Dna四面体在制备治疗肾损伤的药物中的用途
阅读说明：本技术 Dna四面体在制备治疗肾损伤的药物中的用途 (Application of DNA tetrahedron in preparation of medicine for treating kidney injury ) 是由 林云锋 张琦 蔡潇潇 林世宇 于 2019-12-24 设计创作，主要内容包括：本发明提供了DNA四面体在制备治疗肾损伤的药物中的新用途,属于核酸药物领域。本发明证明了DNA四面体可以对受损的肾小管上皮细胞进行修复,公开了DNA四面体用于治疗肾损伤的新用途。由于DNA四面体本身生物相容性强,且目前治疗肾损伤的药物不多,本发明所公开的该用途具有十分良好的应用价值。(The invention provides a new application of a DNA tetrahedron in preparing a medicament for treating renal injury, belonging to the field of nucleic acid medicaments. The invention proves that the DNA tetrahedron can repair damaged renal tubular epithelial cells, and discloses a new application of the DNA tetrahedron in treating renal injury. Because the DNA tetrahedron has strong biocompatibility and a small amount of medicines for treating renal injury at present, the application disclosed by the invention has very good application value.)
技术领域
本发明属于核酸药物领域，尤其涉及DNA四面体在制备治疗肾损伤的药物中的用途。
背景技术
肾脏是人体排泄体内代谢废物的重要器官，其重要性不言而喻。机械外力和外源化合物(如：庆大霉素、造影剂、顺铂、脂多糖、甘油等)均可直接或间接损害肾小管上皮组织，导致肾损伤，严重威胁健康甚至生命。
对肾小管上皮组织的直接损害，指机械外力对肾小管上皮组织造成损伤，或外源化合物对肾小管上皮组织产生直接毒性。例如：庆大霉素进入人体后，几乎不被代谢，绝大部分经肾小球滤过，一部分被肾小管重吸收，另一部则可经肾小管周围血管直接被肾小管上皮细胞摄入，容易导致肾小管上皮细胞坏死或者脱落。庆大霉素的肾毒性反应晚期表现为肾小管坏死、堵塞，肾小管超滤系数显著下降，严重的可危及生命(Prohibitin的阻挡乙酰化修饰介导庆大霉素诱导肾损伤的机制研究，吉林大学博士学位论文，2014)。
对肾小管上皮组织的间接损害，指机械外力或外源化合物作用于机体内肾脏以外的组织器官，使血液中某些物质含量突然增加或产生了某些新物质(不包括机体所摄入药物本身)，进而损害肾小管上皮组织。例如：横纹肌溶解症(rhabdomyolysis，RM)导致的急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)。RM是指各种原因(包括物理因素、药物因素)引起的横纹肌(骨骼肌)细胞受损、溶解，从而使肌细胞内容物(包括钾、磷酸盐、肌红蛋白、肌酸激酶和尿素)释放进入细胞外血液及血液循环，并可致死的一组临床综合征；其中肌红蛋白对肾小管上皮组织有直接毒性。RM导致的AKI的病死率高达20％～50％，目前治疗手段尚不成熟。
目前治疗肾损伤所采取的首选方法是连续性肾脏替代治疗(continuous renalreplacement therapy，CRRT)，即通过体外循环血液净化技术连续、缓慢清除水分和溶质。其疗效值得肯定，但介入时机、治疗模式和剂量仍存在争议。
随着研究的深入以及小鼠/大鼠模型建立的成熟，几种具有治疗/缓解肾损伤的药物被逐渐发现。Aydogdu等提出左卡尼汀对肾组织具有保护作用；张媛媛等通过研究进一步发现左卡尼汀对RM引发的AKI的保护机制可能与左卡尼汀抑制免疫炎性反应通路TLR4/NF-κB继而减少下游炎性反应递质IL-6、TNF-α水平有关。另有研究表明，盐酸戊乙奎醚和脂氧素A4对RM所致的AKI具有治疗作用。
目前已发现的治疗肾损伤的药物屈指可数，且存在明显的副作用，导致其应用存在诸多限制。
DNA四面体(tetrahedral DNA，TDN)，又称四面体骨架核酸(tetrahedralframework nucleic acids，tFNAs)、四面体DNA纳米结构，是一种由4条单链DNA通过变性和复性，进而链间碱基互补配对形成的一种四面体结构，它易于合成，生物相容性高，通常用作某些药物的载体。
发明内容
本发明的目的在于，提供DNA四面体在治疗肾损伤中的新用途。
本发明的技术方案包括：
DNA四面体在制备治疗肾损伤的药物中的用途，所述DNA四面体由4条单链DNA经碱基互补配对组成，单链间摩尔比是1∶1∶1∶1。
如前述的用途，所述单链序列如SEQ ID NO.1-4所示。
如前述的用途，所述肾损伤是急性肾损伤。
如前述的用途，所述肾损伤是横纹肌溶解所致急性肾损伤。
一种治疗肾损伤的药物，它是以DNA四面体为活性成分的药物；
所述DNA四面体由4条单链DNA经碱基互补配对组成，单链间摩尔比是1∶1∶1∶1。
如前述的药物，所述单链序列如SEQ ID NO.1-4所示。
本发明的有益效果如下：
经实验证明，DNA四面体可以在肾小管上皮组织受到损害后，对其进行有效的修复，进而治疗肾损伤。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的
具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1：tFNAs SDS-PAGE电泳图。
图2：tFNAs透射电镜观察图。
图3：tFNAs在各组织器官中的分布图；Lu，肺；He，心脏；Ki，肾脏；Sp，脾脏；Li，肝脏；Ga，胆囊。
图4：HE染色结果图。
具体实施方式
实施例1 tFNAs的合成与鉴定
1.合成方法
将四条DNA单链(S1、S2、S3、S4)溶解于TM Buffer(10mM Tris-HCl，50mM MgCl2，pH＝8.0)中，四条DNA单链的终浓度为1000nM，充分混合，迅速加热至95℃保持10分钟，之后迅速降温至4℃并维持20分钟以上，即可得到tFNAs。
四条单链的序列(5′→3′)如下：
2.鉴定
合成后的tFNAs，SDS-PAGE电泳可见tFNAs约为200bp，可认为tFNAs已成功合成(图1)。使用透射电镜观察，镜下可见tFNAs特征的四面体结构(图2)。
以下将以实验例的形式对本发明进一步说明。
实验例1 tFNAs在小鼠体内的分布
1.方法
使用荧光分子Cy5标记tFNAs，对Balb/c小鼠静脉注射(注射量为40微升)半小时后，收集各组织器官，利用小动物成像系统对各组织器官荧光量进行检测。
2.结果
小鼠肝脏、肾脏和胆囊中cy5-tFNAs的荧光较强其中，胆囊中tFNAs荧光强度最高，其次为肾脏(图3)。
本实验例结果表明，tFNAs可以富集于肾脏，利于其发挥治疗作用。
实验例2 tFNAs对肾损伤疗效的动物实验
1.方法
将甘油(8mg/kg)肌注于balb/c小鼠后肢，建立横纹肌溶解所致急性肾损伤小鼠(AKI小鼠)模型。同时，将生理盐水注入后肢的健康小鼠作为假手术组；不做任何处理的小鼠为空白组。造模后2小时，将tFNAs注入AKI小鼠(40μl，浓度：1μmol/L)作为tFNAs组，将生理盐水(40ul)尾静脉注射入AKI小鼠(为AKI组)和假手术组小鼠体内。24小时后，收集小鼠肾组织，固定后制作石蜡切片，进行HE染色。
2.结果
结果如图4所示，与正常肾组织病理学比较，AKI组肾小管上皮细胞肿胀、空泡化、坏死、上皮细胞脱落、基底膜暴露。部分肾小管形成肌红蛋白管型，部分肾小球充血。tFNAs组肾小管上皮组织损伤程度小于AKI组，表现为肾小管损伤程度轻。
本实验例结果表明，tFNAs可以对已被损伤的肾小管上皮组织进行修复，从而对横纹肌溶解所致急性肾损伤产生治疗作用。其它类型的肾损伤，只要与肾小管上皮组织受损相关，理论上都能用tFNAs对其进行治疗。
综上，本发明提供了tFNAs治疗肾损伤的新用途，应用价值优良。
SEQUENCE LISTING
<110> 四川大学
<120> DNA四面体在制备治疗肾损伤的药物中的用途
<130> GYKH1118-2019P017882CC
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atttatcacc cgccatagta gacgtatcac caggcagttg agacgaacat tcctaagtct 60
gaa 63
<210> 2
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
acatgcgagg gtccaatacc gacgattaca gcttgctaca cgattcagac ttaggaatgt 60
tcg 63
<210> 3
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
actactatgg cgggtgataa aacgtgtagc aagctgtaat cgacgggaag agcatgccca 60
tcc 63
<210> 4
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
acggtattgg accctcgcat gactcaactg cctggtgata cgaggatggg catgctcttc 60
ccg 63
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种预防痛风性关节炎发作的药物