阅读说明：本技术 一种同时鉴别中药组合物中灵芝和首乌藤的方法 (Method for simultaneously identifying lucid ganoderma and vine of multiflower knotweed in traditional Chinese medicine composition ) 是由 郁晓艺 梁淑明 欧阳道福 陈晶 卜闪闪 罗文光 温馨 颜建章 魏毅凡 胡瑞连 于 2018-08-23 设计创作，主要内容包括：本发明属于中药分析技术领域,公开了一种同时鉴定中药组合物中灵芝和首乌藤的方法,所述方法对中药组合物中灵芝和首乌藤采用相同的前处理方法,并选择特定的展开剂体系,使灵芝及首乌藤中的各种成分均能很好地分离,实现了两种药材的同时鉴别。采用不同规格的硅胶薄层板,显示检测结果基本相同,表明本发明的方法具有良好的重现性；各自供试品色谱中,在与阳性对照品色谱对应的位置上,显示相同颜色的斑点,而阴性对照品色谱中均无干扰斑点,表明本发明的方法具有较强的专属性。同时,本发明的方法简化了操作过程,减少了鉴别所需的时间,提高了工作效率,降低了检测成本。(The invention belongs to the technical field of traditional Chinese medicine analysis, and discloses a method for simultaneously identifying lucid ganoderma and vine of multiflower knotweed in a traditional Chinese medicine composition. Silica gel thin layer plates with different specifications are adopted, and the detection results are basically the same, which shows that the method has good reproducibility; in the chromatogram of each test sample, spots with the same color are displayed at the positions corresponding to the chromatograms of the positive reference substances, and no interference spots exist in the chromatograms of the negative reference substances, which shows that the method has stronger specificity. Meanwhile, the method simplifies the operation process, reduces the time required by identification, improves the working efficiency and reduces the detection cost.)

一种同时鉴别中药组合物中灵芝和首乌藤的方法

技术领域

本发明属于中药分析技术领域，具体涉及一种中药组合物中灵芝和首乌藤同时鉴别的方法。

背景技术

中药(即“传统中医”或“传统中医药”)为我国传统中医特有的药物，其有几千年的应用历史，为维系中华民族的繁衍和民众的健康发挥了重要作用。中药通常由多种不同类型的成分组成，而每一个类型的成分又可能含有少则几种、多则十几种、几十种甚至更多的化学成分，因此，为确保中药临床用药的安全性和有效性，保证产品的质量，有必要对各种成分进行检测与分析。

灵芝和首乌藤是中药组合物中比较常见的成分，现有技术中对灵芝及首乌藤的检测分析方法有很多种，如中国期刊文献“过敏康颗粒质量控制方法研究”公开了首乌藤及灵芝的薄层色谱鉴别方法，考虑到两种药材的成分及性质差异比较大，很难在同一条件下同时鉴别，故该方法对首乌藤及灵芝的前处理方式不尽相同，最终选择的展开剂体系也大相径庭，前者选用的展开剂为苯-乙醇体系，后者选用的展开剂为石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸体系，操作十分不方便，特别是当需要大批量检测时，其工作量非常大，工作效率低，因此，有必要研究一种能同时检测中药组合物中灵芝和首乌藤的方法。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有的中药组合物中首乌藤及灵芝的检测方法不同而导致检测工作工作量大、成本高的问题，从而提供一种能同时鉴别中药组合物中灵芝和首乌藤的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种同时鉴定中药组合物中灵芝和首乌藤的方法，包括如下步骤：

(1)阳性对照品溶液及供试品溶液的制备

取灵芝的阳性对照品和首乌藤的阳性对照品，分别加第一溶剂，滤过，滤液蒸干后加第二溶剂，分别作为各自的阳性对照药材溶液；

取中药组合物，加第一溶剂，滤过，滤液蒸干后加第二溶剂，作为供试品溶液；

(2)照薄层色谱试验

吸取上述阳性对照品溶液及供试品溶液，分别点在同一硅胶薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外灯下检视和/或喷以硫酸乙醇溶液并烘干至斑点显色清晰。

进一步地，所述灵芝的阳性对照品选自灵芝对照药材或灵芝提取物中的至少一种；所述首乌藤的阳性对照品选自首乌藤对照药材或首乌藤提取物中的至少一种。

进一步地，步骤(1)所述第一溶剂为甲醇、乙醇、丙醇中的一种或几种；所述第二溶剂为甲醇、乙醇、丙醇中的一种或几种。

进一步地，步骤(2)所述展开剂的体积比为V_环己烷∶V_乙酸乙酯∶V_甲酸＝5∶5∶0.2。

进一步地，所述方法包括如下步骤：

(1)对照药材溶液、提取物溶液、阴性对照品溶液及供试品溶液的制备

取灵芝对照药材，向其中加入其质量10～20倍体积的乙醇，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述灵芝对照药材质量0.5～1.5倍体积的乙醇，作为灵芝对照药材溶液；

取首乌藤对照药材，向其中加入其质量100～120倍体积的乙醇，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述首乌藤对照药材质量2～6倍体积的乙醇，作为首乌藤对照药材溶液；

取灵芝提取物，向其中加入其质量20～40倍体积的乙醇，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述灵芝提取物质量0.5～1.5倍体积的乙醇，作为灵芝提取物溶液；

取首乌藤提取物，向其中加入其质量20～40倍体积的乙醇，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述首乌藤提取物质量0.5～1.5倍体积的乙醇，作为首乌藤提取物溶液；

取不含灵芝提取物的阴性对照品，向其中加入其质量4～8倍体积的乙醇，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述不含灵芝提取物的阴性对照品质量0.1～0.3倍体积的乙醇，作为不含灵芝提取物的阴性对照品溶液；

取不含首乌藤提取物的阴性对照品，向其中加入其质量4～8倍体积的乙醇，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述不含首乌藤提取物的阴性对照品质量0.1～0.3倍体积的乙醇，作为不含首乌藤提取物的阴性对照品溶液；

取中药组合物，向其中加入其质量4～8倍体积的乙醇，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述中药组合物质量0.1～0.3倍体积的乙醇，作为供试品溶液；

所述质量与体积的关系为g/ml；

(2)照薄层色谱试验

吸取上述对照药材溶液、提取物溶液、阴性对照品溶液及供试品溶液各4～6微升，分别点在同一硅胶薄层板上，以体积比为5∶5∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置于366nm紫外灯下检视和/或喷以10％硫酸乙醇溶液烘干至斑点显色清晰。

进一步地，所述方法包括如下步骤：

(1)对照药材溶液、提取物溶液、阴性对照品溶液及供试品溶液的制备

取灵芝对照药材，向其中加入其质量15倍体积的乙醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述灵芝对照药材质量0.5倍体积的乙醇，作为灵芝对照药材溶液；

取首乌藤对照药材，向其中加入其质量120倍体积的乙醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述首乌藤对照药材质量4倍体积的乙醇，作为首乌藤对照药材溶液；

取灵芝提取物，向其中加入其质量30倍体积的乙醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述灵芝提取物质量的体积的乙醇，作为灵芝提取物溶液；

取首乌藤提取物，向其中加入其质量30倍体积的乙醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述首乌藤提取物质量的体积的乙醇，作为首乌藤提取物溶液；

取不含灵芝提取物的阴性对照品，向其中加入其质量6倍体积的乙醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述不含灵芝提取物的阴性对照品质量0.2倍体积的乙醇，作为不含灵芝提取物的阴性对照品溶液；

取不含首乌藤提取物的阴性对照品，向其中加入其质量6倍体积的乙醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述不含首乌藤提取物的阴性对照品质量0.2倍体积的乙醇，作为不含首乌藤提取物的藤阴性对照品溶液；

取中药组合物，向其中加入其质量6倍体积的乙醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入所述中药组合物质量0.2倍体积的乙醇，作为供试品溶液；

所述质量与体积的关系为g/ml；

(2)照薄层色谱试验

吸取上述对照药材溶液、提取物溶液、阴性对照品溶液及供试品溶液各5微升，分别点在同一硅胶薄层板上，以体积比为5∶5∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置于366nm紫外灯下检视和/或喷以10％硫酸乙醇溶液烘干至斑点显色清晰。

进一步地，所述方法包括如下步骤：

(1)对照药材溶液、提取物溶液、阴性对照品溶液及供试品溶液的制备

取灵芝对照药材2g，加入乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入乙醇1mL使溶解，作为灵芝对照药材溶液；

取首乌藤对照药材0.25g，加入乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入乙醇1mL使溶解，作为首乌藤对照药材溶液；

取灵芝提取物1g，加入乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入乙醇1mL使溶解，作为灵芝提取物溶液；

取首乌藤提取物1g，加入乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入乙醇1mL使溶解，作为首乌藤提取物溶液；

取不含灵芝提取物的阴性对照品5g，加入乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入乙醇1mL使溶解，作为不含灵芝提取物的阴性对照品溶液；

取不含首乌藤提取物的阴性对照品5g，加入乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入乙醇1mL使溶解，作为不含首乌藤提取物的阴性对照品溶液；

取中药组合物5g，加入乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干后加入乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；

(2)照薄层色谱试验

吸取上述对照药材溶液、提取物溶液、阴性对照品溶液及供试品溶液各5微升，分别点在同一硅胶薄层板上，以体积比为5∶5∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置于366nm紫外灯下检视和/或喷以10％硫酸乙醇溶液烘干至斑点显色清晰。

本发明中，所述中药组合物的原料包括灵芝提取物和首乌藤提取物。

本发明的技术方案，具有如下优点：

1.本发明提供的同时鉴别中药组合物中灵芝和首乌藤的方法，对中药组合物中灵芝和首乌藤采用相同的前处理方法，并选择特定的展开剂体系，使灵芝及首乌藤中的各种成分均能很好地分离，实现了两种药材的同时鉴别。采用不同规格的硅胶薄层板，显示检测结果基本相同，表明本发明的方法具有良好的重现性；各自供试品色谱中，在与阳性对照品色谱对应的位置上，显示相同颜色的斑点，而阴性对照品色谱中均无干扰斑点，表明本发明的方法具有较强的专属性。同时，本发明的方法简化了操作过程，减少了鉴别所需的时间，提高了工作效率，降低了检测成本。

2.本发明提供的同时鉴别中药组合物中灵芝和首乌藤的方法，为中药组合物各成分的薄层色谱鉴别提供了新思路，有利于中药质量控制标准的提高。

附图说明

为了更清楚地说明本发明

具体实施方式

或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例1的灵芝和首乌藤同时鉴别的薄层色谱图；

图2是本发明实施例2的灵芝和首乌藤同时鉴别的薄层色谱图；

图3是本发明实施例3的灵芝和首乌藤同时鉴别的薄层色谱图。

附图标记说明：

1-不含首乌藤提取物的阴性对照品；2-首乌藤提取物；3-首乌藤对照药材；4-不含灵芝提取物的阴性对照品；5-灵芝提取物；6-灵芝对照药材；7-9供试品(批号分别为：20170204-1、20170204-2、20170204-3)。

具体实施方式

下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。此外，下面所描述的本发明不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。

以下实施例中，中药组合物由完美(中国)有限公司提供；不含首乌藤提取物的阴性对照品和不含灵芝提取物的阴性对照品由完美(中国)有限公司提供；灵芝提取物和首乌藤提取物由广东一方制药有限公司提供；；灵芝对照药材和首乌藤对照药材采购自中国食品药品检定研究院。

以下实施例中，甲醇、乙醇及丙醇均为分析纯，体积浓度≥95％。

实施例1

取中药组合物、不含首乌藤提取物的阴性对照品、不含灵芝的阴性对照品各5g、灵芝提取物1g、首乌藤提取物1g，加乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液水浴蒸干后加乙醇1mL使溶解，分别作为供试品溶液、阴性对照品溶液以及提取物溶液。另取灵芝对照药材2g、首乌藤对照药材约0.25g同法制成对照药材溶液。

照《中华人民共和国药典》2015年版通则0502试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板(20cm×10cm，青岛海浪硅胶干燥剂有限公司)上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比为5∶5∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试液，105℃烘干至显色清晰。结果如图1所示，供试品及提取物色谱在与对照药材色谱相同位置处出现相同颜色的主要斑点，阴性对照品色谱在与对照药材色谱相同位置处未出现主要相同颜色斑点。

实施例2

取中药组合物、不含首乌藤提取物的阴性对照品、不含灵芝的阴性对照品各5g、灵芝提取物1g、首乌藤提取物1g，加乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液水浴蒸干后加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液、阴性对照品溶液以及提取物溶液。另取灵芝对照药材2g、首乌藤对照药材约0.25g同法制成对照药材溶液。

照《中华人民共和国药典》2015年版通则0502试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板(20cm x10cm，德国MACHEREY-NAGEL公司)上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比为5∶5∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试液，105℃烘干至显色清晰。结果如图2所示，供试品及提取物溶液色谱在与对照药材色谱相同位置处出现相同颜色的主要斑点，阴性对照品色谱在与对照药材色谱相同位置处未出现主要相同颜色斑点。

实施例3

取中药组合物、不含首乌藤提取物的阴性对照品不含灵芝的阴性对照品各5g、灵芝提取物1g、首乌藤提取物1g，加乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液水浴蒸干后加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液、阴性对照品溶液以及提取物溶液。另取灵芝对照药材2g、首乌藤对照药材约0.25g同法制成对照药材溶液。

照《中华人民共和国药典》2015年版通则0502试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板(20cm x10cm，德国Merck公司)上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比为5∶5∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试液，105℃烘干至显色清晰。结果如图3所示，供试品及提取物色谱在与对照药材相同位置处出现相同颜色的主要斑点，阴性对照品色谱在与对照药材色谱相同位置处未出现主要相同颜色斑点。

实施例4

取中药组合物、不含首乌藤提取物的阴性对照品、不含灵芝的阴性对照品各5g、灵芝提取物1g、首乌藤提取物1g，加甲醇20mL，超声处理40分钟，滤过，滤液水浴蒸干后加丙醇1.5mL使溶解，分别作为供试品溶液、阴性对照品溶液以及提取物溶液。另取灵芝对照药材2g、首乌藤对照药材约0.25g同法制成对照药材溶液。

照《中华人民共和国药典》2015年版通则0502试验，吸取上述溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板(20cm×10cm，青岛海浪硅胶干燥剂有限公司)上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比为5∶5∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，于366nm紫外光灯下检视。结果显示，供试品及提取物色谱在与对照药材色谱相同位置处出现相同颜色的主要斑点，阴性对照品色谱在与对照药材色谱相同位置处未出现主要相同颜色斑点。

实施例5

取中药组合物、不含首乌藤提取物的阴性对照品、不含灵芝的阴性对照品各5g、灵芝提取物1g、首乌藤提取物1g，加丙醇40mL，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干后加甲醇0.5mL使溶解，分别作为供试品溶液、阴性对照品溶液以及提取物溶液。另取灵芝对照药材2g、首乌藤对照药材约0.25g同法制成对照药材溶液。

照《中华人民共和国药典》2015年版通则0502试验，吸取上述溶液各6μL，分别点于同一硅胶G薄层板(20cm×10cm，青岛海浪硅胶干燥剂有限公司)上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比为5∶5∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，于366nm紫外光灯下检视，后喷以10％硫酸乙醇试液，105℃烘干至显色清晰。结果显示供试品及提取物色谱在与对照药材色谱相同位置处出现相同颜色的主要斑点，阴性对照品色谱在与对照药材色谱相同位置处未出现主要相同颜色斑点，且366nm紫外光灯检视的结果与喷以10％硫酸乙醇试剂并在105℃下烘干显示的结果一致。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举，而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。