阅读说明：本技术 多杂环-吡唑啉类衍生物在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用 (Application of polyheterocycle-pyrazoline derivatives in preparation of non-small cell lung cancer resistant drugs ) 是由 林兆民 高冬芳 张璐 张明 陈元 王鹏 林御星 于 2020-05-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种化合物2-(5-(苯并[d][1,3]二氧杂-5-基)-3-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑(简略记为BPT)在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用。实验证实本发明提供的化合物BPT能够显著抑制A549细胞生长,并且抑制作用优于临床药物5-FU。BPT有望作为一种有效的抑制肿瘤生长工具,为开发非小细胞肺癌治疗药物奠定基础。(The invention discloses application of a compound 2- (5- (benzo [ d ] [1,3] dioxa-5-yl) -3-phenyl-4, 5-dihydro-1H-pyrazol-1-yl) -4- (pyridine-4-yl) thiazole (abbreviated as BPT) in preparation of a non-small cell lung cancer resistant medicament. Experiments prove that the compound BPT provided by the invention can obviously inhibit the growth of A549 cells, and the inhibition effect is superior to that of a clinical drug 5-FU. The BPT is expected to be an effective tool for inhibiting tumor growth and lays a foundation for developing non-small cell lung cancer treatment medicines.)

多杂环-吡唑啉类衍生物在制备抗非小细胞肺癌药物中的 应用

技术领域

本发明涉及多杂环-吡唑啉类衍生物在制备抗肺癌药物中的应用，尤其涉及荧光化合物2-(5-(苯并[d][1,3]二氧杂-5-基)-3-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑(简略记为BPT)在制备抑制A549癌细胞生长的抗非小细胞肺癌药物中的应用。

背景技术

肿瘤是众所周知的严重危害人类健康的疾病之一，发病率和死亡率逐年上升。预计在2030年，全世界将有2140万新诊断肿瘤病例，而肿瘤死亡人数将达1320万。肺癌因其发现晚，高致死率，在癌症治疗中成为一个全球性难题。大气污染等环境因素和吸烟等不良生活习惯，也加剧了肺癌的发展。在肺癌病例当中非小细胞肺癌约占85％的比重，约75％的患者在发现时已处于中晚期，5年存活率极低。化学药物治疗在肺癌的各种治疗方法中占有重要的地位。小分子化合物可以作为肿瘤抑制因子，成为一种有前景的新治疗策略。

然而临床上肺癌化疗所面临的一个非常大的挑战就是药物选择性差，即在肿瘤治疗的同时对正常组织造成毒副作用导致治疗失败，而且选择性差的药物很容易引起肿瘤细胞的耐药。因此，迫切需要研发更多具有抑制肺癌细胞生长的化合物或制剂。经检索，有关荧光化合物2-(5-(苯并[d][1,3]二氧杂-5-基)-3-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑在制备抑制A549癌细胞生长的抗肺癌药物中的应用尚未见报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种化合物2-(5-(苯并[d][1,3]二氧杂-5-基)-3-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑(简略记为BPT)在制备抑制A549癌细胞生长的抗非小细胞肺癌药物中的应用。

本发明所述的化合物2-(5-(苯并[d][1,3]二氧杂-5-基)-3-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用，其中所述2-(5-(苯并[d][1,3]二氧杂-5-基)-3-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑简略记为BPT，其结构式如式(I)所示：

上述的应用中：所述2-(5-(苯并[d][1,3]二氧杂-5-基)-3-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑能够有效抑制A549细胞生长的剂量为1～5μM。

上述化合物2-(5-(苯并[d][1,3]二氧杂-5-基)-3-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑抑制A549癌生长的细胞生物学实验及结果如下：

1.化合物BPT对A549细胞存活率的影响。

实验组：分别将浓度为0.1μM，1μM，5μM，10μM的BPT处理A549细胞24h和48h。阴性对照：DMSO(0.02％，v/v)，阳性对照：临床抗癌药物五氟尿嘧啶(5-FU)。

结果表明：在用1μM，5μM，10μM的BPT处理A549细胞24h和48h后能够显著抑制A549细胞的存活，见图1。具体作用结果见下表：

2.化合物BPT对A549细胞形态的影响。

实验组：分别用浓度为0.1μM，1μM，5μM，10μM的BPT处理A549细胞12h，24h和48h后拍摄细胞形态变化。对照组：DMSO(0.02％，v/v)。

结果表明：在上述时间条件下，用5μM，10μM的BPT处理能够减少A549细胞的数量，见图2。

3.化合物BPT对A549细胞的抑制作用优于临床药物5-FU。

实验组：分别计算化合物BPT以及5-FU处理A549细胞48h的半抑制浓度(IC₅₀)。发现BPT的IC₅₀值为2.6μM，优于临床药物5-FU(9.4μM)。

上述的实验数据统计学处理：

实验数据以平均值±标准误差表示，经t检验：*P<0.05表示有显著性差异；**P<0.01表示有极显著性差异。

由上述实验及其结果，可以得出如下结论：

BPT能够显著抑制A549细胞生长，并且抑制作用优于临床药物5-FU。

本发明提供的BPT所显示的抑制A549癌细胞生长的结果，预示BPT有望作为一种有效的抑制肿瘤生长工具，为开发抗非小细胞肺癌治疗药物奠定基础。

附图说明

图1：BPT抑制A549细胞存活。

其中：A:BPT处理A549细胞24h后，检测A549细胞存活率。

B:BPT处理A549细胞48h后，检测A549细胞存活率。

图2：BPT促进A549形态改变并减少细胞数量。

不同浓度BPT处理A549细胞12h，24h和48h后，显微镜拍照观察A549细胞形态和数量变化。

具体实施方式

下面结合具体附图和实施例对本发明内容进行详细说明。如下所述例子仅是本发明的较佳实施方式而已，应该说明的是，下述说明仅仅是为了解释本发明，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

下述实施例中，所使用的材料、细胞、试剂等，如无特殊说明，均从商业途径得到。

实施例1：BPT处理A549细胞后SRB法存活率检测。

(1)加入不同浓度的化合物BPT处理事先种于96孔板的细胞。(2)化合物处理24h以及48h后弃旧培养液，加入100μL的三氯醋酸，置于4℃固定细胞1h。(3)弃固定液。用双蒸水洗五遍，动作轻柔，室温晾干。(4)每孔加入50μL的SRB，室温摇床，10分钟。(5)用1％醋酸洗5遍，室温晾干。(6)每孔加入100μL浓度10mM的缓冲液Tris碱，置于摇床10分钟。(7)选择540nm激发光，测OD值。

结果表明：1μM，5μM，10μM的BPT处理A549细胞24h以及48h后能够显著抑制A549细胞的存活，见图1。

实施例2：BPT处理A549细胞后，倒置显微镜下检测细胞形态和数量变化。

将A549细胞接种于直径6cm的培养皿中，37℃，CO₂孵箱内培养12h之后，加入不同浓度BPT处理12h,24h以及48h后置于倒置显微镜下拍摄细胞形态，观察数量。

结果表明：上述条件下，5μM，10μM的BPT能够使细胞形态发生变化，有些细胞呈现出细窄狭长和变圆等变化，明显减少A549细胞的数量。见图2。

实施例3：BPT的制备

在100mL的圆底烧瓶中加入1.20克苯乙酮(0.01摩尔)，1.50克胡椒醛(0.01摩尔)，氢氧化钠水溶液(8毫升，2.5摩尔)以及乙醇(20毫升)，装置回流冷凝器，上部接干燥管。加热回流5小时，反应至原料完全消耗，用TLC检测反应终点。黄色沉淀物经水洗，干燥得到(E)-3-(苯并[d][1,3]二氧杂-5-基)-1-苯基丙-2-烯-1-酮。

在1.512克(0.006摩尔)(E)-3-(苯并[d][1,3]二氧杂-5-基)-1-苯基丙-2-烯-1-酮的乙醇(30毫升)溶液中加入0.546克硫代氨基脲(0.006摩尔)，8毫升氢氧化钠水溶液(2.5摩尔)，加热搅拌回流反应6小时，反应至原料完全消耗，用TLC检测反应终点。静置过夜，析出固体，过滤，减压抽滤得5-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)-3-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-硫代酰胺。

在0.325克(0.001摩尔)5-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)-3-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-硫代酰胺的乙醇(25毫升)溶液中加入0.200克2-溴-1-(吡啶-4-基)乙酮(0.001摩尔)，加热搅拌回流反应8小时，反应至原料完全消耗，用TLC检测反应终点。静置过夜，析出固体，过滤，乙醇洗两遍。然后将固体溶于二氯甲烷，先后用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，有机相减压蒸干溶剂得到2-(5-(苯并[d][1,3]二氧杂-5-基)-3-苯基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑。

核磁共振数据如下：

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(dd,J＝4.7,1.4Hz,2H),7.81-7.79(m,2H),7.71(s,1H),7.67(dd,J＝4.7,1.5Hz,2H),7.52-7.48(m,3H),6.95-6.89(m,3H),5.98(d,J＝5.8Hz,2H),5.63(dd,J＝11.8,6.5Hz,1H),4.01(dd,J＝18.0,11.8Hz,1H),3.38(dd,J＝18.0,6.5Hz,1H).

质谱数据如下：

HRMS(EI)：m/z427.1229[M+H]⁺。