阅读说明：本技术 一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒 (Acute toxicity test method based on multiple microorganisms and kit thereof ) 是由 唐小标 于 2018-07-13 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种基于多种微生物的急性毒性试验方法,包括：从国家环境微生物专业菌种库中获取30-40个不同种属的菌株为材料,备用；然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2,3,5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了10-15株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。本发明选取最合适的菌种进行培养成受试菌,然后与多种微生物反应,最终快速的测试出微生物的毒性,相对灵敏度更高,效果更好,速度更快。本发明还公开了一种基于多种微生物的急性毒性试验的试剂盒。(The invention discloses an acute toxicity test method based on multiple microorganisms, which comprises the following steps: acquiring 30-40 strains of different species from a national environmental microorganism professional strain library as materials for later use; then 10-15 strains of bacteria and 1 strain of yeast are screened and put into a vessel to be cultured as test bacteria according to the dose-effect relationship of the reaction of each strain and the toxic compound, the phylogenetic diversity and the principle of response stability to 2, 3, 5-triphenyltetrazolium; and then detecting the activity change of the dehydrogenase cultured in the bacteria and the yeast by using a dehydrogenase activity method to obtain a trained dehydrogenase activity, and finally evaluating the toxicity of the sample to be detected. The invention selects the most suitable strains to culture into the tested strains, then reacts with a plurality of microorganisms, finally tests the toxicity of the microorganisms rapidly, and has higher relative sensitivity, better effect and higher speed. The invention also discloses a kit for acute toxicity test based on various microorganisms.)

一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒

技术领域

本发明涉及一种对急性毒性的测试及其试剂盒的技术领域，尤其是一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒。

背景技术

微生物包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，与人类关系密切。涵盖了有益跟有害的众多种类，广泛涉及食品、医药、工农业、环保等诸多领域。在中国大陆地区的教科书中，均将微生物划分为以下8大类：细菌、病毒、真菌、放线菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体。微生物试验相对于其他生物试验方法，在毒性检测中具有不可比拟的优势。微生物发展时间短，可以大大缩短试验时间；操作容量小而受试生物量大，能够反映整个群体的染毒效应，而非个别效应；微生物适应力强，能用于各种灵敏度要求不同的环境样品的测定；没有道德上的争议存在。目前用于水质检测的微生物检测法主要有以下几种：生物发光法、生长抑制法、呼吸计量法、酶活法及硝化速率法等等。但是目前的方法只能对单一微生物进行检测，导致检测效率低，时间长。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述现有技术的不足而提供一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒。

为了实现上述目的，本发明所设计的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，具体包括以下步骤：

步骤1、从国家环境微生物专业菌种库中获取30-40个不同种属的菌株为材料，备用；

步骤2、然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了10-15株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；

步骤3、然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。

进一步，在步骤2中的用于培养受试菌的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。

进一步，在步骤1中，从国家环境微生物专业菌种库中获取35不同种属的菌株为材料；备用。

进一步，在步骤2中。然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了12株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；其中所述的12株细菌和1株酵母菌的选择方式是选择每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系差距按顺序排列、系统发育优良情况按顺序排列、对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性差异值从大到小进行排列，最终选取前12位的细菌和1株酵母菌。

本发明还还公开了一种基于多种微生物的急性毒性试验的试剂盒，包括受试菌株、培养受试菌株的培养液、培养受试菌株的器皿和2，3，5-三苯基四氮唑，其特征在于，还包括壳体、显示器和控制器，在壳体内设有多个检测通道和对照通道，每一个检测通道和对照通道内均设有一个观察窗口，在每一个检测通道内设有光电检测装置和探测器，所述光电检测装置、探测器和显示器均与控制器连接。

进一步，所述培养受试菌株的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。

本发明得到的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒，本发明选取最合适的菌种进行培养成受试菌，然后与多种微生物反应，最终快速的测试出微生物的毒性，相对灵敏度更高，效果更好，速度更快。

附图说明：

图1是实施例1中一种基于多种微生物的急性毒性试验的试剂盒的结构示意图。

附图标记中：1.壳体；2.显示器；3.控制器；4.检测通道；5.对照通道；6.观察窗口；7.光电检测装置；8.探测器。

具体实施方式

下面结合实施例对发明创造作进一步说明。

实施例1：

如图1所示，本实施例提供的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，具体包括以下步骤：

步骤1、从国家环境微生物专业菌种库中获取30-40个不同种属的菌株为材料，备用；

步骤2、然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了10-15株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；

步骤3、然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。

进一步，在步骤2中的用于培养受试菌的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。

进一步，在步骤1中，从国家环境微生物专业菌种库中获取35不同种属的菌株为材料；备用。

进一步，在步骤2中。然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了12株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；其中所述的12株细菌和1株酵母菌的选择方式是选择每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系差距按顺序排列、系统发育优良情况按顺序排列、对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性差异值从大到小进行排列，最终选取前12位的细菌和1株酵母菌。

本实施例还还公开了一种基于多种微生物的急性毒性试验的试剂盒，包括受试菌株、培养受试菌株的培养液、培养受试菌株的器皿和2，3，5-三苯基四氮唑，其特征在于，还包括壳体1、显示器2和控制器3，在壳体1内设有多个检测通道4和对照通道5，每一个检测通道4和对照通道5内均设有一个观察窗口6，在每一个检测通道4内设有光电检测装置7和探测器8，所述光电检测装置7、探测器8和显示器2均与控制器3连接。

进一步，所述培养受试菌株的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。

本发明选取最合适的菌种进行培养成受试菌，然后与多种微生物反应，最终快速的测试出微生物的毒性，相对灵敏度更高，效果更好，速度更快。

实施例2：

本实施例提供的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，具体包括以下步骤：

步骤1、从国家环境微生物专业菌种库中获取30个不同种属的菌株为材料，备用；

步骤2、然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了10株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；

步骤3、然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。

进一步，在步骤2中的用于培养受试菌的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。

进一步，在步骤1中，从国家环境微生物专业菌种库中获取35不同种属的菌株为材料；备用。

其中所述的10株细菌和1株酵母菌的选择方式是选择每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系差距按顺序排列、系统发育优良情况按顺序排列、对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性差异值从大到小进行排列，最终选取前10位的细菌和1株酵母菌。

实施例3：

本实施例提供的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，具体包括以下步骤：

步骤1、从国家环境微生物专业菌种库中获取40个不同种属的菌株为材料，备用；

步骤2、然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了15株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；

步骤3、然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。

进一步，在步骤2中的用于培养受试菌的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。

其中所述的15株细菌和1株酵母菌的选择方式是选择每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系差距按顺序排列、系统发育优良情况按顺序排列、对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性差异值从大到小进行排列，最终选取前15位的细菌和1株酵母菌。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点，对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。