一种新型靶点Mob1及靶向小分子管花苷B在制备抗炎产品中的应用
阅读说明：本技术 一种新型靶点Mob1及靶向小分子管花苷B在制备抗炎产品中的应用 (Novel target Mob1 and application of targeted small molecular angionoside B in preparation of anti-inflammatory product ) 是由 曾小斌 肖凌云 姚杰 葛岚岚 缪雨阳 欧宝如 于 2021-02-02 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种新型靶点Mob1及靶向小分子管花苷B在制备抗炎产品,特别是制备治疗与M1型巨噬细胞分化相关的炎症性疾病药物、食品或保健品中的应用。本发明首次发现,Mob1蛋白对于巨噬细胞M1型分化具有显著抑制作用,而天然小分子化合物管花苷B能够与Mob1蛋白直接结合,改变其构象,稳定其结构,抑制Mob1蛋白在巨噬细胞M1型分化中的降解,从而提高Mob1蛋白的水平,发挥抗炎作用。本发明拓宽了抗炎药物的作用靶点,为抗炎药物研发提供了新的思路；还提供了活性优秀、靶点明确的活性小分子--管花苷B,为抗炎产品的开发提供了新的药物选择。(The invention provides application of a novel target Mob1 and a targeted small molecular angionoside B in preparation of an anti-inflammatory product, in particular to preparation of a medicine, a food or a health-care product for treating inflammatory diseases related to M1 macrophage differentiation. The invention discovers for the first time that the Mob1 protein has a remarkable inhibiting effect on macrophage M1 type differentiation, while a natural small molecular compound, namely angionoside B, can be directly combined with the Mob1 protein to change the conformation, stabilize the structure and inhibit the degradation of the Mob1 protein in macrophage M1 type differentiation, so that the level of the Mob1 protein is improved, and the anti-inflammatory effect is exerted. The invention widens the action target of the anti-inflammatory drug and provides a new idea for the research and development of the anti-inflammatory drug; also provides an active small molecule, namely the tubular flower glycoside B with excellent activity and definite target spot, and provides a new drug choice for the development of anti-inflammatory products.)
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种新型靶点Mob1及靶向小分子管花苷B在制备抗炎产品中的应用。
背景技术
炎症是机体抵御外界损伤的重要保护机制。尽管正常的炎症可以帮助机体清除异物，抵抗外界环境刺激，但是过度或者持续的炎症反应会造成机体损伤，促进多种疾病的发生发展。例如，在脓毒血症中，机体的促炎与抑炎反应之间的平衡遭到破坏，炎症反应失控，炎性细胞因子大量释放导致全身炎症反应，进而导致多器官衰竭。在动脉粥样硬化中，巨噬细胞介导的炎症反应贯穿着从脂纹形成到斑块破裂的全过程。在病毒性肺炎中，SARS-CoV-2与SARS-CoV类似，主要通过急性炎症反应导致严重的肺部损伤，且患者感染后的细胞因子风暴强弱与疾病的严重程度相关。目前临床可用的抗炎药物主要包括糖皮质激素(如地塞米松)、非甾体类抗炎药(如阿司匹林)、免疫抑制剂、炎症因子拮抗剂(如TNFα拮抗剂英夫利西单抗)等，这些现有药物的副作用和有效性问题受到越来越多的关注。地塞米松能够有效抑制机体炎症反应，但它在抗炎作用之外还具有多种生理学功能，产生副作用，此外，长时间应用糖皮质激素还会影响机体对病原体的清除，增加二次感染的几率。炎症因子拮抗剂均只能针对特定的炎症因子，对多种炎症因子介导的疾病可能效果不佳。因此，有效、安全、无副作用的抗炎药物依然是药物开发的主要方向。
巨噬细胞是炎症反应中的传感器，在炎症反应调控过程中发挥重要作用，从而影响炎症相关疾病的转归。巨噬细胞具有异质性，在不同的刺激下可以极化成促炎的M1型和抗炎的M2型，两种表型之间的相互转化贯穿着炎症相关疾病的发生、发展和转归。其中，M1型巨噬细胞一般由Th1型细胞因子如干扰素-γ与脂多糖诱导，激活Toll样受体和IFN通路极化而来。M1型巨噬细胞能够诱发Th1型细胞免疫应答，介导炎症反应，释放促炎因子如TNF-α、白介素-1、白介素6、白介素12、白介素18、白介素23，释放促炎介质NO，高表达环氧合酶2，高表达部分趋化因子如CXCL1、CXCL9，CXCL10等。M1型巨噬细胞能够吞噬外来病原体，在炎症反应的起始阶段发挥作用，但同时也会引起组织炎症反应，损伤组织细胞。例如，在脓毒症的初始阶段，机体感染引起巨噬细胞向M1型极化，引起过度炎症反应，诱发全身性炎症反应综合征而导致器官衰竭。在不稳定型心绞痛、心肌梗塞病人血液中检测到M1型巨噬细胞分泌的炎症因子的高表达，在易损斑块中，M1型巨噬细胞的增多更可能引发严重的急性动脉粥样硬化血管意外。调节巨噬细胞M1型分化对炎症性疾病的治疗具有广谱的功效，为炎症性疾病的药物开发提供了新的思路。
Mob1(MOB Kinase Activator 1)蛋白在人类中包含两个同源蛋白Mob1a和Mob1b，二者高度同源。Mob1蛋白起初是在Hippo信号通路中被发现，是该通路的核心成员之一。在经典的Hippo信号通路中，Mst1/2激酶受上游信号分子的作用发生磷酸化而激活，并磷酸化下游激酶Lats1/2，激活的Lats1/2与Mob1蛋白结合，进一步磷酸化Hippo信号通路的效应蛋白Yap，使之滞留在细胞质内，并通过泛素化途径降解，使Hippo信号通路维持关闭状态。而未被磷酸化的Yap是激活的，可入核行使转录调控功能。现有研究表明，经典的Hippo-Yap信号通路在进化中高度保守，在调控细胞增殖、凋亡和控制器官发育过程中发挥着重要的作用。近年来，越来越多的研究表明，Hippo信号通路还具有多种非经典的调控功能，如在骨髓造血细胞或免疫细胞中条件性敲除Mst1/2时，未发现有细胞增殖异常或肿瘤发生的表型，而多是非经典Hippo信号通路失活而导致的免疫功能严重失调。Mob1蛋白的其他功能，包括其在炎症中的作用及与Hippo信号通路的关系，尚无报道。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供了一种新型调节巨噬细胞M1型分化的抗炎靶点Mob1蛋白；本发明还提供了一种能够调节该靶点的小分子化合物管花苷B(tubuloside B，TubB)，该化合物结构简单，安全性高，抑制炎症效果明显。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了Mob1蛋白在制备治疗与M1型巨噬细胞分化相关的炎症性疾病药物、食品或保健品中的应用；该药物、食品或保健品包括以Mob1蛋白作为靶点，抑制M1型巨噬细胞炎症因子表达的药物。
进一步地，上述与M1型巨噬细胞分化相关的炎症性疾病包括但不限于，急性肝损伤、急性肺损伤、急性肾损伤、脓毒血症、内毒素血症、炎症性肠病、非酒精性脂肪肝、关节炎、糖尿病、肥胖症、动脉粥样硬化、阿尔茨海默症和慢性阻塞性肺疾病。
进一步地，上述急性肝损伤包括各类急性病毒性肝损伤、急性药物性肝损伤、急性酒精性肝损伤、缺血再灌注性肝损伤等。
进一步地，上述急性肺损伤包括各类病毒、细菌、真菌、寄生虫、内毒素、药物、外伤、烟雾和有毒气体吸入、栓塞、缺血等因素引起的急性肺部损伤。
进一步地，上述急性肾损伤包括各类细菌、病毒、药物、创伤、内毒素、栓塞和缺血等因素所引起的急性肾功能下降。
进一步地，上述炎症性肠病包括溃疡性结肠炎、克罗恩病等慢性炎症性肠道疾病。
进一步地，上述药物、食品或保健品的剂型为固体制剂或者液体制剂；该固体制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、合剂或散剂；该液体制剂为注射针剂、口服液剂、软胶囊剂、气雾剂。
第二方面，本发明提供了Mob1蛋白在筛选治疗与M1型巨噬细胞分化相关的炎症性疾病药物中的应用，以Mob1蛋白作为靶点，筛选出抑制M1型巨噬细胞炎症因子表达的药物。
第三方面，本发明提供了一种筛选治疗与M1型巨噬细胞分化相关的炎症性疾病的候选药物的方法，以Mob1蛋白作为靶点，筛选出抑制M1型巨噬细胞炎症因子表达的药物。
第四方面，本发明提供管花苷B在制备治疗与M1型巨噬细胞分化相关的炎症性疾病药物、食品或保健品中的应用；该管花苷B为能够靶向Mob1蛋白的天然小分子化合物；该药物、食品或保健品的有效成分包括结构如下式的管花苷B或其药用盐、溶剂化物、水合物、前药：
进一步地，上述药物被施用后，具有如下功能的至少一种：
a.抑制Mob1蛋白在巨噬细胞M1型分化中的降解；
b.抑制M1型巨噬细胞分泌的炎症因子的表达。
本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
本发明首次发现，Mob1蛋白对于巨噬细胞M1型分化具有显著抑制作用，而天然小分子化合物管花苷B能够与Mob1蛋白直接结合，改变其构象，稳定其结构，抑制Mob1蛋白在巨噬细胞M1型分化中的降解，从而提高Mob1蛋白的水平，发挥抗炎作用。本发明拓宽了抗炎药物的作用靶点，为抗炎药物研发提供了新的思路；还提供了活性优秀、靶点明确的活性小分子，为抗炎产品的开发提供了新的药物选择。
附图说明
图1显示了本发明一实施例中Mob1蛋白能够抑制巨噬细胞M1型分化；其中，图1(A)显示了RAW264.7巨噬细胞在LPS和IFN-γ诱导后向M1型分化时Mob1蛋白水平的变化；(B)显示了Mob1敲低细胞系中Mob1蛋白水平的变化；(C)(D)显示了Mob1敲低对巨噬细胞炎症因子Il-1β和Il6基因表达水平的影响；(E)显示了Mob1过表达细胞系中Mob1蛋白水平的变化；(F)(G)显示了Mob1过表达对巨噬细胞炎症因子Il-1β和Il6基因表达水平的影响
图2显示了本发明一实施例中管花苷B能够靶向Mob1型蛋白，抑制其在炎症状态的降解；其中，(A)显示了管花苷B对巨噬细胞RAW264.7细胞活力的影响；(B)显示了管花苷B对巨噬细胞在LPS和IFN-γ处理下Hippo信号通路的影响；(C)显示了管花苷B对Yap蛋白入核的影响；(D)显示了管花苷B对Mob1蛋白基因表达水平的影响；(E)显示了Western blot检测亚胺环己酮CHX处理后，管花苷B对Mob1蛋白降解速度的影响；(F)显示了管花苷B对重组Mob1a蛋白自身荧光的影响；(G)显示了管花苷B对重组Mob1a蛋白圆二色谱光谱的影响；(H)显示了管花苷B对重组Mob1a蛋白热稳定性的影响；(I)显示了管花苷B对细胞内Mob1蛋白热稳定性的影响；
图3显示了本发明一实施例中管花苷B具有抑制巨噬细胞M1型分化的抗炎活性；其中，(A)显示了管花苷B对巨噬细胞RAW264.7在LPS和IFN-γ处理下NO释放的影响；(B-E)显示了管花苷B对巨噬细胞在LPS和IFN-γ处理下多种炎症因子基因表达水平的影响；(F)显示了管花苷B对巨噬细胞iNOS和Cox2蛋白水平的影响；
图4显示了管花苷B能够抑制LPS引起的小鼠急性肝损伤和肺损伤，降低炎症分泌；其中，(A)显示了管花苷B对小鼠血清IL-1β水平的影响；(B)(C)显示了管花苷B对小鼠血清ALT和AST水平的影响；(D)为小鼠肝脏的HE染色图片；(E)为小鼠肺脏的HE染色图片。
具体实施方式
本发明发现Mob1蛋白能够抑制巨噬细胞的M1型分化，抑制巨噬细胞的炎症反应。巨噬细胞在LPS和IFN-γ的刺激下向M1型分化，Mob1蛋白水平显著下降。敲低Mob1蛋白后巨噬细胞在LPS和IFN-γ的刺激下炎症因子表达水平增强，而过表达Mob1蛋白后，巨噬细胞在LPS和IFN-γ的刺激下炎症因子表达水平减弱。且Mob1蛋白敲低后不影响Yap蛋白的磷酸化，说明Mob1蛋白发挥的抗炎作用独立于经典的Hippo-Yap信号通路。因此，Mob1蛋白是一个通过调节巨噬细胞M1型极化发挥抗炎功效的新靶点。
通过筛选靶向Mob1的小分子化合物，本发明还提供了一种能够靶向Mob1蛋白发挥抗炎功效的天然小分子化合物管花苷B，其具有以下结构式(I)：
管花苷B(Tubuloside B)属于苯乙醇苷类化合物，可以从中药肉苁蓉中分离得到，目前报道的主要活性集中在神经保护、清除氧自由基两个方面，其抗炎活性尚无报道。本发明以Mob1蛋白为抗炎靶点进行筛选，发现管花苷B能够直接与Mob1蛋白相互结合，稳定其蛋白结构，抑制其在巨噬细胞M1型分化过程中的降解，提高Mob1蛋白水平，从而发挥抑制炎症因子表达的作用，且管花苷B对细胞无明毒性作用，安全浓度高。利用LPS诱导的急性炎症损伤模型也进一步证实，管花苷B能够抑制炎症因子释放，缓解肝、肾等组织的急性炎症损伤。因此，管花苷B可作为先导化合物，有利于炎症相关疾病治疗产品的开发，具有广阔的(临床)应用前景。
下面通过具体实施例和附图对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
实施例中方法如无特殊说明的采用常规方法，使用的试剂如无特殊说明的使用常规市售试剂或按常规方法配制的试剂。
实施例1
本实施例研究Mob1蛋白对巨噬细胞M1型分化和炎症因子表达水平的影响，研究小分子管花苷B对Mob1的调节作用，并探索其抗炎活性，具体的操作方法和结果如下：
一、实验方法
1.1细胞培养及细胞活力检测
RAW264.7细胞培养于含有10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素的DMEM培养基中。使用CCK8的方法测定管花苷B对细胞活力的影响。将细胞以1×104每孔的密度接种到96孔板中，培养24小时，随后加入不同浓度的管花苷B，对照孔加入等量的DMSO溶剂作为对照，继续培养24小时。处理结束后，除去培养基，加入含10％CCK-8溶液的DMEM培养基，再孵育3小时后，测定450nm处吸光度。Western blot和qPCR实验中的细胞按2×105每孔的密度接种到6孔板中，处理方法同前。为诱导M1型巨噬细胞极化，10ng/ml LPS和20ng/ml IFN-γ作为刺激物与管花苷B同时加入至细胞培养基中。
1.2Western blot检测蛋白水平
用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解液裂解药物处理后的细胞。细胞的核质分离采用商业化的试剂盒按说明书进行。在8-15％的SDS-PAGE凝胶上分离不同分子量的蛋白质，然后将蛋白质用湿转的方法转移到PVDF膜上。将膜用5％的脱脂牛奶封闭1小时后，在室温下用特定的一抗溶液孵育1小时或在4℃下孵育过夜，之后清洗3次除去未结合的一抗。然后将膜用HRP偶联的二抗孵育1小时，再次清洗三次除去未结合的二抗。用化学发光试剂检测靶蛋白含量。
1.3qPCR检测基因表达水平
用商业化的试剂盒提取细胞的RNA，并通过逆转录试剂盒将等量的RNA逆转成为cDNA。针对不同的基因设计特定的引物，采用商业化的qPCR预混液进行荧光定量PCR分析。基因表达水平的计算用内参基因Gapdh进行标准化处理(2-ΔΔCT分析方法)。
1.4Mob1敲低及过表达细胞系构建
通过基于慢病毒的CRISPR/Cas9技术在RAW264.7细胞中进行Mob1蛋白的敲低。针对Mob1a和Mob1b的基因序列，设计两组sgRNA(KD1:Mob1a sgRNA1+Mob1b sgRNA1，KD2:Mob1a sgRNA2+Mob1b sgRNA2)，将这些sgRNA分别连接至lentiCRISPR v2载体中，将质粒混合物与包装质粒一起共转染HEK293T细胞，进行病毒包装，在24小时和48小时收集细胞上清，并过滤除去细胞碎片，与8μg/ml聚凝胺混合，添加到RAW264.7细胞中。感染48小时后，使用3μg/ml的嘌呤霉素筛选具有抗性的细胞。用lentiCRISPR v2载体(Cas9)转染的细胞作为对照。细胞内Mob1的敲低效果用Western blot进行确认。
过表达的Mob1蛋白用pLVX-3Flag质粒实现，将Mob1a的全长cDNA克隆到pLVX-3Flag载体中，按上述方法进行慢病毒感染和细胞系筛选。用pLVX-3Flag载体(pLVX)转染的细胞作为对照。细胞内Mob1的表达水平用Western blot和qPCR进行确认。
1.5荧光光谱
蛋白质中色氨酸、酪氨酸等残基能够发射荧光，形成蛋白质的固有荧光；而与蛋白结合的小分子能够改变发色残基附近的微环境，造成蛋白质的荧光淬灭。重组Mob1a蛋白溶解于50mM PB(pH7.6)中，浓度为0.1mg/ml。在Mob1a蛋白溶液中添加管花苷B，用BiotekSynergy H1荧光酶标仪记录荧光光谱。设定蛋白质的激发波长为280nm，设定发射波长的检测范围为300-450nm。
1.6圆二色谱
蛋白质肽键等结构对左右圆偏振光的吸收不同，造成偏振光矢量的偏振差，产生了蛋白质的圆二色性，通过检测蛋白质的圆二色谱可以测定蛋白质的二级结构。重组Mob1a蛋白溶解于50mM PB(pH7.6)中，浓度为0.1mg/ml，在Mob1a蛋白溶液中添加管花苷B。用Chirascan圆二色谱仪检测Mob1a蛋白质的圆二色谱，设置波长为190-260nm，检测路径为1mm，扫描速度和带宽分别固定为0.5s和1nm，每个样品检测3次，并扣除基线，进行平均处理。
1.7热迁移实验
在蛋白质的变性过程中疏水残基暴露，SYPRO Orange探针能与变性的蛋白质暴露出来的疏水区域结合，产生荧光，由此来监测蛋白质的变性温度。重组Mob1a蛋白溶解于50mM PB(pH7.6)中，浓度为0.5mg/ml，在Mob1a蛋白溶液中添加管花苷B，并添加SYPROOrange探针(1:500稀释度)。在罗氏Light Cycler 480荧光定量PCR仪器中检测Mob1a蛋白质的溶解曲线，设置温度从37℃升高到99℃(1℃/分钟)，测量荧光信号。通过计算蛋白质溶解曲线一阶导数d(RFU)/dT的峰值来确定蛋白质的熔融温度Tm。
对于细胞内蛋白质热迁移实验，收集10cm平皿中的细胞(约80％融合度)，重悬于含蛋白酶抑制剂混合物的PBS中，在液氮中反复冻融三次裂解细胞，取适量裂解液加入管花苷B，孵育30分钟。将孵育后的裂解液在指定的温度下加热，并离心以除去热变性不溶解的蛋白质，用Western blot检测剩余蛋白质水平。
1.8动物实验
使用6至8周的雄性C57BL/6小鼠(体重20-25g)构建急性炎症性损伤模型。将小鼠饲养于标准实验条件下(昼夜周期为12小时，18-22℃)，并喂养标准颗粒饲料和水。适应性喂养1周后，将小鼠随机分为6组(每组7只小鼠)：对照组、模型组、管花苷B低剂量组(10mg/kg)、管花苷B中剂量组(20mg/kg)、管花苷B高剂量组(40mg/kg)、阳性对照甲基泼尼松龙组(Met，2.5mg/kg)。各处理组提前3天进行给药处理(腹腔注射)，对照组和模型组给予同等剂量的生理盐水。给药结束后，除对照组外，模型组和处理组腹腔注射给予20mg/kg LPS进行造模处理。20小时后，将所有小鼠在麻醉下处死。收集全血，并在3000g下离心15分钟分离血清进行生化分析。血清IL-1β、ALT水平、AST水平采用商业化试剂盒进行检测。将用于组织病理学检查的样品切成小块，在中性福尔马林中固定24小时，脱水，包埋在石蜡中，切成10μm片，进行H&E染色，并在显微镜下拍照。
二、实验结果
2.1Mob1蛋白能够抑制巨噬细胞M1型分化
如图1A所示，巨噬细胞RAW264.7在10ng/ml LPS和20ng/ml IFN-γ的诱导下Mob1的蛋白水平显著下降，而给予蛋白酶体抑制剂MG132后，Mob1的蛋白水平有明显回升，说明在巨噬细胞向M1型分化时，Mob1蛋白水平显著降低，且泛素-蛋白酶体途径参与Mob1蛋白的降解。利用CRISPR/Cas9和慢病毒转染技术构建Mob1稳定敲低的细胞系，如图1B所示，在KD1和KD2两个细胞系中，Mob1的蛋白水平均稳定下降，且敲低Mob1后，在LPS和IFN-γ的作用下，Yap的磷酸化水平并无明显变化。如图1C和1D所示，Mob1敲低巨噬细胞在LPS和IFN-γ的作用下，炎症因子基因Il-1β和Il6的mRNA表达水平显著上升。利用慢病毒转染技术构建Flag-Mob1蛋白过表达细胞系，如图1E所示，Flag-Mob1在细胞系中存在明显过表达，而在LPS和IFN-γ的作用下，炎症因子基因Il-1β和Il6的mRNA表达水平显著下降(图1F和1G)。以上结果说明，Mob1蛋白能够抑制巨噬细胞的M1型分化，且该作用与Hippo信号通路的效应因子Yap蛋白无关。
2.2管花苷B能够靶向Mob1型蛋白，抑制其在炎症状态的降解
如图2A所示，100μg/ml的管花苷B对巨噬细胞RAW264.7的活力无明显影响。如图2B所示，管花苷B能够显著提高巨噬细胞在LPS和IFN-γ处理后的Mob1水平，但对Hippo信号通路的其他蛋白质的水平无明显影响。此外，管花苷B也不能影响Yap蛋白的入核(图2C)。进一步研究表明，管花苷B不能影响巨噬细胞中Mob1的基因表达水平(图2D)，说明管花苷B是通过影响Mob1蛋白的转录后调控来发挥作用的。如图2E所示，通过CHX抑制蛋白质合成，发现管花苷B能够延长Mob1蛋白质的半衰期，说明管花苷B能够稳定Mob1的结构，减少其降解。利用蛋白质荧光光谱(图2F)、圆二色谱(图2G)、热迁移(图2H和2I)实验，发现管花苷B能够降低Mob1a蛋白的自身荧光，改变蛋白质α螺旋的含量、增加蛋白质的热稳定性，确认管花苷B与Mob1蛋白能够直接结合。以上结果说明，在巨噬细胞中，Mob1蛋白能够独立于Yap蛋白发挥作用；管花苷B能够直接与Mob1蛋白结合，抑制其降解。
2.3管花苷B具有抑制巨噬细胞M1型分化的抗炎活性，且其抗炎作用与Mob1蛋白密切相关
管花苷B能够显著抑制巨噬细胞RAW264.7在LPS和IFN-γ处理后的NO释放(图3A)，降低多种炎症基因的表达水平(图3B-3E)，降低M1分化标志性蛋白iNOS和Cox2的水平(图3F)，说明管花苷B具有明显的抗炎活性。利用Mob1敲低细胞系(图1B)发现，在Mob1敲低细胞中，管花苷B的抗炎活性大幅下降(图1C和1D)，说明管花苷B这种抗炎活性与其调节Mob1蛋白的稳定性密切相关。
2.4管花苷B能够抑制LPS引起的小鼠急性肝损伤和肺损伤，降低炎症分泌
利用LPS(20mg/ml)注射造成小鼠急性系统性炎症模型，发现管花苷B处理后，小鼠血清中的炎症因子Il-1β水平显著下降(图4A)，此外，血清肝脏损伤指标ALT和AST水平相比于模型组显著下降(图4B和4C)，且从病理切片中观察到(图4D和4E)，小鼠肝、肺的炎性损伤得到缓解。
综上所述，Mob1蛋白是巨噬细胞M1型分化中的重要调控蛋白，且这种作用独立于经典的Hippo-Yap信号通路；小分子化合物管花苷B能够直接靶向Mob1蛋白，抑制其降解，从而发挥抗炎活性。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。