阅读说明：本技术 一种吡哆醛在制备治疗卵巢癌的药物中的用途 (Application of pyridoxal in preparation of medicine for treating ovarian cancer ) 是由 令狐华 李若男 詹诗杰 刘斌 于 2020-12-28 设计创作，主要内容包括：本发明属于分子生物学和医药技术领域,公开了一种吡哆醛在制备治疗卵巢癌的药物中的用途,吡哆醛制备成药学上接受的任何一种制剂。验证吡哆醛在制备治疗卵巢癌的药物中的用途的方法包括：获取吡哆醛,并利用PBS配制为50mM工作液,利用0.22μm滤器避光抽滤灭菌；利用xCELLigence工作站及对应的培养板进行活细胞无标记计数检测。本发明通过实验证实了吡哆醛可抑制卵巢癌细胞增殖,且抑制作用十分显著,因此可用于制备治疗卵巢癌的药物,或制备研究卵巢癌发生发展机制的相关试剂。吡哆醛是维生素B6中间代谢产物之一,而维生素B6是水溶性维生素,其应用安全性较高,因此吡哆醛在治疗卵巢癌方面具有很强的临床应用可能。(The invention belongs to the technical field of molecular biology and medicine, and discloses an application of pyridoxal in preparing a medicine for treating ovarian cancer. The method for verifying the use of pyridoxal for the preparation of a medicament for the treatment of ovarian cancer comprises: obtaining pyridoxal, preparing 50mM working solution by using PBS, and performing suction filtration and sterilization by using a 0.22 mu m filter in dark place; and (3) utilizing an xCELLigence workstation and a corresponding culture plate to carry out living cell label-free counting detection. Experiments prove that pyridoxal can inhibit the cell proliferation of ovarian cancer, has obvious inhibition effect, and can be used for preparing medicaments for treating ovarian cancer or preparing related reagents for researching the occurrence and development mechanism of ovarian cancer. Pyridoxal is one of the intermediate metabolites of vitamin B6, while vitamin B6 is a water-soluble vitamin, and the application safety is high, so that the pyridoxal has strong clinical application possibility in the aspect of treating ovarian cancer.)

一种吡哆醛在制备治疗卵巢癌的药物中的用途

技术领域

本发明属于分子生物学和医药技术领域，尤其涉及一种吡哆醛在制备治疗卵巢癌的药物中的用途。

背景技术

目前，卵巢癌的死亡率稳居女性生殖系统恶性肿瘤之首，其疾病进展隐匿，预后差，严重威胁着女性健康。维生素B6的摄取被发现与降低恶性肿瘤的发生及改善预后有关，吡哆醛是维生素B6的主要代谢产物之一，有磷酸化形式(PLP)与非磷酸化形式(PL)两个类型。尽管目前磷酸化形式的吡哆醛(PLP)被认为是维生素B6的活性形式，可作为多种酶的辅酶参与催化反应，维生素B6对恶性肿瘤的抑制作用也通常被认为是PLP的作用。然而，我们反复在卵巢癌细胞内对PLP与PL的抗癌效能进行验证，结果均提示相同浓度的PLP对卵巢癌细胞的抑制作用明显不如PL。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前尚未见到关于非磷酸化形式的吡哆醛PL在肿瘤中的研究，。

解决以上问题及缺陷的难度为：本次申请发明专利的物质，即非磷酸化形式的吡哆醛，传统被认为是维生素B6的非活性形式，其功能尚未被认可。

解决以上问题及缺陷的意义为：明确非磷酸化吡哆醛PL是真正具有抗癌活性的维生素B6成分，有利于充分利用该成分进行抗癌治疗，以获得更好的抗卵巢癌效能，同时具有更合理的效价比。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种吡哆醛在制备治疗卵巢癌的药物中的用途。

本发明是这样实现的，一种吡哆醛在制备治疗卵巢癌的药物中的用途。

进一步，所述吡哆醛制备成药学上接受的任何一种制剂。

本发明的另一目的在于提供一种吡哆醛在制备抑制卵巢癌细胞增殖的试剂中的用途；所述卵巢癌细胞为SKOV3、OVCAR3、3AO或ES-2。

本发明的另一目的在于提供一种验证所述吡哆醛在制备抑制卵巢癌细胞增殖的试剂中的用途的方法，所述验证吡哆醛在制备抑制卵巢癌细胞增殖的试剂中的用途的方法包括：

步骤一，获取吡哆醛，并利用PBS配制为50mM工作液，利用0.22μm滤器避光抽滤灭菌；

步骤二，利用xCELLigence工作站及对应的培养板进行活细胞无标记计数检测。

进一步，步骤二中，所述利用xCELLigence工作站及对应的培养板进行活细胞无标记计数检测包括：

向E-plate 96孔板中加入50μl完全培养基测定基线值，再向孔中加入混合均匀的SKOV3、OVCAR3悬液100μl，2μl吡哆醛，并用完全培养基补足至孔内液体为200μl，令吡哆醛工作浓度达0.5mM，对照组用等量PBS处理；室温放置30min后，设置自动扫面间隙为15min，检测细胞增殖曲线，总扫描时间为72小时。

结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：本发明通过实验证实了吡哆醛可抑制卵巢癌细胞增殖，且抑制作用十分显著，因此可用于制备治疗卵巢癌的药物，或制备研究卵巢癌发生发展机制的相关试剂。PL是维生素B6中间代谢产物之一，而维生素B6是水溶性维生素，其应用安全性较高，因此PL在治疗卵巢癌方面具有很强的临床应用可能。

本发明通过活细胞无标记计数检测并比较了吡哆醛PL与其磷酸酯形式的PLP对卵巢癌细胞增殖能力的影响，相同浓度下PL对卵巢癌细胞的抑制效应显著高于PLP。而进一步研究和开发PL的新用途将有益于充分利用该种化合物，促进临床相关疾病的治疗。

本发明通过实验证实了PL可抑制卵巢癌细胞增殖，因此可用于制备治疗卵巢癌的药物，或制备研究卵巢癌发生发展机制的相关试剂。同时本发明证明吡哆醛对于卵巢癌细胞增殖的抑制作用相比于其他物质对于卵巢癌细胞增殖的抑制作用要显著得多。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对本申请实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例提供的验证吡哆醛在制备抑制卵巢癌细胞增殖的试剂中的用途的方法的流程图。

图2是本发明实施例提供的活细胞无标记计数实验结果示意图。

图3是本发明实施例提供的SKOV3经PBS或0.5mM PL处理6天后细胞克隆生长情况示意图。

图4是本发明实施例提供的OVCAR3经PBS或0.5mM PL处理6天后细胞克隆生长情况示意图。

图5是本发明实施例提供的ES-2经PBS或0.5mM PL处理6天后细胞克隆生长情况示意图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种吡哆醛在制备治疗卵巢癌的药物中的用途，下面结合附图对本发明作详细的描述。

本发明实施例提供的吡哆醛是维生素B6的中间代谢产物，由吡哆醇氧化而来，其化学式为：3-羟基-5-羟甲基-2-甲基吡啶-4-甲醛，分子结构式为：

本发明实施例提供的吡哆醛在制备治疗卵巢癌的药物中的用途。

本发明实施例提供的吡哆醛制备抑制卵巢癌细胞增殖的试剂中的用途；所述卵巢癌细胞为SKOV3、OVCAR3、3AO或ES-2。

如图1所示，本发明实施例提供的验证吡哆醛在制备抑制卵巢癌细胞增殖的试剂中的用途的方法包括以下步骤：

S101，获取吡哆醛，并利用PBS配制为50mM工作液，利用0.22μm滤器避光抽滤灭菌；

S102，利用xCELLigence工作站及对应的培养板进行活细胞无标记计数检测。

步骤S102中，本发明实施例提供的利用xCELLigence工作站及对应的培养板进行活细胞无标记计数检测包括：

向E-plate 96孔板中加入50μl完全培养基测定基线值，再向孔中加入混合均匀的SKOV3、OVCAR3悬液100μl，2μl吡哆醛，并用完全培养基补足至孔内液体为200μl，令吡哆醛工作浓度达0.5mM，对照组用等量PBS处理；室温放置30min后，设置自动扫面间隙为15min，检测细胞增殖曲线，总扫描时间为72小时。

下面结合具体实施例对本发明的技术效果作进一步描述。

实施例1：

1、PL、PLP购自sigma公司，使用PBS配制为50mM工作液，0.22μm滤器避光抽滤灭菌。使用xCELLigence工作站及对应的培养板(E-plate96)进行活细胞无标记计数(RTCA)检测。

2、PL、PLP可以抑制卵巢癌细胞的增殖，且PL对卵巢癌细胞增殖的抑制能力显著强于同等浓度PLP。

向E-plate 96孔板中加入50μl完全培养基测定基线值，再向孔中加入混合均匀的SKOV3、OVCAR3悬液100μl(1×10⁵个/ml)，2μlPL或PLP，并用完全培养基补足至孔内液体为200μl，使PL及PLP工作浓度达0.5mM，对照组用等量PBS处理。室温放置30min后，设置自动扫面间隙为15min，检测细胞增殖曲线，总扫描时间为72小时。参见图2，活细胞无标记计数实验显示PL明显抑制卵巢癌细胞株SKOV3、OVCAR3、3AO和ES-2的生长，且其抑制效应显著高于PLP(**P<0.01)。

以上结果提示PL可用于制备治疗卵巢癌的药物，或制备研究卵巢癌发生发展机制的相关试剂。且本发明在研究过程中发现PL对于卵巢癌细胞增殖的抑制作用要显著优于其他一些化合物。

下面结合实验对本发明的技术效果作详细的描述。

本实验向24孔板每孔中加入500个卵巢癌SKOV3、OVCAR3、ES-2细胞及500μl完全培养基，再向孔中加入PL或等体积PBS，使PL终浓度为0.5mM。置于37℃孵箱中培养6天后，4％多聚甲醛固定细胞，结晶紫染色后观察细胞克隆形成数目及大小(图3-图5)。

图3 SKOV3经PBS或0.5mM PL处理6天后细胞克隆生长情况；图4 OVCAR3经PBS或0.5mM PL处理6天后细胞克隆生长情况；图5 ES-2经PBS或0.5mM PL处理6天后细胞克隆生长情况。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。