具体实施方式

下文将对本发明的各个方面进行具体说明，但本发明并不限于这些具体的实施方式。本领域技术人员可以根据下文公开内容的实质对本发明进行一些修改和调整，这些调整也属于本发明的范围。

本发明提供一种药物组合物，包含40-90wt％的褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐，结构如式(IV)所示，和8-50wt％的填充剂；其中填充剂选自淀粉类、纤维素类中的至少一种；

其中n为选自1-9的整数，m选自0，1或2，m’选自0或1。

优选地，所述填充剂选自：干淀粉、玉米淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠中的至少一种。

优选地，本发明所述的药用组合物还含有0-10wt％的粘合剂和0.1-3wt％的润滑剂；其中粘合剂为淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一种；润滑剂为润滑剂选自滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶、氢化植物油中的至少一种。

优选地，本发明所述的药物组合物包含：60-75wt％的褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐，25-35wt％的填充剂，1-3wt％的润滑剂。

优选地，本发明所述的药物组合物包含：80-90wt％的褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐，8-16wt％的填充剂，1-3wt％的润滑剂。

优选地，用于本发明的药用组合物中的褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐(原料药API)的粒径被控制在使得100％过60目筛，且其中70％以上过100目筛，按重量计。优选地，80％以上过100目筛，更优选地，90％以上过100目筛。由于活性成分具有易溶易吸湿的特点，为了使药物活性成分更好地发挥作用，发明人发现，当控制API的粒径低于100目粉末的比例，且适当降低大于60目的粗原料，分别有助于提高胶囊溶出度和改善制粒后中间颗粒形态。

优选地，本发明所述的药用组合物中，n＝1-5的褐藻胶寡糖二酸的重量总和占褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐总重量的60％以上；古罗糖醛酸二酸的重量总和占褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐总重量的0-50％。

优选地，本发明所述的药用组合物中，n＝1-3的甘露糖醛酸和/或古罗糖醛酸的重量总和占褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐的总重量的20-70％。

优选地，本发明所述的药用组合物中，古罗糖醛酸二酸的重量总和占褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐总重量的5-50％，优选10-40％，更优选15-35％。

优选地，本发明所述的药用组合物中，各聚合度褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐的重量占褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐的总重量的百分比为：二糖(n＝1)5-30％，三糖(n＝2)15-35％，四糖(n＝3)15-35％，五糖(n＝4)、六糖(n＝5)、七糖(n＝6)、八糖(n＝7)、九糖(n＝8)和十糖(n＝9)的总含量为20-45％。

优选地，本发明所述的药用组合物中，各聚合度褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐的重量占褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐的总重量的百分比为：二糖5-30％，三糖15-35％，四糖15-35％，五糖10-25％，六糖5-15％，七糖3-10％，八糖2-5％，九糖1-5％，十糖1-5％。

优选地，本发明所述的药用组合物，其特征在于，其中各聚合度褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐的重量占褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐的总重量的百分比为：二糖10-29％，三糖18-32％，四糖15-30％，五糖15-20％，六糖5-10％，七糖3-5％，八糖2-3％，九糖1-3％，十糖1-3％。

在一个优选的实施方案中，根据前述任一项所述的药用组合物，其特征在于甲酸或其盐的含量低于0.2％，优选低于0.1％，更优选低于0.05％。

优选地，本发明所述的药用组合物，其含有褐藻胶寡糖二酸钠盐或钾盐作为药学上可接受的盐。

优选地，本发明所述的药用组合物，其含有褐藻胶寡糖二酸钠盐作为药学上可接受的盐，其含量约为100mg至500mg，优选150mg至450mg。

本发明的另一个方面涉及一种药物组合物在制备用于治疗选自老年性痴呆、帕金森病、炎症、疼痛、糖尿病或血管性痴呆的药物中的用途。

中国专利申请CN201810721327.6公开了甘露糖醛酸和古罗糖醛酸的寡糖二酸混合物(本发明所述褐藻胶寡糖二酸原料药)被证明具有抗老年性痴呆、帕金森病、炎症、疼痛、糖尿病或血管性痴呆的药理活性。因此，本发明的含有褐藻胶寡糖二酸或其盐的药用组合物同样具有抗老年性痴呆、帕金森病、炎症、疼痛、糖尿病或血管性痴呆的药理活性。

本发明所述疼痛包括各种疼痛，包括但不限于急性疼痛、慢性疼痛、神经性疼痛、术后痛、慢性下背痛、丛集性头痛、疱疹神经痛、幻肢痛、中枢性痛、牙痛、阿片样物质抗性疼痛、内脏痛、手术痛、骨损伤痛、劳累和分娩过程中的疼痛、因灼伤包括晒伤导致的疼痛、产后痛、偏头痛、心绞痛和与泌尿生殖道相关的疼痛(包括膀胱炎)、血管性疼痛、三叉神经痛、肋间神经痛、手术切口痛、慢性筋膜炎痛、足跟痛、肌肉疼痛、骨骼疼痛、关节疼痛、癌性疼痛、非癌性疼痛等。

本发明所述炎症包括各种炎症，包括但不限于急性炎症、慢性炎症、血管炎症、神经炎症、中枢神经炎症(例如多发性硬化症，包括脑脊髓炎等)、外周神经炎症、关节炎(例如骨关节炎、骶髂关节炎等、牛皮癣关节炎、类风湿性关节炎、风湿性关节炎等)、强直性脊柱炎、炎症性肠病(例如克罗恩病和溃疡性结肠炎)、炎症性糖尿病性溃疡、系统性红斑狼疮、炎症性皮肤病(例如银屑病、特应性皮炎、湿疹)等。

本发明的另一个方面涉及一种治疗患有选自如下疾病的患者的方法：老年性痴呆、帕金森病、炎症、疼痛、糖尿病或血管性痴呆，该方法包括通过给予需要的患者单位剂量形式的本发明所述的药物组合物。

优选地，单位剂量可含介于约100mg至500mg的褐藻胶寡糖二酸钠盐，优选150mg至450mg。单位剂量可每天一次或以上给予患者。

本发明的另一个方面涉及一种包含本发明所述的药物组合物的药物制剂。

优选地，本发明的药用组合物适用于口服给药。根据本发明的药用组合物的使用及优选的口服剂型有片剂、颗粒剂、胶囊、锭剂、包衣片剂及其它固体口服剂型。

本发明的另一个方面涉及一种本发明所述药物组合物的制备方法，包含以下步骤：

(1)按含有40-90wt％褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐，8-50wt％的填充剂混合均匀；

(2)将混合均匀的物料制粒，以定量装入包装袋，或充填入胶囊，或压片，制得所述药物组合物；或将步骤(1)得到的混合均匀的物料直接压片得到所述药物组合物。

优选地，在制备过程中还可以加入0-10wt％的粘合剂，优选1-10wt％，更优选2-8wt％。可以在步骤(1)填充剂和褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐混合时加入；也可以在步骤(2)制粒时加入。粘合剂选自淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮的至少一种。或者，粘合剂也可以是低级烷醇的水溶液，如甲醇、乙醇、异丙醇的水溶液。

优选地，本发明所述的制备方法，步骤(2)中所述制粒为干法制粒、湿法制粒或沸腾制粒。

优选地，本发明所述的制备方法，步骤(2)所述制粒完成后还可以加入0.1-3wt％的润滑剂。

优选地，本发明所述的制备方法，步骤(2)之后进行步骤(3)：在步骤(2)压片得到的素片进行包衣，制得所述药物组合物。

优选地，本发明所述的制备方法，包含以下步骤：

(1)按含有40-90wt％褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐，8-50wt％的填充剂混合均匀；

(2)将混合均匀的物料，加入粘合剂制软材，孔径4±0.5mm筛网制粒，60-70℃干燥，孔径1.2±0.2mm筛网整粒，加入润滑剂，混合均匀填充胶囊，或压片包薄膜衣。

本发明所述的药用组合物，选用了特定的填充剂、粘合剂或润滑剂，并与褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐以特定的比例组合后，具有良好的稳定性，且崩解溶出速度快，30分钟溶出度可达到90％以上。

本发明的优点在以下非限制性的实施例中进一步进行说明。但实施例中采用的具体材料及其用量，以及其他实验条件并不应理解为对本发明的限制。除非特别指明，本发明中份数、比例、百分比等均以质量计。

实施例

下文具体实施例中采用的测定方法如下。

溶出度检测方法：硫酸咔唑法

按照溶出度与释放法测定法(《中国药典》2015版第四部通则0931第一法)以醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH4.5)900mL为溶出介质，转速为50转/分钟，依法操作，经30分钟，取溶液适量，采用硫酸咔唑法，以葡萄糖醛酸钠为标准品做标准曲线，计算溶出液及对照溶液的含量，得到溶出度。

甲酸含量的测定方法：

参照中国药典2015版《通则》0521气相色谱法。

重均分子量、分子量分布测定方法：

尺寸排阻色谱光散射联用系统

色谱条件：Waters SEC色谱柱(Waters ACQUITY [email protected] SEC 1.7μm 4.6×300mm column)，柱温25℃；流动相为甲醇：80mmol/L乙酸铵＝1∶4(V/V)；流速为0.1mL/min；检测器为十八角度激光检测器(LS)，示差折光检测器(RI，35℃)。

将待测样品用流动相稀释制成相当于褐藻胶寡糖二酸10mg/mL的溶液作为供试品溶液；取供试品溶液20μl，注入液相色谱，测定得到多角度激光散射-示差折光色谱图；采用图谱处理软件(ASTRA)处理，得到待测样品重均分子量和分子量分布。

实施例1：制备褐藻胶寡糖二酸或其药学上可接受的盐(原料药API)

步骤1)：褐藻胶寡糖混合物的制备

将5Kg海藻酸钠配成约10％的溶液，加稀盐酸调pH至3.0左右，升温至80℃，搅拌，反应10hr，停止加热，冷却至室温后，加NaOH调pH值至9.0，再加稀盐酸回调pH至3.2，离心机5000rpm离心10min，收集上清，旋转蒸发仪浓缩，真空干燥得中间体1500g。

中间体的核磁图谱见附图1。核磁共振测定方法如下：样品准备：称取30mg待测样品溶于0.5ml D2O，冷冻干燥，再加0.5ml氘代重水溶解，重新冻干，最后把冻干样品粉末用适量重水溶解后，全部转移至核磁管中，配成100mg/ml的待测溶液，加入0.01％(w/v)的氘代TSP(trimethylsilylpropionic)钠盐做内标。核磁数据采集和处理：400M傅里叶变换核磁共振仪在60℃采集一维氢谱。脉冲序列为45°脉冲，每次采集4秒，弛豫时间1秒，累积20次，谱宽从-2ppm到10ppm。数据收集后采用傅里叶变换得到一维氢谱，将TSP甲基氢信号设定为0.00ppm。

由图1可知，该中间体含有甘露糖醛酸片段(M-block，化学位移5.1ppm)和古罗糖醛酸片段(G-block，化学位移5.5ppm)以及甘露糖醛酸和古罗糖醛酸镶嵌片段(MG-block，化学位移5.3ppm)。称取500g该中间体，加蒸馏水溶解后，配成5L体积的溶液，NaOH调pH至6.5，水浴加热，控制反应温度到75℃。调节氧气钢瓶出口的气流量和臭氧发生器的功率，使得臭氧质量浓度流量达到8g/hr，通入反应液中。反应4hr后停止通入臭氧，加适量水调整溶液浓度至10％左右，以截留分子量为2000Da的超滤膜过滤，收集未透过液，旋转蒸发仪浓缩，真空干燥，得350g褐藻胶寡糖二酸原料药。

步骤2)：褐藻胶寡糖二酸原料药中各聚合度寡糖的比例和结构分析

精密称取100mg上述干燥的褐藻胶寡糖二酸原料药，加水溶解配制成10mg/mL的浓度，过0.22um滤膜，作为供试样品溶液。采用Superdex peptide(GE公司)分子排阻色谱联用多角度激光散射(MALS，怀雅特公司)测定组合物中不同聚合度寡糖的比例。实验方法如下：

色谱柱：Superdex peptide 10/300Gl

流动相：0.1mol/L NaCl

进样量：10uL

流速：0.3mL/min

测试结果：二糖-十糖分别以dp2-dp10表示，分别为dp2为18％，dp3为24％，dp4为23％，dp5为14％，dp6为8％，dp7为7％，dp8为2％，dp9为2％，dp10为2％。

步骤3)：LC-MS分析褐藻胶寡糖二酸原料药中各聚合度寡糖的结构

实验条件：

色谱柱：Superdex peptide 10/300Gl

流动相：20％甲醇+80％80mmol/L NH₄Ac

流速：0.1mL/min

柱温：25℃±0.8℃。

质谱条件：Agilent 6540 QTOF；离子源：ESI碰撞电压120V；负离子模式。采集信号(m/z)宽度为100-1000。

各聚合度寡糖的质谱图见附图2-4所示。对质谱图中各信号峰进行归属，验证了原料药中所有寡糖的分子结构，即通式(III)所示的结构。信号归属及该信号所对应的结构见下表1。

由上述质谱结构解析发现，原料药中糖链还原末端的甘露糖醛酸或古罗糖醛酸氧化为糖二酸结构(结构见通式IV)，该糖二酸可以是含6个碳(m+m’＝3)的甘露糖二酸或古罗糖二酸结构，含量约为10％～30％，也可以是甘露糖二酸或古罗糖二酸的脱羧产物，即5个碳(m+m’＝2)的糖二酸(30～50％)和4个碳(m+m’＝1)的糖二酸(30％～40％)。

步骤4)核磁分析褐藻胶寡糖二酸原料药中古罗糖醛酸含量

样品准备：称取50mg待测样品溶于0.5ml D2O，冷冻干燥，再加0.5ml氘代重水溶解，重新冻干，最后把冻干样品粉末用适量重水溶解后，全部转移至核磁管中，配成100mg/ml的待测溶液，加入0.01％(w/v)的氘代TSP(trimethylsilylpropionic)钠盐做内标。

核磁数据采集和处理：400M傅里叶变换核磁共振仪在室温采集一维氢谱。脉冲序列为45°脉冲，每次采集4秒，弛豫时间1秒，累积20次，谱宽从-2ppm到10ppm。数据收集后采用傅里叶变换得到一维氢谱，将TSP甲基氢信号设定为0.00ppm。原料药的核磁共振氢谱如图5所示。附图5中，化学位移为4.6ppm的多重峰为甘露糖醛酸(M)C-1位的氢信号，5.0ppm为古罗糖醛酸(G)C-1位的氢信号，4.9ppm为甘露糖醛酸和古罗糖醛酸嵌合片段(MG)的C-1位氢信号。古罗糖醛酸的含量计算公式为：

上式中，I4.6，I5.0和I4.9分别为甘露糖醛酸(M)，古罗糖醛酸(G)，甘露糖醛酸和古罗糖醛酸嵌合片段(MG)的C-1位氢信号积分值。通过计算，原料药的古罗糖醛酸含量为30％。

实施例2：褐藻胶寡糖二酸原料药的吸湿现象

实施例1制备获得的褐藻胶寡糖二酸原料药(纯度99.2％)在高湿(RH75％，25℃)环境下放置5天后会由均匀分散的淡黄色细粉状态变为黄褐色膏状，表面光滑有光泽；称量发现，其增重达到30％以上。

实施例3：制剂实施例

将150g按实施例1制备的褐藻胶寡糖二酸原料药(经粒径检测：100％过60目筛，且其中80％过100目筛)，55g玉米淀粉(市售产品，符合中国药典标准，粒径：全部通过100目筛)混合均匀，85％乙醇作粘合剂制软材，孔径4±0.5mm筛网制粒，60-70℃干燥，孔径1.2±0.2mm筛网整粒，加入2g硬脂酸镁和2g滑石粉，混合均匀，填充胶囊，约为1000粒。

根据前述方法检测，30分钟主要有效成分溶出度为91.6％，甲酸含量为0.037％，重均分子量为925.1Da，分子量分布为1.051。

实施例4：

将150g按实施例1制备的褐藻胶寡糖二酸原料药(经粒径检测：100％过60目筛，且其中80％过100目筛)、65g玉米淀粉混合均匀，85％乙醇作粘合剂制软材，孔径4±0.5mm筛网制粒，60-70℃干燥，孔径1.2±0.2mm筛网整粒，加入3g硬脂酸镁和3g滑石粉，混合均匀，填充胶囊，约为1000粒。根据前述方法检测，30分钟主要有效成分溶出度为93.8％，甲酸含量为0.041％，重均分子量为907.9Da，分子量分布为1.048。

实施例5：

将450g按实施例1制备的褐藻胶寡糖二酸原料药(经粒径检测：100％过60目筛，且其中85％过100目筛)、65g玉米淀粉混合均匀，85％乙醇作粘合剂制软材，孔径4±0.5mm筛网制粒，60-70℃干燥，孔径1.2±0.2mm筛网整粒，加入2.5g硬脂酸镁和5g滑石粉，混合均匀，填充胶囊，约为1000粒。检测，30分钟主要有效成分溶出度为94.6％，甲酸含量为0.039％，重均分子量为915.2Da，分子量分布为1.044。

买施例6：

将450g按实施例1制备的褐藻胶寡糖二酸原料药(经粒径检测：100％过60目筛，且其中90％过100目筛)、45g羧甲纤维素钠混合均匀，85％乙醇作粘合剂制软材，孔径4±0.5mm筛网制粒，60-70℃干燥，孔径1.2±0.2mm筛网整粒，加入2.5g硬脂酸镁和5g滑石粉，混合均匀，压片包薄膜衣，约为1000粒。检测，30分钟主要有效成分溶出度为93.8％，甲酸含量为0.037％，重均分子量为918.9Da，分子量分布为1.046。

实施例7：

将450g按实施例1制备的褐藻胶寡糖二酸原料药(经粒径检测：100％过60目筛，且其中90％过100目筛)、85g玉米淀粉混合均匀，用5％玉米淀粉浆沸腾制粒，经孔径1.2±0.2mm筛网整粒，加入2.5g硬脂酸镁和5g滑石粉，混合均匀，压片包薄膜衣，约为1000粒。检测，30分钟主要有效成分溶出度为95.1％，甲酸含量为0.032％，重均分子量为919.3Da，分子量分布为1.049。

实施例8：

将150g按实施例1制备的褐藻胶寡糖二酸原料药(经粒径检测：100％过60目筛，且其中90％过100目筛)、75g微晶纤维素混合均匀，85％乙醇作粘合剂制软材，孔径4±0.5mm筛网制粒，60-70℃干燥，孔径1.2±0.2mm筛网整粒，加入3g硬脂酸镁和3g滑石粉，混合均匀，填充胶囊，约为1000粒。检测，30分钟主要有效成分溶出度为93.8％，甲酸含量为0.041％，重均分子量为907.9Da，分子量分布为1.048。

比较例：

将450g按实施例1制备的褐藻胶寡糖二酸原料药(经粒径检测：100％过60目筛，且其中30％过100目筛)、20g玉米淀粉混合均匀，85％乙醇作粘合剂制软材，孔径4±0.5mm筛网制粒，80-90℃干燥，孔径1.2±0.2mm筛网整粒，加入10g硬脂酸镁，5g滑石粉，混合均匀，压片包薄膜衣，约为1000粒。检测，30分钟主要有效成分溶出度为62.5％，甲酸含量为0.27％，重均分子量为905.4Da，分子量分布为1.046。

实施例8：加速稳定性实验

将实施例3-8、对比例制备的组合物放置于40℃±2℃/75％RH±5％RH加速试验结果如下表：

临床研究情况：

该研究为36周、随机、双盲、安慰剂平行对照、多中心临床试验，818例患者随机入组，接受褐藻胶寡糖二酸组合物450mg每日2次口服治疗。受试者年龄在50-85岁，MMSE量表评分在11-26分，MRI显示内侧颞叶萎缩视觉评定量表(MTA)不大于2级，脑白质病变Fazekas量表小于3级，直径大于2em的梗死灶不多于2个，在关键脑区无梗死灶，符合轻度至中度阿尔茨海默症的临床诊断标准。主要疗效指标为认知功能评价量表ADAS-cog12治疗36周相对于安慰剂组与基线变化的组间差异；次要疗效指标为治疗36周临床医生面谈的印象变化量表CIBIC-plus和日常生活能力ADCS-ADL量表及精神行为问卷NPI相对于基线变化的组间差异。安全性评价指标包括不良事件、实验室检查、生命体征、心电图和体格检查等。

临床研究结果显示，褐藻胶寡糖二酸组合物能明显改善AD患者认知功能障碍，与安慰剂组相比，ADAS-cog12量表平均改善值为2.54，具有极其显著的统计学意义(p＜0.0001)。在疾病严重程度偏重的亚组中(MMSE量表评分在11-14)疗效尤为显著，与安慰剂组相比，ADAS-cog12量表平均改善值为4.55。褐藻胶寡糖二酸组合物对次要疗效指标CIBIC-plus具有明显改善趋势(p＝0.059)；但对ADCS-ADL量表和NPI问卷尚未观察到统计学意义。褐藻胶寡糖二酸组合物组和安慰剂组相比，其不良事件或严重不良事件的发生率无显著统计学差异，褐藻胶寡糖二酸组合物安全性好，耐受性强。