阅读说明：本技术 一种鳄鱼多肽的提取方法 (Method for extracting crocodile polypeptide ) 是由 张树华 于 2020-05-11 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种鳄鱼多肽的提取方法,属于生物样品提取技术领域,其通过对鳄鱼组织进行加热软化,再进行高温恒温水解,再对水解产物进行浓缩干燥得到鳄鱼多肽提取物粉末,具有操作简单、提取效率高和提取物活性高的优点。(The invention provides an extraction method of crocodile polypeptide, belonging to the technical field of biological sample extraction.)

一种鳄鱼多肽的提取方法

技术领域

本发明属于生物样品提取技术领域，尤其涉及一种鳄鱼多肽的提取方法。

背景技术

蛋白作为人体必需的营养素，对人体的生命健康极为重要。流行病学调查结果表明，如果每天蛋白摄入量过低，就容易患食管癌、胃癌、肝癌等。世界卫生组织和联合国粮农组织的专家认为一个普通公民正常活动的标准饮食，每天蛋白摄入量不能低于75g。蛋白质按照来源分为动物蛋白、植物蛋白、单细胞蛋白和藻类蛋白，这些大分子蛋白在一定程度上补充人体所需要的蛋白，但是存在不易消化、吸收差、不耐酸性等缺点，有些蛋白还存在一定的致过敏性。

大量科学研究表明，通过控制水解的程度和水解的条件，水解某些蛋白质可得到大量生物活性多肽，这些生物活性多肽不仅具有活性高、易消化吸收和安全性高等优点，而且具有特殊的生理调节功能，例如降低血脂、延缓衰老、美体养颜、抗氧化、抗忧郁、抗疲劳、改善睡眠、增强记忆、抑制肿瘤等；还能促进人体对蛋白质、维生素及各种有益微量元素的吸收。科学研究发现，机体内的活性多肽是沟通细胞与细胞之间、器官与器官之间的重要化学信使，通过内分泌、旁分泌、神经内分泌以及神经分泌等作用方式，传递各种特异信息，从而可调节生长、发育、繁殖、代谢和行为等生命过程。

生物活性多肽研究领域发展很快，已经受到了各国科学家和政府的高度重视，通过对食物蛋白进行水解或加工以获得生物活性多肽，具有原料丰富、成本低廉、安全性好、便于工业生产、应用性好等独特的优点，受到各国科学的推崇。活性多肽应用归结起来主要有医用和食用两大方面。活性多肽作为药物，其活性作用点集中于较短多肽链上，不仅可以提高药物有效值和生物活性，而且可以减少非目标活性成分的不良反应，提高其专一性。活性多肽在食品中的应用主要集中在功能性食品上，功能性多肽保健食品在我国刚刚起步，且附加值高，具有巨大的市场空间，较高的经济和社会效益。

鳄鱼属脊椎动物爬行虫纲，广泛生长于越南、泰国、马来西亚等南亚国家，作为祖龙现存唯一的后代，鳄鱼具有体形大、繁殖力强、生长快、抗病力强等特点。鳄鱼全身是宝，鳄鱼的肉、骨、甲及内脏含有丰富的优良蛋白质和人体必需的氨基酸、不饱和脂肪酸、维生素及各种微量元素。

现代医学研究发现，鳄鱼肉不但味美，而且能补气血、壮筋骨、治哮喘，对慢性咳嗽、消渴病(糖尿病)也有显著疗效。

发明内容

基于上述现状，本发明提供一种鳄鱼多肽的提取方法，其通过对鳄鱼组织进行加热软化，再进行高温恒温水解，再对水解产物进行浓缩干燥得到鳄鱼多肽提取物粉末，具有操作简单、提取效率高和提取物活性高的优点。

本发明通过以下详细技术方案达到上述目的：

一种鳄鱼多肽的提取方法，其包括以下步骤：

步骤S10，取鳄鱼组织充分洗净，将洗净的鳄鱼组织加热水解；

步骤S20，取步骤S10中获得的水解产物进行静置沉淀，再进行过滤取滤液，为粗提物；

步骤S30，取步骤S20中获得的粗提物，加入硅藻土和活性炭搅拌，再次进行静置沉淀，并过滤取滤液，为精提取液；

步骤S40，取步骤S30中获得的精提取液，进行干燥，得鳄鱼肽粉末。

其中，所述的步骤S10中的鳄鱼组织包括鳄鱼骨、鳄鱼皮和鳄鱼肉，鳄鱼骨、鳄鱼皮和鳄鱼肉中均含有大量的蛋白质，方便进行多肽的提取。

其中，所述的步骤S10中的加热水解是将鳄鱼组织放入蒸馏水中，并于110-130℃的油浴锅中加热搅拌7-9h；所述的鳄鱼组织和蒸馏水的质量比是鳄鱼组织：蒸馏水＝1：5。

其中，所述的步骤S10中还包括步骤S11，取鳄鱼组织于70-80℃清水中浸泡25-35min。

其中，所述的步骤S40中包括步骤S41，取步骤S30中获得的精提取液，使用真空水泵浓缩得到浓缩提取液。

其中，所述的步骤S40中包括步骤S42，取步骤S41中获得的浓缩提取液，使用冷冻干燥机干燥成粉末。

本发明具有的有益效果：本发明提供的提取方法通用性强，适用于鳄鱼骨、鳄鱼皮和鳄鱼肉等的鳄鱼组织；提取的鳄鱼多肽活性高，在抗氧化方面具有显著的活性效果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做详细的描述。

实施例一：鳄鱼多肽的提取。

一种鳄鱼多肽的提取方法，其包括以下步骤：

步骤S10，取10g鳄鱼组织于70-80℃清水中浸泡30min，再用水充分洗净，然后将洗净的鳄鱼组织置于盛有50mL蒸馏水的有底烧瓶中，并于120℃的油浴锅中加热搅拌8h，充分水解；

步骤S20，取步骤S10中获得的水解产物进行静置沉淀，再进行过滤取滤液，为粗提物；

步骤S30，取步骤S20中获得的粗提物，加入硅藻土和活性炭搅拌，再次进行静置沉淀，并过滤取滤液，得到略带浅黄色的纯清的精提取液；

步骤S40，取步骤S30中获得的精提取液，使用真空水泵浓缩得到浓缩提取液；取浓缩提取液进一步使用冷冻干燥机干燥成粉末。

作为优选实施例，鳄鱼组织选用鳄鱼骨、鳄鱼皮和鳄鱼肉，提取结果如下表1。

表1，鳄鱼组织提取结果表。

鳄鱼组织种类	组织用量(g)	多肽获得量(mg)
			鳄鱼骨	10	40
鳄鱼皮	10	125
			鳄鱼肉	10	160

实施例二：鳄鱼多肽的抗氧化活性测试。

本实施例采用DPPH法测定鳄鱼多肽的抗氧化活性，包括以下步骤：

步骤S1样品的配置：精确称取一定量的样品，用DMSO配置成浓度为10mg/mL的母液，备用，实验时用无水乙醇稀释成所需的浓度。

步骤S2 DPPH的配置：DPPH需现配现用，实验时，精确称取一定量的DPPH，用无水乙醇配置成浓度为0.2mmol/L的溶液。

步骤S3抗氧化活性测试：在96孔酶标板中加入100μL 2mg/mL的样品及100μL0.2mmol/L DPPH溶液，混匀，室温反应30min后，置全波长酶标仪中517nm处测量其吸光度。

在本实施例中，以维生素C作阳性对照，同时设阴性对照组、空白对照组和样品背景组，每组的试剂如下：

阴性对照组：100μL无水乙醇+100μL DPPH溶液；

空白对照组：200μL无水乙醇；

样品背景组：100μL无水乙醇+100μL样品溶液。

每个样品做3个重复孔，并做3次重复的实验，取其平均值。初筛时样品的作用浓度为1mg/mL，对初筛时清除率大于50％的样品，设置至少5个作用浓度作IC50。

样品对DPPH的清除率根据以下公式计算：清除率(％)＝[1-(A样品-A样品背景)/(A阴性对照-A空白对照)]×100％，具体实验结果如下表2所示：

表2，鳄鱼多肽的抗氧化活性测试结果表。

实验结果表明鳄鱼皮多肽、鳄鱼骨多肽、鳄鱼肉多肽在1000μg/mL的浓度下，有一定的自由基清除能力。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。