吡罗昔康在制备治疗皮肤溃疡药物中的应用及药物制备方法
阅读说明：本技术 吡罗昔康在制备治疗皮肤溃疡药物中的应用及药物制备方法 (Application of piroxicam in preparation of medicine for treating skin ulcer and preparation method of medicine ) 是由 张媛媛 孙晓东 于 2020-12-08 设计创作，主要内容包括：本发明公开了吡罗昔康在制备治疗皮肤溃疡药物中的应用及药物制备方法,所述药物由吡罗昔康和药物上可接受的辅料制备得到；吡罗昔康能促进人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞在高糖刺激下的迁移,从而促进糖尿病足溃疡伤口愈合合；吡罗昔康对皮肤溃疡,尤其是糖尿病足溃疡有显著的疗效。(The invention discloses an application of piroxicam in preparing a medicament for treating skin ulcer and a medicament preparation method, wherein the medicament is prepared from piroxicam and pharmaceutically acceptable auxiliary materials; piroxicam can promote human umbilical vein endothelial cell HUVEC cell to migrate under high sugar stimulation, thereby promoting diabetic foot ulcer wound healing; piroxicam has remarkable therapeutic effect on skin ulcer, especially diabetic foot ulcer.)
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及吡罗昔康在制备治疗皮肤溃疡药物中的应用及药物制备方法。
背景技术
皮肤溃疡是常见病、多发病，临床表现皮肤溃疡长期不能愈合，皮肤组织缺损液化坏死。由于创面难以愈合且消耗深大，给患者带来严重的心理压力和经济负担。两周以上创面未愈合者称为慢性皮肤溃疡，一个月以上创面未愈合称为慢性难愈性皮肤溃疡。尤其是糖尿病引起的足溃疡，是糖尿病的常见慢性并发症，临床表现包括足部疼痛、足部溃疡及足坏疽等，甚至导致截肢，是糖尿病患者致残的重要因素。
皮肤溃疡的病理机制包括局部的微循环障碍、神经功能障碍、免疫功能异常等。皮肤溃疡包括血管性溃疡、外伤性溃疡、感染性溃疡、放射性溃疡等。目前对皮肤溃疡尚无针对性的治疗方法，一般采用对症及支持疗法，如抗感染治疗、高压氧治疗等。这些治疗效果欠佳。高压氧治疗是在密闭的压力容器(高压氧舱)中让患者加压吸氧治疗疾病的一种方法。高压氧能改善组织缺氧，促进溃疡愈合，用于治疗糖尿病足已有50余年历史，对重度缺血溃疡创面疗效较好。高压氧是通过提高患处动脉血氧分压发挥治疗作用的，其发挥作用的前提条件是有效的血液循环。因此对患肢动脉血管完全闭塞或动脉血管严重狭窄的患者无效。因此，高压氧治疗仅仅是糖尿病足溃疡的辅助治疗方法之一，且在使用时需要严格掌握适应症、禁忌症和使用方法。
吡罗昔康(Piroxicam)也叫吡氧噻嗪，化学名为：2-甲基-4-羟基-N-(2-吡啶基)-2H-1，2-苯并噻嗪-3-甲酰胺1，1-二氧化物，化学式为：C15H13N3O4S。是一种非选择性非甾体抗炎药，具有镇痛、抗炎、解热作用，可用于治疗骨关节炎、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎等。目前还没有将其用于皮肤溃疡治疗的相关研究和报道。
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题提供一种通过促进人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞在高糖刺激下迁移从而促进皮肤溃疡愈合的吡罗昔康在制备治疗皮肤溃疡药物中的应用及药物制备方法。
本发明采用的技术方案是：吡罗昔康在制备治疗皮肤溃疡药物中的应用，所述药物由吡罗昔康和药物上可接受的辅料制备得到。
进一步的，所述皮肤溃疡为血管性溃疡、外伤性溃疡、感染性溃疡、放射性溃疡中的一种。
进一步的，所述药物为片剂、胶囊剂、贴片剂、凝胶剂、注射剂、软膏剂中的一种。
进一步的，所述皮肤溃疡为糖尿病足溃疡。
所述药物制备方法，包括以下步骤：
步骤1：将吡罗昔康溶于PEG400，形成混合溶液A；
步骤2：PEG8000和水充分溶解形成混合溶液B，混合溶液B中PEG8000和水的质量比为2:1；
步骤3：将混合溶液A和混合溶液B充分混匀形成混合溶液C，密封，4℃条件下静置过夜，凝固成膏体即得所需药物；
混合溶液C中PEG 400、PEG 8000和水的质量比为2:2:1；吡罗昔康在混合溶液C中的浓度为0.1mol/L～0.15mol/L。
本发明的有益效果是：
(1)本发明提供一种皮肤溃疡尤其是糖尿病足溃疡的有效治疗方法；
(2)本发明中吡罗昔康能促进人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞在高糖刺激下的迁移，从而促进糖尿病足溃疡伤口愈合。
附图说明
图1为本发明实施例1中吡罗昔康组和对照组中划痕愈合程度图。
图2为本发明实施例2中吡罗昔康组和对照组中小鼠背部创面愈合程度示意图。
图3为本发明实施例3中吡罗昔康组和对照组中大鼠背部创面愈合程度示意图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。
吡罗昔康在制备治疗皮肤溃疡药物中的应用，药物由吡罗昔康和药物上可接受的辅料制备得到。具体为有效成分吡罗昔康和药物上可接受的辅料制备得到的片剂、胶囊剂、贴片剂、凝胶剂、注射剂或者软膏剂。皮肤溃疡为血管性溃疡、外伤性溃疡、感染性溃疡、放射性溃疡中的一种。尤其是糖尿病足溃疡。
以软膏剂为例说明其制备方法，包括以下步骤：
步骤1：将吡罗昔康溶于PEG400，形成混合溶液A；
步骤2：PEG8000和水充分溶解形成混合溶液B，混合溶液B中PEG8000和水的质量比为2:1；
步骤3：将混合溶液A和混合溶液B充分混匀形成混合溶液C，密封，4℃条件下静置过夜，凝固成膏体即得所需药物；
混合溶液C中PEG 400、PEG 8000和水的质量比为2:2:1；吡罗昔康在混合溶液C中的浓度为0.1mol/L～0.15mol/L。
实施例1
因为糖尿病足溃疡的病理机制之一为局部缺氧，本实施例选择人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC)。通过在高糖低血清条件下培养人脐静脉内皮细胞24h从而模拟糖尿病引起的血管缺血状态，通过CCK-8细胞增殖活性检测实验、划痕实验、管形成实验分别检测在高糖低血清条件下24h和正常条件培养24h的人脐静脉内皮希伯胺的细胞迁移negligence。
按照以下步骤进行：
使用含10％胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)的高糖DMEM培养基培养人脐静脉内皮细胞HUVEC，在37℃，5％CO2培养箱内传代培养。细胞达到90％融合时，传代于细胞培养板上，随机分为三组，进行相关实验。
实验分为两组，组1(高糖模型组即对照组)和组2(吡罗昔康组)。
组1处理如下：加入含2％FBS高糖DMEM培养液，添加葡萄糖使葡萄糖浓度达到50mmol/L。
组2处理如下：加入含2％FBS高糖DMEM培养液，添加葡萄糖使普通糖浓度达到50mmol/L，同时加入吡罗昔康，吡罗昔康加入量为3.31ug/ml。
细胞达到融合后，用100ul的枪头垂直划痕，宽度约500um，分组，培养4h和8h后用倒置相差显微镜拍摄划痕愈合程度，如图1所示。
从图中可以看出，吡罗昔康能显著促进HUVEC细胞划痕的愈合，能提高HUVEC细胞的迁移能力。
实施例2
首先按照以下步骤制备吡罗昔康软膏剂：
步骤1：将30mg吡罗昔康溶于3.4ml PEG400中形成混合溶液A；
步骤2：将PEG 8000和水按照质量比为2:1充分混合形成5.1ml混合溶液B；
步骤3：将混合溶液A和混合溶液B充分混合均匀，倒入平底敞口容器中，密封，4℃条件下静置过夜，凝固成膏体后即可使用。
空白对照软膏制备过程如下：
步骤1：将20g PEG 8000溶于10ml水中形成混合溶液A；
步骤2：将20ml PEG 400与步骤1中的混合溶液A充分混合均匀，倒入平底敞口容器中，密封；4℃条件下静置过夜，凝固成膏体后即可使用。
建立大鼠皮肤溃疡模型
选择8周龄C57BL/6雄性大鼠称重，根据体重随机分为以下两组：对照组和吡罗昔康组，每组7只，适应性喂养3天。两组大鼠均腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，之后用直径10mm的皮肤活检器在背部打一个洞，即得到大鼠皮肤溃疡模型。
对照组大鼠背部创面每天涂抹1次上述空白对照软膏，吡罗昔康组大鼠背部创面每天涂抹1次上述吡罗昔康软膏剂。之后定时拍摄背部伤口照片，观察伤口愈合程度，如图2所示。
从图中可以看出，吡罗昔康组大鼠背部伤口愈合速度明显快于对照组，14天后，吡罗昔康组大鼠背部伤口基本愈合。说明吡罗昔康能够显著促进大鼠皮肤溃疡的伤口愈合。
实施例3
建立糖尿病大鼠皮肤溃疡模型
选择8周龄SD雄性大鼠称重，根据体重随机分为以下两组：对照组和吡罗昔康组，每组7只，适应性喂养3天。
大鼠腹腔注射链脲佐霉素STZ 65mg/kg，使用高脂饲料喂养2周。然后测4小时空腹血糖，筛选空腹血糖≥13.4g/dL者认为糖尿病造模成功。
对照组：将造模成功的大鼠腹腔注射戊巴比妥麻醉，之后用直径10mm的皮肤活检器在背部打一个洞，对照组伤口每天涂抹1次实施例2制备得到的空白对照软膏。
吡罗昔康组：将造模成功的大鼠腹腔注射戊巴比妥麻醉，之后用直径10mm的皮肤活检器在背部打一个洞，在伤口每天涂抹1次实施例2制备得到的吡罗昔康软膏剂。
定时拍摄大鼠背部伤口照片，观察伤口愈合程度，如图3所示。吡罗昔康组大鼠背部伤口愈合速度明显快于对照组，10天后，吡罗昔康组大鼠背部伤口基本愈合。说明吡罗昔康能够显著促进糖尿病大鼠皮肤溃疡的伤口愈合。
糖尿病足溃疡，主要是由严重的血液低灌注导致的，与血管缺血性损伤有关，因此促进血管生成从而增加血液灌注是治疗糖尿病足溃疡的一种治疗策略。吡罗昔康能促进人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞在高糖刺激下的迁移，实施例证明能够促进糖尿病大鼠溃疡伤口的愈合。所以吡罗昔康对皮肤溃疡，尤其是糖尿病足溃疡有显著的疗效。