具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更详细的描述。但是，应当理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式或实施例。相反地，提供这些实施方式或实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式或实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”的可选范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。

本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。

本发明中，涉及到数值区间，如无特别说明，则包括数值区间的两个端点。

本发明中涉及的百分比含量，如无特别说明，对于固液混合和固相-固相混合均指质量百分比，对于液相-液相混合指体积百分比。

本发明中涉及的百分比浓度，如无特别说明，均指终浓度。所述终浓度，指添加成分在添加该成分后的体系中的占比。

本发明中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内进行处理。所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。

姜竹茹中药配方颗粒是由姜竹茹饮片水提后浓缩干燥得到的，相对于姜竹茹饮片，失去了传统饮片的外形、气味等性状特征，只能通过分析其成分来判断真伪及是否规范炮制。姜竹茹中药配方颗粒包含竹茹和生姜两味药的化学成分，以及炮制过程产生的化学成分，整体成分组成复杂，并且竹茹中的成分跟生姜的成分在鉴别时相互造成干扰，单纯借鉴传统的竹茹的薄层鉴别方法(如背景技术中提到的方法)，无法清楚直观地得到确切的判定结果。因此，有效去除姜竹茹中药配方颗粒中其他成分特别是来自姜药材的成分的影响，是基于薄层层析法开展竹茹鉴别的关键。为此，本发明对薄层层析工艺特别是展开剂配方进行调整，展开剂能针对性溶解竹茹成分从而将其从供试品溶液中分离并随后在层析板上展开，有效去除其他干扰成分的影响，斑点显色清晰，分离度好。具体地，本发明的技术方案包括：

本发明提供一种姜竹茹中药配方颗粒中竹茹的鉴别方法，所述鉴别方法包括如下步骤：

分别取姜竹茹中药配方颗粒和竹茹对照药材，制备供试品溶液和对照药材溶液；

将所述供试品溶液和所述对照药材溶液点样于薄层层析板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，检视。

可以理解的是，本发明鉴别方法对所涉步骤的先后顺序不做特别限定，例如可以先制备供试品溶液后制备对照药材溶液，也可以先制备对照药材溶液再制备供试品溶液，可以先点样供试品溶液再点样对照药材溶液，也可以先点样对照药材溶液再点样供试品溶液。另外，可以理解的是，在展开后可以挥干薄层层析板，然后再检视。

在其中一个示例中，所述甲苯、所述三氯甲烷、所述丙酮和所述甲酸的体积比为(7.5-8.5)：(4.5-5.5)：(2.5-3.5)：(0.08-0.12)。例如可以为7.5:5.5:2.5:0.12、8.5:4.5:3.5:0.08、8:5:3:0.1。

在其中一个示例中，所述薄层层析板为硅胶GF₂₅₄板。

在其中一个示例中，所述供试品溶液的制备步骤包括：取姜竹茹中药配方颗粒，用水溶解，所得水溶液用乙醚提取，去除所得提取液中的溶剂，所得残渣用甲醇溶解。通过该制备步骤获得供试品溶液，竹茹的中等极性成分得到富集。

在其中一个示例中，提取的次数为1次-3次(例如1次、2次、3次)，每1g所述姜竹茹中药配方颗粒在每1次提取中对应的所述乙醚的用量为15mL-25mL(例如15mL、20mL、25mL)。可以理解的是：当提取次数为2次或者3次时，需要合并所得提取液；本发明对去除所得提取液中的乙醚的方式不做特别限定，例如可以采用挥干的方式；本发明对溶解所述残渣对应的甲醇用量不做特别限定，例如每1g所述姜竹茹中药配方颗粒提取得到的所述残渣对应的甲醇的用量为0.8mL-1.2mL(例如0.8mL、1mL、1.2mL)。

在其中一个示例中，所述对照药材溶液的制备步骤包括：取所述竹茹对照药材，水煮，滤过，收集滤液，除去所述滤液中的水，所得残渣用水溶解，所得水溶液用乙醚提取，去除所得提取液中的溶剂，所得残渣用甲醇溶解。

在其中一个示例中，提取的次数为1次-3次(例如1次、2次、3次)，每1g所述竹茹药材在每1次提取中对应的所述乙醚的用量为3mL-5mL(例如3mL、4mL、5mL)。可以理解的是：当提取次数为2次或者3次时，需要合并所得提取液；本发明对去除所得提取液中的乙醚的方式不做特别限定，例如可以采用挥干的方式；本发明对溶解所述残渣对应的甲醇用量不做特别限定，例如每1g所述竹茹对照药材取得到的所述残渣对应的甲醇的用量为0.18mL-0.22mL(例如0.18mL、0.2mL、0.22mL)。

在其中一个示例中，所述鉴别方法还包括如下步骤：取缺竹茹的阴性样品制备阴性对照溶液，并将所述阴性对照溶液点样于所述薄层层析板上，于所述展开剂中展开，检视。

本发明中，阴性对照溶液的制备参照供试品溶液的制备。可以理解的是，本发明鉴别方法中，供试品溶液、对照药材溶液以及阴性对照溶液的制备以及点样没有先后顺序限定。

可以理解的是，本发明对缺竹茹的阴性样品的种类不做特别限定，不含竹茹且能适于薄层层析即可，例如可以为麦芽糊精。

在其中一个示例中，点样的方式采用喷雾条带状点样。

在其中一个示例中，检视是于紫外光下进行。

在其中一个示例中，所述紫外光的波长为250nm-260nm。本发明以254nm为例对本发明技术方案进行举例说明，但这并非是对本发明紫外光波长的限制。

在其中一个实施例中，所述供试品溶液的点样量为1.8μL-2.2μL。例如1.8μL、2μL、2.2μL。

在其中一个实施例中，所述对照药材溶液的点样量为7.8μL-8.2μL。例如7.8μL、8μL、8.2μL。

下述实施例中所述试验方法，如无特别说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特别说明，均可从商业途径获得。

实施例1

本实施涉及姜竹茹中药配方颗粒中竹茹成分的鉴别方法，采用薄层色谱法进行鉴别，具体包含如下步骤：

1.1仪器、试剂与试药

仪器：薄层自动成像仪(CAMAG REPROSTAR 3，瑞士卡玛公司)；双槽展开缸；全自动薄层点样仪(AUTOMATIC TLC SAMPLER4，瑞士卡玛公司)；万分之一天平(ME204E，瑞士梅特勒)；超纯水系统(Milli-QDirect，默克股份有限公司)；硅胶GF₂₅₄薄层板(GF₂₅₄，批号：20160312，青岛海洋化工有限公司)；硅胶GF₂₅₄薄层板(TLC Silica gel 60F₂₅₄，批号：HX03452229，默克股份有限公司)；硅胶GF₂₅₄薄层板(SGF254，批号：20210318，烟台市化学工业研究所)。

试剂：乙醚(批号：SY22001010，广州化学试剂厂)；甲苯(批号：SY22005016，广州化学试剂厂)；三氯甲烷(批号：SY22001009，广州化学试剂厂)；丙酮(批号：SY21810005，西陇科学股份有限公司)；甲酸(批号：SY22007013，天津市永大化学试剂有限公司)均为分析纯；水为超纯水(实验室自制)。

试药：姜竹茹配方颗粒(批号：CG2006002、CG2006003、CG2006004；来源：广东一方制药有限公司)；竹茹对照药材(批号：180630，成都普菲德生物技术有限公司)；麦芽糊精(批号：F2004001，吉林中粮生化能源(公主岭)有限公司)。

1.2溶液的制备

1.2.1供试品溶液的制备

取姜竹茹中药配方颗粒约1g，加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

1.2.2对照药材溶液的制备

取竹茹对照药材5g，加水150mL，煮沸30分钟，滤过，滤渣再加水150mL，煮沸25min，滤过，合并两次滤液，蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。

1.2.3阴性样品溶液的制备

取缺姜竹茹的阴性(即麦芽糊精)样品1g，加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为阴性对照溶液。

1.3薄层色谱条件

薄层板：硅胶GF₂₅₄薄层板(TLC Silica gel 60F₂₅₄，批号：HX03452229，默克股份有限公司)；

展开剂：甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶5∶3∶0.1)；

点样方式：喷雾条带状点样；

展开方式：采用双槽展开缸，展开缸预饱和时间15分钟，展开距离为8cm左右；

检视：置紫外光(254nm)下检视。

1.4姜竹茹配方颗粒不同点样量考察

分别吸取不同体积的姜竹茹配方颗粒(CG2006002)供试品溶液、竹茹对照药材溶液点样于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶5∶3∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光(254nm)下检视。实验结果见图1。

由图1可见，姜竹茹中药配方颗粒的供试品溶液的点样量为2μL、竹茹对照药材溶液的点样量为8μL时，供试品色谱和对照药材色谱的主要斑点显色清晰，分离度较好，无拖尾现象，背景无干扰，供试品色谱与对照药材色谱的斑点能够一一对应，因此选择供试品溶液的点样量为2μL、对照药材溶液的点样量为8μL。

1.5姜竹茹中药配方颗粒专属性考察

分别吸取姜竹茹中药配方颗粒供试品溶液、竹茹对照药材溶液、阴性样品溶液点样于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶5∶3∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光(254nm)下检视。实验结果见图2。

由图2可见，姜竹茹中药配方颗粒供试品色谱在与竹茹对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，且阴性样品无干扰。说明该薄层方法专属性良好。

1.6不同温度考察

分别吸取姜竹茹中药配方颗粒供试品溶液、竹茹对照药材溶液点样于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶5∶3∶0.1)为展开剂，分别在常温和低温条件下展开，取出，晾干，置紫外光(254nm)下检视。实验结果见图3和图4。

由图3和图4可见，常温和低温条件下，姜竹茹中药配方颗粒供试品色谱和竹茹对照药材色谱的主要斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象，背景无干扰，供试品色谱与对照药材色谱的斑点能够一一对应，表明温度的降低对姜竹茹中药配方颗粒薄层鉴别无明显影响，说明该薄层鉴别方法对常温和低温的条件耐用性良好。

1.7不同湿度考察

分别吸取姜竹茹中药配方颗粒供试品溶液、竹茹对照药材溶液点样于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶5∶3∶0.1)为展开剂，分别在高湿和低湿条件下展开，取出，晾干，置紫外光(254nm)下检视。实验结果见图5和图6：

由图5和图6可见，高湿和低湿条件下，姜竹茹配方颗粒供试品色谱和竹茹对照药材色谱的主要斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象，背景无干扰，供试品色谱与对照药材色谱的斑点能够一一对应，表明湿度对姜竹茹配方颗粒薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别方法对不同的湿度耐用性良好。

1.8不同厂家薄层板考察

分别吸取姜竹茹中药配方颗粒供试品溶液、竹茹对照药材溶液点样于不同厂家硅胶GF₂₅₄预制薄层板(海洋硅胶GF₂₅₄板、烟台银龙硅胶GF₂₅₄板、默克硅胶GF₂₅₄板)上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶5∶3∶0.1)为展开剂，分别在同一温湿度条件下展开，取出，晾干，置紫外光(254nm)下检视。实验结果见图7、图8和图9。

由图7、图8和图9可见，采用不同厂家的硅胶GF₂₅₄薄层板(海洋硅胶GF₂₅₄板、烟台银龙硅胶GF₂₅₄板、默克硅胶GF₂₅₄板)，姜竹茹供试品色谱和竹茹对照药材色谱的主要斑点均显色清晰，分离度较好，且供试品色谱与对照药材色谱的斑点能够一一对应。说明该薄层鉴别方法对不同厂家的硅胶G薄层板的耐用性良好。

1.9小结

本实施例方法得到的色谱图各斑点Rf值大小适中，整体分离效果较好，斑点较清晰，阴性无干扰，经不同品牌的薄层板和不同的温湿度考察，证明该方法耐用性良好。将供试品色谱与对照药材色谱斑点进行比对，相同颜色的斑点能一一对应。表明以对照药材为参照，该方法能够很好地用于姜竹茹配方颗粒的薄层色谱鉴别。

实施例2

本实施例涉及姜竹茹中药配方颗粒中竹茹的薄层鉴别，包括如下步骤：

1.1供试品溶液的制备

分别取姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002、CG2006003、CG2006004)约1g，加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

1.2对照药材溶液的制备

取竹茹对照药材5g，加水150mL，煮沸30分钟，滤过，滤渣再加水150mL，煮沸25min，滤过，合并两次滤液，蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。

1.3展开

照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)实验，吸取供试品溶液2μL与对照药材溶液8μL，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板(TLC Silica gel 60F₂₅₄，批号：HX03452229，默克股份有限公司)上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶5∶3∶0.1)为展开剂，展开，展距约8厘米。

1.4显色

置紫外光(254nm)下检视。

1.5结果判定

结果见图10，三批供试品色谱中，在与竹茹对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，说明三批姜竹茹中药配方颗粒中含有与竹茹对照药材相同的成分，符合规定。

实施例3

本实施例是实施例2的变化例，包括如下步骤：

1.1供试品溶液的制备

分别取姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)约1g，加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取1次，乙醚用量15mL，挥干，残渣加甲醇0.8mL使溶解，作为供试品溶液。

1.2对照药材溶液的制备

取竹茹对照药材5g，加水150mL，煮沸30分钟，滤过，滤渣再加水150mL，煮沸25min，滤过，合并两次滤液，蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取1次，乙醚用量15mL，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇0.8mL使溶解，作为对照药材溶液。

1.3展开

照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)实验，吸取供试品溶液1.8μL与对照药材溶液7.8μL，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板(TLC Silica gel60F₂₅₄，批号：HX03452229，默克股份有限公司)上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸(7.5:5.5:2.5:0.12)为展开剂，展开，展距约8厘米。

1.4显色

置紫外光(254nm)下检视。

1.5结果判定

结果：结果见图11，三批供试品色谱中，在与竹茹对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，说明三批姜竹茹中药配方颗粒中含有与竹茹对照药材相同的成分，符合规定。

实施例4

本实施例是实施例2的变化例，包括如下步骤：

1.1供试品溶液的制备

分别取姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)约1g，加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，乙醚用量25mL，挥干，残渣加甲醇1.2mL使溶解，作为供试品溶液。

1.2对照药材溶液的制备

取竹茹对照药材5g，加水150mL，煮沸30分钟，滤过，滤渣再加水150mL，煮沸25min，滤过，合并两次滤液，蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取1次，乙醚用量25mL，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1.2mL使溶解，作为对照药材溶液。

1.3展开

照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)实验，吸取供试品溶液2.2μL与对照药材溶液8.2μL，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板(TLC Silica gel 60F₂₅₄，批号：HX03452229，默克股份有限公司)上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8.5:4.5:3.5:0.08)为展开剂，展开，展距约8厘米。

1.4显色

置紫外光(254nm)下检视。

1.5结果判定

结果：结果见图12，三批供试品色谱中，在与竹茹对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，说明三批姜竹茹中药配方颗粒中含有与竹茹对照药材相同的成分，符合规定。

实施例5

本实施例是实施例2的变化例，包括如下步骤：

1.1供试品溶液的制备

分别取姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)约1g，加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

1.2对照药材溶液的制备

取竹茹对照药材5g，加水150mL，煮沸30分钟，滤过，滤渣再加水150mL，煮沸25min，滤过，合并两次滤液，蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。

1.3展开

照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)实验，吸取供试品溶液2μL与对照药材溶液8μL，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板(TLC Silica gel 60F₂₅₄，批号：HX03452229，默克股份有限公司)上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸(9∶6∶1∶0.1)为展开剂，展开，展距约8厘米。

1.4显色

置紫外光(254nm)下检视。

1.5结果判定

结果：结果见图13，三批供试品色谱中，在与竹茹对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点。但对应斑点的Rf值较低，不符合《中国药典》0502薄层色谱法项下比移值Rf以在0.2-0.8之间为宜”，可能会对结果引起误判，因此，此展开条件下色谱图不符合规定。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所述附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。