阅读说明：本技术 一种天然肽的医疗应用 (Medical application of natural peptide ) 是由 付宏征 于 2020-03-20 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种天然肽,按照现有常规技术提取,用于制备：治疗或者预防脑缺血性疾病药物、抗血小板聚集药物、治疗或预防脑瘫药物、治疗或预防脑卒中药物、治疗或预防脑水肿药物、治疗或预防运动功能障碍药物、治疗或预防记忆障碍、保护脑神经功能的药物。(The invention relates to a natural peptide, which is extracted according to the prior conventional technology and is used for preparing: the medicine for treating or preventing cerebral ischemic diseases, platelet aggregation resisting medicine, cerebral palsy treating or preventing medicine, cerebral apoplexy treating or preventing medicine, cerebral edema treating or preventing medicine, dyskinesia treating or preventing medicine, dysmnesia treating or preventing medicine and cranial nerve function protecting medicine.)

具体实施方式

实施例1：LPRW肽之一及其冻干粉的制备

蜈蚣原料粉的制备：挑选500克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，超微粉碎100μm，微波膨化，二氧化碳超临界萃取去除脂肪，二氧化碳超临界萃取的工艺条件是：萃取压力为25MPa，萃取温度为35℃，CO2流量20L/h，萃取2h；得到蜈蚣原料粉之一；

取蜈蚣原料粉之一100克，用蒸馏水溶解，用200目大孔树脂D101吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；真空干燥，得到蜈蚣真空干燥粉末之一，备用。

取蜈蚣真空干燥粉末之一3克，加入0.1克壳聚糖，用去离子水溶解，通过制备柱层析来精制，填料是Sephadex LH-20；进样样品：真空干燥粉末的去离子水溶解液；流动相：0.01mol/L的氢氧化钠水溶液(A)、0.01mol/L的磷酸二氢钾水溶液(B)；梯度洗脱程序：0-10min，B:5％；10-20min，B:10％；收集出峰时间；10-12min的部分；流速：1.0mL/min，检测波长：260nm,进样量：0.5mL；经过脱水，脱盐，得到蜈蚣精制物之一；

蜈蚣精制物之一10.0mg加入5.0mg蛋氨酸，加5.0g乳糖溶解，加入注射用水，加热溶解，稀释至100ml，过滤、滤液超滤，-10℃冷冻5小时，减压干燥3小时，-20℃；升温干燥4小时，温度在-5℃，二次升温干燥4小时，温度在20℃；得到白色粉末LPRW肽的冻干粉之一。

实施例2：LPRW肽之二及其冻干粉的制备

蜈蚣原料粉的制备：挑选500克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，超微粉碎100μm，微波膨化，二氧化碳超临界萃取去除脂肪，二氧化碳超临界萃取的工艺条件是：萃取压力为25MPa，萃取温度为35℃，CO2流量20L/h，萃取2h；得到蜈蚣原料粉之二；

取蜈蚣原料粉之二100克，加入5克壳聚糖，用蒸馏水溶解，混悬液采用200目聚酰胺进行吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，真空干燥，用蒸馏水溶解，用200目大孔树脂D101吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；真空干燥，得到蜈蚣真空干燥粉末之二，备用。

取蜈蚣真空干燥粉末3克，加入0.1克壳聚糖，用去离子水溶解，通过制备柱层析来精制，填料是Sephadex LH-20；进样样品：真空干燥粉末的去离子水溶解液；流动相：0.01mol/L的氢氧化钠水溶液(A)、0.01mol/L的磷酸二氢钾水溶液(B)；梯度洗脱程序：0-10min，B:5％；10-20min，B:10％；收集出峰时间；10-12min的部分；流速：1.0mL/min，检测波长：260nm,进样量：0.5mL；经过脱水，脱盐，得到蜈蚣精制物之二；

蜈蚣精制物之二10.0mg加入5.0mg蛋氨酸，加5.0g乳糖溶解，加入注射用水，加热溶解，稀释至100ml，过滤、滤液超滤，-10℃冷冻5小时，减压干燥3小时，-20℃；升温干燥4小时，温度在-5℃，二次升温干燥4小时，温度在20℃；得到白色粉末LPRW肽的冻干粉之二。

实施例3：LPRT肽之一及其冻干粉的制备

全蝎原料粉的制备：挑选500克全蝎，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，超微粉碎100μm，微波膨化，二氧化碳超临界萃取去除脂肪，二氧化碳超临界萃取的工艺条件是：萃取压力为25MPa，萃取温度为35℃，CO2流量20L/h，萃取2h；得到全蝎原料粉之一；

取全蝎原料粉之一100克，用蒸馏水溶解，用200目大孔树脂D101吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；真空干燥，得到全蝎真空干燥粉末之一，备用。

取全蝎真空干燥粉末之一2克，加入0.1克壳聚糖，用去离子水溶解，通过制备柱层析来精制，填料是Sephadex LH-20；进样样品：真空干燥粉末的去离子水溶解液；流动相：0.01mol/L的氢氧化钠水溶液(A)、0.01mol/L的磷酸二氢钾水溶液(B)；梯度洗脱程序：0-10min，B:5％；10-20min，B:10％；收集出峰时间；15-18min的部分；流速：1.0mL/min，检测波长：260nm,进样量：0.5mL；经过脱水，脱盐，得到全蝎精制物之一；

全蝎精制物之一10.0mg加入5.0mg蛋氨酸，加5.0g乳糖溶解，加入注射用水，加热溶解，稀释至100ml，过滤、滤液超滤，-10℃冷冻5小时，减压干燥3小时，-20℃；升温干燥4小时，温度在-5℃，二次升温干燥4小时，温度在20℃；得到白色粉末LPRT肽的冻干粉之一。

实施例4：LPRT肽之二及其冻干粉的制备

全蝎原料粉之二的制备：挑选500克全蝎，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，超微粉碎100μm，微波膨化，二氧化碳超临界萃取去除脂肪，二氧化碳超临界萃取的工艺条件是：萃取压力为25MPa，萃取温度为35℃，CO2流量20L/h，萃取2h；得到全蝎原料粉之二；

取全蝎原料粉之二100克，加入5克壳聚糖，用蒸馏水溶解，混悬液采用200目聚酰胺进行吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，真空干燥，用蒸馏水溶解，用200目大孔树脂D101吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；真空干燥，得到全蝎真空干燥粉末之二，备用。

取全蝎真空干燥粉末之二2克，加入0.1克壳聚糖，用去离子水溶解，通过制备柱层析来精制，填料是Sephadex LH-20；进样样品：真空干燥粉末的去离子水溶解液；流动相：0.01mol/L的氢氧化钠水溶液(A)、0.01mol/L的磷酸二氢钾水溶液(B)；梯度洗脱程序：0-10min，B:5％；10-20min，B:10％；收集出峰时间；15-18min的部分；流速：1.0mL/min，检测波长：260nm,进样量：0.5mL；经过脱水，脱盐，得到全蝎精制物之二；

全蝎精制物之二10.0mg加入5.0mg蛋氨酸，加5.0g乳糖溶解，加入注射用水，加热溶解，稀释至100ml，过滤、滤液超滤，-10℃冷冻5小时，减压干燥3小时，-20℃；升温干燥4小时，温度在-5℃，二次升温干燥4小时，温度在20℃；得到白色粉末LPRT肽的冻干粉之二。

实施例5：稳定性试验

取实施例1、2、3、4的产品，根据《中国药典》2010年版二部附录XIX C药物稳定性试验指导原则，进行影响因素试验、加速试验和长期试验。考察项目包括：性状、鉴别、含量。

实施例1、2、3、4的产品在强光照射192小时的条件下，试验后含量不变。

实施例1、2、3、4的产品在35摄氏度，相对湿度60±10％，置于留样室中，分别于6、12、24、48个月取样测定，试验后含量不变。

实施例6：毒性试验

实施例1、2、3、4的产品给大鼠静脉给药，用0.9％氯化钠注射液溶解稀释至试验用浓度，实施例1、2、3、4的产品给大鼠肌肉注射给药，用0.9％氯化钠注射液溶解稀释至试验用浓度。实施例1、2、3、4的产品无毒。

实施例7：

实施例1的产品片剂的制备

实施例1的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；硬酸镁2g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂。

实施例1的产品胶囊剂的制备

实施例1的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；100目筛制粒，80℃干燥，100目筛整粒，填入空胶囊。

实施例1的产品喷雾剂的制备

实施例1的产品0.5g；加入30％乙醇水溶液，按照常规方法制备喷雾剂。

实施例2的产品片剂的制备

实施例2的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；硬酸镁2g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂。

实施例2的产品胶囊剂的制备

实施例2的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；100目筛制粒，80℃干燥，100目筛整粒，填入空胶囊。

实施例2的产品喷雾剂的制备

实施例2的产品0.5g；加入30％乙醇水溶液，按照常规方法制备喷雾剂。

实施例8：

实施例3的产品片剂的制备

实施例3的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；硬酸镁2g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂。

实施例3的产品胶囊剂的制备

实施例3的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；100目筛制粒，80℃干燥，100目筛整粒，填入空胶囊。

实施例3的产品喷雾剂的制备

实施例3的产品0.5g；加入30％乙醇水溶液，按照常规方法制备喷雾剂。

实施例4的产品片剂的制备

实施例4的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；硬酸镁2g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂。

实施例4的产品胶囊剂的制备

实施例4的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；100目筛制粒，80℃干燥，100目筛整粒，填入空胶囊。

实施例4的产品喷雾剂的制备

实施例4的产品0.5g；加入30％乙醇水溶液，按照常规方法制备喷雾剂。

实施例9

挑选500克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，然后按照如下任意一种方式制备：粉碎；超微粉碎；用水提取；或，用乙醇提取；得到蜈蚣提取物；该蜈蚣提取物治疗或者预防脑缺血性疾病药物、抗血小板聚集药物、治疗或预防脑瘫药物、治疗或预防脑卒中药物、治疗或预防脑水肿药物、治疗或预防运动功能障碍药物、治疗或预防记忆障碍、保护脑神经功能的药物药物。

实施例10

挑选500克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，粉碎，用水提取，水提物真空干燥；过大孔树脂柱，用纯净水洗脱，用5％、10％、20％、40％、80％的乙醇洗脱；收集得到5％、10％的乙醇洗脱的蜈蚣提取物；该蜈蚣提取物治疗或者预防脑缺血性疾病药物、抗血小板聚集药物、治疗或预防脑瘫药物、治疗或预防脑卒中药物、治疗或预防脑水肿药物、治疗或预防运动功能障碍药物、治疗或预防记忆障碍、保护脑神经功能的药物药物。

2克蜈蚣毒，灭菌，冻干；用于制备治疗或者预防脑缺血性疾病药物、抗血小板聚集药物、治疗或预防脑瘫药物、治疗或预防脑卒中药物、治疗或预防脑水肿药物、治疗或预防运动功能障碍药物、治疗或预防记忆障碍、保护脑神经功能的药物。

实施例11

挑选500克全蝎，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，然后按照如下任意一种方式制备：粉碎；超微粉碎；用水提取；或，用乙醇提取；得到全蝎提取物；该全蝎提取物治疗或者预防脑缺血性疾病药物、抗血小板聚集药物、治疗或预防脑瘫药物、治疗或预防脑卒中药物、治疗或预防脑水肿药物、治疗或预防运动功能障碍药物、治疗或预防记忆障碍、保护脑神经功能的药物药物。

2克蝎毒，灭菌，冻干；用于制备治疗或者预防脑缺血性疾病药物、抗血小板聚集药物、治疗或预防脑瘫药物、治疗或预防脑卒中药物、治疗或预防脑水肿药物、治疗或预防运动功能障碍药物、治疗或预防记忆障碍、保护脑神经功能的药物。

实施例12

挑选500克全蝎，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，粉碎，用水提取，水提物真空干燥；过大孔树脂柱，用纯净水洗脱，用5％、10％、20％、40％、80％的乙醇洗脱；收集得到5％、10％、20％、40％、80％的乙醇洗脱的全蝎提取物；该全蝎提取物治疗或者预防脑缺血性疾病药物、抗血小板聚集药物、治疗或预防脑瘫药物、治疗或预防脑卒中药物、治疗或预防脑水肿药物、治疗或预防运动功能障碍药物、治疗或预防记忆障碍、保护脑神经功能的药物。

实施例13

挑选50克全蝎、50克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，然后按照如下任意一种方式制备：粉碎；超微粉碎；用水提取；或，用乙醇提取；得到全蝎蜈蚣提取物；该全蝎蜈蚣提取物治疗或者预防脑缺血性疾病药物、抗血小板聚集药物、治疗或预防脑瘫药物、治疗或预防脑卒中药物、治疗或预防脑水肿药物、治疗或预防运动功能障碍药物、治疗或预防记忆障碍、保护脑神经功能的药物。

实施例14

挑选50克全蝎、50克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，粉碎，用水提取，水提物真空干燥；过大孔树脂柱，用纯净水洗脱，用5％、10％、20％、40％、80％的乙醇洗脱；收集得到5％、10％、20％、40％、80％的乙醇洗脱的全蝎蜈蚣提取物；该全蝎蜈蚣提取物治疗或者预防脑缺血性疾病药物、抗血小板聚集药物、治疗或预防脑瘫药物、治疗或预防脑卒中药物、治疗或预防脑水肿药物、治疗或预防运动功能障碍药物、治疗或预防记忆障碍、保护脑神经功能的药物。