用于预防和治疗口腔疾病的生物多糖及其应用
阅读说明：本技术 用于预防和治疗口腔疾病的生物多糖及其应用 (Biological polysaccharide for preventing and treating oral diseases and application thereof ) 是由 郭宏亮 叶榛 吴佳迪 庄秀园 王轩 朱斌念 于 2020-08-21 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种具有预防和治疗口腔疾病的生物多糖及其应用。具体地,本发明提供了β-葡聚糖的用途,用于制备一制剂或组合物,所述制剂或组合物用于预防和/或治疗口腔疾病。所述β-葡聚糖有明显缓解和改善口腔疾病,控制口腔疾病的发生和发展的作用,可以用于制备口腔清洁用品。(The invention provides a biological polysaccharide for preventing and treating oral diseases and application thereof. In particular, the invention provides the use of beta-glucan for the preparation of a formulation or composition for the prevention and/or treatment of an oral disease. The beta-glucan has the functions of obviously relieving and improving oral diseases and controlling the occurrence and development of the oral diseases, and can be used for preparing oral cleaning products.)
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种具有预防和治疗口腔疾病功效的生物多糖及其应用。
背景技术
口腔是消化道的起始部分，人体重要的器官之一，它除了本身的功能之外，还是全身健康状态的一个“窗口”。有些全身疾病可以在口腔表现，甚至首先在口腔表征。牙周组织和口腔黏膜系统，可以发生各种疾病，如急性和慢性非特殊感染性炎症、某些特殊感染(如梅毒、结核、艾滋病等)、创伤、畸形、肿瘤，还有一些全身性疾病(包括某些先天性疾病)也可发生在口腔。
口腔黏膜疾病指发生在口腔黏膜和口腔软组织的多种感染和非感染性疾病。可分为两大类，一类是原发于口腔黏膜的疾病，另一类是全身性疾病在口腔的表现，主要表现为口腔黏膜损害。常见的疾病有溃疡、扁平苔藓、白斑、盘状红斑狼疮、口腔炎、舌炎等。口腔黏膜多好发于颊、舌、唇、软腭等黏膜，也可与皮肤同时发病。此外，口腔溃疡等疾病较难根治，易反复发作。目前的治疗手段主要是消炎、止痛、促进溃疡愈合，常用抗生素类、激素类药物及维生素，如四环素、地塞米松、倍他米松、维生素C、复合维生素B、西瓜霜等。
牙周病包括牙龈病和牙周炎两大类疾病。牙龈病中最常见的是牙菌斑引起的慢性炎症，即牙龈炎，以及一些受全身因素(内分泌、血液疾病、药物等)以及局部刺激影响的牙龈疾病。牙周炎是一组有着相似的临床表现和组织学改变、但致病因素和机体反应性不完全相同、病程进展不同、对治疗反应也不尽相同的多因素疾病。中国是牙周病高发的大国，80％～90％的成人患有不同程度的牙周疾病，但民众大多缺乏口腔保健意识，口腔卫生差，对牙周病更是缺乏认识，以致贻误治疗时机，不得不拔牙或等待松动牙自行脱落。牙周病的治疗药物，主要包括抗生素类药物和抗炎类药物，如硝基咪唑类、四环素类、青霉素类、大环内酯类药物、非甾体类抗炎药物等。
上述口腔疾病治疗药物，或是治疗效果不明显，或是存在一定的副作用，因此开发新型的用于防治口腔疾病的药物具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有预防和治疗口腔疾病功效的生物多糖及其应用。
本发明的第一方面，提供了一种β-葡聚糖的用途，用于制备一制剂或组合物，所述制剂或组合物用于预防和/或治疗口腔疾病。
在另一优选例中，所述口腔疾病包括牙周疾病、牙本体疾病和口腔黏膜疾病。
在另一优选例中，所述牙周疾病包括牙龈炎、牙周炎。
在另一优选例中，所述牙本体疾病包括龋齿、牙本质敏感、牙齿色斑。
在另一优选例中，所述口腔黏膜疾病包括白斑、口腔扁平苔藓、口腔溃疡、盘状红斑狼疮、口腔炎、舌炎。
在另一优选例中，所述制剂或组合物用于预防牙槽骨质流失、预防龋齿、抑制牙菌斑的生成、去除牙结石、抗牙本质敏感、改善牙龈出血、去除牙渍、美白牙齿、调节口腔微生态、改善口腔卫生状态、防治口腔溃疡、修复并提升口腔黏膜免疫力、或其组合。
在另一优选例中，所述制剂或组合物还用于口腔术后护理(促进伤口愈合)、预防和/或治疗糖尿病患者的口腔疾病。
在另一优选例中，所述牙槽骨质流失包括牙周疾病引起的牙槽骨质流失和种植牙牙槽骨骨质流失。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖为β-D-葡聚糖。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖为β-1,3-葡聚糖，优选地，具有β-1,6-分支的β-1,3-葡聚糖。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖的结构如式I所示，
其中，l为≥0的整数，较佳地0-50，较佳地0-10，更佳地0-3，更佳地1-2，更佳地1；m为≥0的整数，较佳地为0-19，较佳地为0-4，更佳地为0-1，更佳地为0；n为≥3的整数，较佳地为30-60000，更佳地100-10000。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖的分支度(DB)为0.02-0.8，较佳地0.1-0.5，较佳地0.2-0.4。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖包括具有三螺旋立体结构的β-葡聚糖。
在另一优选例中，所述三螺旋立体结构的β-葡聚糖的含量为80％，90％，95％，按β-葡聚糖的总摩尔量计。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖的β-1,3-主链为三螺旋立体结构的主体。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖的β-1,6-分支位于三螺旋立体结构的外侧。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖的分子量≥2kD，较佳地2kD-40000kD，更佳地20kD-20000kD。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖的分子量可以为5kD-35000kD；10kD-30000kD；50kD-25000kD；100kD-20000kD；200kD-18000kD；400kD-16000kD；500kD-14000kD；1000kD-12000kD；2000kD-4000kD；3000kD-5000kD；4000kD-6000kD；5000kD-7000kD；6000kD-8000kD；7000kD-9000kD；或者8000kD-10000kD。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖选自下组：裂褶菌β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖、小核菌β-葡聚糖、灰树花β-葡聚糖、侧耳多糖、蘑菇β-葡聚糖、酵母β-葡聚糖、燕麦β-葡聚糖、或其组合。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖为裂褶菌β-葡聚糖。
在另一优选例中，所述香菇β-葡聚糖为每5个β-1,3-的主链，带有2个β-1,6-的分支，且每个分支1个葡萄糖残基的β-葡聚糖。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖的纯度≥70％，较佳地≥90％，更佳地≥95％，更佳地≥99％。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖具有良好的稳定性。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖呈固态形式或液态形式，如β-葡聚糖固体颗粒或粉末、或β-葡聚糖水溶液。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖颗粒或粉末的粒径≤20mm，较佳地0.001-10mm，更佳地0.01-5mm，更佳地0.1-2mm。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖为完全水溶的β-葡聚糖。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)具有良好的水溶性和/或天然可溶性。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)在25℃水(100g)中的溶解度≥0.0001g，较佳地0.01-50g，更佳地0.1-10g。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)在25℃水(100g)中的溶解度可以为0.1-100g；0.2-90g；0.5-80g；1-50g；或者，所述溶解度可以为0.1-0.3g；0.2-0.4g；0.3-0.5g；0.4-0.6g；0.5-0.7g；0.6-0.8g；0.7-0.9g；0.8-1g；或者1-3g；2-4g；3-5g；4-6g；5-7g；6-8g；7-9g；8-10g。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖溶液为β-葡聚糖在水中的溶液，即β-葡聚糖水溶液。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖(水)溶液粘度大；较佳地，质量浓度为0.5％的β-葡聚糖水溶液(25℃时)粘度≥40mPa·s，更佳地100-10000mPa·s，更佳地500-2000mPa·s。
在另一优选例中，所述质量浓度为0.5％的β-葡聚糖水溶液(25℃)粘度可以为50-10000mPa·s；100-9000mPa·s；200-8000mPa·s；300-7000mPa·s；400-6000mPa·s；450-5000mPa·s；500-5000mPa·s；550-4000mPa·s；600-3000mPa·s；650-2000mPa·s；700-1500mPa·s。
在另一优选例中，所述质量浓度为1％的β-葡聚糖的水溶液具有高澄清度或高透光率，所述质量浓度为1％的β-葡聚糖水溶液的透光率≥50％，较佳地≥80％，较佳地≥85％，更佳地≥95％；
在另一优选例中，所述β-葡聚糖溶液具有良好的稳定性。
本发明的第二方面，提供了一种制剂，所述制剂包含β-葡聚糖。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖选自下组：裂褶菌β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖、小核菌β-葡聚糖、灰树花β-葡聚糖、侧耳多糖、蘑菇β-葡聚糖、酵母β-葡聚糖、燕麦β-葡聚糖、或其组合。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖为裂褶菌β-葡聚糖。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖为完全水溶的β-葡聚糖。
在另一优选例中，所述制剂为裂褶菌β-葡聚糖，且所述β-葡聚糖具有良好的水溶性、天然可溶性和/或复溶性。
在另一优选例中，所述制剂中的β-葡聚糖呈固态形式或液体形式。
在另一优选例中，所述制剂含有(a)β-葡聚糖；以及任选的(b)药学上、化妆品学上、或器械类可接受的载体或赋形剂。
在另一优选例中，所述制剂含有(a)裂褶菌β-葡聚糖；以及任选的(b)药学上、化妆品学上、或器械类可接受的载体或赋形剂。
在另一优选例中，所述制剂含有0.0001-99wt％，较佳地0.001-90wt％，更佳地0.01-50wt％，更佳地0.05-10wt％的β-葡聚糖，按制剂的总重量计。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖在所述制剂中的质量浓度为≥1μg/mL，具体可以为1μg/mL-200mg/mL，或者1μg/mL-5mg/mL，或者1μg/mL-1mg/mL。
在另一优选例中，所述组合物或制剂的剂型为固体剂型、半固体剂型、或液体剂型。
在另一优选例中，所述制剂可以制成口腔清洁用品，较佳地为牙膏、含漱剂、口腔凝胶、口香糖。
在另一优选例中，所述制剂(含漱剂)可以是液体制剂、气雾剂、粉剂、片剂、浓缩剂。
在另一优选例中，所述组合物为药物组合物或化妆品组合物。
在另一优选例中，所述制剂中包含β-葡聚糖水溶液，所述β-葡聚糖的质量浓度为0.0001-50wt％，较佳地0.02-10wt％，更佳地0.05-5wt％，按β-葡聚糖水溶液的总重量计。
在另一优选例中，所述制剂中β-葡聚糖水溶液的含量≥80wt％，较佳地≥90wt％，更佳地≥95wt％，更佳地≥99wt％，更佳地≥99.5wt％，按制剂的总重量计。
在另一优选例中，所述制剂中的β-葡聚糖具有选自下组一个或多个特征：
(1)所述β-葡聚糖的纯度≥70％，较佳地≥90％，更佳地≥95％，更佳地≥99％；
(2)所述β-葡聚糖具有良好的水溶性、复溶性和/或天然可溶性；
(3)所述β-葡聚糖(固体颗粒或粉末)在25℃水中的溶解度≥0.0001g/100g水，较佳地0.01-50g/100g水，更佳地0.1g-10g/100g水；
(4)所述β-葡聚糖的水溶液具有高澄清度或高透光率；优选地，所述质量浓度为1％的β-葡聚糖水溶液的透光率≥50％，较佳地≥80％，较佳地≥85％，更佳地≥95％；
(5)所述β-葡聚糖溶液粘度大；优选地，质量浓度为0.5％的β-葡聚糖水溶液(25℃时)粘度≥40mPa·s，更佳地100-10000，更佳地600-2000mPa·s；
(6)所述β-葡聚糖的水溶液具有良好的稳定性；和/或
(7)所述β-葡聚糖的分子量≥2kD，较佳地2kD-40000kD，更佳地20kD-20000kD。
在另一优选例中，所述制剂含有(a)β-葡聚糖；以及(b)药学上、化妆品学上、或器械类可接受的载体或赋形剂。
在另一优选例中，所述制剂含有0.0001-99wt％，较佳地0.001-90wt％，更佳地0.01-50wt％，更佳地0.05-10wt％的β-葡聚糖，按制剂的总重量计。
在另一优选例中，所述制剂还含有(c)第二活性成分，所述第二活性成分为不同于所述β-葡聚糖的预防和/或治疗口腔疾病的活性成分。
在另一优选例中，所述第二活性成分选自下组：防龋剂(包括氟化钠、氟化亚锡、SMFP、赤藓醇和防龋酶类)、防牙菌斑和牙龈炎化合物(包括三氯生、柠檬酸锌+三氯生、血根碱月桂醇硫酸酯钠盐、氯已定、度米芬、西吡氯铵)、抗牙石剂(包括焦磷酸盐+NaF、焦磷酸盐+PVM/MA/NaF、柠檬酸锌+单氟磷酸钠、锌盐+氟化钠)、消炎剂(包括二氢胆固醇、尿囊素、甘草甜素、氨基乙酸、甘菊环)、脱敏剂(包括硝酸钾、氯化锶、柠檬酸氢二钠)、去臭剂(包括叶绿素铜钠)。
在另一优选例中，所述制剂用于预防和/或治疗口腔疾病。
本发明的第三方面，提供了一种口腔清洁用品，所述的口腔清洁用品包含β-葡聚糖和清洁用品中可接受的辅料。
在另一优选例中，所述的辅料包括基料(研磨剂、保湿剂、表面活性剂、增稠剂、防腐剂)、增味剂(香味剂、甜味剂)、功能添加剂(着色剂、缓蚀剂、防龋剂、防牙菌斑和牙龈炎化合物、抗牙石剂、消炎剂、脱敏剂、祛臭剂)、溶剂(去离子水)、或其组合。
在另一优选例中，所述的口腔清洁用品为牙膏，并且，所述牙膏包含选自下组的组分：β-葡聚糖(功能添加剂)、黄原胶(增稠剂)、羧甲基纤维素钠(增稠剂)、水合硅石(研磨剂)、山梨醇(保湿剂)、单氟磷酸钠(抗牙石剂)、苯甲酸钠(防腐剂)、糖精钠(甜味剂)、SDS(表面活性剂)、甘油(保湿剂)、香精(香味剂)、或其组合。
在另一优选例中，所述的口腔清洁用品为漱口水。
在另一优选例中，所述的口腔清洁用品为口香糖。
本发明的第四方面，提供了一种预防和/或治疗口腔疾病的方法，包括步骤：(a)给需要的对象施用β-葡聚糖。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖选自下组：裂褶菌β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖、小核菌β-葡聚糖、灰树花β-葡聚糖、侧耳多糖、蘑菇β-葡聚糖、酵母β-葡聚糖、燕麦β-葡聚糖、或其组合。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖为裂褶菌β-葡聚糖。
在另一优选例中，所述的对象包括口腔疾病患者、或正常人群。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了根据菌斑显示剂染色的范围判定菌斑指数。记分标准：0＝牙面无菌斑；1＝牙颈部龈缘处有散在的点状菌斑；2＝牙颈部连续窄带状菌斑宽度不超过1mm；3＝牙颈部菌斑覆盖面积超过1mm，但少于牙面1/3；4＝牙菌斑覆盖面积至少占牙面1/3，但不超过2/3；5＝牙菌斑覆盖面积占牙面2/3或2/3以上。
图2显示了志愿者使用含β-葡聚糖牙膏前后牙菌斑的情况，从照片上可明显看出志愿者使用含β-葡聚糖的牙膏一月后，其牙菌斑得到了显著的改善，并且牙齿也美白了。
图3显示了对志愿者牙齿上的菌斑进行评分和统计的结果。具体地，根据图1所示的判定菌斑指数的方法，将图2中志愿者牙齿上的菌斑进行评分，统计结果显示，照片上所示的牙菌斑，在使用含β-葡聚糖的牙膏后得到了显著的抑制效果(P value＝0.0018，﹡﹡)
图4显示了判断出血指数(BI)的依据。其中，记分标准：0＝牙龈健康，无炎症及出血；1＝牙龈颜色有炎症性改变，探诊不出血；2＝探诊后有点状出血；3＝探诊出血沿牙龈缘扩散；4＝出血流满并溢出龈沟；5＝自动出血。
图5显示了志愿者牙龈出血情况的统计结果。具体地，牙医根据图4判断出血指数的依据，记录了志愿者牙龈出血情况，通过统计分析，志愿者在使用含有β-葡聚糖的牙膏之后，牙龈出血得到明显改善，虽然从探诊出血诊断上并没有显著性(样本数不足)，但从志愿者调查问卷中，其中有8位志愿者使用前，刷牙时都会伴有牙龈出血的情况，但使用含β-葡聚糖的牙膏平均两周后，牙龈出血问题得到明显改善，并且其中有4名志愿者在使用该牙膏两月后，牙龈出血问题得到彻底解决。
图6显示了牙颈部牙石量的记分标准。具体地，检查牙石时，将探针插入牙远中面龈沟内，然后沿着龈沟向近中移动，根据牙颈部牙石的量记分。0＝龈上、龈下无牙石；1＝龈上牙石覆盖面积占牙面1/3一下；2＝龈上牙石覆盖面积在牙面1/3与2/3之间，或牙颈部有散在龈下牙石；3＝龈上牙石覆盖面积占牙面2/3以上，或牙颈部有连续而厚的龈下牙石。
图7显示了志愿者在使用含β-葡聚糖的牙膏之后，牙石的改善情况。实验结果显示，志愿者在使用该牙膏一个月后，牙石得到显著改善，并且持续使用两个月时间，牙石的情况得到进一步的改善。事实上，牙龈炎以及之后发展成牙周炎的起因主要就是牙齿上的牙菌斑和牙石，如果口腔的卫生情况得到改善，直接就可以改善牙龈炎症水平。
图8显示了各式牙周探针。其中，图8A显示了UNC-15探针：每1mm均有刻度标记，每5mm有加粗的颜色标记；图8B显示了非金属探针：每1mm均有刻度标记，每5mm有加粗的颜色标记；图8C显示了Williams探针：刻度标记分别为1、2、3、5、7、8、9、10mm；图8D显示了WHO(CPITN)探针：尖端为0.5mm球状，刻度标记分别为3.5、5.5、8.5、11.5mm.
图9显示了牙周袋探测部位及方法。其中，图9A显示按唇、舌测六个点探测；图9B显示提插式探测近、中、远三点
图10显示了邻面探诊示意图。其中，图10A显示垂直插入探针可能探查不到龈谷；图10B显示探针靠近接触区，稍倾斜探入，可探到龈谷最深处。
图11显示了牙周探诊的结果。具体地，根据探诊深度的变化，了解志愿者使用含β-葡聚糖的牙膏前后牙龈炎症的情况，通过探诊测量牙周探诊及数据分析发现，志愿者使用含β-葡聚糖的牙膏之后，牙周探诊的深度得到明显改善。因为正常健康的牙周探诊深度应该是3mm或者以下，但是由于牙龈炎症的发生导致牙龈附着能力下降，继而导致牙周探诊深度加深。志愿者使用含含β-葡聚糖的牙膏之后，牙周探诊深度降低，说明牙龈附着能力增强，也可反应牙龈炎症得到了改善。
图12显示了实施例1中制备的裂褶菌β-葡聚糖的傅里叶变换红外光谱图。
图13显示了含有裂褶菌β-葡聚糖的牙膏对牙齿敏感指数的影响。
图14显示了含有裂褶菌β-葡聚糖的漱口水口腔溃疡愈合周期的影响。
图15显示了含有裂褶菌β-葡聚糖的牙膏对口腔溃疡愈合周期的影响。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现，β-葡聚糖，尤其是具有天然可溶性、高分子量、高粘度的β-葡聚糖(如裂褶菌β-葡聚糖)，能够非常有效地预防和/或治疗口腔疾病。实验表明，裂褶菌β-葡聚糖能够防治口腔疾病；预防牙周疾病引起的牙槽骨质流失；调节口腔微生态，改善口腔卫生状态，抑制牙菌斑的生成以及去牙石作用；修复受损的口腔黏膜，防治口腔溃疡；提升口腔黏膜免疫力，抵御外界病原微生物的感染。在此基础上，完成了本发明。
术语说明
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由…构成”、或“由…构成”。
如本文所用，术语“完全水溶”指所述固态形式的β-葡聚糖，可以在水中完全溶解成为β-葡聚糖水溶液，即在25℃100g水中β-葡聚糖的溶解度≥0.0001g，较佳地0.01-50g，更佳地0.1g-10g。
如本文所用，术语“天然可溶性”指天然状态的β-葡聚糖本身所具有的、在水中完全溶解形成水溶液的性质。所述“天然状态的β-葡聚糖”，是指使用天然方法生产得到(如生物发酵)的β-葡聚糖，所述β-葡聚糖没有经过任何化学改性、并且没有经过任何物理的和/或化学的和/或生物的方法将其长链分子打断而降低其分子质量。在另一优选例中，本发明β-葡聚糖为天然状态的β-葡聚糖。
口腔黏膜疾病
口腔黏膜疾病指发生在口腔黏膜和口腔软组织的多种感染和非感染性疾病。可分为两大类，一类是原发于口腔黏膜的疾病，另一类是全身性疾病在口腔的表现，主要表现为口腔黏膜损害。常见的疾病有溃疡、扁平苔藓、白斑、盘状红斑狼疮、口腔炎、舌炎等。口腔黏膜多好发于颊、舌、唇、软腭等黏膜，也可与皮肤同时发病。
(一)白斑世界卫生组织在1979年制定了白斑的定义，白斑指发生在口腔黏膜上的白色损害，不能擦去，在临床和组织学上不能诊断为其他疾病。大量流行病学调查表明，白斑发生的部位多见于颊黏膜，上下唇处。白斑是一种癌前病变，吸烟是引起白斑的主要危险因素，白斑有导致口腔癌的可能，具调查其癌变率为3％-6％，停止吸烟后白斑可以消除。
(二)口腔扁平苔藓扁平苔藓是一种发生于皮肤和黏膜上的伴有慢性浅在性炎症的角化性病变。口腔的主要表现为黏膜上的白色线状、网状或环状条纹。在流行病学调查时，扁平苔藓的评价指标主要为患病率。
牙本质敏感
牙本质敏感是指暴露的牙本质对外界刺激所产生的短而尖锐的疼痛，并且不能归因于其他特定原因引起的牙体缺损或病变。常见的外界刺激包括温度刺激、吹起刺激、机械刺激或化学刺激。牙本质敏感产生的原因有多种解释，如神经学说、牙本质纤维传导学说和流体动力学理论。而流体动力学理论是目前被较多接受的牙本质敏感病因理论。在解剖学上，牙本质敏感主要出现在釉质缺失，牙本质暴露之后，位于牙本质内的牙本质小管在髓腔和口腔两端暴露，小管内的液体在外界刺激下流动，压迫小管内的神经纤维产生疼痛。而造成牙釉质缺失的原因很多，常见的如牙齿酸蚀、牙齿磨耗、牙颈部损伤等。还有一些原因导致的牙龈退缩、牙本质暴露也会引起牙本质敏感，如牙周病、不正确的刷牙等
牙本质敏感的评价方法
检查牙本质敏感的方法通常采用温度测试、冷空气喷吹，探针探测和压力测试等。比较常用的方法为Schiff冷空气敏感指数。
冷空气吹喷敏感性评价使用牙科综合治疗台的气枪在离开敏感牙齿1cm距离喷吹1秒，吹起温度约19-21℃，吹起时将手指放在邻牙以避免邻牙症状影响结果的准确性。用Schiff冷空气敏感指数评价，计分如下：
0＝牙及受试者对空气刺激不反应；
1＝牙及受试者对空气刺激有反应，但不请求中止刺激；
2＝牙及受试者对空气刺激有反应，请求中止刺激或去除刺激；
3＝牙及受试者对空气刺激有反应，刺激导致疼痛，请求停止；
该参数低的记分表示牙齿敏感性低，反之亦然。
龋齿
龋病是在以细菌为主的多种因素影响下，牙体硬组织发生慢性进行性破坏的一种疾病。龋齿危险因素是指可能会发生龋齿的潜在因素，也称易感因素或者有害因素，它包含在促使龋病发生的细菌、宿主及食物因素之中。
龋齿的实验室预测：以致龋菌及酸性产物为指标，检测龋发生危险因素的试验称为龋活性试验(CAT)。目前比较成熟的方法如下：
Dentocult SM试验
目的：观察唾液中每毫升菌落形成单位(CFU/ml)的变形链球菌数量来判断龋的活性。
试剂盒：含有轻唾选择培养液的5ml带螺帽的培养试管、标准的塑胶附着板、杆菌肽纸片及石蜡。
检测方法：先令受试者咀嚼一粒石蜡丸1分钟后，持附着板在舌背部翻转涂抹10次，立即将板放置培养试管内，旋上螺帽，37℃，48小时培养后，计数在附着板上的变形链球菌(蓝色)密度情况。
结果判断：分四级：“0和1”＜105；“2”＜105—106；“3”＞106。“3”为高龋的活性。
牙齿色斑
牙齿色斑是积聚的，不是牙齿固有的，它是由牙表膜或牙菌斑变色引起的。这些外来的牙齿色斑可能至少包括三种形成机理：①生色的细菌在牙菌斑产生有色的物质。②一些通过口腔摄入一些有色物质产生颜色(如果浆、茶和咖啡)，或吸烟引起。③获得性薄膜的化学变化形成有色物质。此外，茶、酒、香烟、其他使获得性薄膜产生有色物质、抗菌剂等都影响到牙齿色斑。
β-葡聚糖
β-葡聚糖是一种天然多糖，在自然环境中可以找到相当多种类的β-葡聚糖，通常存在于特殊种类的细菌、酵母菌、真菌(灵芝)的细胞壁中，也可存在于高等植物种子的包被中。β-葡聚糖的生产方法主要有两种，其一是从燕麦等谷物或蘑菇等子实体真菌中直接提取；其二是通过真菌或细菌的液体发酵，经由对发酵液进行提取加工，以获得β-葡聚糖。
如本文所用，“本发明β-葡聚糖”、“本发明生物多糖”可互换使用，主要是指本发明第一方面所述的β-葡聚糖，所述β-葡聚糖选自下组：裂褶菌β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖、小核菌β-葡聚糖、灰树花β-葡聚糖、侧耳多糖、蘑菇β-葡聚糖、酵母β-葡聚糖、燕麦β-葡聚糖、或其组合；优选地裂褶菌β-葡聚糖。
如本文所用，“裂褶菌β-葡聚糖”指来源于裂褶菌的β-葡聚糖。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖的结构如式I所示。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖的分子量≥2kD，较佳地2kD-40000kD，更佳地20kD-20000kD。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖的分子量可以为5kD-35000kD；10kD-30000kD；50kD-25000kD；100kD-20000kD；200kD-18000kD；400kD-16000kD；500kD-14000kD；1000kD-12000kD；2000kD-4000kD；3000kD-5000kD；4000kD-6000kD；5000kD-7000kD；6000kD-8000kD；7000kD-9000kD；或者8000kD-10000kD。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖的纯度≥70％，较佳地≥90％，更佳地≥95％，更佳地≥99％。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖具有良好的稳定性。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖呈固态形式或液态形式，如β-葡聚糖固体颗粒或粉末、或β-葡聚糖水溶液。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖颗粒或粉末的粒径≤20mm，较佳地0.001-10mm，更佳地0.01-5mm，更佳地0.1-2mm。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)具有良好的水溶性和/或天然可溶性。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)在25℃水(100g)中的溶解度≥0.0001g，较佳地0.01-50g，更佳地0.1-10g。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)在25℃水(100g)中的溶解度可以为0.1-100g；0.2-90g；0.5-80g；1-50g；或者，所述溶解度可以为0.1-0.3g；0.2-0.4g；0.3-0.5g；0.4-0.6g；0.5-0.7g；0.6-0.8g；0.7-0.9g；0.8-1g；或者1-3g；2-4g；3-5g；4-6g；5-7g；6-8g；7-9g；8-10g。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖溶液为β-葡聚糖在水中的溶液，即β-葡聚糖水溶液。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖(水)溶液粘度大；较佳地，质量浓度为0.5％的β-葡聚糖水溶液(25℃时)粘度≥40mPa·s，更佳地100-10000mPa·s，更佳地500-2000mPa·s。
在另一优选例中，所述质量浓度为0.5％的β-葡聚糖水溶液(25℃)粘度可以为50-10000mPa·s；100-9000mPa·s；200-8000mPa·s；300-7000mPa·s；400-6000mPa·s；450-5000mPa·s；500-5000mPa·s；550-4000mPa·s；600-3000mPa·s；650-2000mPa·s；700-1500mPa·s。
在另一优选例中，所述质量浓度为1％的β-葡聚糖的水溶液具有高澄清度或高透光率，所述质量浓度为1％的β-葡聚糖水溶液的透光率≥50％，较佳地≥80％，较佳地≥85％，更佳地≥95％；
在另一优选例中，所述β-葡聚糖溶液具有良好的稳定性。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖来源于高等植物或者各种细菌、真菌。
本发明的实施例具体以裂褶菌的发酵产物为例，但不限于此。
制剂或组合物
本发明提供一种用于预防和/或治疗口腔疾病的制剂或组合物，所述制剂或组合物含有(a)β-葡聚糖；以及任选的(b)药学上、化妆品学上、或器械类可接受的载体或赋形剂。
在另一优选例中，所述制剂或组合物含有(a)裂褶菌β-葡聚糖；以及任选的(b)药学上、化妆品学上、或器械类可接受的载体或赋形剂。
在另一优选例中，所述制剂或组合物含有0.0001-99wt％，较佳地0.001-90wt％，更佳地0.01-50wt％，更佳地0.05-10wt％的β-葡聚糖(优选地裂褶菌β-葡聚糖)，按制剂或组合物的总重量计。
在另一优选例中，所述β-葡聚糖在所述制剂或组合物中的质量浓度为≥1μg/mL，具体可以为1μg/mL-200mg/mL，或者1μg/mL-5mg/mL，或者1μg/mL-1mg/mL。
在另一优选例中，所述制剂含有裂褶菌β-葡聚糖水溶液，所述制剂中裂褶菌β-葡聚糖水溶液的含量≥80wt％，较佳地≥90wt％，更佳地≥95wt％，更佳地≥99wt％，更佳地≥99.5wt％，按制剂的总重量计。
在另一优选例中，所述制剂中，裂褶菌β-葡聚糖水溶液中的裂褶菌β-葡聚糖的质量浓度为0.0001-50wt％，较佳地0.02-10wt％，更佳地0.05-5wt％，按裂褶菌β-葡聚糖水溶液的总重量计。
在一个优选的实施方式中，本发明提供了一种用于预防和/或治疗口腔疾病的牙膏，组分如表1所示：
表1具有预防和/或治疗口腔疾病功效的牙膏
本发明所述制剂或组合物中的“活性成分(第一活性成分)”是指本发明所述的β-葡聚糖(优选地裂褶菌β-葡聚糖)。
本发明所述的“活性成分(第一活性成分)”、制剂和/或组合物可用于预防和/或治疗口腔疾病。
“第二活性成分”是指本发明中不同于所述β-葡聚糖的治疗口腔疾病的活性成分。
在优选的实施方式中，第二活性成分选自下组：防龋剂(包括氟化钠、氟化亚锡、SMFP、赤藓醇和防龋酶类)、防牙菌斑和牙龈炎化合物(包括三氯生、柠檬酸锌+三氯生、血根碱月桂醇硫酸酯钠盐、氯已定、度米芬、西吡氯铵)、抗牙石剂(包括焦磷酸盐+NaF、焦磷酸盐+PVM/MA/NaF、柠檬酸锌+单氟磷酸钠、锌盐+氟化钠)、消炎剂(包括二氢胆固醇、尿囊素、甘草甜素、氨基乙酸、甘菊环)、脱敏剂(包括硝酸钾、氯化锶、柠檬酸氢二钠)、去臭剂(包括叶绿素铜钠)。
“安全有效量”指的是：活性成分的量足以明显改善病情或症状，而不至于产生严重的副作用。
通常，药物组合物含有1-2000mg活性成分/剂，更佳地，含有10-200mg活性成分/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个药片或一支注射针剂。
“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。
“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。
药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
在另一优选例中，本发明β-葡聚糖可与大分子化合物或高分子通过非键合作用形成复合物。
在另一优选例中，本发明β-葡聚糖可通过化学键与大分子化合物或高分子相连接。所述大分子化合物可以是生物大分子如高聚糖、蛋白、核酸、多肽等。
本发明的活性成分或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括但不限于：外敷、口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)等。
固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。
在这些固体剂型中，活性成分与至少一种常规惰性赋形剂或载体混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分一种或多种混合：
(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；
(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；
(c)保湿剂，例如，甘油；
(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；
(e)缓溶剂，例如石蜡；
(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；
(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；
(h)吸附剂，例如，高岭土；和/或
(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。
胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
所述的固体剂型还可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。
液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性成分外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明组合物施用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～10000mg，较佳地10～2000mg，更佳地20～1000mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明还提供了一种组合物产品，所述组合物产品包括：
(1)第一药物组合物，所述第一药物组合物含有(a)第一活性成分，所述第一活性成分为β-葡聚糖；和(b)药学上、化妆品学上、或器械类可接受的载体或赋形剂；以及
(2)第二药物组合物，所述第二药物组合物为不同于第一药物组合物的口腔疾病治疗药物。
本发明组合物可以单独给药，或者与其他治疗药物联合给药(如配制在同一药物组合物中)。
本发明药物组合物也可以与已知的治疗或改进相似病状的其它药物联用。联合给药时，原来药物的给药方式和剂量保持不变，而同时或随后使用本发明药物组合物。药物联用也包括在重叠的时间段使用本发明药物组合物与其它一种或几种已知药物。当本发明药物组合物与其它一种或几种药物进行药物联用时，本发明药物组合物或已知药物的剂量可能比它们单独用药时的剂量较低。
本发明的主要优点包括：
(a)本发明β-葡聚糖(如裂褶菌β-葡聚糖)能够非常有效地预防和/或治疗口腔疾病，如牙龈炎、牙周炎。
(b)本发明β-葡聚糖可以用于预防牙槽骨质流失、预防龋齿、抑制牙菌斑的生成、去除牙结石、抗牙本质敏感、去除牙渍、美白牙齿、调节口腔微生态、改善口腔卫生状态、防治口腔溃疡、提升口腔黏膜免疫力、或其组合。
(c)本发明β-葡聚糖可以还用于口腔术后护理(促进伤口愈合)、预防和/或治疗糖尿病患者的口腔疾病。
(d)本发明β-葡聚糖与其他治疗口腔疾病药物结合，可以进一步增强预防和/或治疗效果，具有协同作用。
(e)本发明β-葡聚糖(优选地裂褶菌β-葡聚糖)为纯天然来源的生物多糖，具有完全可溶性或天然可溶性，并且未经过任何化学和/或物理的改性或修饰。
(f)本发明β-葡聚糖完整保留了三螺旋的三维构象，具有更好的预防和/或治疗口腔疾病活性。
(g)本发明β-葡聚糖具有极佳的稳定性，能够与大多数物质共存而保持其活性，因而应用领域广泛，可与其他口腔疾病治疗药物结合使用，在预防和治疗口腔疾病的同时，改善口腔卫生情况，美白牙齿。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
β-葡聚糖的获得以及测定
本实施例仅以裂褶菌发酵获得的β-葡聚糖为例，但不限于此。
一、裂褶菌菌种发酵液的获得
下述实施例中的发酵液通过发酵裂褶菌菌种(裂褶菌Schizophyllum communeFr—1003，产品目录：38548TM，购于美国模式菌种收集中心[ATCC])，具体如下：
1、裂褶菌菌种活化：将马铃薯200g/L、葡萄糖30g/L、氯化钠10g/L、琼脂20g/L制成平板培养基，把裂褶菌菌种接种到该平板培养基上，于25℃恒温培养箱内培养7天得到平板菌丝体；
2、种子活化：将马铃薯淀粉100g/L、葡萄糖40g/L、酵母浸膏2g/L、酵母浸粉2g/L、水制成的液体培养基装入摇瓶，装液量为1/3，取步骤1所得的平板菌丝体接种该摇瓶，于25℃恒温摇床内160rpm震荡培养培养7天，作为种子液；
3、发酵培养：将葡萄糖50g/L、蔗糖50g/L、黄豆粉(山东招远市温计食品有限公司)5g/L、酵母浸粉2g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、七水合硫酸镁0.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硝酸钾6g/L和水制成的发酵培养基加入发酵罐中121℃灭菌15分钟，再将步骤2所得的种子液接种上述发酵罐中，25℃恒温300rpm搅拌4Lpm通气发酵培养8天，得到裂褶菌发酵液。
二、β-葡聚糖的分离纯化及β-葡聚糖溶液的制备
(1)将上述第一部分得到的裂褶菌发酵液与4倍体积的蒸馏水混合，60℃下浸煮8h，得到浸煮液；
(2)将步骤(1)得到的浸煮液在4,000rpm离心5min，取上清液；将上清液用300目的滤布负压过滤，取滤出清液待用，即为浸煮清液；
(3)将步骤(2)过滤后的浸煮清液加热至50℃，向其中同时加入200目的木质活性炭及8～16目的椰壳活性炭，每种活性炭的添加体积为浸煮清液体积的1％。于50℃，350rpm条件下持续搅拌4h，冷却后待用，得到混合有活性炭的浸煮清液；再将混合有活性炭的浸煮清液依次使用300目滤布及SCP-321#滤板(孔径大小约1.5μm)进行负压抽滤，取过滤后的清液待用；
(4)将Solarbio脂肪酶(L8070，酶活力100～400U/mg)溶于生理磷酸盐缓冲液中，按10U/mL的酶用量，将脂肪酶溶液加入步骤(3)制备的滤液中，搅拌均匀后40℃酶解2h；再将Solarbio中性蛋白酶(Z8030，酶活力>60U/mg)溶于生理磷酸盐缓冲液中，按60U/mL的酶用量，将中性蛋白酶溶液加入上述酶解液中，搅拌均匀后，40℃酶解2h。酶解结束后90℃水浴加热30min，以灭酶活，再以SCP-321#滤板(孔径大小约1.5μm)进行负压抽滤，取过滤后的清液待用；
(5)将步骤(4)过滤后的清液快速与95％浓度的食用乙醇混合(体积比为1：3)，搅拌，直至得到析出物；再将析出物重新溶解至原体积，后快速与95％浓度的食用乙醇混合(体积比为1：3)，搅拌，直至得到析出物；
(6)将步骤(5)得到的析出物置于带孔托盘中，使用电热烘箱40℃烘干，直至恒重，得干燥产物；
(7)将上述步骤(6)得到的β-葡聚糖干燥物粉碎，称取粉碎物5g，溶解于1,000mL超纯水中，维持600rpm搅拌2h，直至β-葡聚糖充分溶解，得到β-葡聚糖溶液；将上述β-葡聚糖溶液使用5μm滤膜进行负压抽滤，并添加适量化妆品用防腐剂后，即可得到浓度为0.5％的高粘度、高透光率的β-葡聚糖溶液。
该质量浓度为0.5％的β-葡聚糖溶液在600nm波长(以分光光度计检测)下的透光率可以达到90％，40℃时粘度可达600mPa·s以上。
三、β-葡聚糖的鉴定与检测
1、β-葡聚糖的红外光谱鉴定
对上述0.5％的β-葡聚糖溶液进行鉴定，具体按照《中华人民共和国药典》(2010版)二部附录IV中方法C使用红外光谱法，将105℃烘干后的样品，使用傅里叶变换红外光谱仪进行全波长扫描。结果上述实施例1第二部分步骤(7)得到的0.5％溶液为β-葡聚糖溶液。
与酵母β-葡聚糖行业标准QBT 4572-2013中酵母β-葡聚糖的红外光谱图对比，官能团位置基本吻合。如图12所示，主要的官能团位置为：
1)3301cm-1附近有较强，较宽的吸收峰(糖类O-H键伸缩振动吸收峰)
2)2921cm-1附近有较弱的吸收峰(糖类C-H键伸缩振动吸收峰)
3)886cm-1附近有较弱的吸收峰(糖类β构型特征振动吸收峰)
4)1076cm-1附近有较强的吸收峰(糖类C-OH，C-O-C伸缩振动吸收峰)
傅里叶变换红外光谱测试结果表明，本实施例得到的产物为β-葡聚糖。
2、β-葡聚糖的含量检测
对上述实施例1第二部分步骤(6)得到的干燥产物进行β-葡聚糖定量检测，具体按照酵母β-葡聚糖行业标准QBT 4572-2013中酵母β-葡聚糖含量测定方法，将得到的β-葡聚糖干燥物样品研磨至直径1.0mm左右后进行。结果产物中β-葡聚糖含量为99.23％。
3、β-葡聚糖溶液的激素检测
对上述0.5％的β-葡聚糖溶液进行48项激素测定，具体按照《化妆品安全技术规范》(2015年版)第四章2.4雌三醇等7种组分第一法高压液相色谱-二极管阵列检测器法和GB/T24800.2-2009化妆品中四十一种糖皮质激素的测定液相色谱/串联质谱法和薄层层析法进行。结果上述实施例1第二部分步骤(7)得到的0.5％β-葡聚糖溶液中，未检出上述激素(结果见表2)。
表2 48项激素测定
4、β-葡聚糖溶液的粘度测定
按照实施例1第二部分步骤(7)的方法，配制0.3％、0.5％、0.8％、1.0％(质量体积比)的β-葡聚糖水溶液，于25℃时分别检测动力粘度。结果详见表3，随着β-葡聚糖含量的提高，各样品的粘度也递增，分别为472、740、2150和3100mPa·s。
取市售分散性(不溶于水)酵母β-葡聚糖颗粒(购自Wellmune公司)，准确称取2g，加入去离子水混合，并定容至200mL，得到质量体积比为1.0％的酵母β-葡聚糖混悬液，于25℃时检测动力粘度。结果该1.0％的酵母β-葡聚糖混悬液的动力粘度为0mPa·s(见表3)。
取市售可溶性酵母β-葡聚糖粉末(购自Wellmune公司)，准确称取2g，加入去离子水溶解，并定容至200mL，得到质量体积比为1.0％的酵母β-葡聚糖水溶液，于25℃时检测动力粘度。结果该1.0％的酵母β-葡聚糖水溶液的动力粘度为0mPa·s(见表3)。
上述动力粘度的测定方法如下：
(1)取200mL上述溶液样品，置于250mL烧杯中；
(2)将盛有上述溶液/混合液样品的烧杯置于水浴锅中，25℃保温1h；
(3)使用旋转粘度计，检测25℃下各样品的动力粘度。
5、β-葡聚糖溶液的透光率测定
按照实施例1第二部分步骤(7)的方法，配制0.3％、0.5％、0.8％、1.0％(质量体积比)的β-葡聚糖水溶液，于600nm波长处测定溶液透光率，结果如见表3所示，各样品的透光率分别为96.5％、93.1％、87.5％和81.1％。
取市售1.0％的燕麦β-葡聚糖溶液(购自Symrise公司)，于600nm波长处测定溶液透光率，结果透光率为59.7％(见表3)。
取市售分散性酵母β-葡聚糖颗粒，准确称取2g，加入去离子水混合，并定容至200mL，得到质量体积比为1.0％的酵母β-葡聚糖混悬液，于600nm波长处测定混悬液透光率，结果透光率仅为1.3％(见表3)。
取市售可溶性酵母β-葡聚糖粉末，准确称取2g，加入去离子水溶解，并定容至200mL，得到质量体积比为1.0％的酵母β-葡聚糖水溶液，于600nm波长处测定溶液透光率，结果透光率为68.4％(见表3)。
上述透光率的测定方法如下：
(1)取10mL上述溶液样品置于离心管中；
(2)1000rpm低速离心1min，以去除气泡(两种酵母β-葡聚糖溶液/悬液无气泡，未经离心处理)；
(3)小心取3mL至1cm玻璃比色皿内，避免气泡；
(4)使用分光光度计，以去离子水作为空白参照(去离子水的透光率为100％计)，于600nm波长处测定样品透光率。
6、β-葡聚糖溶液的稳定性测定
按照实施例1第二部分步骤(7)的方法，配制0.5％、0.8％、1.0％(质量体积比)的β-葡聚糖水溶液，加入防腐剂后，室温(未避光)放置24个月，观察溶液稳定性，并检测溶液动力粘度和透光率。结果，上述三种溶液状态均十分稳定，其粘度和透光率变化不大，其中透光率甚至有所提高(表3)。
取市售1.0％的燕麦β-葡聚糖溶液，室温(未避光)放置24个月，观察溶液稳定性，并检测溶液动力粘度和透光率。结果，该1.0％的燕麦β-葡聚糖溶液状态十分不稳定，室温放置3个月后就有固形物析出，导致其粘度和透光率无法检测(表3)。
表3 各种β-葡聚糖溶液动力粘度数据
注：a为市售分散性酵母β-葡聚糖颗粒(不溶于水)，b为市售可溶性酵母β-葡聚糖粉末。
实施例2牙膏的组成及其制备方法
(1)牙膏配方(％)
表4 用于牙周疾病的牙膏配方
(2)配制方法
①依照配方表将黄原胶、羧甲基纤维素钠以及香精分散于甘油之中；
②再加入20ml 1％裂褶菌β-葡聚糖溶液和25g山梨醇，充分搅匀溶解；
③加入20g水合硅石，用均质机均质，使水合硅石在体系内充分分散；
④B相各组分先溶于水再加入到上述体系中，充分搅匀；
用真空泵抽消泡后进行分装。
实施例3含裂褶菌β-葡聚糖的牙膏改善牙周病
(一)召集20名志愿者，测试裂褶菌β-葡聚糖对牙周疾病的改善情况。20名志愿者使用实施例2中制备的含裂褶菌β-葡聚糖的牙膏，对比使用前后牙周炎症以及口腔卫生的改善情况。
(二)实验方法：
1.病史收集
全面地询问就诊者的牙周病病史，进行仔细的临床检查并寻找危险因素，将所得资料进行综合分析，是牙周病诊断的基础。应注意的是，牙周病与全身的关系比较密切，在检查和诊断过程中，应包括患者的全身情况、口腔其他部位的改变等。
(1)系统病史
与牙周病有关的系统系疾病，较为常见的如急性和慢性血液病(白血病、血小板减少性紫癜等)、心血管疾病、糖尿病或其他内分泌疾病、神经系统疾病、免疫功能缺陷以及某些遗传学疾病或有遗传易感因素等。还有一些传染性疾病如肝炎、艾滋病等。
(2)口腔病史
询问牙周组织以外的口腔疾病情况，特别是有些疾病可同时发生在口腔黏膜及牙周组织，如口腔黏膜白斑、扁平苔藓、天疱疮、类天疱疮等。
(3)牙周病史及口腔卫生习惯
主诉的记载中要关注目前的主要症状、发生时间及变化；现病史中要详细询问并记载可能的诱因及疾病的发展过程、治疗经过及疗效。
牙周病患者的检查和沟通中必须要尽可能详细的了解其口腔健康意识、口腔卫生习惯、日常所采取的口腔卫生措施等，这对于牙周病的诊断、治疗计划和预后判断等均具有重要的参考价值。
(4)家族史
询问父母、兄弟姐妹或其他直系亲属的牙周健康状况，尤其是一些与遗传可能相关的牙周病，如侵袭性牙周炎、牙龈纤维瘤等。此外，对于发现牙列、牙齿、颌面发育有异常表现而怀疑有遗传倾向时，应追问家族史。
2.口腔卫生状况
口腔卫生状况与牙周组织的健康关系是十分密切的，无论是初诊还是复诊患者，都首先要进行本项检查，其内容包括查菌斑、软垢、牙石和色渍沉积情况，有无食物嵌塞、牙齿结构异常、口臭等。
菌斑的检查，结合使用目测和菌斑显示剂辅助观察，后者一般用2％碱性品红溶液。患者先用清水漱口，然后用棉签或小棉球蘸取药液，涂于龈缘附近的牙面上，再次漱口后，牙面被染色的区域既是附着的菌斑。
菌斑指数(plague index，PLI)
菌斑指数的计分标准如图1所示。其是由Quigley和Hein(1962)提出，并由Turesky等加以改良，它需要用菌斑显示剂涂布于牙面，漱口后再检查着色的菌斑在牙面的分布部位和范围，这种记分的方法相对比较客观。本指数主要体现口腔卫生状况，检查患者自我菌斑控制的措施是否有效以及临床观察某些抗菌斑剂的效果，患者自己也能对镜检查，所以应用比较方便。
3.牙龈状况
(1)出血指数(bleeding index，BI)
出血指数(BI)的计分标准如图4所示。Mazza在1981年的一项临床研究中采用了经过改良的出血指数。用钝头牙周探针轻探入龈沟或袋底，取出探针30s后，观察有无出血及出血程度。以0～5级记分：0＝牙龈健康，无炎症及出血；1＝牙龈颜色有炎症性改变，探诊不出血；2＝探诊后有点状出血；3＝探诊出血沿牙龈缘扩散；4＝出血流满并溢出龈沟；5＝自动出血。
4.牙周探诊
牙周探诊(periodontal probing)是牙周病(特别是牙周炎)的诊断中最重要的检查方法。
(1)牙周探诊的目的
了解牙周支持组织的丧失状况，探测整个牙列所有牙齿的每个面有无牙周袋的形成、牙周袋的深度、牙周附着水平；此外，还应探查根分叉病变及探诊后有无龈沟/牙周袋出血，并以数值记录来反应。
(2)牙周探诊的工具
牙周探诊在临床上是用普遍牙周刻度探针或电子探针来进行探测。牙周探针的种类有很多，其共性是都带有刻度，但根据检查目的不同而设计特点有所差异，表现在探针的弯曲角度和刻度间距上有所不同，每个刻度有1mm或2～3mm，工作端基本为圆柱形，逐渐变细，利于插入；尖端处为钝头，直径为0.5mm。图8显示了各式牙周探针
(3)牙周探诊的方法
牙周探针应沿着牙齿长轴在各个面进行探查，通常分别在牙的颊(唇)、舌面远中、中央、近中测量，每个牙要记录6个位点的探诊深度。在探诊过程中应沿着牙周袋底提插式行走，以便探明同一牙面上不同深度的牙周袋。牙周袋探测部位及方法如图9所示。
在测量牙周袋时，牙周探针尖始终紧贴牙面，探针应与牙的长轴平行，但由于邻面接触区的阻挡，探针若与牙长轴平行就不能进入龈谷区，而邻面袋最深点常在龈谷处。故探测邻面时，可允许探针紧靠接触点并向邻面中央略为倾斜，这样便可探得邻面袋的最深处(图10)。
(4)牙周探诊的记录和评价指标
牙周探诊是临床评估牙周支持组织丧失程度的最主要方法，临床检查主要采用两个指标：
5.牙的松动度
正常情况下，牙有轻微的生理性动度，主要是水平方向的动度。单根牙的生理性动度略大于多根牙。晨起时，牙的动度最大，可能因为夜间上、下牙没有接触而使牙略有挺出；白天时，由于咀嚼和吞咽动作，可将牙压入牙槽内。这种细微的变化在正常的牙周组织不明显。患牙周炎时，由于牙槽骨吸收、咬合创伤、急性炎症及其他牙周支持结构的破坏而使牙的动度超过了生理性动度的范围，出现了病理性的牙松动。
(1)牙松动度检查
前牙用牙科镊夹住切缘，作唇舌方向摇动；在后牙，闭合镊子，用镊子尖端抵住面窝，向颊舌或近远中方向摇动。常分为三度记录。
Ⅰ度松动松动超过生理动度，但幅度在1mm以内。
Ⅱ度松动松动幅度在1～2mm间。
Ⅲ度松动松动幅度在2mm以上。
也可根据松动方向确定松动度，颊(唇)舌方向松动者为Ⅰ度，颊(唇)舌和远中近方向都松动者为Ⅱ度，颊(唇)、远中近和垂直方向均松动者为Ⅲ度。
6.放射影像学检查
(1)正常牙周组织的X线像
牙槽骨
在牙根周围的固有牙槽骨表现为连续阻射的白线状致密影，称为硬骨板。松质骨的骨髓腔呈透射，骨小梁呈阻射、互相交织成网状。正常情况下，牙槽骨顶到釉牙骨质界的距离约为1～1.5mm，不超过2mm，这是确定有无骨吸收的重要参照标志。
牙周膜
牙周膜在X线片上占据一定的空隙称为牙周膜间隙，为宽约0.18～0.25mm的连续而均匀的线状黑色透射带，其宽度的增加变化对牙周病的诊断有重要意义。
患牙周炎时，由于牙槽骨的破坏，硬骨板常不完整或消失，而牙周膜间隙也相应显示增宽或明显增宽。另外，硬骨板的表现一定程度上可以反映出疾病的变化，在疾病治疗前或活动期，硬骨板往往消失；待牙周治疗后，硬骨板则重新形成，且呈致密连续影；对于维护期的患者和牙位应该定期复查拍摄X线片，通过观察硬骨板的变化可以间接判断病情的恢复状况及稳定性。
在X线片上主要显示牙齿近远中的骨质情况，而颊舌侧牙槽骨因与牙齿重叠而显示不清晰。而标准根尖上，当牙槽嵴顶到釉牙骨质界的距离超过2mm时，则可认为有牙槽骨吸收。
在X线片上，牙槽骨吸收的类型表现为水平型吸收和垂直型吸收。
水平型吸收：牙槽骨高度呈水平状降低，骨吸收面呈水平状或杯状凹陷。前牙因牙槽嵴窄，多呈水平型吸收。
垂直型吸收：X线片显示骨的吸收面与牙根间有一锐角形成，也称角形吸收，多发生于牙槽间隔较宽的后牙。
骨吸收的程度一般按吸收区占牙根长度的比例来描述，通常分为三度。
Ⅰ度：牙槽骨吸收在牙根的顶1/3以内。
Ⅱ度：牙槽骨吸收超过根长1/3，但在根长2/3以内，或吸收达根长的1/2.
Ⅲ度：牙槽骨吸收大于根长2/3。
7.刷牙要求
(a)刷牙的顺序：为保证刷牙时不遗漏某些部位，建议按照一定的顺序刷牙做到面面刷到。每次牙刷放置的设定位置一般占1～3颗牙面的距离，每个部位至少刷5～10次，然后移至下一个邻牙刷牙位置，两个刷牙位置之间均应有重叠，下颌牙唇颊侧一般约9个刷牙位，舌测为11个；
(b)刷牙的时间与用量：普通人群建议每次刷牙时间至少为2分钟；每次使用约1cm长度的牙膏。
(c)刷牙的次数：刷牙清除牙菌斑数小时后，菌斑可以在清洁的牙面上重新附着，不断形成，特别是夜间入睡后，唾液分泌减少，口腔自洁作用差，细菌更易生长。因此，每天至少要刷牙两次，晚上睡前刷牙更重要；
(d)难刷的部位：刷牙时，有些部位常被忽视，如上下颌最后一颗牙的远中面和邻近无牙区的牙面、上颌牙的腭面和下颌牙的舌面、排列不齐的牙和异位萌出的牙等。这些部位容易被忽视或刷牙难以达到，在刷牙时都应给予特殊的关照，需要补充一些刷牙动作或需要用压线或牙间隙刷加以补充。口腔清洁应包括舌面，清洁舌面可减少口腔食物残渣与微生物数量，延迟菌斑形成与总菌斑沉积，有助于整个口腔清洁。
(三)实验结果：
关于牙菌斑的实验结果如图2和图3所示，志愿者使用含β-葡聚糖的牙膏一月后，牙菌斑得到显著的改善，并且牙齿明显变白。根据图1所示的判定菌斑指数的方法，将图2中志愿者牙齿上的菌斑进行评分，统计结果显示，照片上所示的牙菌斑，在使用含β-葡聚糖的牙膏后被显著抑制(P value＝0.0018，**)。
关于牙龈出血的实验结果如图5所示，志愿者在使用含有β-葡聚糖的牙膏之后，牙龈出血得到明显改善，虽然从探诊出血诊断上并没有显著性(样本数不足)，但从志愿者调查问卷中，其中有8位志愿者使用前，刷牙时都会伴有牙龈出血的情况，但使用含β-葡聚糖的牙膏平均两周后，牙龈出血问题得到明显改善，并且其中有4名志愿者在使用该牙膏两月后，牙龈出血问题得到彻底解决。
关于牙石量的实验结果如图7所示，志愿者在使用该牙膏一个月后，牙石得到显著改善，并且持续使用两个月时间，牙石的情况得到进一步的改善。事实上，牙龈炎以及之后发展成牙周炎的起因主要就是牙齿上的牙菌斑和牙石，如果口腔的卫生情况得到改善，直接就可以改善牙龈炎症水平。
牙周探诊的实验结果如图11所示，志愿者使用含β-葡聚糖的牙膏之后，牙周探诊的深度得到明显改善。因为正常健康的牙周探诊深度应该是3mm或者以下，但是由于牙龈炎症的发生导致牙龈附着能力下降，继而导致牙周探诊深度加深。志愿者使用含含β-葡聚糖的牙膏之后，牙周探诊深度降低，说明牙龈附着能力增强，也可反应牙龈炎症得到了改善。
实施例4含裂褶菌β-葡聚糖的牙膏改善牙本质敏感
(一)征集牙本质敏感志愿者20名，进行牙本质敏感的评价。
(二)牙膏的制备
(1)配方
表5 用于牙本质敏感的牙膏配方
(2)配制方法
(a)依照配方表将黄原胶、羧甲基纤维素钠以及香精分散于甘油之中；
(b)再加入10ml 1％裂褶菌β-葡聚糖溶液和35g山梨醇，充分搅匀溶解；
(c)加入18g水合硅石，用均质机均质，使水合硅石在体系内充分分散；
(d)B相各组分先溶于水再加入到上述体系中，充分搅匀；
(e)用真空泵抽消泡后进行分装。
(三)实验结果：
含裂褶菌β-葡聚糖的牙膏能够有效改善牙本质敏感。志愿者使用3天，均反馈敏感程度降低，使用7天，冷空气吹喷敏感性较开始使用前降低1-2分，使用30天，冷空气吹喷敏感性较开始使用前降低2-3分，基本不再有牙本质敏感现象。如图13所示。
另有5位志愿者，在刷牙时，由于机械作用，部分牙齿敏感酸麻。在使用含有0.1％的裂褶菌β-葡聚糖的牙膏3-5天后，自觉牙齿敏感现象消失。
实施例5裂褶菌β-葡聚糖改善口腔黏膜疾病
(一)征集口腔溃疡志愿者30人，平均分成三组。每日目测及自我评价法观察溃疡愈合程度。
(二)实验分组：
组1使用实施例1制备的5mg/mL无菌裂褶菌β-葡聚糖，口腔含1-20mL，保留至少10秒钟；每日含漱3次。
组2使用实施例1制备的1mg/mL无菌裂褶菌β-葡聚糖，口腔含1-20mL，保留至少10秒钟；每日含漱3次。
组3使用无菌水，口腔含漱1-20mL，保留至少10秒钟，每日含服3次。
(三)实验结果：
组1志愿者在使用5mg/mL无菌裂褶菌β-葡聚糖24小时后，口腔溃疡面积明显缩小，疼痛减轻；48小时后，7位志愿者痊愈；72小时后10位志愿者均痊愈。
组2在使用1mg/mL无菌裂褶菌β-葡聚糖24小时后，口腔溃疡面积明显缩小，疼痛减轻；48小时后，4位志愿者痊愈；72小时后8位志愿者痊愈；94小时后10位志愿者均痊愈。
组3在使用无菌水72小时后，仍无明显好转，部分志愿者溃疡加剧。
具体结果如表6所示
表6裂褶菌β-葡聚糖改善口腔黏膜疾病
实施例6含裂褶菌β-葡聚糖的漱口水改善口腔黏膜疾病
(一)征集口腔黏膜疾病志愿者60人，平均分成三组，组1为对照组，使用不含有裂褶菌β-葡聚糖的漱口水，组2和组3为实验组，使用含有不同浓度裂褶菌β-葡聚糖的漱口水。志愿者每日含漱所分配的漱口水至少2次，评价口腔黏膜疾病改善情况。
(二)制备含有裂褶菌β-葡聚糖的漱口水和不含有裂褶菌β-葡聚糖的漱口水。
表7漱口水配方
簌口水成分
配方1
配方2
配方3
β-葡聚糖
0
0.05
0.1
甘油
9
9
9
丙二醇
9
9
9
山梨醇
5
5
5
香精(含茶叶提取物)
0.25
0.25
0.25
糖精钠
0.1
0.1
0.1
单氟磷酸钠
0.05
0.05
0.05
苯甲酸钠
0.2
0.2
0.2
薄荷醇
0.03
0.03
0.03
水
加至100
加至100
加至100
(三)实验结果：
不含有裂褶菌β-葡聚糖的漱口水，能够改善牙菌斑等牙齿清洁度指标，但对口腔黏膜疾病无明显影响，一般愈合周期为6.88天；而含有裂褶菌β-葡聚糖的漱口水，在清洁口腔的同时，对口腔黏膜疾病具有极佳的治疗效果，且长期使用具有预防口腔黏膜疾病复发的作用。其中含有0.05％裂褶菌β-葡聚糖的簌口水使用后，口腔溃疡的愈合周期平均为6.18天，愈合周期缩短10.2％；含有0.1％裂褶菌β-葡聚糖的簌口水使用后，口腔溃疡的愈合周期平均4.5天，愈合周期缩短34.6％。如图14所示。
实施例7含裂褶菌β-葡聚糖的牙膏改善口腔黏膜疾病
(一)征集口腔黏膜疾病志愿者30人。
(二)牙膏的制备
(1)牙膏配方
表8 用于口腔黏膜疾病的牙膏配方
(2)配制方法
(a)依照配方表将黄原胶、羧甲基纤维素钠以及香精，分散于甘油和聚乙二醇400之中；
(b)再加入25ml 1％裂褶菌β-葡聚糖溶液和35g山梨醇，充分搅匀溶解；
(c)加入15g水合硅石，用均质机均质，使水合硅石在体系内充分分散；
(d)B相各组分先溶于水再加入到上述体系中，充分搅匀；
(e)用真空泵抽消泡后进行分装。
(三)实验结果：
含有裂褶菌β-葡聚糖的牙膏对口腔黏膜疾病具有极佳的治疗效果，且长期使用具有预防口腔黏膜疾病复发的作用。含有裂褶菌β-葡聚糖的牙膏对口腔溃疡恢复时间的影响如图15所示。
实施例8含裂褶菌β-葡聚糖的牙膏和口香糖改善龋齿引发的牙周炎症问题
(一)征集龋齿志愿者30人。这30名患有都有不同程度的龋齿，并且龋齿已经引发了牙龈红肿、疼痛、咀嚼困难、对冷热酸甜都有不同程度的敏感。其中有五名志愿者疼痛需要服用消炎止疼的药物才能缓和，但是停药后还会复发。建议每次早晚刷牙，三餐后使用口香糖。
(二)牙膏和口香糖的制备
(1)牙膏配方
表9 用于龋齿引发牙周疾病的牙膏配方
(2)配制方法
(a)依照配方表将黄原胶、羧甲基纤维素钠以及香精，分散于甘油和聚乙二醇400之中；
(b)再加入10ml 1％裂褶菌β-葡聚糖溶液和35g山梨醇，充分搅匀溶解；
(c)加入20g水合硅石，用均质机均质，使水合硅石在体系内充分分散；
(d)B相各组分先溶于水再加入到上述体系中，充分搅匀；
(e)用真空泵抽消泡后进行分装。
(三)口香糖的制备
(1)口香糖配方
表10 用于牙本质敏感的牙膏配方
口香糖成分
成分
胶基
30％
混合糖醇(木糖醇∶麦芽糖醇为7:1)
60％
1％裂褶菌β-葡聚糖溶液
10％
(2)配制方法
(a)胶基的软化：将胶基置于恒温烘箱内以60℃保湿软化2h。胶基软化时要保持湿润，软化后应及时取用，否则胶基会硬化；
(b)配料的混合与调和：先将木糖醇粉碎过200目筛后备用。操作时，首先将软化后的胶基在60℃左右的水浴锅中先搅拌数分钟，渐至熔化成黏液，即加入液体麦芽糖醇与胶基混合搅拌6～8min后，再加入木糖醇粉与胶基混合搅拌5～6min。待糖醇粉和胶基混合基本均匀后，再加入10g 1％裂褶菌β-葡聚糖溶液搅拌混合3～5min。
(c)挤压与成型：将调和好的胶基配料物质加热到85～90℃凝聚，1～2min后冷却至低于40℃，即投入压面机中反复挤压，挤成组织紧密，表面光滑的带状糖坯，重复挤压几次；将挤压成一定厚度的糖片进行切割成型。
(d)包装：成品口香糖在20℃左右、相对湿度低于55％的条件下，老化10～20h，使口香糖水分平衡而软硬适中。
(三)实验结果：
含有裂褶菌β-葡聚糖的牙膏和口香糖，能够有效改善由龋齿引发的牙龈红肿、疼痛、咀嚼困难以及对冷热酸甜的敏感，并能够阻止龋齿的进一步发展。
表11 含裂褶菌β-葡聚糖的牙膏对于龋齿引发的牙周疾病的改善情况
牙齿敏感10人
咀嚼疼痛26人
牙齿松动5人
溢脓3人
正反馈
8
26
1
3
负反馈
0
0
0
0
无效反馈
2
0
4
0
其中牙齿由于炎症造成的疼痛及溢脓的改善反馈率为100％，牙齿敏感改善反馈率为80％，但是对已经松动的牙齿没有极佳的改善效果，因此已经松动的牙齿是没有办法恢复的，建议去医院治疗。
实施例9含裂褶菌β-葡聚糖的牙膏改善牙齿色斑
(一)征集龋齿志愿者30人。每次早晚刷牙。
(二)牙膏配制
(1)牙膏配方
表12 用于改善牙齿色斑的牙膏配方
(2)配制方法
(a)依照配方表将黄原胶、羧甲基纤维素钠以及香精分散于甘油和聚乙二醇400之中；
(b)再加入15ml 1％裂褶菌β-葡聚糖溶液和35g山梨醇，充分搅匀溶解；
(c)加入5g水合硅石和35g碳酸钙，用均质机均质，使研磨剂在体系内充分分散；
(d)B相各组分先溶于水再加入到上述体系中，充分搅匀；
(e)用真空泵抽消泡后进行分装。
(三)实验结果：
含有裂褶菌β-葡聚糖的牙膏能够改善牙齿色斑，但是对氟牙病患者没有明显的效果，对烟渍有一定的去除效果，但是不能完全去除。因此含有裂褶菌β-葡聚糖的牙膏主要是针对较轻微的牙齿色斑有比较好的效果，如果牙齿色斑沉积比较严重的，建议先洗牙，再坚持使用含裂褶菌β-葡聚糖的牙膏，预防牙齿色素再次沉积。
表13 含裂褶菌β-葡聚糖的牙膏对牙齿色斑的改善情况
烟渍8人
氟牙病2人
牙齿色泽暗沉20人
正反馈
5
0
18
负反馈
0
0
0
无效反馈
3
2
2
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