且分离效果好。
实施例3
本实施例提供了一种鉴别猫爪草的方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取猫爪草标准汤剂冻干粉0.5g，研细，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液的制备：取猫爪草对照药材1g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液旋干，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。
(3)薄层色谱检测：吸取上述供试品溶液2μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(1.5：1：0.1)为展开剂，预饱和30min，展开，取出，晾干，置紫外(365nm)下检视。
结果见图3。
其中编号1为供试品色谱；2为对照药材色谱。
比较可知，在该展开剂条件下，供试品色谱斑点与对照药材色谱相应位置显颜色相同的斑点，并且分离效果好。
实施例4
本实施例提供了一种鉴别猫爪草的方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取猫爪草标准汤剂冻干粉0.5g，研细，加体积为6％的盐酸水溶液30ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液的制备：取猫爪草对照药材1g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液旋干，加体积为6％的盐酸水溶液30ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。
(3)薄层色谱检测：吸取上述供试品溶液2μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(1：1：0.1)为展开剂，预饱和30min，展开，取出，晾干，置紫外(365nm)下检视。
结果见图4。
其中编号1为供试品色谱；2为对照药材色谱。
比较可知，在该展开剂条件下，供试品色谱斑点与对照药材色谱相应位置显颜色相同的斑点，并且分离效果好。
实施例5
本实施例提供了一种鉴别猫爪草的方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取猫爪草标准汤剂冻干粉0.5g，研细，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液的制备：取猫爪草对照药材1g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液旋干，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。
(3)薄层色谱检测：吸取上述供试品溶液2μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(1：1：0.1)为展开剂，预饱和30min，展开，取出，晾干，置紫外(365nm)下检视。
供试品色谱斑点与对照药材色谱相应位置显颜色相同的斑点，并且分离效果好。
实验例1方法学考察
1、点样量优化
本研究采用实施例1薄层鉴别中供试品溶液、猫爪草对照药材的制备方法及点样量要求，基于猫爪草药材与猫爪草配方颗粒化学成分的含量差异，对供试品溶液的点样量进行考察。
取猫爪草标准汤剂冻干粉(200602-464400-01、200610-453400-02、200618-461670-03)及猫爪草对照药材按照实施例1方法进行供试品溶液及对照药材溶液的制备，对点样量进行考察，猫爪草标准汤剂冻干粉的点样量分别为1μl、2μl、3μl，猫爪草对照药材点样量分别为2μl、3μl、4μl，其它薄层色谱条件同实施例1，其结果见图5。其中，编号1-3依次为猫爪草标准汤剂冻干粉(200602-464400-01)点样量1μl、2μl、3μl；编号4-6依次为猫爪草标准汤剂冻干粉(200610-453400-02)点样量依次为1μl、2μl、3μl；编号7-9依次为猫爪草标准汤剂冻干粉(200618-461670-03)点样量1μl、2μl、3μl；编号10-12依次为猫爪草对照药材点样量2μl、3μl、4μl。
从图中可以看出，当猫爪草标准汤剂冻干粉点样量为2μl、猫爪草对照药材点样量为3μl时，此点样量下薄层色谱斑点最为清晰，分离度最佳。
2、耐用性考察
按照实施例1方法分别制备猫爪草标准汤剂冻干粉供试品溶液、猫爪草对照药材溶液，点于同一硅胶G薄层板(烟台芝罘)上，按实施例1薄层条件，分别在温度为28℃，湿度为15％的条件下；温度为3℃，湿度为48％的条件下以及温度为28℃，湿度为79％的条件下展开，取出，晾干，显色，置紫外光灯(365nm)下检视，薄层色谱图见图6-8。
由以上图谱可知，在不同温湿度条件下，猫爪草标准汤剂冻干粉的分离效果都较好。实验结果表明，该薄层鉴别方法对温湿度有较好的耐用性。
3、不同薄层板的考察
薄层板商品名：薄层层析硅胶板，厂家：烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂；规格：10×20cm，型号：HSG，批号：2016年10月07日；
薄层板商品名：薄层层析硅胶板，厂家：Merck KGaA，规格：20×20cm，型号：TLCSilica gel 60，批号：HX87183353；
薄层板商品名：薄层层析硅胶板，厂家：烟台市化学工业研究所，规格：200×100mm，型号：HSG，批号：20161028。
按照实施例1方法分别制备猫爪草标准汤剂冻干粉供试品溶液、猫爪草对照药材溶液，点于上述不同厂家生产的硅胶G薄层板，按实施例1薄层条件展开，结果见图9-11所示。
由以上图谱可知，利用不同厂家生产的硅胶G薄层板(Merck KGaA、青岛海洋化工厂，烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂)对猫爪草标准汤剂冻干粉进行薄层鉴别，其色谱分离效果都较好，实验结果表明，该薄层鉴别方法对于不同厂家生产的薄层板有较好的耐用性。
4、样品测定
不同批次的猫爪草标准汤剂冻干粉、猫爪草配方颗粒及猫爪草药材按照实施例1的方法鉴别，得到薄层图，其中薄层板采用硅胶G板，厂家：烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂；规格：10×20cm，型号：HSG，批号：2016年10月07日，见图12-14。
图12中，编号1为猫爪草标准汤剂冻干粉200602-464400-01；编号2为猫爪草标准汤剂冻干粉200610-453400-02；编号3为猫爪草标准汤剂冻干粉200618-461670-03；编号4为猫爪草标准汤剂冻干粉200703-458000-04；编号5为猫爪草标准汤剂冻干粉200703-458000-05；编号6为猫爪草标准汤剂冻干粉200703-456250-06；编号7为猫爪草标准汤剂冻干粉200703-473200-07；编号8为猫爪草标准汤剂冻干粉200703-474250-08；编号9为猫爪草标准汤剂冻干粉200703-473000-09；编号10为猫爪草标准汤剂冻干粉200703-475500-10；编号11为猫爪草标准汤剂冻干粉200831-458000-11；编号12为猫爪草标准汤剂冻干粉200831-458000-12；编号13为猫爪草标准汤剂冻干粉200831-456250-13；编号14为猫爪草标准汤剂冻干粉200831-473200-14；编号15为猫爪草标准汤剂冻干粉200831-474250-15；编号16为猫爪草标准汤剂冻干粉200831-473000-16；编号17为猫爪草标准汤剂冻干粉200831-475500-17；编号18为猫爪草标准汤剂冻干粉200831-454150-18；编号19为猫爪草对照药材121593-201202。
图13中，编号1为猫爪草配方颗粒200602-464400-01；编号2为猫爪草配方颗粒200610-453400-02；编号3为猫爪草配方颗粒200618-461670-03；编号4为猫爪草对照药材121593-201202。
图14中，编号1为猫爪草药材200602-464400-01；编号2为猫爪草对照药材121593-201202。
实验例2
考察不同的无机酸、萃取剂和溶剂对薄层色谱的影响，
(1)分别采用硫酸、硝酸为无机酸，采用如下方法制备供试品溶液：取猫爪草标准汤剂冻干粉0.5g，研细，加水30ml，无机酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；
(2)分别采用乙醚、正丁醇为萃取剂，采用如下方法制备供试品溶液：取猫爪草标准汤剂冻干粉0.5g，研细，加水30ml，无机酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用萃取剂振摇提取2次，每次20ml，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；
(3)分别采用乙醇和乙酸乙酯为溶解的溶剂，采用如下方法制备供试品溶液：取猫爪草标准汤剂冻干粉0.5g，研细，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加溶剂2ml溶解，作为供试品溶液；
(4)对照药材溶液的制备：取猫爪草对照药材1g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液旋干，加体积为6％的盐酸水溶液30ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。
(5)薄层色谱检测：吸取上述供试品溶液2μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(1：1：0.1)为展开剂，预饱和30min，展开，取出，晾干，置紫外(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
图15中，编号1为硫酸提取得到的供试品溶液；2为硝酸提取的供试品溶液；3为乙醚萃取的供试品溶液；4为正丁醇萃取的供试品溶液；5为乙醇溶解的供试品溶液；6为乙酸乙酯溶解的供试品溶液；7为对照药材溶液。
从图中可以看出，硫酸提取得到的供试品溶液、乙醚萃取的供试品溶液、以及乙醇和乙酸乙酯溶解的供试品溶液得到的供试品色谱斑点与对照药材色谱相应位置显颜色相同的斑点，并且分离效果好，正丁醇萃取的供试品溶液得到的供试品色谱斑点显色稍差，硝酸提取的供试品溶液的供试品色谱斑点无法显色。
对比例1
本对比例提供了一种鉴别猫爪草及其制剂的方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：分别以猫爪草药材、猫爪草标准汤剂冻干粉、猫爪草配方颗粒为供试品按照下述操作配制供试品溶液，取供试品0.5g，研细，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液的制备：取猫爪草对照药材1g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液旋干，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。
(3)薄层色谱检测：吸取上述供试品溶液2μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(20：4：0.5)为展开剂，预饱和30min，展开，取出，晾干，置紫外(365nm)下检视。
结果见图16。
其中编号1为猫爪草药材200602-464400-01；编号2为猫爪草标准汤剂冻干粉200602-464400-01；编号3为猫爪草配方颗粒200602-464400-01；编号4为猫爪草对照药材121593-201202。
比较可知，在该展开剂条件下，薄层色谱各荧光斑点分离效果较差，拖尾较严重。
对比例2
本对比例提供了一种鉴别猫爪草及其制剂的方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：分别以猫爪草药材、猫爪草标准汤剂冻干粉、猫爪草配方颗粒为供试品按照下述操作配制供试品溶液，取供试品0.5g，研细，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液的制备：取猫爪草对照药材1g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液旋干，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。
(3)薄层色谱检测：吸取上述供试品溶液2μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯(5：2：1)为展开剂，预饱和30min，展开，取出，晾干，置紫外(365nm)下检视。
结果见图17。
其中编号1为猫爪草药材200602-464400-01；编号2为猫爪草标准汤剂冻干粉200602-464400-01；编号3为猫爪草配方颗粒200602-464400-01；编号4为猫爪草对照药材121593-201202。
比较可知，在该展开剂条件下，薄层色谱中各荧光斑点清晰度较差，斑点数目较少，呈现信息较少。
对比例3
本对比例提供了一种鉴别猫爪草配方颗粒的方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取猫爪草配方颗粒0.5g，加入醋酸乙酯10ml，加热回流30min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣各加2ml醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液，作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液的制备：取猫爪草对照药材1g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液旋干，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。
(3)薄层色谱检测：吸取上述供试品溶液2μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(1：1：0.1)为展开剂，预饱和30min，展开，取出，晾干，置紫外(365nm)下检视。
结果见图18，其中编号1为猫爪草对照药材121593-201202；编号2为猫爪草配方颗粒200602-464400-01对比例3的供试品溶液。
从图中可以看出，该制备方法得到的供试品色谱中没有分离斑点。
对比例4
本对比例提供了一种鉴别猫爪草配方颗粒的方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取猫爪草配方颗粒0.5g，加入甲醇10ml，加热回流30min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣各加2m乙醇溶解，作为供试品溶液，作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液的制备：取猫爪草对照药材1g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液旋干，加水30ml，盐酸2ml，于100℃下加热水解1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。
(3)薄层色谱检测：吸取上述供试品溶液2μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(1：1：0.1)为展开剂，预饱和30min，展开，取出，晾干，置紫外(365nm)下检视。
结果见图19，其中编号1为猫爪草对照药材121593-201202；编号2为猫爪草配方颗粒200602-464400-01对比例4的供试品溶液
从图中可以看出，该制备方法得到的供试品色谱中没有分离斑点。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
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