阅读说明：本技术 一种南瓜花天然多肽的制备方法和应用 (Preparation method and application of pumpkin flower natural polypeptide ) 是由 菅晓勇 于 2019-01-21 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种南瓜花天然多肽的制备方法,包括如下步骤：将南瓜花洗净后切成丁,然后在低温下匀浆并于低温下静置12小时,离心后的上清提取液经凝胶层析分离纯化,收集分子量在500-12000道尔顿的部分即为南瓜花天然多肽,该部分天然多肽收集液经真空冷冻干燥,得南瓜花天然多肽粉。本发明提供的制备方法所得南瓜花天然多肽分子量较低,保留了较高的天然活性,可以用于制备保健食品及食品。(The invention provides a preparation method of a pumpkin flower natural polypeptide, which comprises the following steps: cleaning the cushaw flower, cutting the cushaw flower into pieces, homogenizing at low temperature, standing for 12 hours at low temperature, separating and purifying the centrifuged supernatant extracting solution through gel chromatography, collecting the part with the molecular weight of 500 plus 12000 daltons, namely the cushaw flower natural polypeptide, and carrying out vacuum freeze drying on the collected liquid of the part of the natural polypeptide to obtain the cushaw flower natural polypeptide powder. The pumpkin flower natural polypeptide prepared by the preparation method provided by the invention has lower molecular weight, retains higher natural activity, and can be used for preparing health-care food and food.)

一种南瓜花天然多肽的制备方法和应用

技术领域

本发明属于天然产物提取领域，具体涉及一种南瓜花天然多肽及其制备方法及应用。

背景技术

南瓜又名麦瓜、倭瓜、金冬瓜等，属葫芦科南瓜属一年生草本植物，是我国的传统蔬菜之一。随着人民生活水平的提高以及对营养和健康食品的日益关注，发现南瓜不仅营养丰富，长期食用还具有食疗保健和药用功能，国内外对南瓜果的营养成分和保健作用也进行了大量的研究和报道，现代药理学研究证实，南瓜具有降血糖、调血脂、降血压等功效。南瓜花是南瓜的花，一般为杏黄色，雌雄同株。南瓜花在我国使用历史悠久，即可食用，也可入药，是一种药食兼用食材之一。中医认为具有清利湿热、消肿散瘀、抗癌防癌、治疗黄疸、消除疲劳、促进血管、心脏功能等作用。南瓜花具有很高的价值，但目前的开发程度还是比较低，有文献报道从南瓜花中提取的化学物质用于治疗糖尿病，尚未见有从南瓜花中提取天然多肽的报道。

肽类分为寡肽和多肽，是由两个或两个以上氨基酸缩合并以肽键相连的一类生物活性物质。肽类与生物体内其它物质相比，其最大的特点是它们具有很高的生物活性和多样性。在生物体内，很多生物活性物质大都是以多肽的分子结构及天然构象形式存在，同时也以天然生物活性的作用方式在机体发挥着重要的效应。多肽在生物体的生长发育和新陈代谢中起着至关重要的作用。活性生物多肽可以调控细胞的生命活动以确保细胞正常分裂和蛋白质正常合成，因此对细胞分裂、分化、修复起重要作用。因此活性生物多肽与人类健康、抗衰老及延年益寿等密切相关且意义重大。近年来的科学研究证实，人体所吸收蛋白质的主要形式不都是氨基酸，而是活性生物肽，因此可以通过补充活性生物多肽的方式调理健康，抵抗疾病和衰老。

目前多肽的提取制备方法很多，包括酸水解法、碱水解法、酶水解法以及几种方法结合应用等方法。然而，保留天然活性的多肽的提取，即在不改变这些化合物的结构和性质的条件下，尽量将提取物中的杂质分离出来，需要较为温和的提取条件。单纯的酸解或碱解及酶解法提取多肽，若所选择的溶液体系酸性或碱性太强，都可能使被提取物发生不可逆变性或过度水解以及分子构象等发生明显改变，使其逐步失去了多肽的生物学活性和功能。而且，为了阻止酶解法在完成多肽提取后所加入的蛋白酶继续发生水解、通常需要煮沸进行灭酶活，这样可能在一定程度上造成多肽生物活性的降低或破坏。

重要的是上述方法都是通过分解蛋白来实现得到多肽，总体上操作步骤繁琐，引入介质较多，所得多肽的生物活性存在较多问题。本方法提供了一种能够从生物组织中直接提取天然多肽的简便的多肽制备方法，该方法提取条件温和，分离条件采取生理条件，所得多肽能够保留其天然活性。

发明内容

本发明提供了一种从生物组织中直接提取天然多肽，并且能够保留多肽天然活性的简便的多肽制备方法，以至少解决现有技术中多肽提取方法复杂的技术及天然活性保留的问题。

本发明提供了一种南瓜花天然多肽的制备方法,其特征在于其包括如下步骤：

（1）将新鲜南瓜花洗净，切丁，2-8℃冰浴下匀浆，然后加入预冷过的南瓜花重量1-3倍的0.02-0.2摩尔/升（mol/L）pH 6.0-7.2的磷酸盐缓冲液浸泡，置于2-8℃冰箱12小时后，2-8℃冷冻离心，上清即为含有南瓜花天然多肽粗提液；

（2）向步骤（1）所得含有南瓜花天然多肽的粗提液中加入洗脱液将其稀释至为含多肽30-100毫克/毫升（mg/mL）的溶液，用葡聚糖凝胶层析分离，收集分子量500-12000道尔顿（D）的组分；

（3）将步骤（2）中的南瓜花天然多肽收集液冷冻干燥，即得到南瓜花天然多肽提取物冻干粉。

优选的，上述磷酸盐缓冲液浓度为0.05mol/L，所述磷酸盐缓冲液pH为7.0，所述缓冲液用量为南瓜花的2倍。

优选的，上述步骤（2）中，将步骤（1）收集的红薯叶天然多肽粗提液用洗脱液稀释至为含多肽50mg/mL的溶液。

优选的，上述葡聚糖凝胶层析的分离条件为：凝胶层析柱为Sephadex G-50，内径0.5-2厘米（cm），柱长30-120cm，洗脱液为0.05mol/L的pH7.0磷酸盐缓冲液，含0.15mol/L的氯化钠溶液，流速0.4-7毫升/分钟（mL/min），进样量0.5-1mL，检测波长280nm。

根据上述制备方法所得南瓜花天然多肽提取物均保留较高的天然生物活性，可以用于制备保健食品及食品中的应用。

本发明提供的南瓜花天然多肽制备方法操作简单，能够从生物组织中直接提取天然活性多肽，该方法提取条件温和，分离条件采取生理条件，所得多肽能够保留其天然生物活性。本发明提供方法制备的南瓜花天然活性多肽比游离氨基酸的渗透压低，更容易被吸收，食后不会引起腹泻等不良反应；同时南瓜花天然生物活性肽又具较低抗原性，不会引起过敏反应；活性多肽在人体内能够参与体内蛋白质的合成，促进相关细胞的有丝分裂与增殖分化，增强机体组织与细胞的新陈代谢，因此具有在分子水平上调控细胞代谢，修复异常受损细胞的作用。此外天然活性多肽还具有潜在的降血压、降血脂、抗氧化、抗病毒、抑菌、降低胆固醇、促进矿物质吸收、改善物质代谢、增强机体免疫能力等功能，因此南瓜花天然活性多肽能够在细胞水平上有效调控人体的健康，抵抗衰老与疾病。

附图说明

图1 南瓜花天然多肽凝胶层析图，即实施例1的图。

下面

具体实施方式

用于进一步说明但不限于本发明，下面实施例仅为本发明一种优选地实施方式。

具体实施方式

实施例1 一种南瓜花天然活性多肽提取物的制备方法，步骤如下：

(1)取南瓜花，切丁，4℃冰浴下匀浆，然后加入预冷过的南瓜花重量2倍的0.05mol/LpH7.0的磷酸盐缓冲液浸泡，置于4℃冰箱12小时后，4℃冷冻离心，上清即为含有南瓜花天然多肽粗提液；

(2)向步骤(1)所得含有南瓜花多肽的粗提液中缓慢加入洗脱液稀释成含多肽50mg/mL的溶液，用葡聚糖凝胶层析(Sephadex G-50柱，内径1cm，柱长30cm，洗脱液为0.05mol/L，pH7.0的磷酸盐缓冲液，含0.15mol/L氯化钠溶液，流速1mL/min，进样量1mL，检测波长280nm)分离，收集分子量500-12000D的组分（图1中介于13ml-16ml的峰即为要收集的目的多肽）；

（3）将步骤（2）中的南瓜花天然多肽收集液冷冻干燥，即得到南瓜花活性多肽提取物冻干粉。

实施例2 一种南瓜花天然活性多肽提取物的制备方法，步骤如下：

(1)取南瓜花，切丁，4℃冰浴下匀浆，然后加入预冷过的南瓜花重量3倍的0.2mol/LpH6.0的磷酸盐缓冲液浸泡，置于2-8℃冰箱12小时后，2-8℃冷冻离心，上清即为含有南瓜花天然多肽粗提液；

(2)向步骤(1)所得含有南瓜花多肽的粗提液中缓慢加入洗脱液稀释成含多肽100mg/mL的溶液，用葡聚糖凝胶层析(Sephadex G-50柱，内径1cm，柱长30cm，洗脱液为0.05mol/L，pH7.0的磷酸盐缓冲液，含0.15mol/L氯化钠溶液，流速0.5mL/min，进样量1mL，检测波长280nm)分离，收集分子量500-12000D的组分；

（3）将步骤（2）中的南瓜花天然多肽收集液冷冻干燥，即得到南瓜花活性多肽提取物冻干粉。

实施例3 一种南瓜花天然活性多肽提取物的制备方法，步骤如下：

(1)取南瓜花，切丁，2-8℃冰浴下匀浆，然后加入预冷过的南瓜花重量1倍的0.02mol/L pH7.2的磷酸盐缓冲液浸泡，置于2-8℃冰箱12小时后，2-8℃冷冻离心，上清即为含有南瓜花天然多肽粗提液；

(2)向步骤(1)所得含有南瓜花多肽的粗提液中缓慢加入洗脱液稀释成含多肽30mg/mL的溶液，用葡聚糖凝胶层析(Sephadex G-50柱，内径1cm，柱长30cm，洗脱液为0.05mol/L，pH7.0的磷酸盐缓冲液，含0.15mol/L氯化钠溶液，流速0.4mL/min，进样量1mL，检测波长280nm)分离，收集分子量500-12000D的组分；

（3）将步骤（2）中的南瓜花天然多肽收集液冷冻干燥，即得到南瓜花活性多肽提取物冻干粉。