阅读说明：本技术 一种胆碱酯酶测定试剂盒 (Cholinesterase determination kit ) 是由 马全新 吴艳芳 谢小丽 于 2020-07-26 设计创作，主要内容包括：一种胆碱酯酶测定试剂盒,由彼此独立的试剂R1和试剂R2组成；所述试剂R1的组分包括：缓冲液、防腐剂、保护剂、抗干扰剂、表面活性剂、反应增强剂、5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)和水；所述试剂R2的组分包括：缓冲液、碘化乙酰硫代胆碱、防腐剂、乙二胺四乙酸二钠、反应增强剂、表面活性剂和水。本发明分析灵敏度高,线性范围宽,可高达18000U/L,重复性好,且抗干扰能力强。(A cholinesterase assay kit, which consists of a reagent R1 and a reagent R2 which are independent of each other; the components of the reagent R1 comprise: buffer solution, preservative, protective agent, anti-interference agent, surfactant, reaction enhancer, 5-dithiobis (2-nitrobenzoic acid) and water; the components of the reagent R2 comprise: buffer solution, acetylthiocholine iodide, preservative, disodium ethylene diamine tetraacetate, reaction enhancer, surfactant and water. The invention has high analysis sensitivity, wide linear range, high repeatability and strong anti-interference capability, and can reach 18000U/L.)

一种胆碱酯酶测定试剂盒

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂领域，具体涉及一种胆碱酯酶测定试剂盒。

背景技术

胆碱酯酶(cholinesterase，CHE)是一种催化酰基胆碱或胆碱酯水解反应的酶，主要由真性胆碱酯酶和假性胆碱酯酶组成。真性胆碱酯酶也称乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase)，主要存在于胆碱能神经末梢突触间隙，特别是运动神经终板突触后膜的皱褶中聚集较多，也存在于胆碱能神经元内和红细胞中:假性胆碱酯酶(PCHE)存在于血清或血浆中，除可作用于乙酰胆碱外，还可作用于其他胆碱类化合物。

在临床中，通常是以测定假性胆碱酯酶活性作为协助诊断有机磷中毒和评估肝实质细胞损害的重要手段。现有技术，主要是通过胆碱酯酶对丁酰硫代胆碱起催化作用，使之水解生成丁酸和硫代胆碱，而硫代胆碱和指示剂5，5～二硫代双(2～硝基苯甲酸)反应生成显色物质，而显色物质在指定波长下测试吸光度以得到水解产物硫代胆碱的浓度，进而得到假性胆碱酯酶的活性。但是实际应用中，市售胆碱酯酶试剂盒均存在线性范围窄、重复性差、抗干扰能力弱等问题。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种胆碱酯酶测定试剂盒，本试剂盒分析灵敏度高，线性范围宽，可高达18000U/L，重复性好，且抗干扰能力强。

本发明一种胆碱酯酶测定试剂盒，由彼此独立的试剂R1和试剂R2组成：

试剂R1的组分：

试剂R2的组分：

再进一步地，所述盐离子为氯化镁、氯化钾和氯化钠中的一种或多种。

还进一步地，所述防腐剂为叠氮钠、ProClin300和庆大霉素硫酸盐中的一种或多种。

更进一步地，所述缓冲液为Tris、PB、MOPSO/Na和Hepes中的一种或多种。

更进一步地，所述试剂R1的组分以及浓度为：100mmol/L pH 8.0PB缓冲液，0.30mmol/L 5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)，0.05％Proclin300，20μmol/L氧化型谷胱甘肽，10mmol/L偏钒酸钠，1％TritonX-100，0.1％Tween80，0.5％氯化镁；

所述试剂R2的组分以及浓度为：20mmol/L pH 3.0MOPSO缓冲液，5mmol/L碘化乙酰硫代胆碱，10mmol/L EDTA·2Na，0.05％Proclin300，1％TritonX-100，10％氯化钠。

本发明的有益效果是：本发明分析灵敏度高，线性范围宽，可达18000U/L，重复性好，抗干扰能力强。

附图说明

图1为本发明提出的一种胆碱酯酶测定试剂盒的线形图。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制各方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中己有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING:ALABORATORY MANUAL,Second edi tion,Cold Spring HarborLaboratory Press,1989and Third edi tion,2001:Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY,John Wiley&Sons,New York,1987and periodic updates:theseries METHODS IN ENZYMOLOGY,Academic Press,San Diego:Wolffe,CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION,Third edi tion,Academic Press,San Diego,1998:METHODSIN ENZYMOLOGY,Vo l.304,Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe,eds.),AcademicPress,San Diego,1999:和]METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY,Vo l.119,ChromatinProtocols(P.B.Becker,ed.)Humana Press,Totowa,1999等。

实施例1

试剂R1的组分：

试剂R2的组分：

对比例1

(空白组：实施例1去除氧化型谷胱甘肽、偏钒酸钠、TritonX-100、Tween80)试剂R1的组分：

试剂R2的组分：

对比例2

(空白组+氧化型谷胱甘肽)

试剂R1的组分：

试剂R2的组分：

对比例3

(空白组+偏钒酸钠)

试剂R1的组分：

试剂R2的组分：

对比例4

(空白组+氧化型谷胱甘肽+偏钒酸钠)

试剂R1的组分：

试剂R2的组分：

对比例5

(空白组+氧化型谷胱甘肽+偏钒酸钠+TritonX-100)

试剂R1的组分：

试剂R2的组分：

对比例6

(空白组+氧化型谷胱甘肽+偏钒酸钠+Tween-80)

试剂R1的组分：

试剂R2的组分：

对比例7

(更换酶催化底物：将实施例1中的碘化乙酰硫代胆碱替换为碘化丁酰硫代胆碱)

试剂R1的组分：

试剂R2的组分：

使用实施例1中的试剂盒，检测基质血清。用高浓度胆碱酯酶样品和低浓度胆碱酯酶样品或纯化水混合成至少4个稀释浓度的胆碱酯酶样品，试剂校准后重复测定3次稀释后的胆碱酯酶样品，根据测定均值和理论值进行线性拟合。

实施例1的线性结果：

实施例1的线性范围为高达18000U/L以上，线性相关系数为R²＝0.9997，如图1所示。

实施例1低值重复性：

用校准品进行试剂校准后，重复测试低值样本10次，测试实施例1的低值重复性。

实施例1在低浓度范围内的测试重复性较好。

抗干扰试验：

以水、DMSO和异丙醇分别作为基础样本，测试高浓度的VC、胆红素和甘油三酯对试剂盒的干扰，即将VC浓度为0.8g/L的水溶液、胆红素浓度为500μmol/L的DMSO溶液以及甘油三酯浓度为10mmol/L的异丙醇溶液分别加入三组实施例1中，混合均匀后重复测试10次。

基础样本	干扰样本	干扰样本浓度
			水	VC	0.8g/L
DMSO	胆红素	500μmol/L
			异丙醇	甘油三酯	10mmol/L

由测试结果可知，其中实施例1的抗干扰能力最强；对比例2相对于对比例1增加了氧化型谷胱甘肽，因而对于VC的抗干扰能力较对比例1强；对比例3相对于对比例1增加了偏钒酸钠，因而对于胆红素的抗干扰能力较对比例1更强；对比例4相对于对比例1增加了氧化型谷胱甘肽和偏钒酸钠，因为对比例4相对于对比例1对于VC和胆红素有更强的抗干扰能力；对比例5相对于对比例4增加了TritonX-100，对比例6相对于对比例4增加了Tween-80，因为两者对于甘油三酯的抗干扰能力相较于对比例4更强；对比例7相对于实施例1更换了底物，将碘化乙酰硫代胆碱替换成了碘化丁酰硫代胆碱，对比例7对于VC、胆红素和甘油三酯的抗干扰能力相较于实施例1都更差。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。