阅读说明：本技术 一种精肝颗粒的质量控制方法 (Quality control method of Jinggan granules ) 是由 方燕秋 龙宇 卢璐 陈雄聚 于 2019-11-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及中药制剂质量标准领域,具体涉及一种精肝颗粒的质量控制方法,所述精肝颗粒的质量检测方法为：1)虎杖的鉴别；2)丹参的鉴别；3)大黄素、大黄酚的含量检测。本发明的质量控制方法能使精肝颗粒的活性成分得到有效控制,且具有方法稳定可靠、专一性强、精密度高、重现性好、回收率高和测量结果准确的特点,达到保证精肝颗粒质量的目的,从而保证其疗效的发挥,具有良好的临床应用前景。(The invention relates to the field of quality standards of traditional Chinese medicine preparations, in particular to a quality control method of liver-cleaning granules, which comprises the following steps: 1) identifying giant knotweed; 2) identifying the salvia miltiorrhiza; 3) detecting the content of emodin and chrysophanol. The quality control method can effectively control the active ingredients of the liver-essence granules, has the characteristics of stability, reliability, strong specificity, high precision, good reproducibility, high recovery rate and accurate measurement result, achieves the aim of ensuring the quality of the liver-essence granules, ensures the exertion of the curative effect and has good clinical application prospect.)

一种精肝颗粒的质量控制方法

技术领域

本发明涉及中药制剂质量标准领域，具体涉及一种精肝颗粒的质量控制方法。

背景技术

精肝颗粒是一种针对肝炎症状辅助治疗的中药制剂，具有清热利湿，凉血解毒的功效，适用于肝胆湿热引起的身目俱黄，色泽鲜明，尿黄，胸脘痞满或有胁肋疼痛，纳呆，口干口苦，便秘等症的辅助治疗。

而目前对精肝颗粒的质量标准还不够完善，且控制方法稳定差，专一性若，局限性很大，难以准确控制精肝颗粒的质量，导致其在疗效的发挥以及临床应用前景方面受到了限制。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种精肝颗粒的质量控制方法，该方法能使精肝颗粒的活性成分得到有效控制，且方法稳定可靠，专一性强，能达到保证精肝颗粒质量的目的，从而保证其疗效的发挥，具有良好的临床应用前景。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种精肝颗粒的质量控制方法，精肝颗粒的处方为：茵陈150g、虎杖150g、紫草100g、大黄100g、黄柏100g、赤芍100g、丹参100g、郁金100g、甘草60g。

所述精肝颗粒的质量检测方法为：

1)虎杖的鉴别：取精肝颗粒4g，研细，加25-35ml水，以45-60Hz的频率超声处理25-34min，滤过，滤液用三氯甲烷萃取2次，每次8-12ml，弃去三氯甲烷溶液，再用乙酸乙酯萃取2次，每次8-12ml，将2次萃取用的乙酸乙酯溶液合并并蒸干，加0.5-1.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液；另外取虎杖苷加甲醇，制成0.8-1.2mg/ml的虎杖苷溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取供试品溶液和对照品溶液各0.8-1.2μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，利用第一展开剂使待测液展开，展开至距离为8～15cm时取出，晾干，置波长为254±2nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

2)丹参的鉴别：取精肝颗粒10g，研细，加15-25ml甲醇，以45-60Hz的频率超声处理25-35min，滤过，将滤液蒸干，加15-25ml水溶解，用盐酸调节pH至2-4，用乙酸乙酯萃取3次，每次15-25ml，将3次萃取用的乙酸乙酯溶液合并并蒸干，加0.5-1.5ml无水乙醇溶解，作为供试品溶液；另外取丹酚酸B，加甲醇制成1-2mg/ml的丹酚酸B溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2-4μl和对照品溶液1-3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，利用第二展开剂使待测液展开，展开至距离为8～15cm时取出，晾干，置波长为254±2nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

3)大黄素、大黄酚的含量检测：

(1)液相色谱条件：测定大黄素、大黄酚的色谱条件为用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；以甲醇-浓度为0.08-0.12％磷酸按体积比为90∶10作为流动相；检测波长为254±2nm；流速为1.0ml/min；柱温：25℃；

理论塔板数确定的依据：在上述测试条件下，在系统适用性试验中规定理论塔板数为2000-5000；

(2)对照品溶液的制备：精密称取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇溶解，制成每1ml含大黄素5.46μg、大黄酚0.992μg的混合溶液，即得，避光保存；

(3)供试品溶液的制备：取精肝颗粒1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇45-55ml，称定重量，加热回流25-35min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液4.8-5.2ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去乙醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理4-6min，再加氯仿10ml，加热回流55-65min，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取2次，每次9-11ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇8-12ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；更为优选的，①仪器和试药：高效液相色谱仪为Waters515 HPLC；色谱柱为Hypersil C18(5μm，250×4.6mm)Waters2487双波长紫外检测器；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；②对照品纯度及来源：大黄素、大黄酚均为中国药品生物制品检定所提供，为含量测定用，批号分别为：110756-201110、110796-201310；

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

优选的，步骤1)中，展开时所用第一展开剂为三氯甲烷-丙酮-甲酸-水按照体积比为3-5:4:0.4-0.6:0.1-0.3组成的混合物。

优选的，步骤2)中，展开时所用第二展开剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸按照体积比为1.8-2.2:5.8-6.2:0.8-1.2组成的混合物。

本发明的有益效果在于：本发明的质量控制方法能使精肝颗粒的活性成分得到有效控制，且具有方法稳定可靠、专一性强、精密度高、重现性好、回收率高和测量结果准确的特点，达到保证精肝颗粒质量的目的，从而保证其疗效的发挥，具有良好的临床应用前景。

附图说明

图1为精肝颗粒虎杖鉴别的薄层色谱图；其中，1为缺虎杖精肝颗粒、2为精肝颗粒、3为虎杖对照品、4为精肝颗粒、5为精肝颗粒；

图2为精肝颗粒鉴别的丹参薄层色谱图；其中，1为缺丹参精肝颗粒、2为精肝颗粒、3为丹参对照品、4为精肝颗粒、5为精肝颗粒；

图3为大黄素对照品HPLC图谱；

图4为大黄酚对照品HPLC图谱；

图5为供试品HPLC图谱；

图6为阴性样品HPLC图谱；

图7为大黄素标准曲线；

图8为大黄酚标准曲线。

具体实施方式

为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例及附图1～8对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。

实施例

精肝颗粒的处方为：茵陈150g、虎杖150g、紫草100g、大黄100g、黄柏100g、赤芍100g、丹参100g、郁金100g、甘草60g。

一种精肝颗粒的质量控制方法，所述精肝颗粒的质量检测方法为：

1)虎杖的鉴别：取精肝颗粒4g，研细，加30ml水，以50Hz的频率超声处理30min，滤过，滤液用三氯甲烷萃取2次，每次10ml，弃去三氯甲烷溶液，再用乙酸乙酯萃取2次，每次10ml，将2次萃取用的乙酸乙酯溶液合并并蒸干，加1.0ml甲醇溶解，作为供试品溶液；另外取虎杖苷加甲醇，制成1.0mg/ml的虎杖苷溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取供试品溶液和对照品溶液各1.0μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，利用以三氯甲烷-丙酮-甲酸-水按照体积比为4:4:0.5:0.2组成的混合展开剂使待测液展开，展开至距离为10cm时取出，晾干，置波长为254nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

2)丹参的鉴别：取精肝颗粒10g，研细，加20ml甲醇，以50Hz的频率超声处理30min，滤过，将滤液蒸干，加20ml水溶解，用盐酸调节pH至3，用乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，将3次萃取用的乙酸乙酯溶液合并并蒸干，加1.0ml无水乙醇溶解，作为供试品溶液；另外取丹酚酸B，加甲醇制成1.5mg/ml的丹酚酸B溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液4μl和对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，利用以甲苯-乙酸乙酯-甲酸按照体积比为2:6:1.0组成的混合展开剂使待测液展开，展开至距离为10cm时取出，晾干，置波长为254nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

3)大黄素、大黄酚的含量检测：

(1)仪器和试药：高效液相色谱仪为Waters515 HPLC；色谱柱为Hypersil C18(5μm，250×4.6mm)Waters2487双波长紫外检测器；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；

(2)对照品纯度及来源：大黄素、大黄酚均为中国药品生物制品检定所提供，为含量测定用，批号分别为：110756-201110、110796-201310；

(3)液相色谱条件：测定大黄素、大黄酚的色谱条件为用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；以甲醇-浓度为0.08-0.12％磷酸按体积比为90∶10作为流动相；检测波长为254nm；流速为1.0ml/min；柱温：25℃；理论塔板数确定的依据：在上述测试条件下，在系统适用性试验中规定理论塔板数为2000；

(4)对照品溶液的制备：精密称取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇溶解，制成每1ml含大黄素5.46μg、大黄酚0.992μg的混合溶液，即得，避光保存；

(5)供试品溶液的制备：取精肝颗粒1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去乙醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5min，再加氯仿10ml，加热回流55-65min，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取2次，每次10ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

(6)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

(7)供试品溶液提取方法的比较：取本品细粉约2g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，分别超声震荡和加热回流提取30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，精密量取续滤液5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去乙醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5分钟，再加氯仿10ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取2次，每次约10ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，进样，比较两种提取方法的提取效果，结果见表1；

表1提取方法的比较

采用加热回流法提取大黄素、大黄酚的峰面积均较超声震荡提取法稍大，而且回流提取的甲醇溶液易过滤，所以采用加甲醇25ml，加热回流提取30分钟的方法。

(8)线性关系的考察：分别精密吸取浓度为4.5μg/ml的对照品溶液1、3、5、7、9μl，以及浓度为0.156mg/ml的对照品溶液1.5、2.0μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品进样量(ng)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，测定结果如表2；

表2线性考察结果

回归方程为Y＝0.0601X-0.1125相关系数r＝0.9999，表明大黄素在进样量13.65ng-109.2ng范围内呈良好的线性关系；大黄酚在进样量2.48ng-19.84ng范围内呈良好的线性关系，见图6、7；

(9)空白试验：制备不含大黄、虎杖的阴性颗粒，同供试品溶液的制备方法制备阴性溶液，精密吸取10μl进样，结果在要测定成分位置范围，无任何吸收，说明阴性溶液无干扰，见图7。

(10)稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液10μl，每隔一定时间测定其峰面积，试验结果说明，供试品溶液在24小时内含量稳定，见表3；

表3稳定性试验结

(11)精密度试验：精密吸取同一对照品溶液5μl，重复进样5次，结果表明仪器精密度良好；

表4精密度试验结果

(12)回收率试验：采用加样回收法，取精肝颗粒，分别精密加入大黄素、大黄酚对照品溶液，照含量测定法测定含量，计算回收率；

表5大黄素回收率测定结果

表6大黄酚回收率测定结果

(13)供试品含量测定：照前述方法制备供试品溶液，对十批制剂进行含量测定，结果见表7；

表7含量测定结果

(14)含量限度标准的制定：根据上述10批数据测定结果，大黄素和大黄酚含量之和平均值为3.98mg/袋，按照平均含量80％计算，应为3.18mg/袋；大黄素含量之各平均值为3.09mg/袋，按照平均含量80％计算，应为2.47mg/袋；由于产品含量受药材及批量等因素影响较大，暂定精肝颗粒每袋含虎杖、大黄以大黄素和大黄酚总计不得少于3.0mg/袋，含大黄素计不得少于2.40mg/袋。

上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。