阅读说明：本技术 一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基及其制备方法和使用方法 (Primary screening culture medium for increasing bacteria of caries pathogenic acid-producing bacteria and preparation method and using method thereof ) 是由 王国柱 于 2020-06-20 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基及其制备方法和使用方法,属于微生物培养领域。本发明提供了一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基,包括以下重量份的组分：淀粉10～20份、磷酸二氢钾0.1～0.3份、糖类4～6份、氯化钠0.4～0.6份、水80～120份、指示剂0.003～0.007份。本申请的培养基配方简单,使用方便,以淀粉为原料,适宜工业化生产,能够满足龋齿致病产酸菌的生长过程中的营养需要,同时大大缩短龋齿致病产酸菌的培养时间。用于牙齿和口腔部位细菌的培养时,通过细菌分解培养基内糖分产酸能力不同,使pH值呈现不同梯度的变化,颜色变化肉眼可见,pH值越低则患龋齿的风险越高。(The invention relates to a primary screening culture medium for increasing the number of bacteria of acid-producing bacteria causing dental caries, a preparation method and a using method thereof, belonging to the field of microbial culture. The invention provides a primary screening culture medium for increasing the number of bacteria of acid-producing bacteria causing dental caries, which comprises the following components in parts by weight: 10-20 parts of starch, 0.1-0.3 part of monopotassium phosphate, 4-6 parts of saccharides, 0.4-0.6 part of sodium chloride, 80-120 parts of water and 0.003-0.007 part of indicator. The culture medium has a simple formula, is convenient to use, takes starch as a raw material, is suitable for industrial production, can meet the nutritional requirements in the growth process of the dental caries pathogenic acid-producing bacteria, and greatly shortens the culture time of the dental caries pathogenic acid-producing bacteria. When the microbial agent is used for culturing bacteria in teeth and oral cavity parts, the pH value presents different gradient changes through different sugar acid production capacities in the bacteria decomposition culture medium, the color change can be seen by naked eyes, and the lower the pH value, the higher the risk of dental caries.)

一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基及其制备方法和使用 方法

技术领域

本发明涉及微生物培养领域，尤其涉及一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基及其制备方法和使用方法。

背景技术

龋齿发病率高，分布广，是口腔主要的常见病，也是人类最普遍的疾病之一，可以继发牙髓炎和根尖周炎，甚至能引起牙槽骨和颌骨炎症。如不及时治疗，病变继续发展，形成龋洞，终至牙冠完全破坏消失，其发展的最终结果是牙齿丧失。

细菌是龋齿发生的必要条件，诱发龋齿的众多细菌中最常见的是变形链球菌。人体中生存的变形链球菌能迅速发酵多种碳水化合物产生大量酸，可使局部pH下降至5.5以下，由于变形链球菌耐酸性强，在pH 4.5时仍能继续生活并产酸。局部pH下降维持相当长时间，避开唾液的缓冲作用，从而造成局部硬组织脱落，诱发龋齿病变的开始。培养检测龋齿致病产酸菌量是判断龋齿致病产酸菌易感值的重要方法。

现有技术中的细菌培养基大多以胰蛋白胨为主要原料，这类培养基的成分比较单一，不能满足龋齿致病产酸菌生长所需的全部要求，且培养细菌时间较长，通常需要培养48h以上才能得到结果。因此，急需一种能够快速培养筛选龋齿致病产酸菌的培养基。

发明内容

本发明的目的在于提供一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基，不仅能够满足龋齿致病产酸菌生长所需的全部要求，还能大大缩短培养时间。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基，包括以下重量份的组分：淀粉10～20份、磷酸二氢钾0.1～0.3份、糖类4～6份、氯化钠0.4～0.6份、水80～120份、指示剂0.003～0.007份。

作为优选，所述糖类为葡萄糖和/或蔗糖。

作为优选，所述指示剂为溴甲酚绿。

作为优选，所述指示剂为溴甲酚绿0.005份。

作为优选，所述培养基包括以下重量份的组分：淀粉10份、磷酸二氢钾0.1份、葡萄糖4份、氯化钠0.4份、水80份、溴甲酚绿0.003份。

作为优选，所述培养基包括以下重量份的组分：淀粉20份、磷酸二氢钾0.2份、蔗糖6份、氯化钠0.6份、水120份、溴甲酚绿0.005份。

作为优选，所述培养基包括以下重量份的组分：淀粉15份、磷酸二氢钾0.3份、葡萄糖5份、氯化钠0.5份、水100份、溴甲酚绿0.004份。

本发明还提供了一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基的制备方法，包括如下步骤：

(1)将淀粉和水放入耐热容器中，标记水位高度；

(2)加热，煮20～30min；

(3)补水至原始水位高度；

(4)加入糖类、磷酸二氢钾、氯化钠和指示剂，得所述龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基。

本发明还提供了一项所述的一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基的使用方法，包括如下步骤：

(1)在牙齿取样后将样品接种到培养基中；

(2)将接种后的培养基于36～38℃的条件下培养18～24h；

(3)测定培养基pH值，判断致龋齿病的感染风险。

本发明提供了一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基，包括以下重量份的组分：淀粉10～20份、磷酸二氢钾0.1～0.3份、糖类4～6份、氯化钠0.4～0.6份、水80～120份、指示剂0.003～0.007份。本申请的培养基配方简单，使用方便，以淀粉为原料，适宜工业化生产，能够满足龋齿致病产酸菌的生长过程中的营养需要，同时大大缩短龋齿致病产酸菌的培养时间。用于牙齿和口腔部位细菌的培养时，通过细菌分解培养基内糖分产酸能力不同，使pH值呈现不同梯度的变化，颜色变化肉眼可见，pH值越低则患龋齿的风险越高。

附图说明

图1为本发明的培养基培养龋齿致病产酸菌24h后的结果；

图2为本发明市场上常见的DTA培养基培养龋齿致病产酸菌48h后的结果。

具体实施方式

本发明提供了一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基，包括以下重量份的组分：淀粉10～20份、磷酸二氢钾0.1～0.3份、糖类4～6份、氯化钠0.4～0.6份、水80～120份、指示剂0.003～0.007份。

在本发明中，所述淀粉的重量份优选为12～18份，进一步优选为14～16份，再进一步优选为15份。

在本发明中，所述磷酸二氢钾的重量份优选为0.15～0.25份，进一步优选为0.2份。

在本发明中，所述糖类的重量份优选为4.5～5.5份，进一步优选为5份。

在本发明中，所述氯化钠的重量份优选为0.45～0.55份，进一步优选为0.5份。

在本发明中，所述水的重量份优选为90～110份，进一步优选为95～105份，再进一步优选为100份。

在本发明中，所述指示剂的重量份优选为0.004～0.006份，进一步优选为0.005份。

在本发明中，所述糖类优选为葡萄糖和/或蔗糖。

在本发明中，所述指示剂优选为溴甲酚绿。

本发明还提供了一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基的制备方法，优选包括如下步骤：

(1)将淀粉和水放入耐热容器中，标记水位高度；

(2)加热，煮20～30min；

(3)补水至原始水位高度；

(4)加入糖类、磷酸二氢钾、氯化钠和指示剂制成蓝色混悬液，得所述龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基；

(5)按照每个检测管3ml的培养基进行灌装；

(6)将检测管121℃灭菌15分种。

本发明还提供了一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基的使用方法，优选包括如下步骤：

(1)在牙齿上摩擦4次取样后将样品接种到培养基中；

(2)将接种后的培养基于37℃的条件下培养24h；

(3)测定培养基pH值，判断致龋齿病的感染风险。

下面结合实施例对本发明提供的龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基，包括以下重量份的组分：淀粉10份、磷酸二氢钾0.1份、葡萄糖类4份、氯化钠0.4份、水80份、溴甲酚绿0.003份。将淀粉和水放入耐热容器中，标记水位高度；加热，煮20min；补水至原始水位高度；加入磷酸二氢钾、葡萄糖、氯化钠和溴甲酚绿制成蓝色混悬液，得所述龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基；按照每个检测管3ml的培养基进行灌装；将检测管121℃灭菌15分种，备用。

实施例2

一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基，包括以下重量份的组分：淀粉20份、磷酸二氢钾0.2份、蔗糖6份、氯化钠0.6份、水120份、溴甲酚绿0.005份。将淀粉和水放入耐热容器中，标记水位高度；加热，煮25min；补水至原始水位高度；加入磷酸二氢钾、葡萄糖、氯化钠和溴甲酚绿制成蓝色混悬液，得所述龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基；按照每个检测管3ml的培养基进行灌装；将检测管121℃灭菌15分种，备用。

实施例3

一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基，包括以下重量份的组分：淀粉15份、磷酸二氢钾0.2份、葡萄糖5份、氯化钠0.5份、水100份、溴甲酚绿0.007份。将淀粉和水放入耐热容器中，标记水位高度；加热，煮23min；补水至原始水位高度；加入磷酸二氢钾、葡萄糖、氯化钠和溴甲酚绿制成蓝色混悬液，得所述龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基；按照每个检测管3ml的培养基进行灌装；将检测管121℃灭菌15分种，备用。

实施例4

用无菌棉棒分别在龋齿患者上下颌磨牙及上下前牙唇侧牙颈部上下牙等部位轻微摩擦4次或者直接用棉签在龋齿面及附近摩擦4次取样；把棉签放到实施例3的培养基中，震荡后取出，将接种后的培养基编号为A2；以未接种的本申请培养基为对照，编号A5；将接种好的培养基置于37℃培养箱中培养24小时；用标准pH试纸条比色，实验结果如图1所示，发现接种后的编号为A2的培养基pH下降到4.3。

实施例5

用无菌棉棒分别在龋齿患者上下颌磨牙及上下前牙唇侧牙颈部上下牙等部位轻微摩擦4次或者直接用棉签在龋齿面及附近摩擦4次取样；把棉签放到DTA培养基中震荡后取出，接种后的培养基编号为B2；以未接种的实施例3的培养基为对照，编号B5；将接种好的培养基置于37℃培养箱中培养24小时；用标准pH试纸条比色，实验结果如图2所示，发现接种后的编号为B2的培养基pH下降到5.3，继续培养24h后，发现编号为B2的培养基pH下降到4.6。

由以上实施例可知，本发明提供了一种龋齿致病产酸菌增菌初筛培养基，包括以下重量份的组分：淀粉10～20份、磷酸二氢钾0.1～0.3份、糖类4～6份、氯化钠0.4～0.6份、水80～120份、指示剂0.003～0.007份。本申请的培养基配方简单，使用方便，以淀粉为原料，适宜工业化生产，能够满足龋齿致病产酸菌的生长过程中的营养需要，同时大大缩短龋齿致病产酸菌的培养时间。用于牙齿和口腔部位细菌的培养时，通过细菌分解培养基内糖分产酸能力不同，使pH值呈现不同梯度的变化，颜色变化肉眼可见，pH值越低则患龋齿的风险越高。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。