罗替戈汀制备抗急性肝损伤药物的新应用
阅读说明：本技术 罗替戈汀制备抗急性肝损伤药物的新应用 (New application of rotigotine in preparation of medicine for resisting acute liver injury ) 是由 岳淑敏 王天 杨韵琦 于 2020-12-22 设计创作，主要内容包括：本发明涉及药学领域,本发明公开了罗替戈汀制备抗急性肝损伤药物的新应用,具体公开了罗替戈汀用于制备抗急性肝损伤药物的用途。罗替戈汀可以降低脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-Gal)诱导的肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,降低急性肝损伤小鼠血清TNF-α浓度,减轻肝组织病理损伤,减少肝组织弥漫性出血。本发明的药理实验证明罗替戈汀具有减轻急性肝损伤作用,为肝损伤提供新的预防或治疗药物。(The invention relates to the field of pharmacy, discloses a new application of rotigotine in preparing an anti-acute liver injury medicament, and particularly discloses an application of rotigotine in preparing an anti-acute liver injury medicament. Rotigotine can reduce levels of Lipopolysaccharide (LPS)/D-galactosamine (D-Gal) induced liver injury mouse serum alanine Aminotransferase (ALT) and glutamic oxaloacetic transaminase (AST), reduce concentration of acute liver injury mouse serum TNF-alpha, alleviate pathological injury of liver tissue, and reduce liver tissue diffuse hemorrhage. Pharmacological experiments prove that the rotigotine has the effect of relieving acute liver injury, and provides a new preventive or therapeutic drug for liver injury.)
技术领域
本发明涉及药学领域，具体涉及罗替戈汀制备抗急性肝损伤药物的新应用。
背景技术
肝损伤主要指肝组织的损伤。多种因素能够引起肝脏损伤，如病毒感染、乙醇过量摄入、服用药物不当、接触化学毒物、缺血再灌注、放射线损伤等。急性肝损伤是指在较短的时间内迅速发生肝细胞损伤，出现肝功能异常。严重或持续的肝损伤未能及时有效的控制最终会导致肝功能衰竭。肝损伤的发展过程中释放的各种炎症介质和促炎细胞因子还会引起全身炎症反应，进而累及肝外器官。
罗替戈汀为非麦角碱多巴胺受体激动剂通过作用于多巴胺D3/D2/D1受体改善震颤和运动障碍症状，降低肌张力，起到发挥拟多巴胺作用。罗替戈汀主要用于治疗早期帕金森病，能够有效的缓解帕金森病的症状，而且还可以极大程度上阻止帕金森病情的发展。罗替戈汀作为一种帕金森病治疗药物，其作用机制与其对大脑尾壳核内多巴胺受体的刺激作用有关（大脑尾壳核区域具有调节运动的功能）。罗替戈汀还可以治疗中至重度原发性不宁腿综合征（RLS）。药理研究还发现，罗替戈汀对5-羟色胺受体具有刺激作用，从而产生同丁螺环酮类的抗焦虑作用。小鼠体外多项功能性实验研究发现，罗替戈汀对小鼠输精管刺激性抽搐具有抑制效果，且其抑制性明显要强于阿扑吗啡、喹吡罗以及溴隐亭等。公开的药理研究显示：罗替戈汀具有抗帕金森病作用和神经保护作用。
但是现有技术中未公开罗替戈汀任何具有抗急性肝损伤的信息。
发明内容
已知的罗替戈汀是一种治疗帕金森病的药物，但是，为解决现有技术中的上述问题，本发明的目的在于提供罗替戈汀制备抗急性肝损伤药物的新应用，从而为肝损伤提供新的预防和治疗药物。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
罗替戈汀制备抗急性肝损伤药物的应用。
优选，所述急性肝损伤为LPS/D-Gal诱导的肝损伤。
优选，所述罗替戈汀皮下注射后具有抗急性肝损伤的作用。
本发明提供的罗替戈汀制备抗急性肝损伤药物能够减轻肝组织病理损伤。并且，所述治疗方法包括但不限于以下步骤：在药物作用对象进行肝损伤之前将罗替戈汀施用于所述作用对象。
本发明提供的罗替戈汀制备抗急性肝损伤的药物能够减轻肝组织病理损伤。分析原因如本发明的药理实验显示，罗替戈汀能够通过降低脂多糖（LPS）/D-氨基半乳糖（D-Gal）诱导的肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平，降低急性肝损伤小鼠血清TNF-α浓度，减轻肝组织病理损伤，减少肝组织弥漫性出血。
有益效果：
本发明提供了罗替戈汀制备抗急性肝损伤药物的新应用，并且，包括：罗替戈汀在预防急性肝损伤时的用途、肝损伤治疗药物、肝损伤治疗方法，本发明为急性肝损伤提供了新的预防思路和治疗药物。
附图说明
附图用来提供对本发明技术方案的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本申请的
具体实施方式
一起用于解释本发明的技术方案，并不构成对本发明技术方案的限制。
图1：罗替戈汀对LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠肝组织病理损伤的影响（放大400倍后的照片）。其中A为对照组；B为模型组；C为罗替戈汀0.35 mg/kg剂量组；D为罗替戈汀0.7 mg/kg剂量组；E为罗替戈汀1.4 mg/kg剂量组。
图2：罗替戈汀对LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠血清AST升高的抑制作用；
图3：罗替戈汀对LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠血清ALT升高的抑制作用；
图4：罗替戈汀对LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠血清TNF-α水平的影响。
具体实施方式
为了更好地理解本发明的内容，下面结合具体的实施方法对本发明内容作进一步说明。但在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明保护的内容不局限于以下实施例。下面将参照附图对本发明进行更详细的描述，其中表示了本发明的优选实施例，应该理解本领域技术人员可以修改在此描述的本发明而仍然实现本发明的有益效果。因此，下列描述应当被理解为对于本领域技术人员的广泛指导，而并不作为对本发明的限制。
实施例1 LPS/D-Gal诱导的小鼠急性肝损伤实验
材料和试剂
罗替戈汀（美国Sigma-Aldrich公司）；脂多糖（美国Sigma-Aldrich公司）；D-氨基半乳糖（美国Sigma-Aldrich公司）；谷丙转氨酶（ALT）测试盒（南京建成生物工程研究所）；谷草转氨酶（AST）测试盒（南京建成生物工程研究所）；小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）试剂盒（北京索莱宝有限公司）。
动物：SPF级BALB/c小鼠，雄性，体重18~22 g，济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，合格证号：SCXK（鲁）20190003。
仪器：电子天平（上海Mettler Optiphot公司）；低温离心机（上海Eppendorf公司）；恒温箱（上海长流科学仪器有限公司）；SpectraMax M3多功能酶标仪（美国MolecularDevices公司）。
1）LPS/D-Gal诱导的小鼠急性肝损伤实验步骤如下：
BALB/c雄性小鼠（18~22 g）40只，随机分为对照组、模型组、罗替戈汀0.35 mg/kg剂量组、罗替戈汀0.7 mg/kg剂量组、罗替戈汀1.4 mg/kg剂量组，每组8只。适应性喂养3天后，对照组小鼠皮下注射1%吐温20，模型组小鼠皮下注射1%吐温20，罗替戈汀0.35、0.7、1.4mg/kg剂量组分别按各自给药剂量皮下注射罗替戈汀。2小时后，对照组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠注射液。模型组、罗替戈汀0.35 mg/kg剂量组、罗替戈汀0.7 mg/kg剂量组、罗替戈汀1.4 mg/kg剂量组小鼠腹腔注射LPS（30 μg/kg）/D-Gal（800 mg/kg）。在注射LPS/D-Gal 6小时后，收集小鼠血液以及肝组织。
2）肝组织病理观察：注射LPS/D-Gal 6小时后，每组随机挑选3小鼠，用过量水合氯醛安乐死小鼠，取小鼠右叶肝脏（此过程在冰上进行），置于4%多聚甲醛组织固定液中过夜。在玻璃缸中酒精梯度脱水，石蜡包埋后切片。苏木精-伊红染色，然后用中性树脂封片，放在光学显微镜下观察肝组织的病理变化。
如图1所示，病理组织学结果显示：1、对照组小鼠肝组织中的肝小叶结构清晰，肝细胞排列整齐有规则，肝细胞结构以及形态正常。2、模型组小鼠肝组织弥漫性出血，肝细胞排列紊乱，中央静脉周围可见大量炎性细胞浸润、大片肝细胞坏死，细胞核裂解。3、罗替戈汀0.35、0.7、1.4 mg/kg剂量组小鼠肝组织出血减少，肝细胞排列相对整齐，炎症细胞浸润减少，肝细胞坏死明显减少。
其中，图1（放大400倍后的照片）表明，在小鼠注射LPS/D-Gal前注射罗替戈汀可以减轻LPS/D-Gal诱导的小鼠肝组织损伤。即本发明提供了罗替戈汀制备预防急性肝损伤药物的新应用。本发明提供的罗替戈汀能够作为预防急性肝损伤药物的原因在于罗替戈汀通过降低LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠血清AST、ALT升高，降低血清TNF-α水平，减轻肝组织病理损伤，从而使得罗替戈汀表征出具有减轻肝损伤的作用。
本发明通过下述LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠血清AST、ALT浓度检测实验和小鼠肝损伤后血清TNF-α水平检测实验进一步印证了上述分析。
实施例2
1）血清AST、ALT活性检测：注射LPS/D-Gal 6小时后，取实施例1的小鼠，小鼠眼内眦静脉取血，室温静置0.5小时，4℃，3500 r/min，离心15 min。吸取上层血清转移至新的EP管中。血清AST、ALT活性分别使用谷丙转氨酶（ALT）测试盒、谷草转氨酶（AST）测试盒进行检测。结果用平均值±标准差表示（n=8）。
检测结果如图2和图3所示，与对照组相比，模型组小鼠血清AST、ALT活性显著升高（** P<0.01）；与模型组相比，罗替戈汀0.35 mg/kg剂量组小鼠血清AST活性降低（# P<0.05）；与模型组相比，罗替戈汀0.7、1.4 mg/kg剂量组小鼠血清AST、ALT活性显著降低（## P<0.01）。
图2和图3结果表明，在小鼠注射LPS/D-Gal前注射罗替戈汀，可以降低LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠血清AST、ALT活性。
2）血清TNF-α浓度检测：注射LPS/D-Gal 6小时后，取实施例1的小鼠，小鼠眼内眦静脉取血，室温静置0.5小时，4℃，3500 r/min，离心15 min。吸取上层血清转移至新的EP管中。用小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）试剂盒检测小鼠血清TNF-α水平。结果用平均值±标准差表示（n=8）。
检测结果如图4所示，与对照组相比，模型组小鼠血清TNF-α水平显著上升（** P<0.01）；与模型组相比，罗替戈汀0.35、0.7、1.4 mg/kg剂量组小鼠血清TNF-α水平显著降低（## P<0.01）。
图4的结果表明，在小鼠注射LPS/D-Gal前注射罗替戈汀，可以降低LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠血清TNF-α水平。
通过对LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠血清AST、ALT浓度检测、肝组织病理学观察以及小鼠肝损伤后血清TNF-α水平检测，明确罗替戈汀抗急性肝损伤的作用的关键在于罗替戈汀通过降低LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠血清AST、ALT升高，降低血清TNF-α水平，减轻肝组织病理损伤。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种等同变换，这些等同变换均属于本发明的保护范围。另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。