二冬汤组方中麦冬成份的薄层色谱鉴别方法
阅读说明：本技术 二冬汤组方中麦冬成份的薄层色谱鉴别方法 (Thin-layer chromatography identification method for radix ophiopogonis component in Erdong decoction formula ) 是由 代云桃 黄正军 肖作武 于 2019-10-23 设计创作，主要内容包括：本发明二冬汤组方中麦冬成分的薄层色谱鉴别方法,是以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂,利用薄层色谱试验法而建立的一种鉴别方法,本发明不仅适合于二冬汤中麦冬成分的鉴别,也适合于含麦冬组分的任何复方口服制剂或麦冬饮片的鉴别,本发明的鉴别方法准确率高,专属性强,使用范围广,特别适合于含麦冬的复方口服制剂中麦冬成分的鉴别方法。(The invention relates to a thin-layer chromatography identification method of an ophiopogon root component in a Erdong decoction formula, which is an identification method established by using a thin-layer chromatography test method by taking a lower-layer solution of trichloromethane-methanol-water as a developing agent.)
技术领域
本发明属中药材鉴别技术领域，具体涉及二冬汤组方中麦冬成份的薄层色谱鉴别方法。
背景技术
二冬汤，中医方剂名，出自《医学心悟》卷三。具有养阴清热，生津止渴之功效。主治上消，渴而多饮；肺热咳嗽，痰少等症。症见咳嗽痰少、口渴多饮、舌红、脉细数。临床上常用于治疗糖尿病、百日咳、肺结核、慢性支气管炎、阴虚咳嗽等。该药是由天冬(去心)，麦冬(去心)，花粉、黄芩、知母、荷叶、甘草、人参组成。方中麦冬、天冬、花粉为君药，具有养阴清肺，生津润燥之功效；黄芩、知母、荷叶为臣药，具有清除肺热之功效；人参为；佐药，甘草为使药，具有补益肺气之功效。全方扶正祛邪并用，共奏养阴清热、生津止渴之效。
组方中麦冬(学名：Ophiopogon japonicus(Linn.f.)Ker-Gawl.)属百合科沿阶草属多年生常绿草本植物，根较粗，中间或近末端常膨大成椭圆形或纺锤形的小块根，茎很短，叶基生成丛，禾叶状，苞片披针形，先端渐尖，种子球形，花期5-8月，果期8-9月。麦冬原产中国，日本、越南、印度也有分布，中国南方等地均有栽培。生于海拔2000米以下的山坡阴湿处、林下或溪旁。
麦冬的小块根是中药，有生津解渴、润肺止咳之效。现代药理研究表明，麦冬主要含沿阶草苷、甾体皂苷、生物碱、谷甾醇、葡萄糖、氨基酸、维生素等，具有抗疲劳、清除自由基、提高细胞免疫功能以及降血糖的作用。另外，麦冬有镇静、催眠、抗心肌缺血、抗心律失常、抗肿瘤等作用，尤其对增进老年人健康具有多方面功效。
利用现有技术对麦冬的鉴别方法有植物形态鉴定方法、性状鉴定方法、显微鉴定方法和薄层色谱法。《中国《中国药典》》对于麦冬的鉴别方法采用的是显微鉴别法和薄层色谱鉴别法，显微鉴别法为：本品横切面：表皮细胞1列或脱落，根被为3-5列木化细胞、皮层宽广，散有含草酸钙针晶束的黏液细胞，有的针晶直径至10μm，内皮层细胞壁均匀增厚，木化，有通道细胞，外侧为1列石细胞，其内壁及侧壁增厚，纹孔细密。中柱较小，韧皮部束16-22个，木质部由导管、管胞、木纤维以及内侧的本化细胞连结成环层。循小，薄壁细胞类圆形；薄层色谱鉴别法为：取本品2g，剪碎，加三氯甲烷-甲醇(7∶3)混合溶液20ml，浸泡3小时，超声处理30分钟，放冷。滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各6ul.分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸(80∶5∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾下，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
采用《中国《中国药典》》方法所检测的麦冬中成份极性偏弱，显色后斑点不明显，只勉强适用于麦冬鉴别，不适合二冬汤或含有麦冬组分的其他口服药物制剂中麦冬的鉴别。
发明内容
本发明的目的是对二冬汤组方中麦冬成份的薄层色谱鉴别方法，本发明不仅适合于二冬汤中麦冬成份的鉴别，也适合于含麦冬组分的任何复方口服制剂或麦冬饮片的鉴别，本发明是以二冬汤组方中麦冬成份为鉴别研究对象，建立的一种薄层色谱鉴别方法。
实现本发明，包括供试品溶液的制备、对照药材溶液的制备和和薄层色谱试验法，以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，经显色剂显色后，紫外灯下观察，展开剂进行图谱展开，检查待测图谱与对照药材图谱的一种方法。
作为本发明的一种优选技术方案，该方法包含如下步骤：
1、供试品溶液制备
取二冬汤粉末5g(或取含麦冬组分的复方制剂5g，或麦冬饮片2g)，加正丁醇10ml，超声30min，离心10min，取上层液体加同体积氨试液洗至下层液体变澄清透明，取上层挥干，残渣用甲醇溶解为2ml；得供试品溶液；
2、对照药材溶液制备：
取麦冬对照药材2g，按上述方法制成对照药材溶液，得对照药材溶液；
3、薄层鉴别方法：
照薄层色谱法(通则0502)试验。吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一高效薄层板上，将薄层板置于槽层析缸中，加入新制备的展开剂于另一槽内，预先饱和 30min，再将展开剂小心倾入置薄层板的槽中，展开约8cm，取出，标记溶剂前沿，晾干，均匀浸润显色剂后，在105℃加热，直至斑点或条带清晰可见(约2-4分钟)。置紫外光灯(365nm) 下检视。
所述展开剂：三氯甲烷∶甲醇∶水(65∶35∶10)下层溶液。
所述显色剂：10％硫酸乙醇液。
本发明也适合于含麦冬的任何复方制剂和麦冬饮片中成份的鉴别。
附图说明：
图1：紫外光灯下观察本发明对二冬汤中麦冬成份检测的色谱图；
图2：显色前254nm下，《中国药典》方法对二冬汤中麦冬成份检测的色谱图；
图3：紫外光灯下观察《中国药典》方法对二冬汤中麦冬成份检测的色谱图；
图4：麦冬饮片薄层鉴别图；
其中：图1中：1、麦冬汤剂，2麦冬对照药材，3二冬汤麦冬阴性，4二冬汤
图2中：1：麦冬汤剂；2：二冬汤；3：二冬汤麦冬阴性；
图3中：1：麦冬汤剂；2：二冬汤；3：二冬汤麦冬阴性；
图4中：1：麦冬；2：麦冬对照药材。
有益效果
本发明二冬汤组方中麦冬成份的薄层色谱鉴别方法，是以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，利用薄层色谱试验法而建立的一种鉴别方法，本发明不仅适合于二冬汤中麦冬成份的鉴别，也适合于含麦冬组分的任何复方口服制剂或麦冬饮片的鉴别，本发明的鉴别方法准确率高，专属性强，使用范围广，是鉴别二冬汤中麦冬成份的一种非常有效的鉴别方法。
具体实施方式
实施例1：(考察用本发明方法和《中国药典》方法对二冬汤中麦冬成份的薄层色谱鉴别) 样品来源：
二冬汤供试品：中国中医科学院中药研究所。
麦冬对照药材：中国药品食品检测研究院。
麦冬汤剂供试品：中国中医科学院中药研究所。
二冬汤麦冬阴性对照品：中国中医科学院中药研究所。
一：本发明方法：
1、供试品溶液制备：
取二冬汤粉末2g，加正丁醇10ml，超声30min，离心10min，取上层液体加同体积氨试液洗至下层液体变澄清透明，取上层挥干，残渣用甲醇溶解为2ml；得二冬汤供试品溶液；
2、对照药材溶液制备：
取麦冬对照药材2g，按上述方法制成对照药材溶液，得麦冬对照药材溶液；
3、麦冬汤剂对照品溶液制备：
取麦冬100g，置1000ml烧杯中，加水800ml，加热提取2小时，提取液过滤，滤液浓缩至60℃是相对密度为1.10-1.15的清膏，取清膏5g，按供试品溶液制备方法制备，得麦冬汤剂对照品溶液；
4、二冬汤麦冬阴性对照品溶液制备：
取不含麦冬饮片制备的二冬汤5g，按供试品溶液的制备方法制备，得二冬汤麦冬阴性对照品溶液。
5、薄层鉴别方法：
照薄层色谱法(通则0502)试验。吸取上述供试品溶液、对照药材溶液、麦冬汤剂供试品溶液和二冬汤麦冬阴性对照品溶液各5μl，分别点于同一高效薄层板上，将薄层板置于槽层析缸中，加入新制备的展开剂于另一槽内，预先饱和30min，再将展开剂小心倾入置薄层板的槽中，展开约8cm，取出，标记溶剂前沿，晾干，均匀浸润显色剂后，在105℃加热，直至斑点或条带清晰可见。置紫外光灯(365nm)下检视。
二：《中国药典》方法
样品来源：
二冬汤供试品：中国中医科学院中药研究所。
麦冬汤剂供试品：中国中医科学院中药研究所。
二冬汤麦冬阴性对照品：中国中医科学院中药研究所。
1、供试品溶液的制备：
取二冬汤粉末2g，加三氯甲烷-甲醇(7∶3)混合溶液20ml，浸泡3小时，超声处理30分钟，放冷。滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为二冬汤供试品溶液。
2、麦冬汤剂溶液制备
取麦冬100g，置1000ml烧杯中，加水800ml，加热提取2小时，提取液过滤，滤液浓缩至60℃是相对密度为1.10-1.15的清膏，取清膏5g，按供试品溶液制备方法制备，作为麦冬汤剂对照品溶液；
3、二冬汤阴性对照品溶液制备：
取不含麦冬饮片制备的二冬汤5g，按供试品溶液的制备方法制备，作为二冬汤麦冬阴性对照品溶液。
4、薄层鉴别方法：
照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述二冬汤供试品溶液、麦冬汤剂对照品溶液和二冬汤阴性对照品溶液各6ul.分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸 (80∶5∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾下，置紫外光灯(254nm)下检视。
检测结果如图1、图2和图3所示：
用本发明鉴别方法在紫外光灯(365nm)下检视，二冬汤供试品溶液、麦冬汤剂供试品溶液的色谱显出色泽或斑点与对照药材溶液色谱显出色泽或斑点相同，都具有Rf值相应的特征斑点或条带。而二冬汤麦冬阴性对照品溶液与对照药材溶液无相应的斑点或条带显示。
用中国《中国药典》鉴别方法在紫外光灯(365nm)下检视，麦冬汤剂所制备的溶液在展开剂条件下无条带显示，即使喷显色剂后仍然无斑点；二冬汤供试品溶液与二冬汤阴性对照品溶液所显示的条带或斑点相同，因此该方法无法用于二冬汤中二冬汤中麦冬成份的鉴别、也无法用于麦冬汤剂的薄层鉴别。
实施例2(考察用本发明的方法对麦冬饮片成份薄层色谱的鉴别)
样品来源：
麦冬饮片供试品：中国中医科学院中药研究所。
麦冬对照药材：中国药品食品检测研究院。
1、供试品溶液制备
取麦冬粉末2g，加正丁醇10ml，超声30min，离心10min，取上层液体加同体积氨试液洗至下层液体变澄清透明，取上层挥干，残渣用甲醇溶解为2ml；得供试品溶液；
2、对照药材溶液制备：
取麦冬对照药材2g，按上述方法制成对照药材溶液，得对照药材溶液；
3、薄层鉴别方法：
照薄层色谱法(通则0502)试验。吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一高效薄层板上，将薄层板置于槽层析缸中，加入新制备的展开剂于另一槽内，预先饱和30min，再将展开剂小心倾入置薄层板的槽中，展开约8cm，取出，标记溶剂前沿，晾干，均匀浸润显色剂后，在105℃加热，直至斑点或条带清晰可见(约2-4分钟)。置可见光和紫外光灯(365nm) 下检视。
检测结果如图4所示：
紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱显出色泽或斑点与对照药材色谱显出色泽或斑点相同，都具有Rf值相应的特征斑点或条带。