阅读说明：本技术 苯乙肼在制备抗偶发分枝杆菌感染的药物中的应用 (Application of phenelzine in preparation of drug for resisting mycobacterium fortuitum infection ) 是由 黄海荣 王桂荣 孙晴 姜广路 于霞 陈素婷 于 2020-08-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了苯乙肼的新用途。该新用途是苯乙肼或其药学上可接受的盐在制备抗偶发分枝杆菌感染的产品中的应用。本发明采用微孔板二倍稀释法进行苯乙肼抗偶发分枝杆菌活性进行测定,结果表明,苯乙肼对临床分离的偶发分枝杆菌有较好的抑菌活性,有望发掘出苯乙肼在治疗偶发分枝杆菌感染疾病中的新用途。(The invention discloses a new application of phenelzine. The new application is the application of phenelzine or pharmaceutically acceptable salts thereof in preparing products for resisting mycobacterium fortuitum infection. The invention adopts a microplate double dilution method to carry out the determination of the activity of the phenelzine against mycobacterium fortuitum, and the result shows that the phenelzine has better bacteriostatic activity on clinically separated mycobacterium fortuitum and is expected to develop the new application of the phenelzine in the treatment of mycobacterium fortuitum infection diseases.)

苯乙肼在制备抗偶发分枝杆菌感染的药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及苯乙肼在制备抗偶发分枝杆菌感染的药物中的应用。

背景技术

非结核分枝杆菌(non-tuberculous Mycobacteria,NTM)系指除结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。NTM常存在于自然环境中，为机会性致病菌。近年来，NTM引起的感染呈逐渐上升趋势，严重威胁人类健康。有文献报道我国培养阳性标本中NTM分离株占分枝杆菌分离株的比例从1979年的4.3％上升至2010年的22.9％。NTM致病的菌种繁多，不同菌种NTM对药物的敏感性不同，针对不同菌种引起的NTM病的治疗方案也存在较大差异。且NTM对抗结核药物具有极高的耐药性，如对异烟肼、利福平、链霉素等常用抗结核药物都存在不同程度的耐药，因此寻找NTM治疗效果较佳的药品非常有必要。

苯乙肼(Phenelzine)是一种不可逆非选择性单胺氧化酶抑制剂，目前主要用于抑郁症的治疗。其作用机理主要是通过与单胺氧化酶形成药物-酶复合物，从而抑制酶的活性，以干扰底物的正常代谢，影响其正常的生物学作用。

偶发分枝杆菌，属快速生长型非结核分枝杆菌，常引起皮肤、软组织和骨的病变。近年来，在我国偶发分枝杆菌对抗结核药物耐药程度在不断上升，偶发分枝杆菌对常见的抗结核药物，如利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇等耐药率高达70％以上；对常见的治疗NTM的药物，如克拉霉素也有耐药，且大多菌株同时对多种抗结核药物耐药。

发明内容

本发明的一个目的是提供苯乙肼或其药学上可接受的盐的新用途。

本发明所提供的苯乙肼或其药学上可接受的盐的新用途为下述1)—7)中至少一种：

1)在制备偶发分枝杆菌抑菌剂中应用；

2)在制备抑制偶发分枝杆菌活性的产品中的应用；

3)在制备抗偶发分枝杆菌感染的产品中的应用；

4)在制备预防和/或治疗偶发分枝杆菌所致疾病的产品中的应用；

5)在抑制偶发分枝杆菌活性中应用；

6)在抗偶发分枝杆菌感染中的应用；

7)在预防和/或治疗偶发分枝杆菌所致疾病中的应用。

本发明中所述苯乙肼，其CAS No.156-51-4。所述苯乙肼药学上可接受的盐具体可为苯乙肼盐酸盐或苯乙肼硫酸盐。

本发明的另一个目的是提供一种偶发分枝杆菌抑菌剂。

本发明所提供的偶发分枝杆菌抑菌剂，其活性成分为苯乙肼或其药学上可接受的盐。

本发明的再一个目的是提供一种产品。

本发明所提供的产品，其活性成分为苯乙肼或其药学上可接受的盐；

所述产品具有下述至少一种功效：

a)抑制偶发分枝杆菌活性；

b)抗偶发分枝杆菌感染；

c)预防和/或治疗偶发分枝杆菌所致疾病。

本发明中，所述偶发分枝杆菌可为偶发分枝杆菌标准菌株或偶发分枝杆菌临床分离株或偶发分枝杆菌感染的患者携带的偶发分枝杆菌。

在本发明的一个

具体实施方式

，所述偶发分枝杆菌为偶发分枝杆菌标准菌株ATCC6841。

在本发明的另一个具体实施方式中，所述偶发分枝杆菌为偶发分枝杆菌临床分离株。

本发明中所述产品具体可为药品。

需要的时候，在上述药品中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体；所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

上述药品可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式；上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

上述药品可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。

本发明还保护一种抑制偶发分枝杆菌活性的方法。

本发明所保护的抑制偶发分枝杆菌活性的方法，包括：使用以苯乙肼或其药学上可接受的盐为活性成分的物质抑制偶发分枝杆菌活性。

其中，所述偶发分枝杆菌可为偶发分枝杆菌标准菌株或偶发分枝杆菌临床分离株。

在上述方法中，所述偶发分枝杆菌可为偶发分枝杆菌标准菌株或偶发分枝杆菌临床分离株。

所述以苯乙肼或其药学上可接受的盐为活性成分的物质中苯乙肼或其药学上可接受的盐的最低使用浓度不低于其所抑制的偶发分枝杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。

所述方法为非疾病诊断治疗方法。如在筛选对偶发分枝杆菌敏感药物中作为阳性对照使用。

本发明以采用微孔板二倍稀释法进行苯乙肼抗偶发分枝杆菌活性测定，结果表明，苯乙肼对偶发分枝杆菌标准菌株和临床分离的偶发分枝杆菌均有较好的抑菌活性，有望发掘出苯乙肼在治疗偶发分枝杆菌感染疾病中的新用途。

附图说明

图1为苯乙肼对临床分离的偶发分枝杆菌菌株的MIC浓度分布。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

苯乙肼硫酸盐(CAS：156-51-4)：购自于Sigma，货号：P6777；

分子式：C₈H₁₂N₂·H₂SO₄结构式如下：

偶发分枝杆菌标准株：ATCC 6841。

实施例1、苯乙肼对偶发分枝杆菌标准菌株抑菌活性检测

待测药物：苯乙肼硫酸盐

1、在96孔板的每孔中加入100μl Mueller Hinton(MH)培养基(含5％OADC)；

2、完成步骤1后，取所述96孔板，在第12列加入100μl浓度为6400μg/mL的待测药物溶液(采用DMSO配制)，混匀后吸出100μl加入第11列，依次梯度稀释至第2列后，抽出100μl弃掉，第1列不含药物，为阳性对照孔。每个浓度设置3个复孔。

3、完成步骤2后，取所述96孔板，每孔加入100μl偶发分枝杆菌标准菌株菌悬液，使每孔中最终容积均为200μl，菌液终浓度2.5×10⁵CFU/mL；各孔内的最终药物浓度具体见表1。

偶发分枝杆菌标准菌株菌悬液制备方法：将偶发分枝杆菌标准菌株接种于中性罗氏培养基中，37℃温箱中培养1周后刮取中性罗氏培养基上处于生长对数期菌株，磨菌比浊后用Mueller Hinton(MH)培养基(含5％OADC)稀释。

表1各列孔内的最终药物浓度

4、完成步骤3后，将所述96孔板放至37℃温箱中，培养9天。

5、完成步骤4后，取所述96孔板，每孔加入20μl ALamar blue和50μl 5％Tween80，然后继续放至37℃温箱中培养24h。

6、完成步骤5后，取所述96孔板，读取最小抑菌浓度(MIC)并计算抑制率。

最小抑菌浓度(MIC)读取方法：最小抑菌浓度(MIC)即为能够抑制90％菌落生长的药物浓度。通过荧光检测(Ex/Em,530nm/600nm)抑制>90％还原型Alamar blue生成的最小药物浓度。

抑制率％＝100％-(检测孔荧光值-背景荧光值)/(生长对照孔荧光值-背景荧光值)×100％。

背景荧光值为阴性对照的荧光值，生长对照孔荧光值为阳性对照的荧光值。

阴性对照为未加药物和菌液的培养基，阳性对照为未加药物的含菌培养基。

结果显示，苯乙肼对偶发分枝杆菌标准株的MIC为400μg/mL。

实施例2、苯乙肼对临床分离偶发分枝杆菌菌株抑菌活性检测

临床分离菌株：23株从偶发分枝杆菌感染患者痰标本中分离培养出的菌株，经16SrRNA、hsp65、rpoB、16-23S rRNA间区测序鉴定为偶发分枝杆菌。

待测药物：苯乙肼硫酸盐

按照实施例1中的方法，检测待测药物对23株临床分离偶发分枝杆菌菌株的抑菌活性。

MIC结果如表2所示。MIC浓度分布统计结果如表3和图1所示。

表2苯乙肼对临床分离偶发分枝杆菌菌株的MIC

表3苯乙肼对临床分离偶发分枝杆菌菌株的MIC浓度分布统计结果

结果表明，苯乙肼对临床分离的偶发分枝杆菌有较好的抑菌活性，有望发掘出苯乙肼在治疗偶发分枝杆菌感染疾病中的新用途。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。