阅读说明：本技术 金丝桃苷在制备抑制肺部疾病药物中的应用 ([db:专利名称-en]) 是由 刘剑利 刘丹 程野 田思琪 许瀚元 赵艺淑 曹怡阳 于 2019-10-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了金丝桃苷在制备抑制肺部疾病药物中的应用,拓宽了金丝桃苷的应用范围,并且为肺部疾病的预防和治疗提供新的可能性药物。所述的金丝桃苷通过抑制人支气管上皮细胞(BEAS-2B)存活率及线粒体膜电位的降低,来有效抑制丙烯醛诱导的细胞凋亡,使机体处于健康状态。且金丝桃苷来源广泛,使用安全,价格低廉,具有较好的应用前景。([db:摘要-en])

金丝桃苷在制备抑制肺部疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及金丝桃苷的应用，具体地说，涉及金丝桃苷在制备抑制丙烯醛诱导的肺部疾病药物中的应用。

背景技术

香烟烟雾中含有多种有害物质，且能诱发机体与呼吸有关的疾病，例如哮喘和慢性阻塞性肺病。据资料显示，香烟烟雾包含超过4700种化学成分的复杂混合物——主要有致癌物质、高浓度自由基和其它的氧化剂成分。丙烯醛(Acrolein)是香烟烟雾中的一种主要成分，是一种高度活跃的不饱和醛，常见于环境、食物和水污染物，还能在木材、石油和塑料燃烧时形成。丙烯醛也是一种强力的、高反应性亲电子试剂，在体内能保持活性数天，丙烯醛既可引起脂质过氧化，又是脂质过氧化的产物。一项近期的分析发现丙烯醛是一种主要的室内空气污染物和居住环境中危害最大的物质之一，也是诱发呼吸系统疾病的主要危险因素之一。

支气管上皮细胞是机体内外环境相互作用的重要场所，可通过合成和释放细胞因子和趋化因子等在维持气道微环境的稳态过程中发挥着重要作用，被认为是防御微生物等病原体感染的重要屏障。越来越多的研究证实，支气管上皮细胞损伤与感染性疾病的发生发展关系密切，而改善支气管上皮细胞损伤被认为是感染性疾病治疗的重要策略。支气管上皮细胞能合成并分泌许多炎症因子，并在哮喘发病过程中有着重要作用，其参与了气道的物理防御、炎症发生和气道重塑等过程。因而，如何能有效缓解支气管细胞的损伤，维持其正常的生理功能，对于预防及治疗肺部疾病具有重要的作用。

细胞凋亡是机体维持自身稳态的关键机制之一，在整个生命进程中扮演着重要的作用。细胞凋亡是近年来逐渐被认识的另一种细胞死亡方式，是机体为维持内环境的稳态和更好地适应生存环境的一条必经之路。在成熟的个体中，细胞凋亡也是必不可少的，这是一个细胞主动结束自身生命的过程，受到程序性的严格控制。机体的生长发育受到细胞的增殖、分化及凋亡的共同参与，它们相互配合，协调平衡，同时也受到外界和自身因素的影响，如果出现失衡局面，并且机体不能够重新达到平衡状态，那么将会引起机体出现异常，诱发某些疾病。

金丝桃苷(Hyperoside,Hyp)又称槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷，属于黄酮醇苷类化合物。普遍存在于金丝桃科、葵科、藤黄科等果实与全草中，它的药理作用亦很广泛，且毒性小，具有抗炎、抗肿瘤、利尿、止咳、降血压、降低胆固醇、增强免疫力和抗抑郁等多种生物学活性，具有广阔的开发前景。因此，本发明通过探究金丝桃苷在制备抑制丙烯醛诱导的肺部疾病药物中的应用，对金丝桃苷的生物学活性进行进一步的探索，为肺部疾病的预防和治疗提供理论基础和实验依据。

发明内容

本发明目的是提供一种含有金丝桃苷的药物，在抑制丙烯醛诱导的肺部疾病药物中的应用。金丝桃苷能够抑制丙烯醛诱导的细胞凋亡，本发明从细胞存活率、细胞形态学观察及线粒体膜电位水平出发，为金丝桃苷在肺部疾病的预防和治疗的应用中提供理论基础及实验依据。

本发明采用的技术方案为：

金丝桃苷单用或与其他药物联用在制备抑制肺部疾病药物中的应用。

上述的应用，金丝桃苷单用或与其他药物联用在制备抑制丙烯醛诱导的肺部疾病药物中的应用。

上述的应用，金丝桃苷通过抑制细胞凋亡，抑制肺部疾病。

上述的应用，所述的抑制细胞凋亡，包括抑制细胞存活率的降低、细胞形态学损伤及线粒体膜电位的降低。

上述的应用，所述的肺部疾病为：哮喘或慢性阻塞性肺病。

上述的应用，所述的药物为片剂、胶囊剂或颗粒剂；注射制剂为注射液。

上述的应用，金丝桃苷的剂量为0.1～0.3mg/(kg·d)。

附图说明

图1为金丝桃苷对丙烯醛诱导的BEAS-2B细胞存活率的影响。

图2为金丝桃苷对丙烯醛诱导的BEAS-2B细胞形态学的影响；

其中，a：空白；b：40μM丙烯醛；c：40μM丙烯醛+25μM金丝桃苷；d：40μM丙烯醛+50μM金丝桃苷；e：40μM丙烯醛+100μM金丝桃苷。

图3为金丝桃苷对丙烯醛诱导的BEAS-2B细胞线粒体膜电位的影响；其中，a：空白；b：40μM丙烯醛；c：40μM丙烯醛+25μM金丝桃苷；d：40μM丙烯醛+50μM金丝桃苷；e：40μM丙烯醛+100μM金丝桃苷。

具体实施方式

本实施例选用BEAS-2B细胞为研究对象，检测金丝桃苷对丙烯醛诱导的BEAS-2B细胞凋亡的抑制作用，具体实验步骤如下：

一)细胞存活率检测实验

取对数生长期的人肺支气管上皮细胞(BEAS-2B)细胞接种于96孔板，过夜培养使其贴壁，待细胞密度约为60％左右时进行药物处理。细胞分组情况为Control组，丙烯醛损伤组，不同浓度的金丝桃苷保护组。根据预实验结果，选定丙烯醛损伤浓度为40μM，金丝桃苷保护浓度为25、50和100μM，处理24h后每孔加入20μL MTT(5mg/ml)溶液，置于37℃培养箱中继续培养4h。处理结束后，将96孔板中的培养基全部吸出，每孔加入150μL的DMSO溶液，置于摇床上摇10min，使甲瓒晶体完全溶解，检测490nm处的吸光度值，计算BEAS-2B细胞的存活率。

结果如图1所示，丙烯醛处理后，BEAS-2B细胞的存活率相对于Control组出现显著(P<0.01)降低，加入金丝桃苷共孵育后，细胞存活率相对于丙烯醛损伤组呈现升高的趋势，100μM的金丝桃苷能显著(P<0.01)抑制丙烯醛诱导的细胞存活率降低的现象。MTT结果表明，金丝桃苷能够有效抑制丙烯醛诱导的BEAS-2B细胞存活率降低的趋势。

二)细胞形态学观察

通过在显微镜下观察细胞形态和数量判定细胞生长状态，将BEAS-2B细胞接种于6孔板中培养，待细胞密度到达60％左右，吸出旧培养基，加入2mL新鲜培养基，加入药物共同孵育24h，孵育结束后，于显微镜下对细胞进行观察并拍照，比较不同处理组之间的细胞形态及数量的差异。

结果如图2所示，Control组细胞呈梭状生长，细胞轮廓分明，细胞膜光滑且具有光泽，贴壁细胞数量较多。丙烯醛处理组细胞多数呈现圆形，胞体出现皱缩，悬浮细胞增多，贴壁细胞数量显著(P<0.01)减少。观察不同浓度金丝桃苷组(25、50和100μM)细胞可以发现，与丙烯醛损伤组相比，细胞形态出现改善，细胞皱缩现象得到明显缓解，细胞数量明显增多。并且金丝桃苷浓度的增加与细胞形态恢复及细胞数量呈现正相关。结果显示，金丝桃苷能够有效抑制丙烯醛诱导的BEAS-2B细胞的形态学损伤。

三)线粒体膜电位检测

将处于对数生长期的BEAS-2B细胞接种于12孔板细胞爬片上，待其贴壁后，加入药物共同孵育24h，孵育结束后，将旧培养基吸出，加入PBS洗涤两次，每孔加500μL罗丹明123溶液(10μg/mL)，置于37℃培养箱中继续孵育30min。孵育结束后，加入PBS洗涤两次去除未负载的罗丹明123溶液，清洗后使用4％多聚甲醛室温固定30min，滴加抗荧光淬灭剂，封片，置于荧光显微镜下观察并拍照。

结果如图3所示，Control组为正常对照组，未加丙烯醛处理，细胞内荧光强度较高。丙烯醛处理后，相对于Control组荧光强度显著降低，表明线粒体膜电位下降，线粒体膜遭到破坏，表明丙烯醛可能是通过降低线粒体膜电位而引起BEAS-2B细胞凋亡。当加入金丝桃苷共孵育后，荧光强度随着金丝桃苷保护浓度的增加而呈现升高趋势，表明金丝桃苷能有效抑制丙烯醛诱导的细胞线粒体膜电位降低。