一种甲基丁香酚在制备保护胰腺的药物中的应用
阅读说明：本技术 一种甲基丁香酚在制备保护胰腺的药物中的应用 (Application of methyl eugenol in preparing medicament for protecting pancreas ) 是由 宫念樵 于 2021-08-26 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种甲基丁香酚在制备保护胰腺的药物中的应用,包括含有甲基丁香酚的药物组合物以及甲基丁香酚的各种药学上可接受的药物制剂,对保护胰腺内分泌腺细胞或改善胰腺内分泌腺细胞具有作用,本发明对进一步开发与应用具有临床实际意义与价值。(The invention provides an application of methyl eugenol in preparing a medicament for protecting pancreas, which comprises a medicinal composition containing the methyl eugenol and various pharmaceutically acceptable medicinal preparations of the methyl eugenol, has an effect on protecting pancreatic endocrine gland cells or improving the pancreatic endocrine gland cells, and has clinical practical significance and value for further development and application.)
技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种甲基丁香酚在制备保护胰腺的药物中的应用。
背景技术
细辛属马兜铃科植物，是我国传统中药，已广泛用于风寒感冒、头痛、牙痛、鼻塞流涕、痰饮喘咳等，甲基丁香酚(Methyl eugenol,ME)作为细辛挥发油的主要成分，研究表明，ME具有镇痛、麻醉、抗过敏、抗炎和抗肿瘤等多种药理作用。
胰腺是由被称作胰小岛的内分泌腺组织(胰岛)和分泌消化酶的外分泌腺组织组成的器官。胰岛中存在β细胞，α细胞，δ细胞，胰多肽细胞等，它们极大影响血液葡萄糖的控制和代谢。其中，β细胞作为产生胰岛素的细胞起着特别重要的作用。
天然化合物甲基丁香酚(ME)是一种与丁香酚结构相似的物质，是一种烯基苯化合物，已在450多种植物中检测到，其中许多被用作食物、精油或药物的来源。ME作为中药配方的主要成分，用于组织修复和创面愈合已有十年的历史有报道称，啮齿动物代谢能的主要靶器官和代谢部位是肝脏。但至今，现有技术中尚未有ME对保护胰腺方面的报道和记载。
发明内容
鉴于上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提出一种甲基丁香酚在制备保护胰腺的药物中的应用。
本发明的目的通过如下技术方案得以实现：
本发明的目的之一在于，甲基丁香酚在制备保护胰腺的药物中的应用。
优选的，该药物的给药剂量为不小于3mg/kg/天。
本发明的目的之二在于，含有甲基丁香酚的药物组合物在制备保护胰腺的药物中的应用。
本发明的目的之三在于，一种保护胰腺的药物制剂，其包含注射剂、口服制剂、粉针剂、凝胶剂、胶囊剂和贴剂；所述制剂中甲基丁香酚的含量为80％以上。
上述保护胰腺是保护胰腺内分泌腺细胞或改善胰腺内分泌腺细胞功能。
本发明的突出效果为：
本发明提供了甲基丁香酚在制备保护胰腺的药物中的应用，包括含有甲基丁香酚的药物组合物以及甲基丁香酚的各种药学上可接受的药物制剂，对保护胰腺内分泌腺细胞或改善胰腺内分泌腺细胞具有作用，本发明对进一步开发与应用具有临床实际意义与价值。
附图说明
图1为本发明正常组(Normal组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧/复氧+DMSO溶剂组(H/R+DMSO组)、缺氧/复氧+甲基丁香酚组(H/R+Me组)的HE染色的切片的显微放大图；
图2为本发明正常组(Normal组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧/复氧+DMSO溶剂组(H/R+DMSO组)、缺氧/复氧+甲基丁香酚组(H/R+Me组)的胰岛素分泌量的测定数据图；
图3为本发明流式细胞仪检测Min6细胞凋亡的荧光图；
图4为本发明流式细胞仪检测Min6细胞凋亡率的测定数据图。
具体实施方式
为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现对发明的技术方案进行以下详细说明，但不能理解为对发明的可实施范围的限定。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1甲基丁香酚改善胰岛细胞活力
实验选用雄性C57BL/6J小鼠(6-8周龄，体重20g～22g，北京HFK Bioscience)。将这些小鼠分成正常组(Normal组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧/复氧+DMSO溶剂组(H/R+DMSO组)、缺氧/复氧+甲基丁香酚组(H/R+Me组)。将上述4组小鼠胰脏用波恩氏液固定，经过脱水、透明、浸蜡后，用石蜡包埋，切片，厚度为4.5-5.5μm，30-45℃烘箱加热固定，对胰腺切片进行HE染色和醛复红染色，脱水，透明，封片，于显微镜下观察，并拍照记录，如图1所示，与正常培养的Normal组胰岛细胞相比，经缺氧/复氧处理后，H/R组胰岛细胞中红染细胞数增加，细胞死亡增加，而与H/R组以及H/R+DMSO组相比，甲基丁香酚处理后，H/R+Me组胰岛细胞的红染细胞数减少，说明细胞死亡减少。
实施例2甲基丁香酚改善胰岛素分泌的功能
实验选用雄性C57BL/6J小鼠(6-8周龄，体重20g～22g，北京HFK Bioscience)，小鼠颈椎脱臼法处死开腹，用动脉夹夹住胆总管入十二指肠端，肝脏上翻游离胆总管。通过胆总管往胰腺灌注预冷的Liberase RI酶工作液(0.153mg/ml)约3ml，使胰腺充分膨胀。钝性分离完整的胰腺，置于37℃水浴静止消化30min。消化结束后，用漩涡振荡器上剧烈振荡10s，加入预冷PBS终止消化。用PBS洗消化物两次，每次1000rpm15s。往组织沉淀加入4ml25％(w/v)Ficoll，振荡混匀，再依次小心加入23％，21％，11％的Ficoll各2ml，形成界面清晰的密度梯度分离液。把离心管放入吊桶式的转头，1000rpm离心10min，得到纯化的胰岛细胞，用含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液(含11mM D-葡萄糖)，在95％air+5％CO2的环境下培养过夜。用小号枪头逐一挑出，置于低糖DMEM培养液中(含5.5mM D-葡萄糖)，并随机分成四组，即正常组(Normal组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧/复氧+DMSO溶剂组(H/R+DMSO组)、缺氧/复氧+甲基丁香酚组(H/R+Me组)。Me的用量是40μg/ml，培养时间24h。实验结束后，把胰岛挑出置于Eppendorf管中，每3个大小均一，直径约为150μm的胰岛归于一管，管中已加入1ml低糖DMEM培养液。把管子放入CO2培养箱培养1h，简短离心，取上清，用小鼠胰岛素ELISA试剂盒测定胰岛素释放量。如图2所示，与正常组(Normal组)的胰岛素分泌量相比，缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧/复氧+DMSO溶剂组(H/R+DMSO组)的胰岛素分泌量明显下降，缺氧/复氧+甲基丁香酚组(H/R+Me组)的胰岛素分泌量明显上升。由此可知，经甲基丁香酚的处理，可改善经缺氧/复氧处理后的胰岛细胞的胰岛素的分泌。
实施例3甲基丁香酚降低Min6细胞的凋亡率
MIN6细胞复苏及培养：经-80℃冰箱中取出，离心弃去上层冻存液，加入含10％胎牛血清、1％双抗的1640培养基重悬细胞，相对湿度为95％，37℃，5％CO2的孵箱中培养；视细胞生长情况，每24～36h更换新鲜培养基，待细胞生长至75％～85％，予以传代或冻存。
将生长良好的Min6细胞，均匀接种到96孔板中，按5×105个/mL加入100μL完全培养基(含有10％胎牛血清的培养基)，培养24h后，去掉原培养基，分为正常组(Normal组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧/复氧+DMSO溶剂组(H/R+DMSO组)、缺氧/复氧+甲基丁香酚组(H/R+Me组)。利用磷脂结合蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)和碘化丙啶(PI)双重染色，流式细胞仪检测细胞凋亡，如图3、图4所示，结果表明，和Normal组相比，H/R组和H/R+DMSO组的Min6细胞凋亡细胞明显增多；予以甲基丁香酚后，H/R+Me组Min6细胞总凋亡率下降，表明ME预处理可改善HK-2细胞H/R损伤，抑制Min6细胞凋亡。
实施例4
本实施例提供一种含有甲基丁香酚的药物组合物，用于保护胰腺。所述药物组合物还可以制成能够接受的药物制剂，其包含注射剂、口服制剂、粉针剂、凝胶剂、胶囊剂和贴剂；所述药物制剂中甲基丁香酚的含量为80％以上。
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