具体实施方式

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的技术领域的技术人员通常理解的含义相同；本文中在申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请；本申请的说明书和权利要求书及上述附图说明中的术语“包括”和“具有”以及它们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。本申请的说明书和权利要求书或上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别不同对象，而不是用于描述特定顺序。

在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域技术人员显式地和隐式地理解的是，本文所描述的实施例可以与其它实施例相结合。

以下的实施例便于更好地理解本申请，但并不限定本申请。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。

为了使本技术领域的人员更好地理解本申请方案，下面将结合附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。

在一些常规的生化反应中，反应必须在维持在强碱性条件下进行，例如钙离子测定试剂(OCPC法)和碱性磷酸酶测定试剂(AMP法)。在这些试剂中往往使用强碱性缓冲液来维持反应的碱性条件，当试剂开瓶使用时，外界二氧化碳不停进入到试剂中，致使强碱性缓冲液的pH下降，试剂的测定灵敏度也随之下降。

一、本申请提供一种强碱性生化试剂，能够应用于测定人体液中钙离子的钙测定试剂，还能够应用于测定人体液中磷酸酶的碱性磷酸酶测定试剂。

1、强碱性生化试剂包括50mM～2000mM强碱性缓冲液以及10～30v/v％挥发水溶性有机溶剂。其中，上述强碱性缓冲液中可列举为N-甲基-D-葡糖胺缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、2-氨基乙醇、3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸或3-(环己基氨基)-1-丙磺酸等。挥发水溶性有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈或四氢呋喃。优选甲醇或乙醇。

需要说明的是：本申请的挥发水溶性有机溶剂的选择，可根据实际情况使用，通过不同浓度的筛选，满足不干扰待测物质测定和有效防止试剂吸收二氧化碳的，可作为选用依据。

本申请在含有强碱性缓冲液的生化试剂(即强碱性生化试剂)中添加一至两种挥性水溶性的有机溶剂，可降低试剂吸收二氧化碳的速率。

2、上述强碱性生化试剂的一般组分及浓度如下所示：

二、强碱性生化试剂的制备方法如图1所示，图1为本申请的强碱性生化试剂的制备方法流程图。具体过程如下：

S1：称取相应的缓冲成分和生化试剂的组分，并加纯化水充分溶解，配置得浓度为50mM～2000mM强碱性缓冲液；

S2：加入挥发水溶性有机溶剂并充分混匀，其中，所述有机溶剂的浓度为10～30v/v％；

S3：调试试剂到预设的pH值，并加入纯化水定容。

三、本申请的强碱性生化试剂能够应用在常规的生化试剂中，例如，应用于测定人体液中钙离子的钙测定试剂，以及应用于测定人体液中磷酸酶的碱性磷酸酶测定试剂。强碱性生化试剂中的挥发水溶性有机溶剂有效减缓了钙测定试剂和碱性磷酸酶测定试剂吸收二氧化碳，钙测定试剂和碱性磷酸酶测定试剂配合全自动生化分析仪对人体体液中的成分进行测定，具体实验数据如下所示：

1、钙测定试剂各组分及浓度为：

其中，在第一钙离子测定试剂(R1)中添加的强碱性生化试剂中的乙醇的终浓度分别为0％、10％、20％、30％。

根据以下程序进行测量。使用自动分析仪(日立7180型)，取样品3.0μL、第一钙离子测定试剂(R1)160μL、37℃保温5分钟，加入第二钙离子测定试剂(R2)80μL，然后再保温5分钟。在样品和试剂混合后5分钟和10分钟时，分别测定主波长570nm和副波长660nm处的吸光度变化量。用生理盐水和标准溶液校准后，试剂瓶在自动分析仪的试剂储存库中保持打开状态，分别在第0天、2天、4天、6天、8天、10天、12天、14天、16天、18天、20天测试质控，详细结果如表1和图2所示，图2为钙测定试剂开瓶载机测试结果趋势示意图，横坐标为天数，纵坐标为钙测定试剂的载机开瓶测定结果。

表1钙测定试剂开瓶载机测试数据

根据表1和图1可知，相对没有添加乙醇的钙离子测定试剂，载机开瓶稳定性下降快，而含有乙醇的钙离子测定试剂，钙离子测定试剂稳定性得到改善。

2、碱性磷酸酶测定试剂各组分及浓度为：

其中，在第一磷酸酶测定试剂(R1’)中添加的强碱性生化试剂中的甲醇的终浓度分别为0％、20％、30％。

根据以下程序进行测量。使用自动分析仪(日立7180型)，取样品2.0μL、第一磷酸酶测定试剂(R1’)160μL、37℃保温5分钟，加入第二磷酸酶测定试剂(R2’)40μL，然后5分钟内监控主波长405nm和副波长700nm的变化率。用生理盐水和校准溶液校准后，装有碱性磷酸酶测定试剂的试剂瓶在自动分析仪的试剂储存库中保持打开状态，分别在第0天、2天、4天、6天、8天、10天、12天、14天、16天、18天、20天测试质控，详细结果如表2和图3所示，图3为碱性磷酸酶测定试剂开瓶载机测试结果趋势示意图，横坐标为天数，纵坐标为碱性磷酸酶测定试剂的载机开瓶测定结果。

表2碱性磷酸酶测定试剂开瓶载机测试数据

结果显示，相对没有添加甲醇的碱性磷酸酶测定试剂，载机开瓶稳定性下降快，而含有甲醇的碱性磷酸酶测定试剂，碱性磷酸酶测定试剂稳定性得到显著改善。

3、本申请还提供另一种所述强碱性缓冲液的生化试剂，称为目标强碱性试剂，按照下列配制该目标强碱性试剂：

其中，在目标强碱性试剂(R1”)中添加的强碱性生化试剂中的乙醇的终浓度分别为0％、20％、30％。

将装有该目标强碱性试剂的试剂瓶在自动分析仪的试剂储存库中保持打开状态，分别在第0天、2天、4天、6天、8天、10天、12天、14天测试该目标强碱性试剂的pH值的变化情况，详细结果如表3所示。

表3强碱性试剂开瓶载机pH值测定结果

结果显示，含有乙醇的目标强碱性试剂一直处于开瓶状态下，pH下降的速率明显小于未添加乙醇的目标强碱性试剂，表明在目标强碱性试剂中添加一定量乙醇，能够有效减缓该目标强碱性试剂吸收二氧化碳的速率。

本申请将含有挥发水溶性的有机溶剂的强碱性试剂应用于常规生化试剂的使用过程中，能够有效减缓该常规生化试剂开瓶过程中吸收二氧化碳的速率，进而实现抑制该常规生化试剂的pH值下降，稳定该常规生化试剂。并且，本申请的强碱性试剂中添加的为水溶性可挥发的有机溶剂，能够充分溶于该强碱性试剂和常规生化试剂中，为均相体系，不影响实际操作中的测试过程。

以上描述公开了本发明的产品、用途、使用方法及优点，应当指出的是，上述实施例仅为了清楚说明本申请所举的实例，并不能用来限定本专利的权利要求。对于本领域的技术人员，在未背离本发明精神实质与原理的前提下，可以做出一定的改进与替换，均在本发明要求保护的范围之内。

应该理解的是，虽然附图的流程图中的各个步骤按照箭头的指示依次显示，但是这些步骤并不是必然按照箭头指示的顺序依次执行。除非本文中有明确的说明，这些步骤的执行并没有严格的顺序限制，其可以以其他的顺序执行。而且，附图的流程图中的至少一部分步骤可以包括多个子步骤或者多个阶段，这些子步骤或者阶段并不必然是在同一时刻执行完成，而是可以在不同的时刻执行，其执行顺序也不必然是依次进行，而是可以与其他步骤或者其他步骤的子步骤或者阶段的至少一部分轮流或者交替地执行。

显然，以上所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例，附图中给出了本申请的较佳实施例，但并不限制本申请的专利范围。本申请可以以许多不同的形式来实现，相反地，提供这些实施例的目的是使对本申请的公开内容的理解更加透彻全面。尽管参照前述实施例对本申请进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来而言，其依然可以对前述各具体实施方式所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等效替换。凡是利用本申请说明书及附图内容所做的等效结构，直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理在本申请专利保护范围之内。