甘草苷在制备治疗或预防肠道病毒71型感染药物中的应用
阅读说明：本技术 甘草苷在制备治疗或预防肠道病毒71型感染药物中的应用 (Application of liquiritin in preparation of medicine for treating or preventing enterovirus71 infection ) 是由 李晋 徐尚福 杜文琪 于 2021-09-09 设计创作，主要内容包括：本申请公开了中药制药技术领域中甘草苷在制备治疗或预防肠道病毒71型感染药物中的应用以及制备抑制肠道病毒71型复制药物中的应用,研究发现,本申请采用甘草苷,灌胃给药后,可通过降低脑组织中EV71VP1表达量,降低炎症因子IL-6,抑制病毒复制,进而改善EV71引起手足口病的神经症状。(The application discloses application of liquiritin in preparing medicines for treating or preventing enterovirus71 type infection and application of liquiritin in preparing medicines for inhibiting enterovirus71 type replication in the technical field of traditional Chinese medicine pharmacy, and researches show that liquiritin is adopted in the application, after the liquiritin is administrated by intragastric administration, EV71VP1 expression quantity in brain tissues can be reduced, inflammatory factor IL-6 is reduced, virus replication is inhibited, and then the neurological symptoms of hand-foot-and-mouth disease caused by EV71 are improved.)
技术领域
本发明涉及中药制药技术领域，涉及甘草苷在制备抗病毒药物中的应用，具体是甘草苷在制备治疗或预防肠道病毒71型感染药物中的应用。
背景技术
肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)感染已成为全球公共卫生的主要威胁，尤其是婴幼儿。流行病学研究表明EV71感染是导致严重甚至致命手足口病的主要原因。EV71感染通常伴有严重的神经系统并发症如无菌性脑膜炎、急性弛缓性麻痹、脑炎等，这些神经系统并发症和神经源性肺水肿被认为是致命病例的主要疾病过程。对于EV71感染所致的中枢神经系统疾病，尚无有效的抗病毒治疗药物和可以应用于临床的疫苗。因此，积极开发具有抗EV71疗效且对神经系统有保护作用的药物迫在眉睫。
目前已有的中药抗EV71的研究表明，清开灵、喜炎平、蓝岑口服液等制剂，款冬、鱼腥草等单味中药均具有抗EV71作用，但具体抗病毒成分和机制探讨仍不足。然而EV71感染所致中枢神经系统损害的发病机制，以及中药或天然产物的抗病毒或神经保护作用机制不明确，仍是制约其安全有效治疗的瓶颈。因此，明确中药抗病毒活性成分，并探明其作用机制，将是抗EV71相关中枢神经系统疾病防治研究的重要途径之一，将为EV71感染所致的中枢神经系统疾病的中药治疗提供基础研究依据。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供甘草苷在抗肠道病毒71型中的应用。
本发明的目的之一是提供甘草苷或其药学上可接受的盐作为活性成分在制备治疗或预防肠道病毒71型感染药物中的应用。
本发明的目的之二是提供甘草苷或其药学上可接受的盐作为活性成分在制备抑制肠道病毒71型复制药物中的应用。
具体的，肠道病毒71型感染所致的疾病包括手足口病、病毒性咽峡炎、无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿和中枢神经系统感染中的一种或者多种。
具体的，所述的药物可以制备成任何剂型，包括但不限于如下：片剂(例如包衣片剂)、胶囊剂、口服液体剂、口服颗粒剂、口服散剂和注射剂(例如冻干粉针和注射用乳剂)。
本发明的甘草苷为市售，研究发现，本发明采用甘草苷，灌胃给药后，可通过降低脑组织中EV71 VP1表达量，降低炎症因子IL-6，抑制病毒复制，进而改善EV71引起手足口病或者其他的神经症状，达到预防和治疗EV71感染所致疾病的目的。
附图说明
图1乳鼠感染实验中各组体重变化、生存情况及临床症状评分图；
图2为各组脑组织HE染色结果图；
图3为各组脑组织EV71 VP1表达量示意图；
图4为各组脑组织炎症因子IL-6表达量示意图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
1.建立EV71感染乳鼠模型，观察甘草苷对EV71感染乳鼠的治疗作用
1.1造模方法
3日龄ICR乳鼠30只，体重3±0.5g，分为3组，每组10只，分别为①空白对照组(Control group)；②模型组(EV71 group)；③甘草苷治疗组(LQ group)。模型组和甘草苷治疗组给予EV71病毒原液50μL颅内注射制备EV71感染模型，空白对照组给予等量生理盐水颅内注射。造模第2天，甘草苷治疗组采用甘草苷0.06mg/g灌胃给药，每天1次，共5天。空白对照组和模型组给予相同剂量生理盐水灌胃。
1.2体重变化、生存情况及临床症状评分
测量乳鼠体重，观察给药前后的体重变化。对各组乳鼠进行临床症状评分，临床评分标准如下表。
表1为临床评分标准
1.3脑组织病理学检测
第5天给药后，将乳鼠禁食麻醉断头，取脑组织，行HE染色，观察脑组织的病理学改变。
1.4脑组织EV71 VP1表达量检测
第5天给药后，将乳鼠禁食麻醉断头，取脑组织，提取RNA，检测脑组织EV71 VP1基因表达量。
1.5脑组织炎症因子IL-6表达量检测
第5天给药后，将乳鼠禁食麻醉断头，取脑组织，提取RNA，检测脑组织IL-6的表达。
2实验结果
2.1体重变化、生存情况及临床症状评分
3日龄乳鼠接种病毒后，每日记录体重变化、生存情况及临床症状评分。具体见图1，A为模型组乳鼠与LQ治疗组乳鼠大体比较；B为各实验组乳鼠体重变化曲线；C为各实验组乳鼠生存率曲线；D为各实验组临床评分。与空白对照组相比，模型组乳鼠体重明显降低，生存率稍降低，临床评分明显升高。LQ给药治疗后，乳鼠体重明显升高，生存率提高，临床评分明显降低，
2.2脑组织病理检测结果
显微镜下可见，如图2所示，A为空白对照组，B为模型组，C为LQ治疗组。空白对照组脑皮质内神经细胞数量多，细胞圆润。模型组神经细胞形态皱缩，并出现大量炎性细胞浸润，LQ给药治疗后，神经细胞形态较模型组有所改善，炎性细胞浸润减少。
2.3脑组织EV71 VP1表达量检测结果
EV71属小RNA病毒科肠道病毒(enterovirus)，它含有一个长度约为7kb的单链正链RNA基因组。在病毒感染过程中，有四种衣壳蛋白(VP1、VP2、VP3和VP4)被翻译，其中VP1在病毒的获取和传播过程中起主导作用。如图3所示，vs空白对照组，#P<0.05；vs模型组，*P<0.05。在空白对照组，EV71 VP1不表达，而模型组EV71 VP1mRNA高表达。与模型组比较，甘草苷治疗组的EV71 VP1 mRNA明显降低。
2.4脑组织炎症因子IL-6表达量检测结果
IL-6是由免疫细胞和非免疫细胞产生的多效性细胞因子，刺激机体的免疫应答。如图4所示，vs空白对照组，##P<0.01；vs模型组，**P<0.05；与正常对照组相比，模型组IL-6mRNA表达明显减少，LQ给药后，IL-6mRNA表达显著增多。表明LQ促进机体细胞的免疫活性，增强机体细胞对EV71的抵抗力。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。