阅读说明：本技术 一种通过综合矫正代谢紊乱来防治高同型半胱氨酸血症的复合配方 (Compound formula for preventing and treating hyperhomocysteinemia by comprehensively correcting metabolic disorders ) 是由 贺鑫 于 2020-05-22 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种通过综合矫正代谢紊乱来防治高同型半胱氨酸血症的复合配方,成分包括：甜菜碱(300-1000 mg/d)、葡萄糖酸钙(500-2000 mg/d)、叶酸(10-40 mg/d)、维生素B2(5-15 mg/d)、维生素B6(5-15 mg/d)、维生素B12(20-80μg/d)和α-生育酚(10-50 mg/d)。本配方综合了对症和对因防治,在对症方面,通过缓解ROS损伤和血管内皮细胞活力下降来消除当下机体的高Hcy状态的靶点损伤；对因方面,通过全面矫正叶酸代谢紊乱涉及的五大生化通路,达到快速降低血Hcy水平的目的；另外在配方开发上综合利用高通量细胞实验和随机双盲对照多中心志愿者实验,精确探明了配方各成分的作用范围和毒性阈值,从而使各组分的使用剂量有一定的宽容度和极强的安全性,适合作为保健品或食疗的营养补充剂的核心配方,利于后续相关产品的开发上市。(The invention discloses a compound formula for preventing and treating hyperhomocysteinemia by comprehensively correcting metabolic disturbance, which comprises the following components: betaine (300-1000 mg/d), calcium gluconate (500-2000 mg/d), folic acid (10-40 mg/d), vitamin B2 (5-15 mg/d), vitamin B6 (5-15 mg/d), vitamin B12 (20-80 μ g/d) and alpha-tocopherol (10-50 mg/d). The formula integrates symptomatic and pathogenic control, and eliminates target spot damage of the current high Hcy state of the organism by relieving ROS damage and the activity reduction of vascular endothelial cells in the aspect of symptomatic; on the aspect of causes, the aim of quickly reducing the Hcy level of blood is fulfilled by comprehensively correcting five biochemical pathways related to folic acid metabolic disorder; in addition, a high-throughput cell experiment and a random double-blind control multicenter volunteer experiment are comprehensively utilized in formula development, and the action range and the toxicity threshold of each component of the formula are accurately detected, so that the dosage of each component has certain tolerance and strong safety, and the formula is suitable for serving as a core formula of a nutritional supplement of a health-care product or a food therapy and is beneficial to development and marketing of subsequent related products.)

一种通过综合矫正代谢紊乱来防治高同型半胱氨酸血症的复 合配方

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种通过综合矫正代谢紊乱来防治高同型半胱氨酸血症的复合配方。

背景技术

同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是蛋氨酸在体内代谢的中间产物，多种代谢紊乱都导致体内的Hcy出现异常积累，当血浆Hcy>15 μmol/L即可诊断为高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteiemia，HHcy)。HHcy对心脑血管等多种组织和器官产生毒性损伤，是诱发多种心脑血管病的独立危险因子，因此将伴有HHcy的高血压简称高血同或H型高血压，一项我国6城市的大样本研究显示，中国高血压患者中H型高血压约占75%，是代谢性疾病的重要类型。

HHcy是人体多种代谢通路紊乱的结果，因为机体本身有很强的维持内环境稳态的能力，HHcy的发生意味着相关代谢网络的补偿能力已经失调，进而产生的高浓度Hcy将严重干扰细胞内多种巯基蛋白质结构稳定性和活性氧簇(ROS)消除，导致一系列心脑血管损伤。有研究表明，血Hcy每升高５μmol/L，脑卒中风险增加59％，因此《美国卒中杂志》把HHcy作为脑卒中一级预防中潜在的可变危险因素。

Hcy 的代谢途径共有五条: ①重甲基化途径: Hcy 在维生素 B12、甲基供体N5-甲基四氢叶酸和蛋氨酸合成酶的作用下甲基化生成蛋氨酸，其中的甲基供体是以维生素B2 为辅酶的亚甲基四氢叶酸还原酶 ( MTHFR) 催化 N5,N10-甲基四氢叶酸而形成的; ②甲基化的替代途径: 以甜菜碱为甲基供体，在甜菜碱-高半胱氨酸甲基转移酶作用下甲基化生成蛋氨酸; ③转硫化途径: Hcy 与丝氨酸在维生素B6 和β-胱硫醚合成酶 ( CBS) 的作用下生成胱硫醚并再进一步裂解为胱氨酸和α-酮丁酸，形成转硫化途径; ④Hcy 直接释放到细胞外液; ⑤Hcy在Fe³⁺或Ca²⁺等重金属离子的催化下自身氧化代谢。以上任何代谢途径发生异常， 都可能导致Hcy 代谢受阻产生HHcy。

降低血Hcy对提升我国民众健康有着非常重要的作用，但是现有的HHcy预防与治疗方案，存在众多问题和缺陷，导致HHcy的发病率、治愈率和危害性常年居高不下。例如申请号CN201115679和CN200710175651等专利，利用药物或药物组合来防治HHcy，需要长期服用甚至注射某种或某几种药物，导致干预对象的依从性低，即因为担心长期使用药物的副作用而难以坚持使用，影响干预效果。申请号CN201910452229和CN201710910596等专利，声称可以从天然食物或蔬菜中获取防治HHcy的营养成分，但公开的配方含有活性铁1-10 mg，铁是芬顿反应的核心催化剂，能使HHcy诱导产生的过氧化氢转化为极高氧化性的羟自由基，使HHcy导致的ROS损伤和细胞铁死亡更加严重，加剧HHcy对心脑血管的损伤。

更为重要的是，目前的Hcy防治方案，首先未完整考虑Hcy代谢的五条通路，导致以目前主流的补充叶酸为代表的疗法降Hcy效果不佳；另外目前公认HHcy主要损伤心脑血管内皮细胞，发明人之前的细胞实验证明HHcy诱导了血管内皮细胞铁死亡，然而发明人检索到的所有治疗方案都没有针对性的保护HHcy诱导的血管内皮损伤，因此防治效果不佳。

发明内容

作为一种复杂的代谢紊乱，HHcy的治疗最好能够覆盖Hcy代谢的五大途径，以复合配方方式来全面矫正代谢紊乱和防止血管内皮损伤。因此，本发明在代谢组学分析基础上，经过长期的细胞实验、动物模型和人类志愿者随机双盲对照实验改进和验证，得出最适合防治HHcy的复合配方，其成分包括：甜菜碱（300-1000 mg/d）、葡萄糖酸钙（500-2000 mg/d）、叶酸（10-40 mg/d）、维生素B2（5-15 mg/d）、维生素B6（5-15 mg/d）、维生素B12（20-80 μg/d）和α-生育酚（10-50 mg/d）。本配方中各组分化学结构清楚明确、理化性质较为稳定、理论推测和实验证明不存在互相干扰问题，因此对制备方法如各组分加入的先后顺序等并无特殊要求。

与现有技术相比，本发明有如下优势：

一、从理论上讲，本发明配方各成分间存在复杂的良性相互作用，理论上能产生增效协同作用。

1. 配方成分互相维护稳定性：甜菜碱和葡萄糖酸钙为不易氧化和热稳定性很高的的两性化合物，在配方中可以维持配方中硫辛酸、维生素B2、B6和α-生育酚的稳定性；硫辛酸和α-生育酚均为ROS清除剂，但是硫辛酸可以保护α-生育酚免于被氧化失活。

2. 配方成分存在代谢协同作用：叶酸与维生素B2、B12有协同作用，硫辛酸能够促进叶酸在人体内代谢为四氢叶酸这一主要活性成分，并保护配方中多种维生素免于失活；维生素B2作为辅酶成分能促进B6代谢活性产物生成；甜菜碱、叶酸、B2、B6可以辅助硫辛酸缓解Hcy导致的ROS损伤并保护血管内皮细胞，B12辅助叶酸和B2促进Hcy的重甲基化，B12可以辅助甜菜碱促进Hcy的甲基化替代途径，B12可以辅助B6促进Hcy的丝氨酸缩合代谢途径。

3. 促进配方成分良好吸收：维生素B6能促进B12吸收。

4. 配方成分能互相增效： Hcy代谢的五大通路本身就有复杂的交叉互作，构成一个代谢网络，其中的B族维生素作为水溶性的辅酶构成一个代谢复合群，因此一次摄取要比分别摄取效果更好，这种现象叫维生素B族共融现象，因此适合共同补充以综合矫正代谢紊乱。另外，硫辛酸为极性和非极性两相抗氧化剂，可与α-生育酚形成协同作用，保护细胞膜不受活性氧自由基损伤。

二、从细胞实验数据看，本发明配方协同增效作用明显

详见实施例1和实施例2，本复合配方与单用叶酸或者市面上的配方A相比，在细胞实验上有明显的协作优势。

三、从志愿者试用数据看，本发明配方显著强于主流防治方案

在作用效果上，通过综合利用细胞活力实验与志愿者多中心大样本随机双盲对照等实验方法，在获取大量数据基础上统计分析，发现本配方比单纯使用叶酸或者某些专利配方效果更为良好(见实施例2)。

四、在安全性上，本配方各组分都来自公认的低毒性的代谢调节性营养物质，并且在预实验中专门检查了配方的细胞毒性，保证使用剂量不超过毒性阈值的5%；主要通过小剂量的复合配方的方式增加效果。另外，精确探明了配方各成分的作用范围和毒性阈值，从而使各组分的使用剂量有一定的宽容度，利于产品开发上市。

五、在作用机制上，本配方区分对症与对因防治手段，通过清除ROS损伤和内皮细胞活力下降来对症治疗；并通过将Hcy视作负责代谢紊乱，利用复合配方靶向Hcy代谢的全部途径，多管齐下纠正代谢紊乱，以降低血Hcy水平。总之，本配方能够全面的对症和对因防治HHcy，整体效果远大于各个成分的单独作用(见实施例)。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的技术实施方案做进一步详细说明。

实施例1 基于高通量细胞实验的配方有效性和安全性评估实验

在前期工作基础上，利用高通量实验，筛选出本配方各组分的较优剂量，组成配方A：甜菜碱（500 mg/d）、葡萄糖酸钙（1000 mg/d）、叶酸（30 mg/d）、维生素B2（10 mg/d）、维生素B6（10 mg/d）、维生素B12（50 μg/d）和α-生育酚（20 mg/d）。

基于相关文献和本发明的前期工作，分别选定配方A中各个组分的对应比值浓度(质量浓度比值按照上述顺序为：50:100:3:1:1:5:2，以甜菜碱在培养液中终浓度0.01mmol/L时按照上述比例配置的配方A为1 U)，利用CCK8法测定细胞活力，在5次独立实验的数据基础上进行T检验分析；以P＜0.05为差异显著标准，分析出配方中该组分的起效和实效范围；为提高配方安全性，以P＞0.01的最低剂量作为该组分的毒性剂量阈值，得出配方A的终浓度数据为：有效范围为5-200 U，毒性阈值为5000 U，是最大有效剂量的25倍以上，说明本配方的安全性极好。

实施例2 本配方在较优浓度下的随机双盲对照多中心志愿者实验

2018年3月至2019年3月，在北京、上海和咸阳三座城市，分别选取各城市体检查出的50例高Hhy血症志愿者(共150人，平均年龄48.3岁，男女比例1.17，体质指数26.10，平均血Hhcy为18.62 mmol/L)，分别每日服用外观无法分辨的配方A、食药级叶酸40 mg以及已上市配方B共60天(配方A按照实施例1给出剂量，配方B按照说明书服用，且均为午餐后顿服)，采用随机双盲对照原则进行志愿者实验，结果显示，配方A最终能使志愿者的血HHy平均降低51.5%，分别是单纯使用叶酸和配方B干预效果的2.28倍和2.04倍，另外不论服用叶酸、配方A还是配方B干预的志愿者都未报告任何不适，血生化、血常规等复查也未发现有不良影响。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的配方范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换，也应视为本发明的保护范围。