发明内容

本发明的发明目的，在于提供一种治疗毛囊皮脂腺炎效果更好的药物。

本发明提供一种丹参中酚酸类成分——丹酚酸Y在制备治疗毛囊皮脂腺炎的药物中的应用。

丹酚酸Y，又名丹参酚酸Y，英文名称：Salvianolic acid Y

英文别名：(7′R,8′S,8″R,8″′R)-epi-Salvianolic acid B；2-epi-Salvianolicacid B； Orthosiphoic acid B；

化学名称：(2R,3S)-4-[(1E)-3-[(1R)-1-羧基-2-(3,4-二羟基苯基)乙氧基]-3-氧-1- 丙烯-1-基]-2-(3,4-二羟基苯基)-2,3-二氢-7-羟基-3-苯骈呋喃基甲酸-[(1R)-1-羧基 -2-(3,4-二羟基苯基)]乙酯。

分子式：C36 H30 O16

分子量：718.61

CAS号：1638738-76-7

化学结构式如下：

丹酚酸Y是从丹参多酚酸提取物中分离得到的一种新的丹参酚酸类成分，具有较强的清除自由基作用。中国专利CN105218495A公开了一种丹酚酸Y及其制备方法，其制备方法为：丹参药材，加水煎煮提取3次，每次加3-6倍量水，煎煮0.5-2 小时，合并煎液，冷却至8-14℃，用盐酸溶液调pH值至1.0-2.0，静置4-8小时，取上清液，滤过；滤液过聚酰胺柱，用7倍柱体积的纯化水冲洗，弃去流出液，再用7倍柱体积的0.1％碳酸氢钠溶液洗脱，收集洗脱液，用盐酸溶液调pH值至 2.5-3.5；过AB-8型大孔吸附树脂柱，用2-3倍柱体积的纯化水冲洗，弃去水洗液，再用约2.5倍柱体积95％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，调节至30℃条件下相对密度1.02-1.06，2-10℃冷藏12-24小时，滤过，滤液用10％氢氧化钠溶液调pH值至5.0-6.5，冷冻干燥，得提取物，将提取物用适量水溶解，通过两次半制备RP-HPLC纯化，得到纯品。

中国专利CN109988133A公开了另一种丹酚酸Y及其制备方法，步骤1、丹酚酸Y的富集：取丹参酚酸提取物，用水溶解，加入到MCI-GEL色谱柱中，用10-20％乙醇水溶液洗脱，下接液调节pH值，再次加入到MCI-GEL色谱柱中，用70-95％乙醇洗脱，回收溶剂，浓缩至干得到丹酚酸Y富集物；步骤2、精细分离：丹酚酸 Y富集物用1-3倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向加压制备液相分离，流动相为乙腈和含0.01％甲酸的水溶液，用HPLC法检测并合并含有丹酚酸Y的洗脱液，减压浓缩得到丹酚酸Y单体。

本发明在现有技术的基础上，对丹酚酸Y进行了药效学研究，意外发现，丹酚酸Y具有治疗毛囊皮脂腺炎的作用。

为此，本发明提供丹酚酸Y在制备治疗毛囊皮脂腺炎药物中的应用。

其中所述毛囊皮脂腺炎，包括痤疮，粉刺、丘疹、脓包、囊肿、结节等。

其中所述毛囊皮脂腺炎发生于颜面、颈部、躯干。

其中所述毛囊皮脂腺炎发生在任何人群，尤其是12-24岁的青少年。

本发明进一步提供含有丹酚酸Y的药物组合物，所述组合物可以用于治疗所述的毛囊皮脂腺炎。

其中，所述药物组合物，含有除含有丹酚酸Y以外，还可含有药物可接受的载体。

所述药物可接受的载体，包括任何一种适合将丹酚酸Y制备成药物制剂的已知的载体，具有赋形、提高稳定性、增溶、助溶、缓控释等功能，如常用的：硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低沸点蜡、可可脂等。

本发明的药物组合物可以制备成任何可药用的剂型。

本发明的药物组合物以适合药用的制剂形式存在。本发明的药物组合物可以制备成任何可药用的剂型。优选的，药用的制剂为片剂、胶囊剂、溶液剂，颗粒剂，粉剂，膏剂，丸剂，混悬剂，栓剂，擦剂，乳剂，涂抹剂，贴剂，喷剂，优选外用制剂。

所述剂型为单位剂量形式，每个单位剂量中含有丹酚酸Y0.1-10mg，或 10-100mg，或100-1000mg，或1000-10000mg。

所述每一单位剂量，是指适合服用的单位剂量形式，如片剂的每片，胶囊的每粒，也可指每次服用剂量，如每次服用100mg。

在制备成粉剂、片剂、可分散粉剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和软膏形式的固体或半固体药物制剂时，可使用固体载体。可使用的固体载体优选为选自稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、膨胀剂等中的一种或多种物质，或可为包封物质。在粉状制剂中，在载体中含有5～70％的微粒化活性成分。适宜的固体载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低沸点蜡、可可脂等。由于它们易于给药，片剂，粉剂、扁囊剂和胶囊等代表最有利的口服固体制剂。

在制备成液体制剂如注射制剂时，可为水溶液形式，可调节等渗度，pH等使适于活体的生理条件。液体制剂还可制成口服水溶液制剂，或者将活性成分分散在粘性物质如天然和合成胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它已知悬浮剂中制备适于口服的水悬液。

可以将药物制剂配制成剂量单位形式。制剂的剂量单位形式指适于作为单一剂量的物理分离单位，每个单位含有产生所期望的治疗效果的计算好的预定量的活性成分。这种剂量单位形式可为包装形式，如片剂、胶囊或装在小管或小瓶中的粉剂，或装在管或瓶中的软膏、凝胶或霜剂。剂量单位形式中所含活性成分的量可以变化，但一般根据所选择活性成分的效力，调节在1～800mg范围内，日剂量可一次给药或分数次给药。

本发明还包括，将丹酚酸Y作为保健品或者化妆品中的添加剂使用，人们在使用含有丹酚酸Y的保健品或者化妆品时，可以起到美容祛斑，祛痤疮，消除皮肤疹子的作用。

为此，本发明进一步提供丹酚酸Y作为保健品或者化妆品的添加剂的应用。

为证明本发明的药物作用，本发明人进行了以下药效实验：

1、研究内容与方法：

1.1材料和动物：

1.1.1供试品及其他试剂：

丹酚酸Y：按照中国专利CN109988133A公开的方法进行制备，纯度99％；

丹参提取物：按照中国专利申请CN109568217A公开的方法进行制备，纯度91％；

丹参酮：按如下方法进行制备：取丹参粗粉，加药材体积3倍量的95％乙醇，回流提取3次，每次120分钟，滤过，得滤渣和滤液，合并滤液，减压回收乙醇，得到丹参粗提物，粗提物过大孔树脂，流动相为乙腈-0.5％冰醋酸水溶液(20:80)，检测波长280nm；柱温30C；流速1.0mL/min，收集过柱液，每60mL为一管，收集第3-10管，即为丹参酮，纯度91.2％。

油酸：天津市化学试剂六厂生产，批号为20180605，用液体石蜡配成50％溶液备用；表皮葡萄球菌系从临床痤疮患者的痤疮中分离而得，用肉汤稀释为 108/ml备用；兔IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA和SOD ELISA Kit均购自酶联生物。

1.1.2实验动物：

日本大耳白兔60只，体重质量(BM)为2.0k g左右，由天津裕达实验动物养殖有限公司提供，生产许可证号：SCXK(津京)2016-0001，质量合格证号： 0010986。实验动物所有操作均严格按照天士力实验动物管理及福利伦理委员会标准执行(TSL-IACUC-2020-15)。

1.1.3饲养条件：

普通级实验动物环境设施合格证号：SCXK(津)2017-0006。环境温度：22 ±2℃；相对湿度40～70％，全部动物自由饮食饮水。

1.1.4实验仪器：

光学显微镜，游标卡尺。电子天平(T1000,常熟市双杰测试仪器厂)；可调高速匀浆机(FSH-2,常州荣华仪器有限公司)；高速冷冻离心机(ST16R,Thermo Fisher公司，美国)；-80℃低温冰箱(902-ULTS,hermo Fisher公司，美国)；多功能酶标仪(Rayto RT-6100，美国)；全自动脱水机(ASP300，Leica公司，德国)；包埋机(EG1150H，Leica公司，德国)；轮转式切片机(RM2235，Leica公司，德国)；烤片机(HI1220，Leica公司，德国)。

1.2实验方法：

1.2.1造模及分组给药

(1)实验造模：40只日本大耳白家兔，检疫并适应性喂养1周。随机取10 只作为正常组，其余按照文献方法分别在其双耳外耳道上用1ml的胰岛素注射器均匀涂抹50％的油酸0.2ml，1次/天，连续28天。造模开始的第12天在双侧兔耳皮内注射表皮葡萄球菌30ul，并且在注射处用记号笔做标记。

(2)实验分组及给药周期：确认造模成功后，将剩余家兔分成六组，即模型组、丹参提取物组(10mg/kg)、丹参酮组(10mg/kg)、丹酚酸Y高剂量组(丹 Y高10mg/kg)、丹酚酸Y低剂量组(丹Y低5mg/kg)。分别用相应药物给予耳缘静脉注射，正常组和模型组给予同体积的生理盐水。连续给药14天。

1.2.2指标检测

(1)肉眼观察：实验前后分别称量体重，每日对家兔的饮水、饮食、精神状态、兔耳四周等进行观察。

(2)生化指标检测：采用心脏采血6-10ml静置30min后，3000rpm，离心 15分钟，取上清分装于离心管中，用于兔IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA 和SOD ELISA Kit的检测。

(3)使用5mm打孔器在每只家兔固定位置打孔制备耳片，并进行称重。

(4)病理指标检测：用1cm打孔器在右耳标记处取皮，组织块以10％福尔马林固定，石蜡包埋，切片，HE染色与光学显微镜下观察组织学改变，方法同上。造模第14天随机取10只家兔在左耳标记处用1cm打孔器取皮肤活检，同样在正常组的左耳相同位置取标本作为对照。组织块以10％的福尔马林固定、石蜡包埋、切片(每个标本连续切片四张，检测四张切片中位置相同且结构最完整的两个毛囊面积和四个皮脂腺的直径，然后计算各自平均值)，进行HE染色，显微镜下观察。

1.2.3统计学方法

实验数据均采用SPSS 19.0统计分析软件进行统计学处理，所得结果以 表示。各组间比较采用单因素方差分析，以p＜0.05为差异有统计学意义。

2、实验结果

2.1肉眼观察

2.1.1对家兔体重的影响：

正常组家兔正常饮水和进食，身体毛色等均匀顺滑，精神状态良好。模型组和丹参提取物组、丹参酮组及丹酚酸Y低、高剂量组家兔体重与正常组相比，均无显著性差异。

表1：丹酚酸Y对毛囊皮脂腺炎家兔体重的影响(n＝10)

2.1.2大体观察：

正常组家兔状态始终良好，模型组个别家兔有甩耳的症状，可能跟兔耳发痒有关。正常组家兔兔耳均非常薄，柔软，其上可见清晰的粉色毛细血管，兔耳管开口处可见毛囊口排列整齐；而模型组造模后的约一周时间，兔的外耳道毛囊口出现黑色角栓，呈黑色，有粉刺状，毛囊口有丘疹状鼓包，随着天数增加，数量逐渐增多，肉眼难以分清个数，个别家兔甚至覆盖整个耳道。造模后2周，达到高峰，并一直持续到实验结束未见好转。经治疗两周后，丹参提取物组、丹参酮组和丹Y低剂量组及丹Y高剂量组毛囊角栓明显减少，部分角栓脱落后遗留点状凹陷的毛囊，丘疹变平且数量较少。肉眼可见丹酚酸Y高剂量组丘疹数量最少，其次依次是丹酚酸Y低剂量组、丹参酮组、丹参提取物组(见图1)。

正常组家兔兔耳均非常薄，柔软，其上可见清晰的粉色毛细血管；而模型组家兔造模后的约三四天的时候即出现严重的水肿、肿胀等明显炎症现象；经治疗后，丹参提取物组和丹参酮组较模型组相比，水肿和肿胀程度明显减轻；丹Y 高组和丹Y低组家兔的水肿情况明显好转，尤其高剂量组效果更好；相比丹参提取物组和丹参酮组，丹Y低、高剂量组稍好。距离耳道10～15厘米左右的各组家兔附近耳廓情况（见图2）。

2.2病理检查

正常组兔耳表皮组织为2～4层，毛囊上皮个别有轻度增厚.真皮层偶见单核炎细胞浸润。模型组家兔兔耳可见毛囊四周角化层明显增厚。毛囊漏斗扩大，相邻毛囊相互融合，毛囊腔中充满粉红色角化物，并向皮脂腺延伸，皮脂腺分叶增多，单个皮脂腺直径明显增大，真皮也有较多的炎细胞浸润。丹参提取物组和丹参酮组较模型组相比，毛囊腔还可见非常明显的炎症反应，皮脂腺粗大，肉眼可见有水肿的现象；丹Y高剂量组和丹Y低剂量组可见毛囊四周角化层明显减轻，真皮层可见少量炎性细胞，毛囊漏斗部轻微扩张，可见少量疏松角化物质填充，皮脂腺较模型组相比有缩小迹象；丹酚酸Y低、高剂量组比丹参提取物和丹参酮组要好一些(见图3)。

2.3生化指标检测

2.3.1对组织炎症因子的影响：

(1)各细胞因子的ELISA测定结果如表所示，与正常组相比，模型组各炎症因子均有显著性升高(P<0.01)；

(2)与模型组相比，各给药组的炎症因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.05或P<0.01)；结果说明模型组家兔病灶区域存在严重的炎症反应，四个给药组丹参提取物、丹参酮组和丹酚酸Y低、高组的干预均可以有效缓解这类炎症反应，其中丹Y高剂量组效果最好；

(3)四个给药组中：1)丹参提取物组和丹参酮组对四个指标的改善作用相差不多，两组中无显著性差异；2)同丹参提取物组相比，丹Y低组、丹Y高组具有显著性差异(P<0.05)和非常显著性差异(P<0.01)，即丹Y低、高剂量组均能够显著性降低四个炎症因子含量；3)同丹参酮组相比，丹Y高组在IFN-γ、TNF-α和IL-1β指标上具有非常显著性差异(P<0.01)，在和IL-6指标上具有显著性差异(P<0.05)；而丹Y低组仅IFN-γ上具有显著性差异。具体见表2。

表2：丹酚酸Y对毛囊皮脂腺炎家兔的组织炎症因子的影响(n＝10)

(注:与正常组比较，模型组^##P＜0.01；与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；给药组中，与丹参提取物组相比，丹Y组中，^&P＜0.05，^&&P＜0.01；与丹参酮组相比，丹Y组中^☆P＜0.05，^☆☆P＜0.01。)

2.3.2对抗氧化能力因子的影响：

SOD活力的增加代表着机体抗氧化能力的恢复，这使得体内自由基的清除能力也得到恢复，进而使得脂质过氧化产物MDA含量也得到控制，细胞氧化应激损伤得以缓解。如表3所示：

(1)与正常组相比，模型组MDA含量显著升高(P<0.01)，SOD活力显著下降(P<0.01)；

(2)与模型组相比，四个给药组均有一定的降低MDA含量，升高SOD活力的作用；其中丹酚酸Y的低(P<0.05)、高剂量组(P<0.01)效果最好，且氧化应激损伤有改善作用且存在剂量相关性；

(3)各给药组间中，1)丹参提取物组和丹参酮组对MDA和SOD指标的改善作用相差不多，两组中无显著性差异；2)同丹参提取物组相比，丹酚酸Y高组在 MDA和SOD两个指标上的改善作用均具有显著性差异(P<0.05和P<0.01)，丹酚酸Y低剂量组仅在SOD指标上有显著性差异；3)同丹参酮组相比，仅丹酚酸Y高组具有显著性差异(P<0.05)，说明丹酚酸Y高组在提高SOD氧化活力方面效果最好。

表3：丹酚酸Y对毛囊皮脂腺炎家兔的组织抗氧化能力的影响(n＝10)

(注:与正常组比较，模型组^##P＜0.01；与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；给药组中，与丹参提取物组相比，丹Y组中，^&P＜0.05，^&&P＜0.01；与丹参酮组相比，丹Y组中^☆P＜0.05。)

3.讨论：

毛囊皮脂腺炎严重影响患者的生活质量，而中医病机基本和西医认为一致。抗炎始终是治疗的首选，口服抗生素是最常见的药物，但抗生素类药物长期使用或多或少都有引起病菌耐药性，且具有众多副作用。中药在抗炎方面的药效也越来越被大家所认可，还能避免西药长期服用带来的肝肾损害等不良反应。

现代研究发现炎症是毛囊皮脂腺炎症的重要因素之一，会产生一些酶类如蛋白酶、酯酶等，将三酰甘油分解为游离脂肪酸然后进一步释放一些生物活性物质参与炎症，同时导致局部炎症反应和机体对其发生免疫反应。其参与炎症反应的主要有IL-1β、IL-6及TNF-α、IFN-γ、MDA、SOD等细胞因子等。其中IL-6和TNF- α主要由单核-巨嗜细胞产生，又被称为前炎症细胞因子，可介导天然免疫，在细胞免疫、炎症反应和肿瘤免疫方面具有十分重要的作用，尤其IL-6广泛参与各类炎症反应，在急性炎症期可以显著升高，是许多炎症性疾病的促发剂。IL-8通过受体IL8-RA和IL8-RB产生多种生物学功能，包括促炎性细胞趋化、促血管生成、促有丝分裂和诱导细胞增殖等。

本研究从兔耳外观表现观察，并结合IL-1β、IL-6及TNF-α、IFN-γ、MDA、 SOD等细胞因子含量检测结果和病理结果分析，可以证实丹参提取物组、丹参酮组和丹酚酸Y对兔耳毛囊皮脂腺炎均有一定的疗效，综合各个指标的结果可见，丹酚酸Y两个剂量组均能降低毛囊皮脂腺炎家兔体内IFN-γ、TNF-α、IL-1β和、 IL-6的含量水平，降低过氧化产物MDA和提高SOD含量水平，且丹酚酸Y高剂量组明显优于低剂量组，可见丹酚酸Y高组效果最好。

本专利证实丹酚酸Y在治疗毛囊皮脂腺炎症具有良好的作用，可为今后在毛囊皮脂腺炎症治疗的临床应用提供实验依据。