阅读说明：本技术 一种治疗白血病的药物 (Medicine for treating leukemia ) 是由 苗玉迪 于 2019-07-15 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种治疗白血病的药物,其具体包括一种化合物与多肽,该药物能提高白血病细胞的膜通透性以及细胞杀伤效果,并且其对正常细胞毒性低,因此能够有效抑制白血病细胞的细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡,具有较好的应用前景。(The invention relates to a medicament for treating leukemia, which particularly comprises a compound and polypeptide, can improve the membrane permeability and the cell killing effect of leukemia cells, has low toxicity to normal cells, can effectively inhibit the cell proliferation of the leukemia cells and induce the apoptosis of tumor cells, and has better application prospect.)

一种治疗白血病的药物

技术领域

本发明涉及一种能够特异性抑制白血病的药物，属于生物制药领域。

背景技术

白血病(leukemia)是一类发生于造血器官，以血液和骨髓中白细胞及其前体细胞的增殖和发育异常的一种恶性肿瘤疾病。由于造血干细胞分化异常，导致在骨髓和其他造血组织中白血病细胞不正常的过度增生、积聚并浸润其他组织和器官，同时使正常造血受抑制，临床表现为出血、贫血、感染及各器官浸润症状。

据相关统计，白血病约占肿瘤发病率的3％左右，好发于儿童和青年，男性患者较女性多。白血病的发病率在世界各国中，欧洲和北美发病率最高，其死亡率为3.2-7.4/10万人口。亚洲和南美洲发病率较低，死亡率为2.8-4.5/10万人口，并以每年至少3-4万的速度增加。在我国各年龄组恶性肿瘤的死亡率中分别占第6位(男性)和第8位(女性)，在儿童及35岁以下的死亡率中占第1位。

近年来，随着我国经济的飞速发展，环境污染日益严重，肿瘤已成为我国威胁人民健康和生命的头号疾病，尤其是恶性肿瘤的发病率不断攀升，白血病的情况也不容乐观。

根据白血病细胞的成熟程度和自然病程，白血病可分为急性和慢性两大类。急性白血病是造血干祖细胞来源的恶性克隆性血液系统疾病。临床以感染、出血、贫血和髓外组织器官浸润为主要表现，病情进展迅速。自然病程仅有数周至数月。一般可根据白血病细胞系列归属分为急性髓系白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)两大类。

慢性白血病其特征是有功能的已分化成熟细胞过度增生，因此慢性白血应是一种由于信号传导不良或细胞增殖失控所至的疾患，而非成熟障碍所至。慢性白血病常见有慢性粒细胞性白血病(C ML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

白细胞增生与浸润为白血病的特异性病理变化，变现为***、肝、脾肿大，胸骨压痛。亦可表现其他部位浸润，如出现胸腔积液、腹腔积液或心包积液，以及中枢神经系统浸润等。由于白血病导致中性粒细胞数量减少和功能缺陷，从而容易引发各种细菌感染，其中以口腔、肠、肺部等炎症最为常见。血小板减少，纤维蛋白溶解，弥散性血管内凝血及血浆蛋白结合多糖体增多，抑制凝血功能，患者多伴有出血现象，常见于皮肤黏膜、造血组织、脾、胃等。白血病产生的部正常分化细胞抑制正常造血细胞，破坏红细胞生长的骨髓环境，引致溶血现象，造成贫血。白细胞增多还可导致小血管阻塞及出血性栓塞，引起患者瘫痪、昏迷、甚至死亡。

化学治疗目前仍为白血病的主要治疗手段，目的是清除白血病细胞克隆并重建骨髓正常造血功能。急性白血病治疗可分为两个阶段，即诱导缓解和缓解后治疗(巩固强化和维持治疗)。诱导缓解阶段是选择数种作用机理不同药物联合组成方案，剂量以达到使骨髓轻度抑制为度。争取用药1～2个疗程达到完全缓解，恢复造血功能。但此时患者并未痊愈，治疗进入第2阶段即缓解后治疗，缓解后治疗一般于第一次取得完全缓解之后两周开始，化疗方案除诱导缓解时使用的原方案外，另择多个新方案，其中包括两个大剂量强化方案穿插于其中，各方案轮换交替进行，进行巩固强化治疗。

放射治疗常作为造血干细胞移植中预处理方案的一部分而使用，但由于白血病细胞本身充斥于人体的循环系统、造血器官及被浸润的组织，所以放射疗法在白血病治疗中有一定的局限性，一般用于局部照射明显肿大的肝脾或***节以缓解症状，或用于骨髓移植前的预处理，以减少排斥反应。

骨髓移植(BMT)是现在治疗白血病的普遍选择的治疗方法，因为骨髓移植是真正意义上根治白血病的方法。骨髓移植较普通化疗的优越性在急性白血病得以充分体现，这种疗法可使急性白血病患者的无病生存率显著提高。据Fred Hutchinson癌症研究中心与IBMTR的大宗病例分析，AML在第一次缓解接受ALLo-BMT后，3年无病生存率可达50％左右；而同期化疗病人的3年无病生存率仅18-27％。BMT疗效受多种因素影响，主要有BMT时机选择：第一次缓解BMT疗效优于第二次缓解期。Brotint等(1988)比较AL患者第一次缓解期及第二次缓期BMT结果，发现第一次缓解期BMT后患者5年复发率为21％±11％，5年无病存活率46％±9％；第二次缓解期BMT后患者5年复发率及存活率则分别是56％及22％。IBMTR及西雅图的资料亦有类似结果。因此，急性白血病患者宜在第一次完全缓解期进BMT。疾病本身的性质：BMT疗效与分型的关系不甚明确，一般认为AML疗效优于ALL，对于ALL患者。患者的年龄及一般情况：年龄越大，脏器功能越差，BMT后发生各种合并症尤其是GVHD的可能性亦越大，因此对于45岁以上的患者进行异基因骨髓移植谨慎，50岁以上一般不再进行异基因骨髓移植。

近年来，白血病细胞的靶向治疗已成为白血病治疗的发展趋势，利用单抗，细胞因子或基因等靶向杀死白血病细胞，在临床上有着良好的应用前景，可能成为白血病的又一治愈手段。

在专利领域，化合物治疗白血病领域申请也较为广泛。比如CN102961374B公开了式I所示化合物在制备STAT3抑制剂中的应用以及一种STAT3抑制剂，本发明所述式I化合物能够显著抑制急慢性白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、肺癌、***癌和***等多种肿瘤细胞的增殖和存活，抑制肿瘤细胞STAT3信号通路，激活诱导肿瘤细胞凋亡的相关因子，从而诱导肿瘤细胞凋亡，达到***疾病的效果。

CN103751172B公开了双呫吨酮类化合物在制备治疗抗白血病药物中的应用，还包括了从田基黄药材中提取得到5种双呫吨酮类化合物的方法。对该5种天然的双呫吨酮类化合物进行白血病细胞活性实验，结果显示5个双呫吨酮类化合物对白血病细胞K562、HL-60、THP-1都具有抑制活性，对K562细胞的抑制活性更优。该5种双呫吨酮类化合物通过BCL2蛋白家族发挥抗肿瘤活性，根据白血病实体瘤裸鼠模型结果，不仅能抑制肿瘤的生长，而且还能延长肿瘤模型的生命周期。

CN100441222C中公开了化合物PS-341在制备治疗具有t(8；21)染色体易位的M2型急性糖性白血病的药物中的应用。解决了目前AML M2的治疗以大剂量阿糖胞苷结合柔红霉素或去甲氧柔红雾素的化疗为主，多数病人虽可获得缓解，但很快复发，并逐渐产生耐药性而导致治疗失败，且药物毒副作用较大。

近年来，有相关研究表明正常人体内所具有的低浓度VEGF主要与血管生成存在关联，而恶性血液病同样具有血管生成。肿瘤细胞中VEGF出现过表达的情况下，会导致局部肿瘤组织中的VEGF浓度出现异常增高，进一步促进心血管生成，为肿瘤细胞提高营养物质，进一步促进肿瘤细胞出现生长、增殖，并且与肿瘤细胞的侵袭、转移也存在较大关联。通过对白血病患者治疗前的血清VEGF表达水平与参照组血清VEGF表达水平相比发现，白血病患者血清中的VEGF表达水平远高于健康人群，而白血病患者在经过标准化治疗后血清中的VEGF表达水平远低于治疗前。而VEGF所具有的主要生物学功能是能够使血管通透性增加，是促进心血管生成的主要诱导因子，并且通过对内皮细胞发挥刺激作用，使其出现过度增殖，进而促进新血管生成，并在血管通透性增加的情况下血管外基质中的沉积大量纤维蛋白原，进一步为血管生产、肿瘤细胞生长提供营养物质，为肿瘤的进一步侵袭、转移提供必要条件。由此可以说明对白血病患者采用VEGF抑制剂进行治疗具有较好的应用价值。

但是在这些申请中，还存在着化合物的毒性作用较强，在治疗白血病的同时对人体也是相爱相杀，因此发明人在此基础上进行了改进，提供了一种改进的能够较少化合物毒性以及提高抑制效果的新的治疗白血病的药物组合物。

发明内容

发明人前期研究的药物在治疗效果上仍存在改进的空间。

本发明要解决的技术问题在于提供一种化合物及其制备与用途。本发明提供的化合物具有式1所示结构，并能够有效抑制K562白血病细胞的生长，具有较好的应用前景。

本发明另外一方面，提供一种能够提高白血病细胞膜的通透性的多肽，如SEQ IDNO：1所示。该多肽能够显著的提高K562白细胞细胞膜的通透性，提高细胞渗漏，抑制细胞生长。

通透肽SEQ ID NO：1：

本发明另外一方面，提供一种组合物，将SEQ ID NO：1多肽与式1的化合物进行组合使用，实现协同增强的细胞杀伤效果。

本发明还提供了一种抗肿瘤药物组合物，它是由所述的化合物和多肽以及其药学上可接受的盐为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

本发明所述化合物和多肽可以单独或与一种以上可接受的载体组合剂制成制剂给药。例如，溶剂、稀释剂等。可以口服剂型给药，如片剂、胶囊、可分散粉末、颗粒剂等；也可以注射型给药，如冻干粉针剂。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域中熟知的方法进行制备。这些药用制剂中可以含有与载体组合的例如重量活性成分，更常见约

之间的活性成分。本发明化合物和多肽剂量可以根据疾病严重程度或剂型的不同使用剂量超出此剂量范围。

所述白血病是指急性髓系白血病、慢性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病，慢性白血病以及浆细胞白血病、慢粒急变白血病、嗜酸性粒细胞白血病、嗜碱性粒细胞白血病，巨核细胞白血病，未分化型急性白血病或组织嗜碱细胞白血病、低增生性白血病类型的耐药白血病。

有益效果

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：

本发明首次公开了化合物与多肽一起协同作用，提高白血病细胞的膜通透性以及细胞杀伤效果，并且其对正常细胞毒性低，因此能够有效抑制白血病细胞的细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡，具有较好的应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可做出其它多种形式的修改、替换或变更。

下通过实施例形式的

具体实施方式

，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明：

图1：细胞培养时间与细胞密度图。

具体实施方式

实施例1 细胞的培养以及多肽的制备

肿瘤细胞株：K562白血病细胞(陕西省人民医院血液病研究室保存)，从液氮中复苏后，将K562细胞置于含10％灭活新鲜小牛血清RPMI-1640培养液，在37℃，体积分数为5％CO₂、饱和湿度条件下培养，保持细胞活力＞97％，取指数生长期的K562细胞(1X10⁵个/ml)分为对照组与实验组备用。

所述SEQ ID NO：1的多肽采用合成方式获得，由北京义翘神州科技有限公司完成。

实施例2.细胞膜通透性实验之乳酸脱氨酶(LDH)释放实验

以5X10³个细胞/孔的密度将K562细胞加到96孔板中培养。多肽(SEQ ID NO：1在pH7.5时)与细胞共同孵育2小时。LDH浓度(LDHsample)用显色的LDH试剂盒测定。Triton-X100(0.2％终浓度)加到某些孔中准备细胞裂解液。细胞裂解液中的LDH浓度定义为LDHtotal。LDH的释放(LDHrelease)按照以下的公式来计算：

LDHrelease＝100％X(LDHsample/LDHtotal)

细胞活性实验是在上清液都取出做LDH释放实验后，在同样的细胞上完成的。细胞活性值和LDH释放值列在表1中。由表1可看出，多肽处理细胞后，LDH的释放随着多肽浓度的增加而增加。LDH的释放通常用于衡量细胞膜的通透性，结果显示多肽会增加细胞通透性，因而导致细胞的活性降低。

表1.细胞活性和LDH释放的关系

多肽(μM)	0	10	20	40	80
						细胞活性(％)	100	80.3	31.2	21.5	11.3
LDH释放(％)	2.56	32.5	51.4	63.8	76.9

以上结果表明，在多肽对细胞作用后，LDH释放直接与细胞活性的降低有关。正常细胞约有1-5％的LDH释放到外面。在多肽对细胞作用后，LDH的释放随着多肽浓度的增加而增加。由于LDH的释放通常用于衡量细胞膜的通透性，结果显示SEQ ID NO：1的多肽导致细胞通透性增加导致细胞的活性降低。

实施例3 细胞增殖抑制实验

细胞增殖抑制实验：将处于对数生长期的K562细胞以1×105/mL加入24孔板中，每孔1μL，药物分别为80μM多肽组，80μM多肽+20μM式1化合物药物组，20μM式1化合物药物组，PBS空白对照组，于12、24、36、48h后记数，用台盼蓝拒染实验记数活细胞，实验重复3次，取平均值，描绘生长曲线，见图1所示。

从图1可以看出，单独采用多肽以及式1化合物对于细胞的抑制效果相似，都有一定的效果，而将多肽与式1化合物药物一起能够显著的抑制细胞的增殖以及促进细胞的凋亡，在48h时细胞存活率不到1％，细胞密度降低为0.001*10⁵个/ml，表现出极好的抑制效果。

实施例4 细胞毒性实验

将293T细胞、16HBE细胞以及WI-38[WI38]人胚胎肺成纤维细胞分别按照常规的培养方法进行细胞培养，收集细胞浓度为1X10⁵个。5X10³个细胞/孔的密度将293T细胞、16HBE细胞以及WI-38[WI38]人胚胎肺成纤维细胞加到96孔板中同时添加多肽+式1化合物混合物与细胞共同孵育4小时，以不加药物的PBS溶液为对照。检测细胞密度发现，对照组与加药组细胞密度基本相同，这说明，本发明提供的组合物对正常细胞没有显著的杀伤作用，具有较好的应用前景。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可对之作一些修改或改进，运对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的运些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。