利用双链核酸检测器进行靶核酸检测的方法
阅读说明：本技术 利用双链核酸检测器进行靶核酸检测的方法 (Method for detecting target nucleic acid using double-stranded nucleic acid detector ) 是由 段志强 于 2021-08-25 设计创作，主要内容包括：本发明提供了利用双链核酸检测器进行靶核酸检测的方法,具体提供了一种检测样品中靶核酸的方法,所述方法包括将样品与CRISPR效应蛋白、gRNA(指导RNA)和核酸检测器接触,所述gRNA包括与所述CRISPR效应蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列；检测由CRISPR效应蛋白切割所述核酸检测器产生的可检测信号,从而检测靶核酸,所述核酸检测器不与所述gRNA杂交；所述核酸检测器包括可以形成双链互补配对结构的核酸；所述CRISPR效应蛋白选自Mad7或LbCas12a。(The present invention provides a method for detection of a target nucleic acid using a double-stranded nucleic acid detector, in particular a method for detecting a target nucleic acid in a sample, the method comprising contacting a sample with a CRISPR-effector protein, a gRNA (guide RNA) comprising a region binding to the CRISPR-effector protein and a guide sequence hybridizing to a target nucleic acid, and a nucleic acid detector; detecting a detectable signal generated by cleavage of the nucleic acid detector by a CRISPR effector protein, thereby detecting a target nucleic acid, the nucleic acid detector not hybridizing to the gRNA; the nucleic acid detector comprises a nucleic acid that can form a double-stranded complementary paired structure; the CRISPR effector protein is selected from Mad7 or LbCas12 a.)
技术领域
本发明涉及核酸检测领域，涉及利用双链核酸检测器进行靶核酸检测的方法，具体涉及利用Cas蛋白进行核酸检测的方法，所述检测方法中的检测器为双链核酸检测器。
背景技术
特异性检测核酸分子(Nucleic acid detection)方法具有重要的应用价值，例如病原体的检测，遗传病检测等。在病原体检测方面，由于每种病原体微生物都有其独一无二的特征核酸分子序列，因此可以开发出针对特定物种的核酸分子检测，也称为核酸诊断(NADs,nucleic acid diagnostics)，在食品安全、环境微生物污染检测，人体病原菌感染等领域具有重要义。
目前建立的特异性核酸分子检测通常需要分为两步，第一步是目的核酸的扩增，第二步是目的核酸检测。现有检测技术包括限制性核酸内切酶方法、Southern、Northern、斑点杂交、荧光PCR检测技术、LAMP环介导等温扩增技术、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)等方法。
2012年之后，CRISPR基因编辑技术兴起，张锋团队基于RPA技术开发了一种以Cas13为核心的靶向RNA的新核酸诊断技术(SHERLOCK技术)，Doudna团队开发了一种以Cas12酶为核心的诊断技术(DETECTR技术),中国科学院上海植物生理生态研究所王金博士等也开发了一种基于Cas12的新型核酸检测技术(HOLMES技术)。基于CRISPR技术开发的核酸检测技术正在日益发挥重要作用。申请人基于Cas12i和Cas12j也开发了相应的核酸检测体系，例如，中国专利申请(CN111996236A，公开日：2020年11月27日)公开了基于Cas12i和Cas12j的核酸检测方法，但是，上述方法中所利用的检测器均是单链核酸；本申请对上述检测方法中的检测器进行了改进，提出了一种利用双链核酸作为检测器进行核酸检测的方法。