阅读说明：本技术 表没食子儿茶素没食子酸酯在制备治疗血管疾病药物中的用途 (Application of epigallocatechin gallate in preparing medicine for treating vascular diseases ) 是由 朱依谆 刘新华 龙芬 于瀛 于 2018-07-19 设计创作，主要内容包括：本发明属化合物药物用途技术领域,涉及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在制备治疗血管内膜增生相关的血管疾病药物中的用途。本发明通过药理实验及体外与体内实验,建立小鼠颈动脉结扎内膜增生模型和PDGF-BB诱导VSMCs的体外细胞增殖与迁移模型,结果表明EGCG通过降低血管损伤后内膜增生的厚度,抑制血管组织细胞增殖相关蛋白的表达发挥对血管重构的治疗作用,所述EGCG通过抑制PDGF-BB诱导的大鼠原代平滑肌细胞增殖和迁移水平,降低VSMCs细胞增殖和迁移相关蛋白的表达对血管重构过程进行调控；进一步可用于制备防治血管内膜增生的药物。(The invention belongs to the technical field of compound medicine application, and relates to application of epigallocatechin gallate (EGCG) in preparation of a medicine for treating vascular intimal hyperplasia-related vascular diseases, wherein a mouse carotid artery ligation intimal hyperplasia model and a PDGF-BB induction VSMCs in-vitro cell proliferation and migration model are established through pharmacological experiments and in-vitro and in-vivo experiments, and results show that EGCG can be used for regulating and controlling a vascular remodeling process by reducing the intimal hyperplasia thickness after vascular injury and inhibiting the expression of vascular tissue cell proliferation-related proteins through inhibiting PDGF-BB induction primary rat smooth muscle cell proliferation and migration level and reducing the expression of VSMCs cell proliferation and migration-related proteins, and steps can be used for preparing the medicine for preventing and treating vascular intimal hyperplasia.)

表没食子儿茶素没食子酸酯在制备治疗血管疾病药物中的 用途

技术领域

本发明属化合物药物用途技术领域，涉及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在制药中的新用途，具体涉及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在制备治疗血管内膜增生相关的血管疾病药物中的用途。

背景技术

现有技术公开了血管重构是动脉粥样硬化、血管移植性动脉病、血管成形术、高血压等多种疾病的共同病理基础。研究显示，血管重构过程会发生一系列的生理变化，如，血管壁细胞肥大、大量增殖、迁移能力增强，细胞外基质的产生及降解等，其中，平滑肌细胞(VSMCs)的增殖与迁移是其中最为主要的病理过程。目前，新生内膜增生与血管重塑是临床上血管再狭窄及管腔治疗失败的主要原因，因此，如何防治血管内膜增生是业内亟待解决的难题。

EGCG，即表没食子儿茶素没食子酸酯，是绿茶茶多酚的主要组成成分；有研究报道了EGCG具有显著的抗肿瘤作用，有望成为一种天然的抗肿瘤药物。还有研究报道了EGCG在心血管疾病方面也显示其参与了其中某些过程，如在降血脂，改善低密度脂蛋白，防止动脉粥样硬化，减轻心脏毒性等过程中，但迄今尚未见其对内膜增生性血管重构治疗作用的有关报道。

基于现有技术的基础，本申请的发明人拟提供表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在制药中的新用途，具体涉及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在制备治疗血管内膜增生相关的血管疾病药物中的用途。

发明内容

本发明的目的是基于现有技术的基础，提供表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在制药中的新用途，具体涉及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在制备治疗血管内膜增生相关的血管疾病药物中的用途。

本发明所述的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)其分子式为：C22H18011，本发明通过药理实验及体外与体内实验显示，EGCG参与细胞的增殖和血管重构过程，具有防治血管损伤后内膜增生作用，可进一步制备防治血管内膜增生的药物

本发明采用C57BL/6J小鼠颈动脉结扎损伤模型，HE染色法检测EGCG对血管内膜增生厚度的影响；结果显示EGCG显著降低内膜增生厚度；通过体外建立血小板源性生长因子(PDGF-BB)诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞(VSMCs)的细胞增殖与迁移模型，检测EGCG对细胞增殖和迁移活力的影响，Edu法测定使用该化合物时细胞增殖水平的变化，结果表明，EGCG能显著抑制细胞增殖；Transwell法检测结果显示，其能显著抑制PDGF-BB诱导的细胞迁移；此外，EGCG能抑制细胞增殖与迁移相关蛋白Cyclin D1，CyclinE，PCNA与MMP9的表达水平；实验证明，所述化合物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对原代血管平滑肌细胞的增殖迁移过程产生抑制，并具有治疗血管内膜增生的作用。

本发明所述表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)可用于制备治疗血管内膜增生相关的血管疾病药物。

附图说明

图1：EGCG对血管内膜增生厚度的影响，

其中，Sham：假手术组；Injury：颈动脉结扎损伤组；EGCG 5mg：颈动脉结扎损伤+EGCG给药组，5mg/kg/day；EGCG 10mg：颈动脉结扎损伤+EGCG给药组，10mg/kg/day；EGCG20mg：颈动脉结扎损伤+EGCG给药组，20mg/kg/day。

图2：EGCG对PDGF-BB诱导的VSMCs细胞增殖水平的影响，

其中，Control：正常对照组，PDGF：模型组，PDGF+EGCG：EGCG，30μM，^：模型组与正常对照组相比，p＜0.05；*：给予EGCG组与模型组相比，p＜0.05。

图3：EGCG对PDGF-BB诱导的VSMCs细胞迁移水平的影响，

其中，Control：正常对照组，PDGF：模型组，PDGF+EGCG：EGCG，30μM，^：模型组与正常对照组相比，p＜O.05；*：给予EGCG组与模型组相比，p＜O.05。

图4：EGCG对PDGF-BB诱导的VSMCs细胞增殖迁移相关蛋白表达水平的影响，

其中，Control：正常对照组，PDGF：模型组，PDGF+EGCG：EGCG，30μM，^：模型组与正常对照组相比，p＜O.05；*：给予EGCG组与模型组相比，p＜O.05。

具体实施方式

实施例1 EGCG降低血管内膜增生厚度，抑制血管组织中细胞增殖相关蛋白的表达实验

体重21-24g雄性C57BL/6J小鼠，1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后仰卧固定，开颈部正中皮肤，切口长约2cm。钝性分离颈部肌肉，暴露左侧颈总动脉，在颈外动脉与颈内动脉“Y形”分叉处以8-0号丝线完全结扎阻断血流，无菌生理盐水清洁后缝合颈部皮肤，待小鼠清醒后给予水和标准饲料分笼饲养；假手术组除不使用丝线结扎，其他操作与模型组相同；EGCG以生理盐水溶解，将小鼠随机分为假手术组(Sham，生理盐水，ip.n＝5)，模型组(Injury，生理盐水，ip.n＝1O)，模型+EGCG组(Injury+EGCG，5mg/kg/day，n＝5)，模型+EGCG组(Injury+EGCG，10mg/kg/day，n＝5)，模型+EGCG组(Injury+EGCG，20mg/kg/day，n＝5)；连续给药28天后，取颈总动脉上自结扎位点以下长度约O.5cm的血管组织，假手术组取相同位置和长度的血管；4％多聚甲醛固定，包埋做石蜡切片。HE染色观察内膜增生厚度；

结果显示，与模型组相比，EGCG组可使内膜增生厚度显著降低。

实施例2 EGCG抑制PDGF-BB诱导的VSMCs细胞增殖水平实验

大鼠原代平滑肌细胞培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃，5％CO2孵箱中培养，当细胞汇合度达80-90％时传代；细胞种24孔板里的小圆片，调整密度使汇合度在30％左右，设置正常对照组(Control，无药物干预，不加PDGF-BB)，模型组(Model，无药物干预，20ng/ml PDGF-BB刺激24h)，EGCG组(EGCG，30μM，提前4h预加后以PDGF-BB刺激)；Edu是一种胸腺嘧啶核苷类似物，在细胞增殖时能够***正在复制的DNA分子中，基于EdU与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析，可以有效地检测处于S期的细胞百分数；。实验结果表明，EGCG能显著抑制PDGF-BB诱导的原代平滑肌细胞增殖。

实施例3 EGCG抑制PDGF-BB诱导的VSMCs细胞迁移水平实验

细胞增殖过程伴随着细胞迁移能力的增强，二者共同促进血管内膜增生过程的发生，用Transwell法检测在PDGF-BB诱导下细胞迁移水平的变化，结果显示，EGCG能显著抑制原代平滑肌细胞的迁移。

实施例4 EGCG抑制PDGF-BB诱导的VSMCs细胞增殖相关蛋白的表达

细胞种6孔板，各试验对照组以PDGF-BB诱导24h后裂解细胞收取蛋白；Western-Blotting法检测细胞增殖迁移相关蛋白Cyclin D1，CyclinE，PCNA，MMP9，结果显示，EGCG能明显降低细胞增殖迁移相关蛋白的表达水平。