阅读说明：本技术 白屈菜红碱在抑制多重耐药粘质沙雷菌生长中的应用 (Application of chelerythrine in inhibiting growth of multiple drug-resistant serratia marcescens ) 是由 李永东 倪红霞 许国章 焦素黎 刘昱慧 于 2019-12-20 设计创作，主要内容包括：本发明公开了白屈菜红碱在抑制多重耐药粘质沙雷菌生长中的应用,根据白屈菜红碱对多重耐药粘质沙雷菌具有较好的体外杀灭作用,能够抑制多重耐药粘质沙雷菌的生长,且最低杀菌浓度为30～250μg/mL,最小抑菌浓度为15～125μg/mL,本发明提出了白屈菜红碱对多重耐药粘质沙雷菌的抑制作用,在医药等领域具有广泛的应用价值。(The invention discloses an application of chelerythrine in inhibiting the growth of multiple drug-resistant serratia marcescens, and provides an inhibition effect of chelerythrine on multiple drug-resistant serratia marcescens according to the fact that the chelerythrine has a good in-vitro killing effect on the multiple drug-resistant serratia marcescens and can inhibit the growth of the multiple drug-resistant serratia marcescens, the minimum sterilization concentration is 30-250 mu g/mL, and the minimum inhibition concentration is 15-125 mu g/mL.)

白屈菜红碱在抑制多重耐药粘质沙雷菌生长中的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及白屈菜红碱在抑制多重耐药粘质沙雷菌生长中的应用。

背景技术

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)，即粘质沙雷菌，是一种肠杆菌科沙雷菌属革兰氏阴性细菌，可引起多种感染。粘质沙雷氏菌目前已知可引起眼、肺、泌尿道和血流感染。最近的报告显示，2.5％-7.7％的导管相关感染中存在这种病原体。近年来耐碳青霉烯类粘质沙雷菌的耐药率和临床分离率在逐步上升，这给医院感染防控和临床抗感染治疗工作带来了极大的挑战。

白屈菜红碱是从植物，如马钱子、麦地黄、加拿大红三尖杉等中提取的一种天然苯并菲啶类生物碱。白屈菜红碱具有广泛的生物活性，在抗肿瘤，抗炎，抗糖尿病中起着重要的作用。已有研究表明，白屈菜红碱具有抗菌活性。有文献报道了白屈菜红碱对龙胆枯斑病菌菌丝、玉米小斑病菌、核桃叶枯病菌、番茄枯萎病菌、南瓜枯萎病菌、新月弯孢霉菌丝的生长有较好的抑制作用。文献中还报道了白屈菜红碱通过抑制变形链球菌的细胞***而抑制其生长，并对荚膜、细胞壁、细胞膜等结构产生显著影响。中国专利报道了“白屈菜红碱在治疗禽耐药性大肠杆菌病上的应用”(CN106138054A)，其中，大肠杆菌为肠杆菌科埃希氏菌属。目前，未有文献报道白屈菜红碱对多重耐药粘质沙雷菌具有抑菌作用。

发明内容

本发明针对目前临床医学面临的耐药难题，目的在于提供白屈菜红碱在抑制多重耐药粘质沙雷菌生长中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

利用微量二倍稀释法确定粘质沙雷菌对抗生素的耐药性，然后确定了白屈菜红碱对粘质沙雷菌的最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果表明：白屈菜红碱对多重耐药粘质沙雷菌具有较好的抑菌作用，可以用于抑制多重耐药粘质沙雷菌的生长。

优选的，所述多重耐药粘质沙雷菌为耐氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑林、头孢替坦、头孢曲松、头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦、复方新诺明、头孢吡肟、氨曲南、庆大霉素、厄他培南、亚胺培南、妥布霉素、阿米卡星、环丙沙星、呋喃妥因、左氧氟沙星中多种抗生素的人源粘质沙雷菌。

优选的，所述多重耐药粘质沙雷菌选自耐氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑林、头孢替坦、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、厄他培南、氨曲南、妥布霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、哌拉西林/他唑巴坦及呋喃妥因的人源粘质沙雷菌。

优选的，所述白屈菜红碱的最低杀菌浓度为30～250μg/mL，最小抑菌浓度为15～125μg/mL。

本发明的有益效果体现在：

本发明从现存的药用植物资源库入手，挖掘潜在的耐药菌抑制剂，基于白屈菜红碱对多重耐药粘质沙雷菌的作用的研究，发现非抗生素类化合物白屈菜红碱可以有效抑制多重耐药粘质沙雷菌的生长，为多重耐药粘质沙雷菌抑制剂的研究开发和应用提供新的思路和来源，在医药等领域具有广泛的应用价值。

进一步的，本发明明确了白屈菜红碱对多重耐药粘质沙雷菌的抑制作用，将其作为抗生素替代品，可有效缓解或解决多重耐药粘质沙雷菌的耐药及感染问题，降低病死率。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。所述实施例仅用于解释本发明，并非对本发明保护范围的限制。

1、粘质沙雷菌的药敏实验

本发明以多株人源粘质沙雷菌(菌株样本取自宁波妇儿医院)为出发菌株，选用氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑林、头孢替坦、头孢曲松、头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦、复方新诺明、头孢吡肟、氨曲南、庆大霉素、厄他培南、亚胺培南、妥布霉素、阿米卡星、环丙沙星、呋喃妥因、左氧氟沙星18种常用抗生素进行试验。

挑取培养18～24h的纯菌落均匀溶解于2～5mL无菌生理盐水中，调节其浊度与0.5麦氏比浊管等浊。利用试管二倍稀释法将抗生素、菌液及TSB液体培养基加入96孔培养板中过夜培养，利用酶标仪测定抗生素对粘质沙雷菌的最小抑菌浓度(MIC)。不同浓度的药液组别均为三个平行，确保实验数据的可信度。抑菌结果根据美国临床试验室国家标准化管理委员会(CLSl2017)标准判定，判定标准见表1。实验结果见表2，结果显示，1#粘质沙雷菌对16种抗生素耐药(2种中介)，因此将其作为下一步实验的研究对象。

表1.美国临床试验室国家标准化管理委员会(CLSl2017)标准判定结果

表2.人源粘质沙雷菌的药敏试验MIC结果

2、白屈菜红碱对多重耐药菌株的抑制作用

为了充分考虑用药安全，本发明以白屈菜红碱这一单一活性成分为研究对象，以标准菌株(ATCC-14041，对头孢氨苄、卡那霉素、头孢菌素、庆大霉素、新霉素、四环素等抗生素敏感)作为参考，进行耐药性抑制作用的研究。挑取培养18～24h的纯菌落均匀溶解于2～5mL TSB液体培养基中，调节其浊度与0.5麦氏比浊管等浊，并用酶标仪测定其OD₆₀₀值。用二甲基亚砜配制浓度为1000μg/mL的白屈菜红碱作为药液，利用试管二倍稀释法将药液、菌液及TSB液体培养基加入96孔培养板中过夜培养，不同浓度的药液组别均为三个平行，确保实验数据的可信度。

利用酶标仪测定白屈菜红碱对多重耐药粘质沙雷菌的最小抑菌浓度(MIC)。并将MIC浓度的前一个药物稀释浓度下的培养液转接至无菌的TSA固体培养基中继续培养，观察有无单菌落的生成，如果无，则此浓度为白屈菜红碱对多重耐药粘质沙雷菌的最低杀菌浓度(MBC)，实验结果见表3。

表3.白屈菜红碱对多重耐药粘质沙雷菌的抑制结果

由表3可知，白屈菜红碱对耐氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑林、头孢替坦、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、厄他培南、氨曲南、妥布霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、哌拉西林/他唑巴坦及呋喃妥因的多重耐药粘质沙雷菌抑制作用较好，其MIC为125μg/mL，MBC为250μg/mL。结果表明白屈菜红碱不仅对粘质沙雷菌参考菌株ATCC-14041有抑菌作用，对本发明中的多重耐药粘质沙雷菌(例如，1#菌株)也有抑菌作用。

根据以上实验结果，结合中草药来源广泛、不良反应少及不易产生耐药性等特点，可通过获得活性单品成分白屈菜红碱，直接针对临床主要的多重耐药粘质沙雷菌发挥抑制作用，能够有效缓解或解决多重耐药粘质沙雷菌的感染问题，降低病死率，为研究临床分离的粘质沙雷菌的抑菌剂提供科学依据，为开发抑制多重耐药粘质沙雷菌的药物和抗生素替代品提供新思路和来源。